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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2012年第6期
收稿日期 : 2012-02-29
基金项目 : 中国农业科学院作物科学研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资助项目（2060302-13）, 农业部农村能源综合建设
项目（2130138-018）
作者简介 : 田谷 , 女 , 硕士研究生 , 研究方向 : 微生物 ; E-mail: latte_10@hotmail.com
通讯作者 : 顿宝庆 , 男 , 博士 , 副研究员 , 环境微生物基因工程 ; E-mail: baoqingdun9@hotmail.com;
许修宏 , 男 , 博士生导师 , 研究方向 : 应用微生物 ; E-mail: howard2857@hotmail.com
桔青霉木聚糖酶基因克隆及其在毕赤酵母中的
表达及活性分析
田谷1， 2 顿宝庆1 王智1 李维维1， 2 许修宏2 李桂英1
（1 中国农业科学院作物科学研究所 国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程 中国农业科学院生物质能源研究中心，北京 100081 ；
2 东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030）
摘 要： 通过同源序列 PCR克隆的方法，获得桔青霉（Penicillium citrinum）CR-2菌株的木聚糖酶编码基因 xyl，该基因全
长 984 bp，编码 327个氨基酸，无内含子序列，具有完整开放阅读框。其编码的氨基酸序列 N端具有一段包含 19个氨基酸的信号
肽序列，并具有糖基水解酶第 10家族（GH10）的保守催化域特征，推测该酶属于第 10家族成员。将该基因与毕赤酵母表达载体
pPIC9相连接构建重组载体 pPIC9-XYL，电击转化至毕赤酵母GS115菌株中。挑选阳性重组子经测序、酶活性以及 SDS电泳分析表明，
xyl基因成功在毕赤酵母中分泌表达，重组酶活性可达 214.15 IU/mL。该重组酶最适温度与最适 pH分别为 50℃和 4.5，且具有良好
的 pH和热稳定性。
关键词： 桔青霉 木聚糖酶 毕赤酵母 酶学性质 表达
Cloning, Expression and Characterization of an Endo-β-1, 4-xylanases
from Penicillium citrinum in Pichia pastoris
Tian Gu1, 2 Dun Baoqing1 Wang Zhi1 Li Weiwei1, 2 Xu Xiuhong2 Li Guiying1
（1The National Key Facility for Crop Gene Resources and Genetic Improvement of Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural
Sciences, Beijing 100081; 2College of Life Sciences, Northeast Agricultural University, Harbin 150030）
Abstract: The complete gene of endo-β-1, 4-xylanases was cloned from Penicillium citrinum CR-2, which is 984 bp in length,
contained no intron and encoded 327 amino acids, N-terminal has a 19 amino acid signal peptide sequence. It contains the conserved catalytic
domain of glycoside hydrolase family 10 （GH10）, suggested belongs to glycoside hydrolase family10. The recombinant plasmid pPIC9-
XYL was constructed by cloning the gene into vector pPIC9 and transformed into Pichia pastoris strain GS115 by electroporation. The xyl
gene was expressed in Pichia pastoris successfully by sequencing and enzyme activity. The activity of the recombinant protein reached to
214.15 IU/mL. The optimum pH and temperature of the recombinant enzyme was 50℃ and 4.5 respectively, the stability of pH and temperature
were both high.
