全 文 ：·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第4期
收稿日期 ：2012-10-08
基金项目 ：国家重点基础研究发展计划（2011CB111601），国家自然科学基金项目（30972271），广东省教育厅育苗基金项目（B12121）
作者简介 ：周泽军，男，硕士研究生，研究方向 ：水产经济动物病害 ；E-mail ：zhouzejun0929@126.com
通讯作者 ： 丁燏，男，博士，教授，研究方向 ：水产经济动物免疫学及病害控制 ；E-mail ：dingy@gdou.edu.cn
吴灶和，男，博士，研究员，研究方向 ：水产经济动物免疫学及病害控制 ；E-mail ：wuzh@gdou.edu.cn
溶藻弧菌 HY9901 外膜蛋白 OmpH 的基因克隆及其
生物信息学分析
周泽军1，2，3  庞欢瑛1，2，3  丁燏1，2，3  简纪常1，2，3  吴灶和2，3，4
（1. 广东海洋大学 水产学院，湛江 524088 ；2. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，湛江 524088 ；3. 广东省教育厅
水产经济动物病害控制重点实验室，湛江 524088 ；4. 仲恺农业工程学院，广州 510225）
摘 要 ： 根据已发表的溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）全基因组序列设计 1 对特异性引物，PCR 扩增溶藻弧菌 HY9901 株外
膜蛋白 OmpH 的全长基因。结果显示，该基因（GenBank 登录号 ：JX855924）全长 573 bp，共编码 190 个氨基酸残基。根据推导
的氨基酸序列预测其分子量约为 21.1 kD，等电点为 9.02。SignalP 4.0、TMHMM Server 2.0 和 SoftBerry-Psite 预测结果显示，OmpH
不存在信号肽与跨膜区，含有 1 个 N-糖基化位点，6 个磷酸化位点，1 个内质网靶信号位点以及 3 个微体 C 末端靶信号位点。利
用 MAGE5.0 软件，以邻位相连法构建 OmpH 系统进化树，结果显示，溶藻弧菌 OmpH 与副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、哈
氏弧菌（Vibrio harveyi）等有较近亲缘关系。采用多种参数成功预测了 OmpH 可能的 B 细胞抗原优势表位，分别是第 5-10、106-
110、120-125、158-163 和 175-180 区段。利用 SWISS-MODEL 软件，模拟了 OmpH 亚基三维结构模型，且与其同源蛋白大肠杆菌
（Escherichia coli）Skp 蛋白有相似构型。
关键词 ： 溶藻弧菌 基因克隆 OmpH 基因 外膜蛋白 生物信息学分析
Molecular Cloning and Bioinformatics Analysis of Outer Membrane
Protein H Gene from Vibrio alginolyticus Strain HY9901
Zhou Zejun1，2，3 Pang Huanying1，2，3 Ding Yu1，2，3 Jian Jichang1，2，3 Wu Zaohe2，3，4
（1. Fisheries College of Guangdong Ocean University，Zhanjiang 524088 ；2. Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic
Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals，Zhanjiang 524088 ；3. Key Laboratory of Diseases Controlling for
Aquatic Economic Animals of Guangdong Higher Education Institutions，Zhanjiang 524088 ；4. Zhongkai University of
Agriculture and Engineering，Guangzhou 510225）
Abstract:  Primers for PCR cloning were designed according to the whole genome sequence of vibrio alginolyticus published in GenBank.
