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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2014年第4期
大伏革菌（Phlebiopsis gigantea）隶属于担子菌
门（Basidiomycota）、 伞 菌 纲（Agaricomycetes）、 多
孔菌目（Polyporales）、原毛平革菌科（Phanerochae-
taceae），是防治针叶树干基腐朽病的重要菌株。针叶
树干基腐朽病是北半球温带针叶林最为严重的病害
之一，也是经营林分最严重的森林病害［1］，该病害
在我国东北、西北和西南地区的针叶林区内也比较
普遍［2-5］。如今，利用大伏革菌防治针叶树干基腐
朽病已成为防治该病害的主要手段［2，6］。
收稿日期 ：2013-10-09
基金项目 ：引进国际先进林业科学技术项目（2012-4-65）
作者简介 ：李杏春，女，硕士研究生，研究方向 ：异担子菌的生物防治 ；E-mail ：xingchun_8914@foxmail.com
通讯作者 ：戴玉成，男，博士，教授，研究方向 ：菌物分类与分子系统学，森林病理学 ；E-mail ：daiyucheng2013@gmail.com
大伏革菌产纤维素酶条件优化及高效菌株筛选
李杏春  何双辉  戴玉成
（北京林业大学微生物研究所，北京 100083）
摘 要 ： 真菌胞外纤维素酶活可作为高效生防菌株筛选的指标之一，通过测定野生大伏革菌（Phlebiopsis gigantea）菌株在
最优条件下所产生纤维素酶活力高低来达到筛选防治针叶树根腐病高效菌株的目的。以大伏革菌菌株液体培养过程中纤维素酶活
力为指标，通过单因素和正交试验结合的方法，筛选出大伏革菌最适产纤维素酶条件为（g/L）：葡萄糖 30.00，蛋白胨 5.00，磷酸
二氢钾 3.00，硫酸镁 1.50，装液量 120 mL/250 mL，接种量 5%（V/V），初始 pH 为 4.0。测定野生大伏革菌菌株纤维素酶活力的大
小显示 ：08077 号菌株纤维素酶活力最大，13025 号菌株最小。研究得出 08077 号菌株比芬兰商业化生物制剂 Rotstop-F 具有更好
的防治中国小孔异担子菌的潜能。
关键词 ： 大伏革菌 液体培养 优化 纤维素酶活力 正交试验
Optimization of Submerged Culture Requirements for the Cellulase
Activity by Phlebiopsis gigantea and Screening the Most Effective Strain
Li Xingchun He Shuanghui Dai Yucheng
（Institute of Microbiology，Beijing Forestry University，Beijing 100083）
Abstract:  The activity of extracellular cellulase could be used for screening the effective biocontrol strain. We could acquire the most
effective Phlebiopsis gigantea isolate associated with biocontrol conifer root and butt rots by determining cellulase activity of them. Based on
single factor and orthogonal experiment, the optimum medium compositions for the highest cellulase activity were（g/L）：glucose 30.00,
peptone 5.00, KH2PO4 3.00, MgSO4·7H2O 1.50, the optimal liquid medium volume was 120 mL/250 mL, the optimal inoculum volume was 5%
（V/V）, initial pH4.0. By determining cellulase activity of P. gigantea isolates, we concluded that P. gigantea 08077 had the highest cellulase
activity and 13025 was the lowest. P. gigantea 08077 is better to control the Chinese Heterobasidion parviporum than Rotstop-F that had been
registered in Finland.
