全 文 ：中国中西医结合杂志 l州 年 6 月第 19 卷基互出型鱼型迷哗
讨 论
研究表明 ,氧自由基及其产物均具有毒性 , 而其中羚自由基
产生的脂质过氧化物在膜损伤中毒性最强 。 肾组织细胞膜系统
含有丰富的脂类物质 , 自由基与生物膜内的多价不饱和脂肪酸具
有高度亲和性 ,一旦结合便生成多种脂质过氧化物 , 生物膜的脂
质过氧化反应导致膜的液体性 、流动性及通透性发生改变。 脂质
过氧化反应的终产物 州田 A 本身也是 自由基 ,可进一步损伤细胞
的结构和功能 ,导致无休止的恶性循环 (4) 。 我们以往的研究` 5) 曾
提示轻自由基在 仓A 所致的急性肾毒性中起了重要作用 。
洲 e y皿而 ar (eG ,在给大鼠每天每公斤体重 sC A 巧 gm , 14 天
后 , CS r 、尿素氮及肾组织 M DA 水平明显升高 , 而肌醉清除率明
显下降。 本研究及以往研究 5` ,均证实 , 。 A诱发了大鼠全身及
肾脏的 oR M 产生增加和抗氧化能力的下降 , 表现为血清及肾皮
质匀浆 MD A 的升高和抗氧化剂 os D 活力的下降 , 提示 OR M 可
能参与了 Q A 肾毒性的发病 。
急性 仓A 肾毒性表现为肾血流量下降 , 肾血管阻力增高 ,
G F R下降 ,其可能的机理有以下几方面 : ( l) 内皮素是强的血管收
缩剂 , 山A使内皮素的产生增加 , 而内皮素抗体可缓解因 。 A 所
致的肾血流动力学改变 (7) ; ( 2) 。 A 干扰花生四烯酸的代谢 ,抑制
前列腺素卜、凡 的合成 ,而血栓素人 合成增加 ,致使血管张力增
高` , ) ; (3) 血小板活化因子可增加肾血管阻力 ,降低 GF R , 仓A使肾
小球的血小板活化因子产生增加 , 而该因子活性抑制后可减少
。 A 诱导的离体小球及系膜细胞的收缩 7`) ; (4 ) 。 A 增加肾素活
性 ,义 r 与肾素活性之间存在相关性 , 而血管紧张素n受体受抑制
后可部分阻断公 A 所致的急性肾血流量的下降 , 因而认为肾素血
管紧张素系统的激活在 仓 A 肾毒性中具有肯定的作用`助 ; ( 5) O A
诱导 RoM 产生增加 ,使肾小球收缩 , 肾血流及超滤面积减少 , 而
自由基清除剂及抗氧化剂可抑制肾小球的收缩 (9) 。
川芍嗦是中药川芍的有效成分 ,有活血化疲等作用。 樊光
辉等《 ’ 0) 报道川苟嗓有降低冠心病患者血脂质过氧化物 ,提高血
so D 的作用 , 同时能抑制心肌缺血再灌注大鼠的血栓素凡 释
放 ,促进心肌合成前列腺素 12 ,使血栓素凡 /前列腺素 12 的比值
降低`川 。 另有作者报道川芍嗓能有效对抗内皮素一 1对离体大
鼠胸主动脉的收缩作用 ”` ’ 。 本实验证实 LH 具有抗氧自由基作
用 ,并能增强机体和肾脏的抗氧化能力 , 从而预防 sC A 的肾毒
性 。
为观察 LH 是否影响大鼠公 A的血药浓度 , 我们测定了 sC A
对照组和川芍嚓预防组的 sC A 血药浓度 ,发现两组之间无显著
差异 .说明 LH 并非通过影响 C s A 的血药浓度而发挥预防作用 ,
但其是否干扰 C sA 的免疫抑制特性尚有待进一步的研究 。
参 考 文 献
1
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甜瓜蒂对 5/ 6 肾切除大鼠残留肾组织中转化
生长因子 日m R N A 表达的影响
高峻钊 {亚舀」2 魏光玉 ,
本实验以肾小管一间质纤维化为主要病理改变的 516 肾切
除大白鼠慢性肾功能衰竭为模型 . 以测定残留肾组织中转化生
长因子 一以T G F~ 田n识洲 A 的表达及病理学变化为指标 ,探讨了甜
瓜蒂抗纤维化的作用机理 。 现报告如下 。
材料与方法
1 材料
1
.军事医学科学院附属医院 (北京 l X( X) 39 ) ; 2 . 中国中医研究院研
究生部 ; 3 山东省济南市长清县中医院
1
.
