全 文 ：·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第4期
收稿日期 ：2012-10-16
基金项目 ：中央高校基本科研业务费专项资金资助（JUSRP31105, JUSRP111A10）
作者简介 ：邵明瑞，女，硕士研究生，研究方向 ：环境生物技术 ；E-mail ：shaomingrui_s@126.com
通讯作者 ：刘和，男，博士，教授，研究方向 ：环境生物技术和固体废物资源化 ；E-mail ：liuhe@jiangnan.edu.cn
三种油气指示菌定量 PCR 方法的建立及其在油气田
土壤中的初步应用
邵明瑞1  许科伟2  汤玉平2  赵克斌2  符波1  刘和1
（1. 江南大学环境与土木工程学院 环境生物技术研究室，无锡 214122 ；2. 中国石化石油勘探开发研究院
无锡石油地质研究所，无锡 214151）
摘 要 ： 利用建立的 pmoA、bmoX 和 alkB 基因的定量 PCR 方法分别研究了油田和气田土壤中甲烷氧化菌、丁烷氧化菌和
中链烷烃氧化菌的数量丰度，并以背景区土壤作为对照。pmoA 和 alkB 的基因数量均随着采样深度的增加而降低了 1-2 个数量级。
手工法提取油气田土壤 DNA 进行油气指示菌基因定量的结果显示，油田区和气田区土壤中 pmoA 和 alkB 基因丰度略高于背景区样
品。气田区样品的 bmoX 基因丰度为 2.75×105 拷贝数 /g，高于背景区和油田区土壤样品 0.5-1 个数量级。试剂盒提取的土壤 DNA
的基因定量结果表明，油田区样品 pmoA 和 alkB 基因丰度分别为 3.09×104 和 2.56×106 拷贝数 /g，高于气田区和背景区土壤样品，
且气田区样品 bmoX 基因丰度分别高于背景区和油田区样品 1 个数量级和 0.5 个数量级。结果表明 3 种油气指示菌的定量 PCR 技
术的建立可为油气微生物勘探提供新的检测手段。
关键词 ： 油气微生物勘探 实时荧光定量 PCR 甲烷氧化菌 烃氧化菌
The Quantitative PCR Technology for Three Oil and Gas
Indicating Bacteria and Its Preliminary Application
in Oil and Gas Field Soils
Shao Mingrui1 Xu Kewei2 Tang Yuping2 Zhao Kebin2 Fu Bo1 Liu He1
（1. Laboratory of Environmental Biotechnology，School of Environmental and Civil Engineering，Jiangnan University，Wuxi 214122 ；
2. Wuxi Research Institute of Petroleum Geology，Exploration and Production Research Institute，
SINOPEC，Wuxi 214151）
Abstract:  In this paper, the methane-, butane- and alkane-oxidizing bacteria contents in oil and gas field soil was determined by the
established real-time quantitative PCR（qPCR）technologies targeting the pmoA, bmoX and alkB gene respectively, and the background field
soils were compared as the control. The pmoA and alkB gene copies decreased by 1-2 orders of magnitude with the sampling depth increased.
The gene quantification results of DNA samples extracted by manual method indicated the pmoA and alkB gene copies in oil and gas field soils
were slightly higher than in background field soils. The bmoX gene copies in gas field soils was 2.75×105copies/g, which was 0.5-1 order of
magnitude higher than that in background and oil field soils. The results of DNA samples extracted by kit method showed the pmoA and alkB
gene copies in oil field soils were 3.09×104 and 2.56×106 copies/g, respectively, which were higher than that of gas and background field. The
bmoX gene copies in gas field soils is 1 order of magnitude higher than that of background field soils, and 0.5 order of magnitude higher than that
of oil field soils. It is concluded that the established qPCR method of the three oil and gas indicating bacteria provided new detection means for
microbial prospecting of oil and gas.