The outer membrane protein H（OmpH）gene of V.alginolyticus strain HY9901 was amplified by PCR and cloned into pMD18-T vector to
investigate the possibility of OmpH as a candidate antigen for vaccine production. Sequence analysis revealed that OmpH gene（GenBank
Number ：JX855924）is 573 bp and encodes a putative protein of 190 amino acids. The predicted molecular weight（MW）of OmpH was 21.1
kD with an estimated pI of 9.02. Using SignalP 4.0 and TMHMM Server 2.0 software, and it was predicted that the OmpH protein did not contain
a signal peptide or a transmembranous region. This protein had one N-glycosylation site, six phosphorylation sites, one endoplasmic reticulum
targeting sequence and three microbodies C-terminal targeting signals predicted by SoftBerry-Psite software. To further analyze the evolutionary
relationship among OmpH, a molecular phylogenetic tree was constructed using MEGA5.0 software. In this tree, the OmpH protein showed high
genetic relationship with Vibrio parahaemolyticus and Vibrio harveyi. Using bioinformatices softwares and methods, the B-cell preponderant
epitopes of OmpH were localized in the regions of 5-10、106-110、120-125、158-163 and 175-180. The three-dimensional structure of
2013年第4期 117周泽军等 ：溶藻弧菌 HY9901 外膜蛋白 OmpH 的基因克隆及其生物信息学分析
溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）是一种嗜盐嗜
温性、兼性厌氧的革兰氏阴性短杆菌，广泛分布于
世界各地，是引起多种海水养殖经济动物弧菌病的
重要病原菌之一，可造成巨大的经济损失［1-3］。长
期以来，国内对弧菌病防治仍然主要依靠化学药物
及抗生素，由此带来的环境污染、药物残留及细菌
耐药性现象日趋严重，因而寻找病原体主要保护性
抗原并克隆其基因表达出免疫原性更强，保护力更
高，毒副作用更低的基因工程亚单位疫苗逐渐得到
人们的关注［4］。
外膜蛋白（outer membrane protein，Omp）是革
兰氏阴性菌外膜之中和与外膜有关的所有蛋白的总
称，在维持外膜结构、物质转运，以及宿主的感染
和致病过程等方面有重要的作用［5］。同时其作为细
胞膜中的一种重要成分，具有良好的免疫原性，已
作为疫苗生产的候选抗原，在免疫方面的作用越来
越受到重视［6，7］。吴灶和等［8］发现，将提取的溶藻
弧菌外膜蛋白免疫对虾后，免疫保护率在 65% 以上。
毛芝娟等［9］对副溶血弧菌（V. parahaemolyticus）外
膜蛋白及其免疫原性进行了研究。在哈维氏弧菌（V.
harveyi）中，OmpK 是其重要保护性抗原之一［10］，
并且研究发现哈维氏弧菌 OmpU 重组蛋白对大黄鱼
幼鱼免疫保护率为 85%［11］。此外，Luo 等［12］研究
表明，纯化的天然 OmpH 诱导的保护率与全菌的保
护率相当，OmpH 和全菌都能诱导高水平的 ELISA
抗体。但至目前为止，关于溶藻弧菌 OmpH（outer
membrane protein H）相关研究尚未见相关报道。本
研究对溶藻弧菌 HY9901 株外膜蛋白 OmpH 进行基
因克隆测序，并对其序列特征、B 细胞抗原表位和
亚基结构等进行具体分析，以期为下一步原核表达、
免疫原性研究和亚单位疫苗制备奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 载体和菌株 溶藻弧菌强毒株 HY9901，由本
试验室自广东省湛江海域患病红笛鲷鱼体中分离获
得并保存［13］；克隆载体 pMD18-T 购自 TaKaRa 公司。
1.1.2 主要试剂 Ex Taq DNA 聚合酶购自 TaKaRa
公司 ；细菌基因组 DNA 提取试剂盒、DNA 胶回收
试剂盒购自天根公司 ；其余试剂均为进口或国产分
析纯 ；PCR 引物合成和序列测定均由上海生工生物
技术服务有限公司完成。抗生素使用浓度为 ：氨苄
西林（Ap）100 μg/mL。
1.2 方法
1.2.1 溶藻弧菌 HY9901 总 DNA 的提取 将溶藻弧
菌 HY9901 菌株涂布于 TSA 平板上，挑选单菌落接
种于 TSB（5% NaCl）培养基，28℃振荡培养 12 h 以
上。取适量菌液于 Ependoff 离心管中，10 000 r/min
离心 1 min 收集菌体，参照试剂盒说明书提取基因
组 DNA，-20℃保存备用。
1.2.2 OmpH 基因的克隆 根据 GenBank 上登录的
溶藻弧菌全基因序列（登录号 ：NZ_AAPS00000000）
设计一对引物，上游引物 P1 为 ：ATGGCGATGATG-
AAGAGT，下游引物 P2 为 ：TTATTTTAGAGCTTTA-
ATTACG。以提取的溶藻弧菌 HY9901 总 DNA 为模
板，PCR 反应条件为 ：94℃预变性 4 min ；94℃ 30
s，55℃ 30 s，72℃ 40 s，共 35 个循环 ；72℃延伸
10 min。PCR 产物经 1% 琼脂糖凝胶电泳检验后使用
DNA 胶回收试剂盒切胶回收。
1.2.3 PCR 产物的测序 按照说明书操作步骤，将
PCR 产物连接到 pMD18-T 载体上，然后转化大肠杆
菌 DH5α 感受态细胞，在含 IPTG/X-Gal 的 Ap+/LB 平
板上进行筛选，挑取阳性克隆送至上海生工测序。
1.2.4 溶藻弧菌 HY9901 OmpH 生物信息学分析 利
用 NCBI（http ：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi） 进
行序列同源性比对和相似性分析 ；使用 DNAMAN
Version 6.0（Lynnon Biosoft）进行氨基酸同源比对分
析 ；采 用 ORF Finder（http ：//www.ncbi.nlm.nih.gov/
gorf/gorf.html）和 ExPASy Proteomics Server（http：//ca.