Key words: Penicillium citrinum Endo-β-1, 4-xylanases Pichia pastoris Enzymology characteristics Expression
半纤维素是自然界纤维素类生物质资源中含量
第二的多糖，仅次于纤维素的含量［1］。它是存在于
大多数植物细胞壁中的一类杂聚多糖，由几种不同
类型的单糖构成，其中以木聚糖含量最高。木聚糖
酶是将木聚糖降解为木糖和低聚糖的一组酶系的总
称，也是木聚糖降解酶系中最关键的酶［2］。它可将
木聚糖降解成低聚木糖和木糖的水解酶，主要有 3
种 ：β-1，4-D-内切木聚糖酶、β-1，4-D-外切木聚糖酶
和 β-木糖苷酶。其中降解木聚糖主链的 β-1，4-D-内
切木聚糖酶占最重要的地位［3］。随着木聚糖酶在各
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2012年第6期88
领域工业中越来越广泛的应用，针对目前实际生产
应用中木聚糖酶降解效率低，生产成本高等问题，
开发活性高、稳定性强且 pH 耐受性好的木聚糖酶
已成为相关研究中的重要方向。
自然界中存在着许多能够生产木聚糖酶的微生
物，如细菌、真菌、放线菌等。其中丝状真菌由于
其自身能够分泌胞外木聚糖酶且分泌能力极强的特
点得到了最为广泛的关注，尤其以曲霉属和木霉属
的相关研究最为深入。但近几年的大量研究表明，
青霉属真菌不仅能够分泌组成齐全、酶活较高的木
质纤维素降解酶，并且有易培养、生长快的优势［4］。
因此青霉来源的一些木聚糖降解酶已经相继被开发
出来。但相关研究多数仍集中于产木聚糖酶的优良
菌株选育和相关酶性质研究上，对于青霉来源木聚
糖酶编码基因的克隆和异源表达的研究相对较少。
自 Sahasrabudhe 和 Ranjekar［5］克隆出第一个青霉纤
维素酶基因以来，对于青霉纤维素酶基因的研究也
进入了基因水平。
Wakiyama［6］和 Tanaka 等［7］分别在 2005 年和
2008 年相继纯化了两种来自于桔青霉菌株的木聚糖
酶，分析了其酶学性质，并克隆得到了相关木聚糖
酶基因，分析了其酶学性质，并克隆得到了相关木
聚糖酶基因，但是对于其木聚糖酶基因的异源表达
及氨基酸序列结构分析并没有进行深入研究。
本研究克隆得到了无内含子的桔青霉木聚糖酶
基因 xyl，通过基因工程的方法构建毕赤酵母表达系
统，获得细胞外的活性表达，并对重组酶的酶学性
质进行深入分析，测定桔青霉 CR-2 重组木聚糖酶的
热稳定性及 pH 耐受范围，旨在为构建高效工程菌
株并应用于工业生产提供理论及材料基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株与载体 桔青霉（Penicillium citrinum）
菌株 CR-2 由本实验室（CGMCC No. 3024，专利号
200910082211.3）保存。大肠杆菌（Escherichia coli）
DH5α、毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115 及其表达
载体 pPIC9 为 Invitrogen 公司产品 ；质粒 pGEM-T
easy 购自 Promega 公司。
1.1.2 酶与试剂 各种限制性内切酶均购自 NEB 公
司。T4 DNA 连接酶，Taq DNA 聚合酶，胶回收试剂
盒和 DNA 片段纯化试剂盒均购自 TaKaRa 公司。酶
活测定相关试剂购自 Sigma 公司，其他常规试剂为
进口分装或国产分析纯。引物的合成及序列的测定
由上海生工公司完成。
1.1.3 培养基 LB 培养基见文献［8］；YEPD、MM、
MD、BMGY、BMMY 培养基根据 Invitrogen 公司操
作手册配制。
1.2 方法
1.2.1 木聚糖酶编码基因 xyl 的克隆与序列分析
根据 GenBank 中已经发表的木聚糖酶基因序列设计
上下游引物，引物序列分别为：F：5-ATGCTCTCCA-
ACGCTCGTAT-3，R：5-TTAAGCAAAACCGCCACT-
AACC-3。
利用 QIAGEN 公司总 RNA 提取试剂盒提取
CR-2 的总 RNA。以总 RNA 为模板，反转录合成