Key words:  Microbial prospecting of oil and gas（MPOG） Real-time quantitative PCR Methane-oxidizing bacteria Hydrocarbon-
oxidizing bacteria
2013年第4期 173邵明瑞等 ：三种油气指示菌定量 PCR 方法的建立及其在油气田土壤中的初步应用
油气微生物勘探法是一种具有广阔前景的油气
勘探方法，主要研究近地表土壤层中微生物异常与
地下深部油气藏的相关关系。以烃类为唯一碳源和
能源的微生物（即烃氧化菌）有甲烷氧化菌、乙烷
氧化菌、丙烷氧化菌、丁烷氧化菌和己烷氧化菌，
都可作为油气勘探的指示微生物［1-3］。
传统的微生物油气勘探技术是利用微生物计数、
富集培养、分离以及微生物代谢产物的生理、生化
分析来研究土壤中油气微生物的异常，从而预测油
气藏的存在。由于常规的微生物分离培养技术的局
限性以及耗时费力，目前的趋势是利用不依赖于微
生物培养的分子生物学新手段（如定量 PCR 技术、
荧光原位杂交技术等）来研究微生物在环境中的种
群数量、结构与功能、迁移与转归［4-6］。实时荧光
定量 PCR 技术融合了 PCR 高灵敏性、DNA 杂交的
高特异性和光谱技术的高精确定量等优点，可利用
该技术扩增油气指示菌的功能基因，检测其存在和
数量，具有快速、灵敏、高通量、特异性强、自动
化程度高、重复性好、准确定量等特点［6-8］。
甲烷氧化菌的功能基因 pmoA 基因被普遍运用
于环境样品中甲烷氧化菌的检测与定量［9，10］，用于
诊断热成因或后生甲烷气藏。轻烃单加氧酶基因，
包括丙烷单加氧酶 α 亚基基因 prmA 和丁烷单加氧酶
bmoX，负责降解 C3-C4，适用于一般油气田土壤的
诊断［11］；中链烷烃羟化酶基因（alkane hydroxylase
gene，alkB）［12，13］编码 alkB 同系物，存在于许多降
解烷烃的 α-、β-、γ-变型菌和高 G+C 含量的革兰氏
阳性菌中，负责降解 C5-C12。本研究旨在通过建立
基于功能基因 pmoA、bmoX 和 alkB 基因的定量 PCR
技术体系，并分别对油气田土壤样品中甲烷氧化菌、
丁烷氧化菌和中链烷烃氧化菌数量丰度进行测定，
以期为微生物油气勘探的实际应用提供新的高效油
气指示菌检测技术。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 土壤样品来源 供试土壤样品均采自山东胜
利油田附近的一个小型油气田，紧邻渤海以及黄河
三角洲。根据已探明的地下油气藏存在情况，分别
在油田区、气田区和背景区域采集土壤样品，在每
个区域内按照矩形分布方式设置 12 个采样点，每
个采样点之间间隔 50 m 距离，样品采集深度分别
为 0.1、0.6、1.2 和 2.0 m。土样采集后封装在无菌
袋中 4℃冷藏保存，运回实验室后立即进行实验
分析。
1.1.2 试剂 QuantiFast SYBR Green PCR Kit试剂盒、
宿主细胞埃希氏大肠杆菌（Escherichia coli）JM109
均 购 于 TaKaRa 公 司， 质 粒 pGEM-Teasy 载 体 购 于
Promega 公司，所有引物合成和 DNA 序列测序均在
上海生工生物工程有限公司。
1.2 方法
1.2.1 质粒的提取 PCR 扩增得到 pmoA、alkB 和
bmoX 基因测序确定后，连接到 pGEM-Teasy 载体质
粒上，构建重组质粒并转导进入宿主 E. coli 构建重
组菌株。将构建的基因工程菌株在 LB 培养基（0.1%
Amp）200 r/min 37℃振荡培养 6 h 后，利用质粒提取
试剂盒（Tiangen，德国）提取质粒，利用 Nanodrop
2000 紫外 - 可见光分光光度计（Thermo，USA）测
定模板质粒浓度。
1.2.2 定量 PCR 标准曲线的制作 提取的质粒用于
定量 PCR 标准曲线的制作。使用 QuantiFast SYBR
Green PCR Kit 试 剂 盒（Qiagen， 德 国 ） 进 行 定 量