expasy.org）推导氨基酸序列、确定开放阅读框（ORF）、
分子量计算值（Mw）和理论等电点（pI）预测等 ；
通过在线分析软件 SignalP 4.0 Server（http ：//www.
cbs.dtu.dk/services/SignalP）预测信号肽序列 ；采用
OmpH was determined using SWISS-MODEL work-space and it had a similar structure with Skp protein of Escherichia coli. These results can
provide a basis for further studies on the immunogenecity of OmpH and vaccine preparation.
Key words:  Vibrio alginolyticus Gene cloning OmpH gene Outer membrane protein Bioinformatics analysis
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第4期118
TMHMM Server 2.0（http ：//www.cbs.dtu.dk/services/
TMHMM）预测跨膜结构域 ；SoftBerry-Psite（http ：//
linux1.softberry.com/berry.phtml?topic=psite&group=p
rograms&subgroup=proloc）预测氨基酸序列中的功能
位点分布；使用 InterProScan Sequence Search（http：//
www.ebi.ac.uk/Tools/InterProScan） 分 析 蛋 白 质 结 构
功能域 ；亚细胞定位预测采用 PSORT II Prediction
（http ：//psort.hgc.jp/form2.html）。 使 用 Clastal2.0 及
MEGA5.0 软 件， 以 邻 位 相 连 法（Neighbor-joining）
构 建 系 统 进 化 树。 利 用 ExPASy 服 务 器 的 SWISS-
MODEL［14］（http：//www.swissmodel. expasy.org/）程序
进行建模并通过 3D 结构分析软件 PyMOL Viewer 进
行分析。
1.2.5 溶藻弧菌 HY9901 OmpH B 细胞抗原表位预
测 采用 Chou-Fasman［15］方法预测蛋白质的二级
结构，运用 Kyte-Doolittle 亲水性参数［16］、Karplus-
Schulz 柔韧性参数［17］、Emini 表面可及性参数［18］
和 Jameson-Wolf 抗原性参数［19］分别进行单参数预测。
对各个参数的预测结果进行比较，最后结合 DNAstar
软件综合分析以确定溶藻弧菌 HY9901 OmpH 蛋白 B
细胞抗原表位。
2 结果
2.1 OmpH基因的全长克隆
PCR 扩增得到一条约 570 bp 的特异条带（图
1-a），克隆至 pMD18-T 载体，菌落 PCR 也扩增出
570 bp 的条带（图 1-b）。测序表明，OmpH 基因含
有一个 573 bp 的开放读码框（ORF），编码 190 个氨
基酸（图 2）。将该基因提交至 GenBank，登录号为
JX855924。
2.2 OmpH的理化性质
利用 ExPASy 软件对溶藻弧菌 HY9901 OmpH 蛋
白进行分析，结果显示原子总数为 3 036，分子结
构式为 C933H1555N253O289S6。理论分子量为 21.133 kD，
理论 pI 值为 9.02。不稳定系数 36.01，大于阈值 40
则性质不稳定，所以该蛋白比较稳定。脂肪系数为
97.16，总平均亲水性为 -0.384，蛋白总体疏水性较
高。该蛋白不含有色氨酸（Trp）和半胱氨酸（Cys），
280 nm 处 的 摩 尔 消 光 系 数 为 7 450（mol·cm）-1。