1 动物 s D 系雄性大鼠 , 体重 (20
.
0 土 37
.
5) 9
,第四军
医大学试验动物中心提供。
1
.
2 实验用药物 甜瓜蒂浸液 : 按文献川制备 。 mA v 逆转
录系统试剂盒 : 美国 1玩n l e g a 公司 。 冗F 日引物及 3一磷酸葡萄糖
醛酸脱氢酶 ( gl yc e阁de 场d-e 3一曲os p h at e dhe y而 g e n ase , CAP DH ) 引
物 :第四军医大学临床分子生物学研究室合成。 代R 试剂 :华美
公司 。
2 方法
2
.
1 肾衰模型的建立 SD 系雄性大鼠 35 只 , 29 只在严格
消毒 ,控制污染的条件下 , 用戊巴比妥钠腹腔注射 ( 35 呵 kg )麻
`咨, 国中西医结合杂志 11冲 , 年 6月第 19 卷基础理论研究特集
醉 ,行右肾切除术 , l 周后同样条件下行左肾 2/ 3 切除`2 ) 。 另 6
只在同等条件下行假手术 (不作肾脏切除 ) , 进行对照 。 在保证
饮水条件下 ,普通块状饲料 (粗蛋白含量为 2 % )喂养。
2
.
2 治疗方法 术后 4 周 , 存活的 24 只大鼠随机分为两
组 : 甜瓜蒂浸液治疗组 (下简称中药组 ) 12 只 ,灌服 5% 甜瓜蒂浸
液 Zml d/ ,模型组 12 只 (实验第 19 周死亡 l 只 ) ,灌服凉开水 ;假
手术组亦灌服凉开水 , 灌服液量均为 2衬d/ 。 连续灌药 20 周 。
治疗期间饲以高蛋白饮食 (粗蛋白含量为 50 % ,第四军医大学
试验动物中心提供 ) ,逐 日记录进食量 。
2
.
3 标本采集 治疗第 20 周末 . 大鼠在复合麻醉剂麻醉
下 , 从颈动脉插管取血后 , 以 18 c0 m 水柱压力灌人冷 Ha nk , S 液
( 2
一
4 ℃ ) 150 衬 ;随即取出肾脏称重后 ,做光镜病理检查 的组织
放人 4 %多聚 甲醛一 磷酸缓冲固定液中浸泡 固定 。 做肾组织
咒卜月mNR A 表达的组织放人液氮中冻存 。
2
.
4 肾组织 叭 ; F p mNR A 表达的测定 异硫氰酸肌法提取
肾组织总 .ul 弓NA , 参照 K a ll e t o 法 `” 进行逆转录模板 D NA ( c DN A )
和聚合酶链反应 ( CP )R ,并设 G AP I〕H 为对照 。
2
.
5 观察指标及统计学处理 观察指标 : 肾 /体承比 (川
w )
, ’肾脏病理学检查 、咒 R 测定肾组织 r几卜俘m洲 A 〕 本文资料
组间差异采用 t 检验 卜
结 果
I 肾脏病理改变 模型组大鼠的残留肾脏明显大于中药
组 , 印w 有明显差异 。 光镜 下模型组大鼠肾脏切片可见肾小球
内细胞数明显增多 ,且 49 . 2 % 的肾小球内出现均质状嗜伊红染
色 , Mal o yr 氏染色可见肾小球内有大量 的蓝 色物质存在 , 约
26
.