PCR，20 μL 反应体系参照试剂盒说明配制。初步确
定了定量 PCR 条件以后分别应用于油气田土壤 DNA
样 品 pmoA、alkB 和 bmoX 基 因 的 定 量， 根 据 扩 增
结果对 PCR 条件进行优化，最后得到最佳 PCR 条
件。各 PCR 反应的扩增引物和 PCR 反应条件如表 1
所示。
为确保定量 PCR 扩增片段的特异性，试验采用
Rotor Gene-Q 软件（Qiagen，德国）对 PCR 产物进
行了融解曲线分析。根据定量 PCR 得到的荧光阈值
（Ct 值）与基因拷贝数对数值建立线性定量标准曲线。
每个样品做 2 组平行性对照。pmoA、alkB 和 bmoX
基因的拷贝数可以根据以下公式计算 ：
基因拷贝数 =DNA 浓度（ng/μL）×（1 g/106ng）×
（1 molbp DNA/660 g DNA）×（6.023×1023 bp/
molbp）×［1 拷贝 / 质粒大小（bp）］× 模板体积（μL）
注 ：质粒大小 = 载体质粒大小（3 015 bp）+ 携
带基因大小（bp）
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第4期174
1.2.3 油气田土壤中油气指示菌的基因定量
1.2.3.1 土壤 DNA 提取方法 新鲜土壤运回实验室
后，经过冷冻干燥处理，收集于灭菌离心管中冷藏
备用。DNA 手工提取方法具体步骤 ：参照改良的
Zhou 等［17］方法进行 DNA 提取和纯化。冷冻干燥
后的土壤在研钵中加入液氮迅速研磨，重复 2-3 次
直至粉末状，收集土样冷藏备用。称取 0.5 g 研磨后
的土壤置于 2 mL 离心管中，加入 1 mL DNA 提取缓
冲 液（0.1 mol/L Tris-HCl（pH8.0）、0.1 mol/L EDTA
（pH8.0）、0.1 mol/L 磷酸钠（pH8.0）、1.5 mol/L NaCl），
再加入 25 μL 蛋白酶 K 溶液（10 mg/mL），混合均
匀，37℃水浴 30 min，期间每隔 5-10 min 摇匀一次；
加入 20% 的 SDS 溶液 200 μL，并轻轻摇匀，65℃
水浴 30 min，期间每隔 5-10 min 摇匀一次 ；室温
10 000×g 离 心 10 min， 转 移 上 清 液 到 新 的 2 mL
离 心 管 中 ；加 入 等 体 积 的 苯 酚 / 氯 仿 / 异 戊 醇
（25∶24∶1），摇匀后，12 000 r/min 4℃离心 10 min，
收集上清液，加入等体积的氯仿 / 异戊醇（24∶1），
摇 匀 后，12 000 r/min 4 ℃ 离 心 10 min， 收 集 上 清
液 ；加入 0.6 倍异丙醇，4℃条件沉淀 30 min，室
温 13 000×g 离心 20 min，弃上清 ；加入 70% 的乙
醇 1 mL 洗涤沉淀，用枪头吸打，充分混匀，室温
13 000×g 离心 10 min，倒掉上清液，待沉淀干燥后
加入 50 μL TE 溶解，4℃储存（长期储存需 -20℃）
备用。DNA 粗提取液用 UNIQ-10 柱式通用 DNA 纯
化试剂盒（Sangon Biotech（Shanghai）Co. Ltd，中国）
进行纯化，纯化步骤按照试剂盒说明进行操作。
DNA 试 剂 盒 提 取 方 法 ：采 用 PowerSoil DNA
Isolation Kit 土壤 DNA 提取 试 剂 盒（Mobio，USA），
提取步骤按照说明书进行。
1.2.3.2 pmoA、alkB 和 bmoX 基因的定量 PCR 反应
将提取的油气田土壤 DNA 样品作为模板，利用表
1 中扩增引物和 PCR 扩增条件进行定量 PCR 扩增，
根据定量 PCR 得到的 Ct 值计算各基因的拷贝数。
2 结果
2.1 定量PCR标准曲线的建立
各次定量 PCR 反应的融解曲线分析均为一个单
峰，证实了定量 PCR 扩增的特异性。定量 PCR 产
物的凝胶电泳分析显示了清晰的目标条带，无非特