Key words:  Phlebiopsis gigantea Submerged culture Optimization Cellulase activity Orthogonal array design
纤维素酶是一组能够降解纤维素生成葡萄糖的
酶的总称。它是一种多组分酶，现已确定的纤维素
酶主要组分有内切型葡聚糖苷酶（也称 Cx 酶、CMC
酶）、外切型葡萄糖苷酶（也称纤维二糖水解酶或微
晶纤维素酶）和纤维二糖酶（也称 β-葡萄糖苷酶，
简称 BG）。纤维素酶的来源很广泛，昆虫、软体动物、
原生动物、细菌、真菌、放线菌等都可以产生纤维
素酶［7-9］。
近年来，纤维素酶广泛应用于食品发酵、饲料、
2014年第4期 153李杏春等 ：大伏革菌产纤维素酶条件优化及高效菌株筛选
酿造行业、农副产品深加工、纺织、医药、化工、
环境保护等领域［10，11］，同时，在病原菌的生物防治
中，纤维素酶也发挥了巨大的作用，它能够降解树
木细胞壁纤维素结构，利用降解产物葡萄糖来满足
自身对于营养物质的需要，同时达到在植物组织中
快速定殖的目的。Anna 等［12，13］认为，防治树木根
部病害的生物防治菌株必须能够降解新鲜树桩及其
根部组织，故真菌胞外纤维素酶活可作为高效生防
菌株筛选的指标之一。过去，对大伏革菌的筛选研
究多数利用室内平板拮抗及室外木桩防治结合的方
法，很少把酶活力做为筛选指标，本研究针对已选
定大伏革菌（Phlebiopsis gigantea）菌株，首先优化
其产纤维素酶的条件，其次通过测定野生菌株在最
优培养基中所产生纤维素酶活力的大小以达到筛选
高效菌株的目的。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种 芬兰野生大伏革菌菌株 04052、08076、
08077（引进于芬兰林业研究所，经由平板拮抗试验
从 14 株芬兰野生大伏革菌中初步筛选出拮抗中国小
孔异担子菌效果较好的菌株），中国野生大伏革菌菌
株 13009、13025，Rotstop 生物制剂（Rotstop-F，引
进于芬兰 Verdera 公司）。
1.1.2 培养基 菌种活化固体培养基（g/L）：麦芽
浸粉 20.00，KH2PO4 3.00，琼脂 20.00，pH 自然 ；液
体种子培养基（g/L）：麦芽浸粉 20.00，酵母浸粉
5.00，KH2PO4 1.00，MgSO4·7H2O 0.50，维生素 B1
0.01，pH 自然 ；碳源筛选培养基（g/L）：碳源 20.00，
酵 母 浸 粉 5.00，KH2PO4 1.00，MgSO4·7H2O 0.50，
CaCl2 0.50，维生素 B1 0.01，pH 自然 ；氮源筛选培
养基（g/L）：葡萄糖 20.00，氮源 5.00，KH2PO4 1.00，
MgSO4·7H2O 0.50，CaCl2 0.50，维生素 B1 0.01，pH
自然。
1.2 方法
1.2.1 液体种子制备 将大伏革菌菌株在固体培养
基上活化，用打孔器取长势一致、直径 6 mm 的菌
饼 5 块接种至液体种子培养基中（100 mL/250 mL），
28℃，150 r/min 培养 7 d，得到一级发酵种子，匀浆
后按 10%（V/V）接种量接至液体种子培养基中（100
mL/250 mL），28℃，150 r/min 培养 3 d 得二级发酵
种子，4℃保存备用。
1.2.2 培养基组成优化 本试验考虑到影响大伏
革 菌 生 长 的 4 个 条 件 —— 碳 源、 氮 源、KH2PO4、
MgSO4·7H2O，首先设计单因素试验，筛选最适碳、
氮源 ；其次，设计 4 因素、3 水平正交试验 L9（3
4），
用以优化培养基成分最适比例，确定最佳培养条件
（正交试验的因素水平设计见表 1）。
表 1 正交试验因素水平表
水平
因素
碳源（g/L） 氮源（g/L） KH2PO4（g/L） MgSO4·7H2O（g/L）
1 10 5 1 0.5
2 20 10 2 1.0
3 30 15 3 1.5
1.2.3 液体培养方法 将二级液体发酵种子按 10%
（V/V）接种量接种至筛选用培养基中，28℃，150 r/min
培养 7 d，每个处理重复 3 次。
1.2.4 粗酶液制备 取培养 7 d 的发酵液，24℃，
12 000 r/min 离心 10 min，上清液即为粗酶液，4℃
保存备用。
1.2.5 DNS 试剂（3，5-二硝基水杨酸）制备 见参
考文献［14］。
