全 文 ：微 生 物 学 报 2 7 。 ): 3 4 3一 3咯, , 一, 5 7
流 e *。 衬亩口。脚讨。砂. 及` .
海枣曲霉木聚糖酶的提纯和性质
曾宇成 张树政
(中国科学院微生物研究所 , 北京 )
通过硫酸铁分段 、 异丙醇分段 、 s e p h a d e x G 一 1 0 0 凝胶过滤 、 及 D E A E一 s e p h a d e : A 一 5 0 离
子交换柱层析等提纯步骤 , 从海枣曲霉 (击加gr il o p入。朗ic 了 ) 的麦鼓培养物抽提液中分离到
4 个成份的木聚塘酶 , 分别称之为 x 一 I、 X 一1 、 x 一 I n 和 x 一 vI 。 经 . 7% 凝胶浓度的圆盘电 泳
及薄层等电聚焦分析 , x 一 l 、 X 一 u 和 x 一 1 皆为均一成分 , x 一vI 中则仍杂有少量 x 一川 。 x 一 I
的最适 p H 为 4 . 。 , 最适温度 45 ℃ , 在 p H 5 . 0一 9 . 0 之间稳定 , 保温 30 分钟时的半失活温度
嗯为 9 0℃ 。 X 一 11 和 X 一川 的最适 p H 分别为 4 · 5 及 5 · 0 , 最适温度均为 5 0℃ , 稳定 p H 范
·围分别为 .60 一 1 .0 0及 .7 0一 10
·
0 , t香分别为 60 及 5 ,℃ 。 s DS 一凝胶电泳几法 测得 x 一 I、 x 一 n
和 x 一 1 的分子量分别为 26 , 5。。 、 35 , 50 0 及 2 , 。。 0 。 薄层凝胶等电聚焦法测得三者的等电
点分别为 4 . 7 、 呼. 4 和 斗 . 0 。 在所测定的化学试剂中 , A g + 、 H g , + 和 M n 片 对这三个酶均有较
强烈的抑制作用 。 s DS 对 x 一 l 活力影响较小 , 对 x 一 ” 和 x 一川 则有强烈的抑制作用 。 服对
x 一 I 的抑制作用大 ,对 x 一 n 和 x 一川 的抑制作用小 。
关锐词 海枣曲霉 ;木聚塘酶 ; 提纯与性质
木聚塘为一种在植物体内大量存在的
半纤维素 , 其分子结构为 户 1 , 4一木糖二营键
连接的木糖聚合物 , 并在其木糖基的 0 一 2
或 0 一 3 位连有 a 一 L一阿拉伯糖 , 或 4 一。 一甲
基葡萄糖醛酸等分枝 , 或连接由木糖 、 葡萄
糖 、 半乳糖及阿拉伯糖等聚合成的较长的
侧链 lt, ,ol
木聚糖酶 ( l , 4 一声一 D 一 x y l a n x y l a n o h y -
d r o r a s e
,
E e
.
3
.
2
.
2
.