5 %肾小球透明样变面积达球内毛细血管禅总面积的 50 % 以
上 。 肾小管出现萎缩和扩大的两极变化 , 间质见明显的淋巴细
胞浸润和纤维增生 。 中药组肾小球内细胞数 ( GN) 及肾小球透
明样变 ( GH )发生率明显少于模型组 (见表 l ) , Mal o ry 氏染色肾
小球内蓝色物质明显少于模型组 。 偶见肾小管上皮细胞间隙增
大 , 或管腔有细胞样物质充填 , 未见肾小管萎缩及肾间质纤维增
生 ;未见明显的间质淋巴细胞浸润 。
表 1 3组大鼠柑w 、 G N 及 GH发生率比较 ( : 土 ` )
组 别 柑W 肾小球数 G N (个 ) GH ( % ) G H > 50 % (% )
{:
假手术 6
0 3 3 士 0
.以 ,
0
.
3 8 士 0
.
0 5
`
0
.
79 士 0 . 0 1
102
.
6 士 20
.
7
“ 八
13 2
,
2 土 34
.
3
势
8 3
.
1 士 12
.
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13
.
5 士 3
.
4
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49
.
2 士 14
.
7
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3
.
2 土 1
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2
.
7 士 1
.
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26
.
5 士 7
.
9
带
O△ 八
卿8504药型模中
注 : 与假手术组比较 , ` p < 0 . 01 尸j模型组比较 , △ p < 0 . 05 , △ △ 尸 < 0 . 01
树W 中药组明显小于模型组 (尸 < 0 . 05 ) ,假手术组 (有两个
肾脏 )明显高于造模组 。 G N 各组之间有明显的差异 ( p < 0 . 01 ) ,
假手术组明显少于模型组 ( P < 0 . 01 ) ,模型组明显多于中药组
( P
< 0
.
05 )
。 各组间 G H 发生率及透明样变面积大于 50 % 的肾
小球个数 ,模型组显著大于其它两组 (尸 < 0 . 01 ) 。
3 3组 肾脏组织 兀-F 日n讯 NA 含量的变化 3 组 肾组织
GA PI〕H n讯 NA 的 代R 产物电泳条带 , 在明暗或宽窄方面均匀一
致 , 而 3 组肾脏组织 联江、 p n 1R刊A 的 cP R 产物电泳条带则显示
明显的不均一 。 假手术组电泳条带浅暗 , 中药组的电泳条带比
较明亮 ,模型组最为粗大明亮。
不但上述改变明显减轻 , 而且整个残留肾脏的代偿性增长都被
抑制 , 刃W 明显小于病理组 。 结果提示瓜蒂浸液抗纤维化作用
可能与其抑制残留肾组织中的飞扒枷 RN A 的表达有关 但瓜
蒂抑制 咒-F伪11RN A 的表达的机理还需进一步探讨 。
实验中为了严格控制 CP R 产物的组间差异 , 从组织块的处
理到 CP R 产物电泳的全过程均为各组同步进行 ,并设立以 “ 看
家 ” 基因一GIA, DH为对照的外控组 , 从 G A PI) H mNR A 的 代 R 产
物的电泳条带均匀一致看 , 实验结果是可信的 。
参 考 文 献
讨 论
1 肾纤维化模型 通过肾脏大部切除 ,人为造成肾小球缺
失而引起残留肾组织的代偿性增生 、硬化 , 继发小管一间质病变 、
细胞浸润及纤维化是肾衰模型的主要病理变化 。 实验中 , 我们
在 5/ 6 肾切除模型的基础上 , 加饲高蛋白饮食 ,术后第 拼周时 ,
模型组肾脏的病理改变非常明显 , 取得好的造模效果。
2 兀-F 日n 1RN A 表达与组织纤维化 1℃ F . p是迄今为止人
们所发现的在纤维和结缔组织基质发生过程中起最重要作用的
细胞因子 `4) 。 实验表明使用抗祀F一日抗体能够使系膜增生性肾
小球肾炎模型 ECM 合成降低印% 一 os % ` , ’ 。 相反 ,飞-F 角1讯N A
的过表达则导致 ECM 合成的明显增加 `6 , 。 我们实验结果与此
吻合 。 肾组织中咒-F日m RN A 的表达量为模型组 > 中药组 > 假
手术组 。 同时可见 :模型组肾间质一肾小管区明显的纤维增生 ,
肾小球中 ECM 和胶原纤维明显增多 , 肾小球透明样变 ; 中药组
1
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版社 , l叨 l : 26
.
2
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