1.2.6 葡萄糖标准曲线制作 分别取 7 支具塞试管，
其中一支加入 2.0 mL 蒸馏水做空白，另外 6 支分别
加入不同体积（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 和 1.2 mL）
的浓度为 1 mg/mL 葡萄糖标准液，补充水到 2.0 mL。
然后每支试管加入 1.5 mL DNS 试剂，将各试管摇匀，
在沸水浴中准确煮沸 5 min，取出，冰浴冷却至室温，
用蒸馏水定容至 25 mL，加塞后颠倒混匀，在紫外 -
可见分光光度计 540 nm 处测定吸光值，用空白调零
点。以 A540 吸光值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为
横坐标绘制标准曲线。
1.2.7 纤维素酶活力测定 本试验采用羧甲基纤维
素钠盐（CMC-Na）酶活性测定方法，取 0.1 mL 粗酶
液，加入 1.9 mL 羧甲基纤维素钠溶液，混匀，置于
40℃水浴锅中保温 30 min 后，立即加入 1.5 mL DNS
试剂，沸水浴 5 min，取出冷却至室温，用蒸馏水稀
释至 25 mL，颠倒混匀后，于 540 nm 处测定吸光值，
以 0.1 mL 煮沸的粗酶液加 1.9 mL 底物羧甲基纤维素
钠溶液做对照，每个处理重复 3 次，求平均值。按
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第4期154
葡萄糖标准曲线，计算 CMC-Na 被羧甲基纤维素酶
分解的葡萄糖含量，1 个酶活单位定义为每分钟生
成 1 μmol 葡萄糖所需要的酶量。
1.2.8 高效大伏革菌菌株筛选 将芬兰和中国野生
大伏革菌菌株的二级液体发酵种子按 10%（V/V）的
接种量接种至优化后的产纤维素酶培养基中，28℃，
150 r/min 培养 7 d，取发酵液，离心后测定纤维素酶
活力，每个处理重复 3 次。
1.2.9 数据处理 采用 SPSS17.0 对单因素和正交
试验的数据进行方差分析，检验数据间的差异性，
P<0.05 时为差异显著，用 EXCEL 作图。
2 结果
2.1 葡萄糖标准曲线的测定
根 据 1.2.6 方 法 测 定 葡 萄 糖 标 准 溶 液 的 吸 光
度，运用 SPSS17.0 对数据进行处理，绘制葡萄糖标
准曲线，对应的回归方程为 ：y=0.581 1x+0.014 9，
R2=0.998 8。此标准曲线线性关系很好，可用于纤维
素酶活力的测定。
2.2 碳源筛选结果与分析
本试验分别以葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、复合碳
源 1（麦芽糖∶甘露醇 =2∶1）和复合碳源 2（葡
萄糖∶甘露醇 =2∶1）为筛选碳源，羧甲基纤维素
酶活力为指标进行试验。结果（图 1）显示，当碳
源为葡萄糖时，大伏革菌的纤维素酶活力达到最大
（1 749.71 U/L），复合碳源 2 次之，而以蔗糖为碳源时，
大伏革菌的纤维素酶活力最低（316.72 U/L）。方差
分析结果（表 2）显示，所用碳源不同，不同处理
间大伏革菌纤维素酶活力差异极显著。因此，选择
葡萄糖作为大伏革菌产纤维素酶的最适碳源。
表 2 碳源方差分析表
变异来源 自由度 自由度 df 均方 F 值 显著性
组间 3 140 782.807 4 785 195.702 220.381 0.000
组内 35 628.955 10 3 562.896
总数 3 176 411.763 14
2.3 氮源筛选结果与分析
本试验分别以蛋白胨、酵母浸粉、硝酸钠、硫
酸铵和复合氮源 1（酵母浸粉∶蛋白胨 =1∶1）为筛
选氮源，羧甲基纤维素酶活力为指标进行试验，结
果（图 2）显示，当氮源为蛋白胨时，大伏革菌的
纤维素酶活力达到最大（892.46 U/L），复合氮源 1
次之，而以硝酸钠为氮源时，大伏革菌的纤维素酶
活力最低（725.69 U/L）。方差分析结果（表 3）显示，
所用氮源不同，不同处理间大伏革菌维素酶活力差
异极显著。选择蛋白胨作为大伏革菌产纤维素酶的
最适氮源。
0 㪑㨴㌆ 㭇㌆ 哖㣭㌆ ༽ਸ⻣Ⓚ1༽ਸ≞Ⓚ2≞Ⓚ
㓔㔤
㍐䞷
⍫࣋
U/L

500
1000
1500
2000
2500
复合碳源 1 ：麦芽糖∶甘露醇 =2∶1 ；复合碳源 2 ：葡萄糖∶甘露醇 =2∶1
图 1 碳源对纤维素酶活力的影响
0
100
㳻ⲭ㜘 䞥⇽⎨㊹ ⺍䞨䫐 ⺛䞨䬥 ༽ਸ≞Ⓚ1≞Ⓚ
㓔㔤