8 ) 为一类以内切方式
水解木聚糖分子中户 1 , 4 一木糖昔键的酶 ,
其水解产物主要为木二糖与木二糖以上的
寡聚木糖 , 也有少量木糖和阿拉伯糖 。该酶
广泛存在于各种微生物中 , 对于降解 自然
界大量存在的半纤维素起着重要 作 用叭 .a]
现在 , 已有报道从黑曲霉 ( A , . , ig er ) ’ , , ,
乳白耙菌 ( I rP o la c, eu力 6[] 等真菌及短小
芽抱杆菌 ( B 4时11“ , 洲。 ilu ,) m 和 环 状 芽
抱杆菌 ( B . 价留 lan , )「81 等细菌中提纯了
木聚搪酶 , 并研究了其性质。 但 目前对木
聚糖酶的研究大多不够深人 , 且至今未见
报道从海枣 曲霉 中提纯木聚糖酶。 为了深
人了解微生物来源的木聚糖酶的性质 、 作
用机制及可能的应用价值 , 我们从海枣曲
霉中提纯到三个凝胶电泳 均 一 的 木 聚 糖
酶 , 并对其性质进行了较为深人的研究 。本
文报道这些酶的提纯及基本性质。
材 料 和 方 法
(一 ) 菌种
海枣曲霉 ( A护 , , g i llu , 户人。 。 。 i c i r ) ^ 5 3 . 3 1 4 3
为我所原纤维素酶组从海南岛分离到 , 菌种保藏
室提供 ,并经一室齐祖同先生鉴定 。
(二 ) 主要化学试剂
s e p h a d o x G 一 1 0 0 , D E A E 一 s e p h a d e x A 一 5 0 , 低
分子量标准蛋白 ( LM w 喊 , p r . , ` e i n , ) 及 p h a t m -
a ]y t e ( p H 3一 2 0 ) 均为瑞典 p h a r m a e i a 公 司产
品 。 稻草木聚塘为我所方一澄同志制备 。 其他试
口`汤,.J百,
本文于 1 986 年 6 月 曰 日收到 。
DOI : 10. 13343 /j . cnki . wsxb. 1987. 04. 013
微 生 物 学 报 2 7 卷
.. ..
.`杏
淀 。
4
.
s e p h目 e : G 一 10 0 柱层析 : 将异丙
醇分段的样品溶于 30 回 p H , . 2 、 0 . 02 m ol / L
的乙酸缓冲液中 , 上样于同一缓冲液平衡
的 S e Ph ad e x G 一 1 0 0 柱 ( 3 . 0 x 12 0 e m ) , 用
同一缓冲液洗脱。 待流出 1 50 d 后 , 再分
部收集。 30 分钟 1 管 , 每管 9 已 . 测定各
管的 A . 。 二 及水解稻草木聚糖的活力 , 结
果如图 1。 将活力峰部分 ( 39 一弘 管 ) 合
并 。
厦
3叫之-甜
90
。月沂一g只咖ǐ姗胭配卑怜
一扣
制均为分析纯或化学纯 。
(三 ) 浦定方法
1
. 木聚塘酶活力的测定 : 取酶液 0 . 5m凡和七
预热 3 分钟后 ,加人已预热的稻草木聚塘 (用 PH
4
.
5
、
0
.
0 5 xn o l /L 乙酸缓冲液配制 ) 0 . 5 m l , 4 0℃
反应 3 0 分钟后 , 用 oS m o g , i一 N e l s o n 法 t , , 侧定产
生的还原塘 。 以木糖为标准 ,在本实验条件下 ,每
分钟形成 1” m o l还原糖定义为 1 个酶活力单位 。
2
. 蛋白质测定 : 柱层析时测定各管的吸光度
,^
,0 .’ , 一般分析采用 oL w yr 法 , , 。 , 。
3
. 聚丙烯酞胺凝 胶盘 状电 泳 ( P A G E ) : 按
aD 击 法`川 ,凝胶浓度 7% , 缓冲液 p H S · 3。
车 哪一聚丙烯酞胺凝胶电 泳 ( sDS 一 P A G E ) :按 w e be r 一Os bo rn 法「 ’ 2 , ,凝胶浓度 10 % ,电极缓冲
液为 p H 7 . 2 , 0 . 1 m o , IL 磷酸缓冲液 。
5
. 等电聚焦 : 按 ve st er b er g 薄层凝胶 等 电
聚焦法 `川 。 凝胶薄层大小为 r o o x Z o o x l m m ,
凝胶浓度 7% , 内含 2% 两性电解质 hP ar 。 : vtI e
( p H 3一 1 0 )。 聚焦在 10 ℃左右进行 , 将电源的电
压 、 电流和功率最高值分别限定为 1 5。。 v 、 25 m A
和 15 w 。 聚焦 2 小时后 , 从凝胶两边截下 1 c m
宽胶条 ,切成 0 . s c m 小段 , 用 3 lm 抽气的蒸馏水
浸袍 10 小时 ,测其 p H , 并绘 p H一距离图 , 剩下的
凝胶固定 ,染色 。
习忆二
川 面 .~ ’ 一 ` .’ e0
计数 F r a e t i o n n u m b e r
图 1 木聚塘酶的 s e p h a d 。 x G一 10 0 凝胶过挂图
F ig
.