异性扩增现象的出现（图 1）。结果表明，优化的定
量 PCR 扩增条件能够较好地扩增油气田区土壤 DNA
表 1 功能基因扩增引物和 PCR 扩增条件
基因 大小（bp） 引物序列（5-3） 反应条件［温度（℃），时间（s）；目的］ 参考文献
pmoA 510
F ：GGNGACTGGGACTTCTGG ；
R ：CCGGMGCAACGTCYTTACC
95，50 ；变性
61，50 ；退火
72，50 ；延伸
［14］
alkB 550
F ：AAYACNGCNCAYGARCTNGGVCAYAA ；
R ：GCRTGRTGRTCHGARTGNCGYTG
95，50 ；变性
61，50 ；退火
72，50 ；延伸
［15］
bmoX 608
F ：CAAAACGCCRAAGTGCCTGCC ；
R ：CGCCTTSACGAGTACRGARAGT
95，50 ；变性
66，50 ；退火
72，40 ；延伸
［16］
510
bp
A
B
C
550
bp
608
bp
N 9 8 7 6 5 4 3 2 1 M
N 9 8 7 6 5 4 3 2 1 M
N 9 8 7 6 5 4 3 2 1 M
图 1 pmoA（A）、alkB（B）和 bmoX（C）基因定量 PCR
产物的电泳图谱
M ：DNA maker ；1 ：原样 ；2-9 ：1×10-1-1×10-8 稀释梯度 ；N ：阴性对照
2013年第4期 175邵明瑞等 ：三种油气指示菌定量 PCR 方法的建立及其在油气田土壤中的初步应用
中 pmoA、alkB 和 bmoX 基 因， 定 量 PCR 得 到 的 Ct
值与基因拷贝数对数值建立的标准曲线具有较好地
线性关系，R2 均大于 0.99（图 2）。
土壤样品中未检测到 pmoA 基因。
alkB 基因定量结果显示，alkB 基因拷贝数深
度 0.1 m 时丰度最高，随着采样深度增加逐渐降低，
2 m 时达到最低值（图 3-B）。背景区和气田区土壤
alkB 基因定量结果具有相同的变化趋势，alkB 基因
丰度从深度 0.1 m 到 2 m 缓慢降低，最终下降了约 1.5
个数量级 ；油田区土壤中 alkB 基因拷贝数则先从深
度 0.1 m 到 0.6 m 时急剧下降了约 1 个数量级，深度
0.6 m 到 2 m 时之间呈现相对稳定状态。
0
5
10
15
20
25
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
30
A
C
t٬
3 4 5 6 7 8 9
35
5
10
15
20
25
30
2 3 4 5 6 7 8 9
0
5
10
15
20
25
30
C
t٬
B
35
C
C
t٬
y = -3.1521x + 43.458
R2=0.9954
R2=0.9997
y = -3.9904x + 47.092
R2=0.9982
y = -3.281x+34.006
Log10ᤧ䍍ᮠ
Log10ᤧ䍍ᮠ
Log10ᤧ䍍ᮠ
10 11
10 11
图 2 pmoA（A）、alkB（B）和 bmoX（C）基因的定量
PCR 标准曲线
2.2 不同深度油气田土壤的基因定量PCR结果比较
如 图 3 所 示， 背 景 区、 油 区 和 气 区 0.1 m 深
度土壤样品的 pmoA 基因拷贝数分别为 5.43×106，
5.05×106，1.66×107 拷贝数 /g（以土壤干重计）（图
3-A）。油田区土壤 pmoA 基因丰度随着采样深度没
有明显变化，基因拷贝数差异在 0.5 个数量级内 ；
背景区和气区土壤 pmoA 基因丰度从深度 0.1 m 到 0.6
m 时略有下降，到 1.2 m 深度时则下降了 1 个数量级，
2 m 深度时下降到最低值，尤其是深度 2 m 的气区
-200
-150
-100
-50
0
6.0 7.0 8.0 9.0 10.0
㛼Ჟ४൏༔⋩⭠४൏༔≄⭠४൏༔
B
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ṧ૱
␡ᓖ
cm

-200
-150
-100
-50
0