㍐䞷
⍫࣋
U/L

200
300
400
500
600
700
800
900
1000
复合氮源 1 ：酵母浸粉∶蛋白胨 =1∶1
图 2 不同氮源对纤维素酶活力的影响
表 3 氮源方差分析表
变异来源 自由度 自由度 df 均方 F 值 显著性
组间 51 217.969 4 12 804.492 12.637 0.001
组内 10 132.237 10 1 013.224
总数 61 350.206 14
2.4 正交试验结果分析
4 因素 3 水平 3 重复正交试验结果见表 4，分
别使用极差分析和方差分析法对试验结果进行分析。
极差分析结果显示，碳源对纤维素酶活力影响最大，
其次是氮源，影响最小的因素为磷酸二氢钾。从平
均值看，碳源、磷酸二氢钾、硫酸镁的第 3 水平最好，
氮源的第 1 水平最好，因此，大伏革菌产纤维素酶
最佳培养基组合为 A3B1C3D3。
2014年第4期 155李杏春等 ：大伏革菌产纤维素酶条件优化及高效菌株筛选
以大伏革菌纤维素酶活力为因变量对正交试验
结果进行方差分析，结果（表 5）显示，不同水平
的碳源、氮源、磷酸二氢钾和硫酸镁对大伏革菌纤
维素酶活力影响均显著。综合两种分析方法，得出
大伏革菌产纤维素酶最佳培养基组合为 A3B1C3D3，
即 1 L 培养基中含葡萄糖 30.00 g，蛋白胨 5.00 g，磷
酸二氢钾 3.00 g，硫酸镁 1.50 g。由于正交表中没有
该组合，所以设置 1 组试验来进一步验证最佳培养
基组合的合理性，得出大伏革菌纤维素酶活力分别
为 ：3 002.29、3 142.51 和 3 091.52 U/L，平均值为 3
078.77 U/L，大于正交表中最大值 1 304.78 U/L，认
为该组合适合大伏革菌产纤维素酶。
表 4 四因素三水平正交试验结果
试验号
因素
纤维素酶活力（U/L）
A 葡萄糖 B 蛋白胨 C KH2PO4 D MgSO4·7H2O
1 1 1 1 1 222.33
2 1 2 2 2 187.28
3 1 3 3 3 308.38
4 2 1 2 3 699.29
5 2 2 3 1 453.91
6 2 3 1 2 367.86
7 3 1 3 2 1 304.78
8 3 2 1 3 954.24
9 3 3 2 1 509.15
K1 717.99 2 226.41 1 544.43 1 185.38
K2 1 521.06 1 595.42 1 395.71 1 859.93
K3 2 768.16 1 185.38 2 067.07 1 961.90
K
___
1 239.33 742.14 514.81 395.13
K
___
2 507.02 531.81 465.24 619.98
K
___
3 922.72 395.13 689.02 653.97
R 683.39 347.01 223.78 258.84
纤维素酶活力为平均值（n=3）；K1，K2，K3 为纤维素酶活力 3 次重复总和，K
-
1，K
-
2，K
-
3，R 为纤维素酶活力的平均值和极差
表 5 正交试验方差分析表
变异来源 自由度 自由度 df 均方 F 值 显著性
A 2 134 479.950 2 1 067 239.975 102.323 0.000
B 549 993.843 2 274 996.921 26.366 0.000
C 248 658.521 2 124 329.261 11.920 0.001
D 356 130.420 2 178 065.210 17.072 0.000
误差 187 741.724 18 10 430.096
总计 3 477 004.457 26
2.5 pH 值对大伏革菌纤维素酶活力影响
培养基的酸碱度对真菌生命活动有很大的影响，
本试验在单因素和正交试验的基础上，探索不同 pH
值对大伏革菌纤维素酶活力的影响。控制初始 pH
值分别为：3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、6.0、7.0 和 8.0，
酶反应时间 30 min，测定羧甲基纤维素酶活力，结
果见图 3。
由图 3 可知，随着培养基酸碱度递增，羧甲基
纤维素酶活力先增高后降低，在 pH4.0 时，大伏革
菌纤维素酶活力达到最大，pH8.0 时，酶活力最低。
方差分析结果（表 6）显示，不同 pH 值对大伏革菌
纤维素酶活力影响有显著差异，故选择 pH4.0 作为
大伏革菌产纤维素酶最适初始 pH。