酸性氨基酸残基（Asp + Glu）总数为 28，碱性氨基
酸（Arg + Lys）总数为 32，N 末端是甲硫氨酸（Met）。
在酵母和大肠杆菌中表达的半衰期分别大于 20 h 和
10 h，在哺乳动物网状细胞中体外培养表达的半衰
期为 30 h。
2000
bp bpM 1 2 3 4 5 6 7 M bp
573
1000
750
500
250
100
a b
2000
1000
750
500
250
100
M ：DL2000 DNA 分子量标准 ；1-7 ：OmpH PCR 产物
图 1 OmpH 基因的克隆（a）和菌落 PCR（b）
* 表示终止子，方框部分为 N-糖基化位点，浅灰色阴影部分为蛋白激酶 C
磷酸位点，下划线代表酪蛋白激酶 II 磷酸化位点，波浪线代表酪氨酸激酶
磷酸化位点，深灰色阴影部分代表内质网靶信号位点，双下划线代表微体 C
末端定位信号位点
图 2 OmpH 基因核苷酸及其编码的氨基酸序列
2.3 OmpH的序列分析
利用 SignalP 4.0 Server 程序对 OmpH 氨基酸序
列进行 N 端信号肽结构的预测，发现其无明显的信
号肽切割位点，不存在信号肽。TMHMM Server 2.0
程序预测发现该蛋白无跨膜区。SoftBerry-Psite 程序
预测发现该氨基酸序列含有 1 个 N-糖基化位点，6
个磷酸化位点（1 个蛋白激酶 C 磷酸化位点，4 个酪
蛋白激酶 II 磷酸化位点，1 个酪氨酸激酶磷酸化位
点），1 个内质网靶信号位点，3 个微体 C 末端靶信
号位点（图 2）。蛋白质亚细胞定位预测结果显示，
OmpH 位于细胞核中可能性最大，为 56.5%，其次
60
120
180
240
1
61
121
181
241
301
361
421
481
541
300
360
420
480
540
2013年第4期 119周泽军等 ：溶藻弧菌 HY9901 外膜蛋白 OmpH 的基因克隆及其生物信息学分析
为线粒体，可能性为 21.7%，而位于胞外基质和细
胞支架的可能性分别为 8.7% 和 4.3%。
2.4 OmpH的同源性及进化分析
BLAST 分析发现，溶藻弧菌 OmpH 与其他物
种的 OmpH 具有较高的同源性，其中与副溶血弧菌
的 OmpH 氨基酸序列的同源性最高达 98%，多序列
相似性比较表明弧菌中的 OmpH 是高度保守的（图
3）。 利 用 MAGE5.0 的 Neighbor-joining 法， 将 推 导
的 OmpH 氨基酸序列与其他微生物构建系统进化树，
结果（图 4）显示，溶藻弧菌 HY9901 的 OmpH 蛋
白可明显的与副溶血弧菌（V. parahaemolyticus）、哈
氏弧菌（V. harveyi）聚为同一亚族，表明他们之间
有较近亲缘关系，这与传统的形态学和生化特征分
类结果一致。
JX855924
ZP_05910767
ZP_06174972
NP_935341
ZP_00991335
EGR00188
JX855924
ZP_05910767
ZP_06174972
NP_935341
ZP_00991335
EGR00188
JX855924
ZP_05910767
ZP_06174972
NP_935341
ZP_00991335
EGR00188
JX855924
ZP_05910767
ZP_06174972
NP_935341
ZP_00991335
EGR00188
JX855924
ZP_05910767
ZP_06174972
NP_935341
ZP_00991335
EGR00188
80
80
56
80
56
56
120
120
96
120
96
96
160
160
136
160
136
136
100%
Identity
98%
96%
83%
80%
78%
190
190
166
190
166
166
40
40
16
40
16
16
JX855924 ：溶藻弧菌 ；ZP_05910767 ：副溶血弧菌 ；ZP_06174972 ：哈维氏弧菌 ；NP_935341 ：创伤弧菌 ；