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0
㛼Ჟ४൏༔⋩⭠४൏༔≄⭠४൏༔
A
log10สഐᤧ䍍ᮠ
ṧ૱
␡ᓖ
cm

图 3 不同深度土壤样品的 pmoA（A）和 alkB
（B）基因的定量 PCR 结果
综上分析，背景区、油田区和气田区土壤样品
的 pmoA 和 alkB 基因丰度均随采样深度增加而降低。
深度 0.1 m 到 0.6 m 之间时，基因丰度变化不大 ；深
度 2 m 时基因丰度降到最低值，与 0.1 m 样品相比，
基因拷贝数下降了 1-2 个数量级。
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第4期176
综合本研究结果表明，0.5-1.0 m 更适合作为微
生物勘探过程中大批量调查研究的采样深度，既考
虑了不同采样深度土壤具有不同的土壤性质从而影
响土壤中烃类氧化细菌的活性与数量，又可避免在
采样过程中地表环境对浅层土壤样品造成污染。
2.3 不同区域油气田土壤的基因定量PCR结果比较
背景区、油田区和气田区深 0.6 m 的土壤样品
分别进行 pmoA、alkB 和 bmoX 基 因 的 定 量 PCR 扩
增，其结果如图 4 所示。手工法提取的 DNA 样品
扩增结果（4-A）显示，油田区和气田区土壤样品
的 pmoA 基因拷贝数分别为 6.72×102 和 8.65×102 拷
贝数 /g，略高于背景区为 2.11×102 拷贝数 /g ；背景
区、油田区和气田区土壤样品 alkB 基因丰度分别为
1.87×104、 3.68×104 和 4.18×104 拷贝数 /g。可见，
油田区和气田区土壤的 pmoA 和 alkB 基因丰度均差
别较小，略高于背景区样品。气田区样品的 bmoX
基因丰度相对较高，为 2.75×105 拷贝数 /g，高出背
景区样品 1 个数量级，其基本趋势为气田区 > 油田
区 > 背景区。
试剂盒提取的 DNA 样品扩增结果（图 4-B）显
示， 油 田 区 样 品 pmoA 和 alkB 基 因 丰 度 分 别 为
3.09×104 和 2.56×106 拷贝数 /g，与气田区和背景
区土壤样品比较而言相对较高，同时气田区和背景
区土壤样品差别较小。试剂盒提取 DNA 样品 bmoX
基因扩增结果与手工法 DNA 扩增结果一致，气田区
样品 bmoX 基因丰度分别高于背景区和油田区样品 1
个数量级和 0.5 个数量级，其基本趋势也表现为气
田区 > 油田区 > 背景区。
从以上 3 个基因的定量结果发现，bmoX 基因
在气田区、油田区和背景区土壤样品中的分布差异
㛼Ჟ४≄४⋩४0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
4.5
5.0
5.5
㛼Ჟ४≄४⋩४0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
6.5
BA
pmoAสഐ
alkBสഐ
bmoXสഐ
pmoAสഐ
alkBสഐ
bmoXสഐ
lo
g 1
0สഐ
ᤧ䍍
ᮠ
lo
g 1
0สഐ
ᤧ䍍
ᮠ
A ：手工法提取土壤 DNA ；B ：试剂盒法提取
图 4 油气田土壤 DNA 中 pmoA、bmoX 和 alkB 基因的定量 PCR 结果
较为明显，手工法和商用试剂盒提取的 DNA 样品均
得到了相似的结果，即气田区样品的 bmoX 基因丰
度相对较高，分别为 2.75×105 和 2.29×105 拷贝数 /g，
均高出背景区样品 1 个数量级，其基本趋势为气田
区 > 油田区 > 背景区。
3 讨论
土壤中烃氧化菌的数量不仅受烃类气体浓度的
影响，还与土壤中溶解氧、土壤酸碱性、土壤湿度
等多种环境因子密切相关［18］。土壤中的溶解氧是烃
氧化细菌降解烃类过程所必需的［19］，土壤中溶解氧
的数量会随着深度增加而减少，因而影响到土壤中
烃类氧化细菌的数量和活性。同时，近地表土壤中
烃类的微生物氧化作用较大程度上受湿度控制，若
土壤的水分含量低，将大大减弱甚至完全抑制土壤