3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 6.0 7.0 8.0
ࡍ࿻pH
㓔㔤
㍐䞷
⍫࣋
U/L

2800
2900
3100
3000
3200
3300
3400
3500
图 3 pH 值对纤维素酶活力的影响
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第4期156
表 6 pH 值方差分析表
变异来源 自由度 自由度 df 均方 F 值 显著性
组间 648 703.928 7 92 671.990 16.172 0.000
组内 91 685.796 16 5 730.362
总数 740 389.724 23
2.6 接种量对大伏革菌纤维素酶活力影响
本试验在单因素和正交试验的基础上，探索不
同接种量对大伏革菌纤维素酶活力的影响。分别接
种 2%、5%、10% 和 15% 种 子 液 于 100 mL/250 mL
三角瓶中，酶反应时间 30 min，测定羧甲基纤维素酶
活力。结果（图 4）显示，在 100 mL 培养基中接入
5% 的种子液，纤维素酶活力最大，而接入 15% 的
种子液，酶活力最小。方差分析结果（表 7）显示，
不同接种量对大伏革菌纤维素酶活力影响有显著差
异，5% 的接种量最适合大伏革菌产纤维素酶。
8）显示，不同装液量对大伏革菌纤维素酶活力影响
有显著差异，故选择 120 mL 作为大伏革菌产纤维素
酶最佳装液量。
2% 5% 10% 15%᧕⿽䟿V/V
㓔㔤
㍐䞷
⍫࣋
U/L

2000
2200
2400
2600
2800
3000
3200
3400
3600
3800
图 4 接种量对纤维素酶活力的影响
表 7 不同接种量方差分析表
变异来源 自由度 自由度 df 均方 F 值 显著性
组间 1 457 263.645 3 485 754.548 39.694 0.000
组内 97 899.528 8 12 237.441
总数 1 555 163.173 11
2.7 装液量对大伏革菌纤维素酶活力影响
本试验在单因素和正交试验的基础上，探索不
同装液量对大伏革菌纤维素酶活力的影响。在 250
mL 三角瓶中，分别装入 50、70、100、120、140 和
160 mL 培养基，酶反应时间 30 min，测定羧甲基纤
维素酶活力，结果见图 5。
由图 5 可知，随着装液量的增加，大伏革菌纤
维素酶活力先增高后降低，装液量为 120 mL 时，酶
活力最大；50 mL 时，酶活力最小。方差分析结果（表
50 70 100 120 140 160㻵⏢䟿mL
㓔㔤
㍐䞷
⍫࣋
U/L

2000
2200
2400
2600
2800
3000
3200
3400
图 5 装液量对纤维素酶活力的影响
表 8 装液量方差分析表
变异来源 自由度 自由度 df 均方 F 值 显著性
组间 1 426 239.414 5 285 247.883 12.962 0.000
组内 264 087.834 12 22 007.320
总数 1 690 327.249 17
2.8 高效大伏革菌菌株筛选
本试验从芬兰和中国野生大伏革菌中通过测定
其纤维素酶活力的方法来筛选生物防治异担子菌的
高效菌株，芬兰 Verdera 公司的商业制剂 Rotstop-F
作为对照菌株，试验所用培养基为优化后培养基，
即 1 L 培养基中含葡萄糖 30.00 g，蛋白胨 5.00 g，磷
酸二氢钾 3.00 g，硫酸镁 1.50 g，装液量 120 mL/250
mL，接种量 5%（V/V），初始 pH 为 4.0。结果（图
6）显示，不同大伏革菌其纤维素酶活力不同，菌
株 08077 纤维素酶活力最高，Rotstop-F 次之，13025
最低。方差分析结果（表 9）显示，不同菌株间纤
维素酶活力酶活力有显著差异，经多重比较，菌株
0
04052 08076 08077 13009 13025 Rotstop-F㧼Ṛ㕆ਧ
㓔㔤
㍐䞷
⍫࣋
U/L

500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
图 6 高效大伏革菌菌株筛选
2014年第4期 157李杏春等 ：大伏革菌产纤维素酶条件优化及高效菌株筛选
08077 和对照 Rotstop-F 间纤维素酶活力有显著差异，
08077 比商业化的生物制剂具有更高的纤维素酶活
力，能更好的防治中国的异担子菌。