ZP_00991335 ：灿烂弧菌 ；EGR00188 ：霍乱弧菌
图 3 OmpH 基因推导氨基酸序列的同源性比较
2.5 OmpH的B细胞抗原表位预测
用 Chou-Fasman 方法来预测 OmpH 的二级结构，
从图 5-a 可以看出，OmpH 二级结构存在 α-螺旋和 β-
折叠。在 α-螺旋和 β-折叠之间存在丰富的转角，分
别在第 4-12、36-41、98-102、106-110、120-125、
158-163 和 175-180 区段。这些区段的转角结构较
为松散，容易与抗体嵌合，形成抗原表位的可能性
较高。
按 Kyte-Doolittle 方法的氨基酸亲水性标准分析
OmpH 的亲水性，由图 5-b 可见，OmpH 的亲水性
区域主要分布在第 5-11、15-22、69-84、91-112、
120-126、155-165 和 174-182 区段。蛋白质的亲水
性区域一般暴露于蛋白的表面，因此，这些区段很
可能成为抗原表位。
由 Karplus-Schulz 法预测 OmpH 的柔韧性，OmpH
蛋白的柔性区域分别比较广泛，主要位于第 4-9、
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第4期120
15-20、36-40、64-68、72-87、91-112、119-127、
132-162、175-179 和 181-184 区段（图 5-c）。柔韧
性大的区域较易发生扭曲，有利于其与抗体的嵌合，
所以是成为抗原表位的可能区域。
由 Emini 法预测 OmpH 的表面可及性，结果显
示表面可及性较大的区域主要集中在 9 个区段，分别
是 第 5-8、15-19、72-84、89-101、108-114、120-
127、134-144、158-163 和 174-181 区段（图 5-d）。
表面可及性大的区域表示其中的氨基酸残基被溶剂
分子接触的可能性较大，这提示该区域可能位于
OmpH 蛋白的表面。
采用 Jameson-Wolf 法预测 OmpH 的抗原性指数，
结果（图 5-e）显示，第 5-10、14-22、72-86、88-
115、119-145、150-163 和 174-185 区段的抗原性指
数较高，表明这些区段是潜在的抗原表位。
利用 DNAStar 软件中的 Protean 模块，对 OmpH
蛋白的二级结构、亲水性、柔韧性、表面可及性及
抗原性指数进行综合分析后，发现该蛋白有多个
啐⯛㙦ቄ἞㧼Yersinia pestisNP_670425
ሿ㛐㔃㛐⚾㙦ቄ἞㧼Yersinia enterocoliticaYP_004297178
䀓⏰㊹⅗᮷ᔿ㧼Erwinia amylovoraYP_003537917
ਁݹᵶ㧼Photorhabdus luminescensYP_928026
䘏㕃⡡ᗧॾ㧼Edwardsiella tardaZP_06713640
䍩∿ᕗ㧼Vibrio fischeriYP_002156781
ຄᔿᕗ㧼Vibrio tubiashiiZP_08738395
⢉劶㛐ᕗ㧼Vibrio ichthyoenteriZP_08742984
ࡋՔᕗ㧼Vibrio vulnificusNP_935341
⚯⛲ᕗ㧼Vibrio splendidusZP_00991335
ᤏᘱᕗ㧼Vibrio mimicusZP_06034065
䴽ҡᕗ㧼Vibrio choleraeEGR00188
䖞㲛ᕗ㧼Vibrio rotiferianusZP_08911097
૸ᔿᕗ㧼Vibrio harveyiZP_06174972
࢟ⓦ㹰ᕗ㧼Vibrio parahaemolyticusZP_05910767
Ʒⓦ㰫ᕗ㧼Vibrio alginolyticusJX855924
0.1
图 4 基于 NJ 法构建的 OmpH 氨基酸系统进化树
A
4.5
4.5
6
F
a
b
c
d
e
1
0
1.7
1.7
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190
B
T