中的微生物活动［20］，影响甲烷氧化菌的浓度和活
性［21，22］。不同深度土壤的水分含量明显不同，这
也可能是影响深度土壤中烃氧化菌数量的重要因素
之一。
依据本研究结果确定的微生物勘探最佳采样
深度，对 0.6 m 深度的土壤样品分别进行了 pmoA、
alkB 和 bmoX 三个功能基因的 PCR 定量。PCR 扩增
结果表明气区土壤中的 bmoX 基因丰度较高，bmoX
2013年第4期 177邵明瑞等 ：三种油气指示菌定量 PCR 方法的建立及其在油气田土壤中的初步应用
基因负责编码以丁烷氧化菌为代表的轻烃氧化菌。
美国菲利浦石油公司的微生物石油测量技术（MOST）
认为，C1-C4 轻烃气体中的丁烷受人为影响较少，主
要来源于油气藏，采用丁烷氧化菌作为油气指示菌
的研究对象对油气微生物勘探更具有专属性［23，24］。
鉴于目前利用分子生物学技术研究油气田上方土壤
中丁烷氧化菌群落的报道还较少，未来研究中可把
丁烷氧化菌作为油气指示菌的重点研究对象，进而
进一步探索油气田土壤中丁烷氧化菌群落分布与下
层油气藏分布的关联性。
手工法与试剂盒提取的 DNA 样品之间 pmoA 和
alkB 基因定量 PCR 结果相差 1-2 个数量级，分析原
因可能是由于，手工法得到粗提 DNA 样品以后要经
过一次 DNA 纯化试剂盒纯化，造成了第二次 DNA
大量损失，具体原因目前还在研究中。但从定性角
度分析，两种方法得到的基因丰度在油区、气区和
背景区表现出相同的趋势，即油田区、气田区和背
景区土壤的 pmoA 和 alkB 基因丰度没有表现出明显
的区别，并且本研究中手工法提取 DNA 定量 PCR
得到的 pmoA 基因丰度在 102-103 拷贝数 /g，与满
鹏等［19］的基因定量结果基本一致。因此手工法提
取 DNA 样品的定量 PCR 结果仍是具有参考价值的。
值得注意的是，手工提取方法相比商用试剂盒便宜
60%-80% 的费用，这对于大批量土壤样品的分析来
说可大大减少经济成本。
本研究中建立的 pmoA、bmoX 和 alkB 基因的定
量 PCR 技术应用到油气田土壤可成功扩增油气指示
菌相应的基因片段，并且检测结果稳定。不同区域
的 pmoA、bmoX 和 alkB 基因定量结果显示，油田区
和 / 或气田区土壤中油气指示菌功能基因丰度高于
背景区，尤其是 bmoX 基因分布差异较为明显，在
气田区样品中相对较高。本研究结果初步表明了定
量 PCR 技术可为微生物油气勘探提供了新的检测手
段，尤其是丁烷氧化菌 bmoX 基因的检测。与传统
的培养法相比，定量 PCR 方法具有快速、灵敏的特
点，并可适合于批量化高通量的基因定量检测。进
行大规模土壤样品的检测时，能够大幅度缩短时间，
提高效率。利用分子生物学方法不需要培养微生物，
通过基因定量等直接分析土壤样品中的油气指示菌
的异常，可为微生物油气勘探的实际应用提供新的
油气指示菌检测技术。
4 结论
（1） 建 立 的 pmoA、bmoX 和 alkB 基 因 的 定 量
PCR 方法可成功定量油气田土壤样品中甲烷氧化菌、
丁烷氧化菌和中链烷烃氧化菌的功能基因拷贝数。
（2）随着采样深度的增加，pmoA 和 alkB 基因
丰度降低。考虑到溶解氧、土壤湿度等环境因子的
影响以及采样过程可能对表层土壤造成的污染进而
影响土壤中烃氧化细菌的数量和活性，因此建议采
用 0.5-1.0 m 作为油气微生物勘探的适宜采样深度。
（3）bmoX 基因在气田区、油田区和背景区土壤
样品中的分布差异较为明显，其基本趋势为气田区
> 油田区 > 背景区。结果提示利用基于 bmoX 基因的
定量 PCR 方法检测丁烷氧化菌可作为微生物油气勘
探中重要的油气指示菌检测手段，丁烷氧化菌则可
作为未来油气指示菌研究中的重点检测对象。
参 考 文 献
［1］ Sealy JR. A geomicrobial method of prospecting for oil［J］. Oil &
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（责任编辑 李楠）