cDNA，再以 F 和 R 为引物进行 PCR 扩增。PCR 扩
增程序为 ：94℃预变性 5 min ；94℃变性 30 s，52℃
退火 30 s，72℃延伸 1.5 min，25 个循环 ；72℃延伸
5 min。PCR 产物进行电泳分析，纯化后与 pGEM-T
easy 于 4℃过夜连接，得到重组质粒 pGEM-XYL 并
进行测序分析。采用 BLAST 进行序列的同源性比
对，DNAMAN 软件对 DNA 序列进行翻译与分析，
DNAStar 用于氨基酸序列比对，利用 SWISS-MODEL
系统构建蛋白同源三维结构模拟图。
1.2.2 表达载体的构建及重组毕赤酵母的筛选 分
析木聚糖酶基因 xyl 的限制性酶切位点，设计引
物包括双酶切位点 SnaB I 和 EcoR I，引物序列
为 ：E1 ：5-ACGTAATGATTAAGTCTAA-3；E2 ：
5-GAATTCTTACCACACCGT-3。以重组质粒 pGEM-
XYL 为模板进行 PCR 扩增。琼脂糖凝胶电泳后，回
收得到目的片段并与载体 pPIC9 分别经 SnaB I 和
EcoR I 双酶切后，以 T4 连接酶连接，转化 E. coli
DH5α 感受态细胞中，涂布到含氨苄青霉素抗性的
LB 平板过夜培养，经菌落 PCR 鉴定，阳性重组子
提取质粒测序。得到的重组质粒命名为 pPIC9-XYL。
重组表达载体 pPIC9-XYL，经 BglⅡ线性化后
回收，电击转化至毕赤酵母 GS115 感受态细胞中［9］，
涂布于固体 MD 培养基上，30℃培养至菌落出现。
2012年第6期 89田谷等 ：桔青霉木聚糖酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达及活性分析
PCR 鉴定后的阳性转化子按照毕赤酵母操作手册进
行诱导表达，测定酶活，选取最高表达量的重组子
为目标重组子。
1.2.3 重组木聚糖酶的诱导表达和纯化 目标重组
子于 10 mL 的 BMGY 中 30℃、300 r/min 条件下培
养至 OD600=2.0-6.0 ，离心后以 10 mL 培养基 BMMY
重悬菌体，相同条件下继续诱导培养，每 24 h 添
加甲醇至终浓度为 0.5%-1% 诱导表达。诱导 72 h
后，离心并收集上清液，分别用 20%、30%、40%、
50%、60%、70% 和 80% 饱和度的（NH4） 2SO4 进行
浓度梯度分级沉淀，于 4℃过夜后离心、弃去上清
液，以适量 0.1 mol/L pH6.0 的乙酸钠缓冲液溶解沉
淀。重组蛋白通过 10 kD 大小的超滤浓缩管（Milli-
pore Corporation，USA）进行浓缩纯化。
1.2.4 重组木聚糖酶酶活测定和 SDS-PAGE 分析
重组木聚糖活性测定采用 DNS 法［10］，重复 3 次，
以灭活酶液作为对照。取 100 μL 中性木聚糖（美国
Sigma 公司）底物，与待测酶液混合于 50℃恒温水
浴中反应15 min。加入600 μL的DNS试剂，震荡混匀，
于沸水浴中煮 5 min。以流动的冷水终止反应后，在
OD540nm 下测吸光值，对照木糖标准曲线测算酶活力。
1 个木聚糖酶活性单位（IU）为 ：以 1% 可溶性木聚
糖为底物，每分钟在最适条件 pH 和温度下分解木
聚糖生成 1 mol 木糖所需的酶量。采用 BIO-RAD 蛋
白电泳试剂盒操作，分离胶浓度为 10%，浓缩胶浓
度为 4% 的 SDS-PAGE 分析重组蛋白。
1.2.5 重组酶酶学性质的分析
1.2.5.1 重组酶最适 pH 值测定 纯化后的重组酶以
不同 pH 的缓冲液进行稀释（乙酸钠缓冲液 pH4.5-
6.0，磷酸钠缓冲液 pH6.0-8.0，Tris-HCl 缓冲液 pH
8.0-10.0），稀释后的酶液在 50℃条件下进行酶促反
应以测定其最适 pH。以最高酶活力为 100% 计算相
对酶活。
1.2.5.2 重组酶的最适温度测定 重组酶酶液与木
聚糖底物分别在 30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、
55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃和 85℃不同