1 G e l f i l tr a t i姐 o f x , l a 。 ” e on
S e P h a d e x G · 10 0
结 果 和 讨 论
(一 ) 酶的提纯
1
. 粗酶的制备 : 3 0 0 9 麦鼓 , 加 4 5 0 m l
自来水 , 装人 , 升三角瓶内 , 灭菌后接人培
养好的种曲 。 28 ℃培养 3 夭后 , 加人蒸馏
水 7” 耐 , 15 ℃浸泡 4 小时 , 过滤 , 滤液即
为粗酶液。
2
. 硫酸铁分段 : 在粗酶液中慢慢加人
固体硫酸镶到 35 多饱和度 , 离心后取上清
液 , 加硫酸钱到 75 多饱和度 , 离心取沉淀 。
3
. 异丙醇分段 : 将硫酸按分段的样品
溶于蒸馏水 ,经 s e p h a d e x G 一 2 5 脱盐后 ,加
人 l / 2 体积的异丙醇 (预冷到一巧℃ ) , 离
心后取上清液 , 再加人该上清液 2 倍体积
的异丙醇 , 4℃静置 4 小时后 , 离 心 取 沉
O —
. —
A“ 。二
酶活力 E n z y m e a e t i , i t y
,
.
o E A E 一 s e p h ad e x A
一 5 0柱层析 :将上
一步提纯的样品加到已用 p H S . 2 、 0 . 02 m ol /
L 乙酸缓冲液平衡的 D E A E一 SeP h ad xe A -
50 柱上 ( .2 8 x 30 c m ) , 以同一缓冲 液 充
分洗柱 , 然后 以含 .0 0 25 m ol / L N a Q 的
20 0 d 同一缓冲液冲洗柱上的杂蛋白。 再
以 0 . 0 2 5一 0 . 3 m o l / L N a e l (各 6 0 o ml ) 线
性梯度洗脱 , 并分部收集 , 45 分钟 1 管 , 每
管 10 而 , 测定各管的 A : , nm 及木聚糖 酶
活力 (图 2 )。 结果 , 依次洗脱出 4 个具有
木聚糖酶活力的峰。 根据洗脱下 来的 次
序 , 将其分别称之为 x 一 I 、 x 一 1 、 x 一 fl l 和
X 一 IV .
上述木聚糖酶的整个提纯过程如表 lo
峪 期 曾宇成等 : 海枣曲霉木聚糖酶的提纯和性质
g里撼
, 。 、二
l:
离到的四个木聚搪酶组分用 7多凝胶浓度
的 P AG E 分析 , 表明 X 一 I 、 X 一n 和 X 一m
均为均一成份 , x 一 I v 则杂有少量 x 一 n l
(图 3 ) o
官亏à雳去吕器亘舜尺胆谧即陇长如aZ0J卜1.。|
.U.5刀么盖.
::考
. . . 一 口 , . . .