Alpha, Regions-Chou-Fasman
Beta, Regions-Chou-Fasman
Turn, Regions-Chou-Fasman
Hydrophilicity Plot-Kyte-Doolittle
Flexible Regions-Karplus-Schulz
Surface Probability Plot-Emini
Antigenic lndex-Jameson-Wolf
Scale
图 5 OmpH 蛋白 B 细胞抗原表位分析
2013年第4期 121周泽军等 ：溶藻弧菌 HY9901 外膜蛋白 OmpH 的基因克隆及其生物信息学分析
潜在的抗原表位，其中有 5 个区段的特征能够满足
以上全部指标的要求，分别是第 5-10、106-110、
120-125、158-163 和 175-180 区段。这 5 个区段有
较好的亲水性、可及性和较高的抗原性指数，并在
二级结构上含有易形成抗原表位的转角和无规则卷
曲，因此 B 细胞抗原表位可能出现在这些区域内或
者附近。
2.6 OmpH的亚基结构
将 OmpH 氨基酸序列提交至 SWISS-MODEL 程
序，自动搜索同源蛋白作模板，得到 OmpH 单亚基
三级结构模型。结果显示，OmpH 主要有 3 个 α-螺
旋和 3 个 β-折叠（图 6-a），与其同源蛋白大肠杆菌
Skp 单亚基（PDB ID：1U2M）有相似的构型（图 6-b），
且与采用 Chou-Fasman 方法预测的 OmpH 二级结构
基本相符。
a
b
图 6 溶藻弧菌 HY9901 OmpH（a）与大肠杆菌 Skp
（b）亚基三维结构比较
3 讨论
本 研 究 基 于 溶 藻 弧 菌 HY9901 株 外 膜 蛋 白
OmpH 蛋白的氨基酸序列，通过对其二级结构、跨
膜区、亲水性、表面可及性与抗原性等多种参数进
行综合比较分析，预测了 OmpH 可能的 B 细胞抗原
优势表位。吕凤林等［20］对人 C5a 序列进行 B 细胞
表位预测，人工合成这些表位短肽和制备单克隆抗
体，发现该单抗具有更好的特异性和亲和性。Petzke
等［21］预测并用人工方法合成曼氏血吸虫 Sm25 分子
B 细胞抗原表位，用表位肽和 Sm25 重组融合蛋白分
别免疫小鼠后，ELISA 检测发现表位肽的敏感性和
特异性都优于 Sm25 全基因融合蛋白。这提示在今
后的试验中，可以人工合成推测的 B 细胞抗原表位
区域来制备更高效的亚单位疫苗。
溶藻弧菌是引起海水养殖经济动物疾病的重要
病原之一，给水产养殖业造成了较大经济损失。因此，
寻找一种理想的免疫保护性抗原用于该病的免疫防
治则是解决问题的关键。很多研究表明，外膜蛋白
具有良好的免疫原性，是研制基因工程疫苗的良好
材料［8-10］。本研究通过分子生物学方法，克隆了溶
藻弧菌 HY9901 株外膜蛋白 OmpH 的基因全序列，
OmpH 基因的开放阅读框为 573 bp，能编码 190 个
氨基酸残基，与其他弧菌具有相当高的同源性。因
此我们推测溶藻弧菌 OmpH 蛋白可能是弧菌属的一
种共同抗原，下一步工作我们将对其进行原核表达、
免疫原性和免疫保护等研究，为防治弧菌病找到新
的有效共同抗原。
4 结论
本研究从溶藻弧菌 HY9901 成功克隆得到外膜
蛋白 OmpH 的全基因序列。该基因全长 573 bp，编
码 190 个氨基酸，理论分子量为 21.133 kD，理论 pI
值为 9.02。通过在线预测发现 OmpH 的基因无信号
肽和跨膜区，有 1 个 N-糖基化位点，6 个磷酸化位
点，1 个内质网靶信号位点，3 个微体 C 末端靶信
号位点。B 细胞抗原表位可能在第 5-10、106-110、
120-125、158-163 和 175-180 区段。模拟了 OmpH
的三级结构，与大肠杆菌 Skp 蛋白单亚基有相似的
构型。同源性分析表明与副溶血弧菌、哈氏弧菌亲
缘关系较近，推测溶藻弧菌 OmpH 蛋白可能是弧菌
属的一种共同抗原。
参 考 文 献
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（责任编辑 马鑫）