温度条件下进行反应，然后测定酶活性。以最高酶
活力为 100% 计算相对酶活。
1.2.5.3 重组酶 pH 稳定性测定 重组酶酶液在不同
的 pH 溶液中室温下保存 30 min 后，于最适 pH 和
最适温度条件下测定酶活性。以最高酶活力为 100%
计算相对酶活。
1.2.5.4 重组酶热稳定性测定 重组酶酶液在 40℃、
45℃、50℃和 55℃下分别保存 5、10、15、20、30、
40 和 60 min，于最适 pH 和最适温度条件下对酶活
进行测定。以最高酶活力为 100% 计算相对酶活。
1.2.6 金属离子及其他试剂对重组酶活性的影
响 在测定重组酶酶活的反应体系中分别加入终浓
度为 10 mmol/L 的金属阳离子及化学试剂（K+、Ni+、
Cu2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Ag+、Na+、Ca2+、Fe2+、
EDTA 和 SDS-Na），在室温下保温 30 min，然后在最
适 pH、最适温度条件下测定酶活性。以没有加入金
属离子和化学试剂的酶液为对照，设为 100%。
2 结果
2.1 桔青霉CR-2木聚糖酶基因xyl克隆
根据 GenBank 中已报道的青霉木聚糖基因序列
设计引物，以反转录得到的 cDNA 为模板，PCR 方
法克隆得到 CR-2 木聚糖酶基因 xyl 全长。回收产
物进行琼脂糖凝胶电泳得到一条清晰条带，大小为
984 bp（图 1），测序所得结果在 NCBI 上进行 BLAST
比对，具有完整开放阅读框，与来源 Penicillium chr-
ysogenum和 Aspergillus niger的内切-β-1，4-木聚糖酶
具有较高相似性均为 81%。与同样来自 Penicillium
citrinum的木聚糖酶基因 xynB 相对比，分析发现基
因序列基本一致，但木聚糖酶基因 xynB 中包含内含
子序列。而与另一个已克隆的 Penicillium citrinum木
聚糖酶基因 xynA 相似性不高，分析可能由于其编码
蛋白属不同家族所致。
M. DL15000 DNA Marker ；1. 木聚糖酶基因 xyl 全长
图 1 CR-2木聚糖酶基因 xyl全长 PCR扩增图谱
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2012年第6期90
2.2 桔青霉CR-2木聚糖酶基因序列分析
CR-2 木聚糖酶基因 xyl 编码 327 个氨基酸和一
个终止密码子，N 端 19 个氨基酸为预测的信号肽序
列“MVQIKTAALAALFAGQVLS”。因此，成熟的木
聚糖酶有 308 个氨基酸，其理论分子量约为 33 kD，
预测等电点为 8.36。信号肽的碱基序列为 ：5-ATG-
GTTCAAATCAAGACAGCTGCGCTGGCCGCTCTTTTC-
GCAGGCCAAGTGCTTTCC-3。
将木聚糖酶基因 xyl 的氨基酸序列在 GenBank
中进行 BLAST 比对，与糖基水解酶第 10（GH10）
家族的 Penicillium citrinum的内切-1，4-β-木聚糖酶，
和 Penicillium canescens的内切-1，4-β-木聚糖酶相似
性分别为 99% 和 89%。同时，氨基酸序列对比（图
2）发现，该酶具有两个典型的谷氨酸催化残基，在
区域 WDVVNE 的谷氨酸起酸碱催化作用，另一个
区域 TELD 中的谷氨酸提供亲核受体，据此推测
CR-2 木聚糖酶为糖基水解酶第 10（GH10）家族
成员。
Pci Xyl. 木聚糖酶（Penicillium citrinum）Xyl ；Ani XynA. 木聚糖酶 （Aspergillus niger）XynA ；Pca XylA. 木聚糖酶（Penicillium canescens）XylA ；Psi XynA. 木聚
糖酶（Penicillium simplicissimum）XynA ；Ppu XynA. 木聚糖酶（Penicillium purpurogenum）XynA ；Pch XylP. 木聚糖酶（Penicillium chrysogenum）XylP ；* 表