表 9 高效大伏革菌菌株筛选方差分析表
变异来源 自由度 自由度 df 均方 F 值 显著性
组间 2 479 679.048 5 495 935.810 78.849 0.000
组内 75 476.306 12 6 289.692
总数 2 555 155.355 17
3 讨论
纤维素酶是诱导酶，不同碳源对纤维素酶的合
成具有显著的影响［15］，本试验通过单因子试验，从
5 种碳源中最终选择葡萄糖作为大伏革菌产纤维素
酶的最适碳源，通过方差分析，该选择具有合理性；
碳源浓度为 30 g/L，浓度过低不能满足微生物生长、
繁殖和代谢所需的营养物质和能源，不利于产酶。
氮源是微生物细胞蛋白质和核酸的主要成分，对微
生物的生长发育有着重要的意义［16］，本试验中蛋白
胨对纤维素酶的合成有较大的诱导作用，这与勇强
等［19］在 2004 年得出的里氏木霉产纤维素酶最适氮
源是一致的。正交试验显示，蛋白胨最适用量为 5 g/L，
蛋白胨浓度过高反而不利于产酶，原因可能为氮源
浓度过高，菌体生长过于旺盛，发酵液黏稠，影响
溶解氧和营养物质的利用［17］，从而对酶的生产带来
不利的影响，所以“高碳低氮”比较适合大伏革菌
产生纤维素酶。
无机盐也是微生物生长过程中不可缺少的营养
物质。K+ 是细胞中的主要无机阳离子，是许多酶的
激活剂，它与原生质胶体特性和细胞膜透性密切相
关［18］，而磷酸二氢钾还具有调节渗透压和缓冲调节
pH 的作用［19］，本试验最佳磷酸二氢钾用量为 3 g/L；
Mg2+ 在微生物的生长代谢中起着重要作用，是许多
重要酶的辅助因子，在细胞中起着稳定核糖体、细
胞膜和核酸的作用［18］，本试验最佳硫酸镁的用量为
1.5 g/L。
pH 值通过影响菌体细胞膜的带电荷性质、膜的
稳定性及相应酶的活性来影响菌体生命活动［18］，本
试验最佳 pH 为 4.0，随着培养基酸碱度的递增，酶
活力降低，此结论与黑曲霉的最适 pH 大体一致［20］，
由此判断大伏革菌适合在酸性条件下产纤维素酶，
最终选择 pH4.0 作为大伏革菌产纤维素酶初始 pH。
培养基装液量和接种量通过影响其通气量和营
养物质的利用来影响菌体产酶［21］，装液量越小，其
通气量越高，本试验最佳装液量为 120 mL，装液量
继续增大，纤维素酶活力没有明显增大，相反摇床
负荷变大，不利于仪器的长久使用。在营养物质含
量固定的情况下，接种量越大，随着培养时间的延长，
营养物质消耗过快，导致营养不足，影响微生物生长，
所以本试验最佳接种量为 5%（V/V）。
Davet［22］在 1987 年发现，纤维素酶在生防菌株
营养竞争方面起着重要作用，纤维素酶活与其生物
防治潜能有一定相关性，纤维素酶活越高，生防潜
能越大。本试验得出，大伏革菌的不同菌株纤维素
酶活力具有差异性，使其生物防治效率不同。本人
在前期初筛试验中得出，04052、08076、08077 号
大伏革菌较芬兰其他野生菌株具有较高的生长速率
和拮抗率，能够快速覆盖小孔异担子菌，起到显著
的生防效果，故本试验材料选择此 3 株菌株进行，
由于三者拮抗率差异不显著，所以，本研究通过测
定大伏革菌纤维素酶活力进一步筛选高效菌株。结
果表明，08077 号菌株纤维素酶活力最大，比芬兰
商业化的生物制剂 Rotstop-F 及野生大伏革菌菌株
04052、08076 号具有更高的纤维素酶活力，说明
08077 号菌株具有更好的防治中国小孔异担子菌的
潜能。
4 结论
通过单因素和正交试验结合的方法，以纤维素
酶活力为筛选指标，优化大伏革菌产纤维素酶条件，
通过测定野生大伏革菌（Phlebiopsis gigantea）菌株
在最优条件下所产生纤维素酶活力高低来筛选防治
针叶树根腐病的高效菌株。结果表明，大伏革菌最
适产纤维素酶条件为（g/L）：葡萄糖 30.00，蛋白胨
5.00，磷酸二氢钾 3.00，硫酸镁 1.50，装液量 120
mL/250 mL，接种量 5%（V/V），初始 pH 为 4.0。供
试菌株中 08077 号菌株纤维素酶活力最大，13025
号菌株最小，显示 08077 号菌株比芬兰商业化生物
制剂 Rotstop-F 具有更好的防治中国小孔异担子菌的
潜能。
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2014年第4期158
参 考 文 献
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（责任编辑 李楠）