示相同序列，单双点分别表示半保守和保守残基 ；对比破折号表示间隙中引入对齐 ；方框标出催化残基谷氨酸
图 2 CR-2木聚糖酶多序列比对
2012年第6期 91田谷等 ：桔青霉木聚糖酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达及活性分析
2.3 桔青霉CR-2木聚糖酶基因xyl编码蛋白结构
预测
利用 SWISS-MODEL 系统基于 Penicillium simpli-
cissimum的木聚糖酶 XynA（PDB ID 1b31）数据对
CR-2 木聚糖酶进行结构预测（图 3）。分析推测，
CR-2 木聚糖酶由 8 个 α-螺旋和 8 个平行的 β- 链交
替盘旋形成 TIM-barrel 式折叠，其三维结构呈现“碗”
状。在其他属于第 10 家族的木聚糖酶中也发现了相
似的折叠状构造。但其在分子结构上存在不同，不
仅 N 和 C 的末端存在差异，而且桶状结构的顶端螺
旋线和环状体长度也不相同。CR-2 木聚糖酶的活性
中心位于一道穿过筒状结构顶端的缝隙中，这条裂
缝的中心区域较狭窄，并且含有 Glu157 和 Glu263
两个催化残基。位于催化中心附近的 Trp119、
Trp293、Trp301、His115 和 His235 均是第 10 家族
的保守残基。
饱和硫酸铵浓度为最适饱和度。沉淀后的重组蛋白
再经超滤管浓缩，浓缩后样品经 SDS-PAGE 分析，
在 30 kD 左右位置出现了明显的条带（图 4），说明
该重组蛋白的表观分子量和理论分子量基本一致，
没有明显糖基化现象发生。
图 3 木聚糖酶蛋白的三维结构预测
2.4 CR-2木聚糖酶在毕赤酵母中的诱导表达及
SDS-PAGE分析
将得到的木聚糖酶基因 xyl 双酶切后插入到毕
赤酵母表达载体 pPIC9（8 023 bp）中，使之处于诱
导型启动子 AOX1 控制之下，PCR 菌落鉴定及测序
结果表明，木聚糖酶基因 xyl 已经被正确重组进了表
达载体 pPIC9 中，得到重组表达载体命名为 pPIC9-
XYL。
重组酵母菌株在添加甲醇诱导后的第 72 h 所产
酶活最高，最高酶活可达到 214.15 IU/mL。通过硫
酸铵分级沉淀法纯化重组蛋白，确定饱和度为 80%
图 4 重组蛋白的 SDS-PAGE检测
2.5 重组木聚糖酶酶学性质分析
2.5.1 pH 对重组酶活性的影响 重组糖酶最适 pH
分析结果（图 5-A）表明，其最适 pH 为 4.5，在
图 5 最适 pH（A）及 pH稳定性（B）对重组
木聚糖酶活力的影响
M. 蛋白分子量标准 ；1. 重组蛋白
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2012年第6期92
pH4.0-9.0 的范围内，其相对酶活性均能维持在约
60% 以上，但在 pH9.5 以上降解能力迅速下降至几
乎为零，说明该酶在一个相对较宽的中性偏酸 pH
范围内均具有比较好的降解活性。稳定性分析（图
5-B）表明，该酶在 pH4.0-9.0 之间具有很好的 pH
稳定性，并且其剩余酶活性均稳定在 80% 以上，在
pH9.0 以上 pH 稳定性呈现一个明显下降趋势。说明
该酶在 pH4.0-9.0 条件下均具有良好的稳定性。
2.5.2 温度对重组酶活性的影响 酶反应最适温度
测定结果（图 6-A）显示，该重组酶的最适催化反
应温度为 50℃，在温度 40-55℃条件下，其相对酶
活力均处于较高水平。当反应温度超过 55℃时，酶
活力急剧下降。热稳定性分析（图 6-B）表明，重
组酶在 40℃保存 60 min 后仍能保持 90% 以上的
酶活性。说明该酶在 40℃温度下有极好的稳定性。
在 45℃保存 60 min 后，剩余酶活性为 44.4%。在
50℃保存 5 min 后，重组木聚糖酶仍能保持原活性
的 62.9%，以上结果说明该酶具有良好的热稳定性。
由 50℃和 55℃的曲线说明，该酶在 50-55℃保存
10 min 以上，酶活性急剧下降至失活。
图 6 最适温度（A）及热稳定性（B）对重组酶活力的影响
2.6 金属离子和化学试剂对重组酶活力的影响
在重组酶活性测定反应体系中，加入终浓度为
10 mmol/L 的不同金属离子及 SDS-Na、EDTA 后测定
酶活性。测定结果（表 1）显示，K+、Ca2+ 和 Na+ 对
酶活力有激活作用，其中 Ca2+ 的激活作用最强，可
达到 152.2%。Zn2+、Fe2+、Ni+ 和 Cu2+ 均对酶活力产
生了抑制作用，其中 Cu2+ 和 Fe2+ 的抑制作用较强烈，
分别达到了 60.1% 和 65.9%。Ag+、Mn2+ 是最强烈的
抑制剂，当其存在时不能检测到酶活性。SDS-Na 也
是较强烈的抑制剂，可使酶活性下降至 12.4%。Mg2+
和螯合剂 EDTA 对酶活性没有显著的影响。
3 讨论
根据氨基酸序列的相似性，大多数木聚糖酶均
属于糖基水解酶第 10、11 家族（GH10，GH11）［11］，
而其他的一些木聚糖酶被归类为糖基水解酶第 5、8
和 43 家族。糖基水解酶第 11 家族所包含的木聚糖
酶都具有相对较低的分子量，一般在 19 000-25 000
的范围内，而第 10 家族包含的木聚糖酶一般具有大
于 30 000 的较高的分子量和较高的等电点［12］。其
催化产物中单糖较多，且在结构上呈现“碗状”结构。
与 GH11 家族相比，GH10 家族的木聚糖酶在耐高温、
表 1 金属阳离子对重组酶活性的影响
金属离子（10 mmol/L） 相对酶活性（%）
Control 100±0.28
K+ 104.5±0.73
Na+ 107.3±1.08
Zn2+ 80.8±1.85
Fe2+ 65.9±0.92
Ni2+ 85.6±1.03
Ca2+ 152.2±1.46
Mg2+ 92.1±1.75
Ag+ -
Cu2+ 60.1±0.39
Mn2+ -
SDS-Na 12.4±1.05
EDTA 90.7±1.70
Control. 未添加金属离子或化学试剂 ；-. 未检测到活性
2012年第6期 93田谷等 ：桔青霉木聚糖酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达及活性分析
耐酸和耐碱性方面更有优越性。
本研究从桔青霉 CR-2 菌株中克隆得到了木聚
糖酶基因 xyl，对其编码的氨基酸序列分析表明，其
属于糖基水解酶第 10 家族，理论分子量为 33 kD，
形成（β/α）8- 桶状折叠的 TIM 结构，与大部分来自
于第 10 家族的木聚糖酶在三维结构方面呈现出较高
的等同性和氨基酸残基相似性。研究表明，CR-2 木
聚糖酶的催化机理是由两个 Glu 参与的双取代反应
机制，其中一个 Glu 起酸碱催化作用，另一个 Glu
提供亲核受体，这两个活性中心的氨基酸位点位于
一个开放式裂缝中。与其他木聚糖酶相比，桔青霉
CR-2 木聚糖酶拥有相对更加紧凑的结构，推测其也
具有更好的稳定性。
不同微生物所产生的木聚糖酶的酶学性质也各
不相同，其决定了木聚糖酶在应用上的潜力及应用
领域，一般要求具备较高的催化效率、较宽的 pH
范围和温度适应范围等［13］。例如，造纸工业中应用
的木聚糖酶要求在碱性的 pH 值范围内，饲料工业
中所应用的木聚糖酶作为饲料添加剂要求 pH 值应
属酸性。不同领域工业中要求的反应温度也各不相
同。因此，对木聚糖酶酶学性质的研究有利于木聚
糖酶更好的在生产中应用。
本研究中重组木聚糖酶的最适反应温度范围为
45-55℃。在此条件下，其相对酶活均保持在 90%
以上。在温度为 40℃、45℃条件下保存 60 min，该
重组酶在酶活分析中仍表现出了较好的稳定性。pH
为 4.5 时，重组酶酶促反应相对活性最高，为最适
反应 pH。在 pH 为 4.0-9.0 的范围内，该重组酶均
呈现了极好的 pH 稳定性，说明该酶相对于其他报
道过的木聚糖酶具有良好的热稳定性和一个更宽范
围的 pH 耐受性。
4 结论
通过 PCR 方法克隆获得了桔青霉 CR-2 菌株的
木聚糖酶编码基因 xyl 并在毕赤酵母成功进行外分泌
表达。重组酶酶学性质分析发现，该重组酶的最适
反应温度为 40-55℃，并具有良好的热稳定性。pH
的耐受范围较宽，在 pH4.0-9.0 的范围内都能呈现
极好的稳定性，拓宽了其应用范围，使其更易于在
饲料加工、酿酒和生物质能源等工业领域的应用。
参 考 文 献
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（责任编辑 马鑫）