宁一一一前一 ~ -一- 飞乙一一一 的
甘数 行 a c t i的 。 u m b e r
翻 2 木聚艳酶的 D E A E一 s 。曲出 ex A 一 , O柱层析图
Fi g
一 攀 C b or m a t o g r a p h y 滋 二萝l叨 a o e s on
D E A E一 s e Ph a d e x A一 , 0
O— 0 . A , . 0 。 .. — . 酶活力 E n z ym e a e t i v it ,- - 一 N a e l 浓度 oC n e e n tr a t i o n o f N a e l
X 一 I 的提纯倍数小于 1 , x 一1 的提纯倍数
也不大。 这是因为 X 一 I 、 x 一 n 对稻草木聚
糖的比活很低 , 而 X 一m 的比活很高。 粗
酶液中的木聚艳酶实际上为 X 一 I 、 X 一n 和
X
一
m 等的混合物 , 且 X 一m 最多 , 故测到
的比活较高。 而在提纯后 , x 一 I 的比活还
低于粗酶液 , 故提纯倍数小于 o1 同样 ,
X 一 n 的提纯倍数也较低 。
(二 ) 酶的纯度
将 D E A E 一 s e p h a d e x ^ 一 , o 柱层析 分
图 3
iF g
。
1
。
X~ I
提纯的木聚塘酶的盘状凝胶电泳图
3 p ^ G E o f 训 6 f i e d x y l a n a s e .
2
·
X
一
11 ; 3
一
X
一 111
5
.
X 一 I , X 一 11 , X “ 1 11
; 机 X 一 I v ;
X 一 I V
将以上 4 个组份用薄层凝胶等电聚焦
法分析纯度 , 结果仍表 明 x 一 I 、 x 一 n 和
T a b le
狡 1 海弃曲 . 木… 的报纯p u r i f i e a t i o n o f x y la n ” e , 如 一n As P · P五。` ” 广`15
提纯步骤
S t e P
总蛋白
T o t a l
总酶活
T o t a !
比活
S P e e i if e
Pm t e , n
( m g )
a e t i v i t y
(
u
)
尹c梦v ` t芝
L u l m g 夕
收率
R e c o v e r y
r呱 )
4
,
7 2 9
。
6
8 3 2
。
5 ; 3
,
22 0
J人é,翻
:
曰JOù
祖 酶 液
C rU d e e 。 名 , . e
破酸铁分段
( N H
一
)
: 5 0 -
肠 a e t io n a t i o 。
异丙醉分段
l匆 p拍 p a ” 0 1
台 . ` t ioa a r ion
S eP h
a d e 二 G 一 1 0 0
D E A卜 S e P h a d e x A 一 5 0
X峨
x 峨 1 :
X一 11
4 ,
一`丁0
3 9 7
。
0 20
,
3 50
1 5 1
。
2 12
,
8 70
9
。
2
39
。
9
5 1
。
3
8 5
。
l
10 0
72
。
8
4 4
。
6
2 8
。
2
” ·扭
6
一
,
73
。
8
3 3 8
。
1
,
,
2 4 0
8
.
,
52
。
0
3 1 5
。
4
O
。
, 6
,
。 `
3 4
。
3
0
。
2
0
。
,
2 0
。
2
3 4` 橄 生 物 . 掌 很 朴 卷
. . . . . . . . . . . . . . . .
X 一m 为均一成分 , X 一 IV 贝馆少蚤 X 一 I V
混杂 (图 4 ) 。 `
ǎ次à必ù之材另。协娜澳.a
叔组权契
图 , p H 对木聚抽酶活力的影响
F i`
.
S E吐七e t o f p H 的 x 了l a o . 别 , 。 e d v i . ,
O— O X 一 I. — 二 X一 1
O
· ~ -二 O X~ 11 1
(三 ) 蔺的性质
1
. 酶的 最 .适 p H : 在不 同 p H 的 .0 1
, 01 71
, 柠檬酸一N 匆H P O 。 缓冲液中分别测
定 X 一 I 、 X 一n 和 x 一 In 水解稻草木聚 糖
的活力。 X 一 I 、 X 一n 和 X 一m 的最适困
分别为 4 . 0 、 4 . 5 和 5 . 0 (图 5 ) o
2
. 酶的最适温度: 分别在不同温度下
测定上述木聚搪酶的活力。 X .I 在 35 一
, 5℃的温度范围均显杀较高的活力 , 而在
45 ℃时活力最高 , X 一 n 和 X 一m 则在 50 ℃
时显示最高活力 (图 6) 。
3
. 酶在不伺州 的 稳 定 性 : 酶液在
。 . 05 m ol / L 柠檬酸 一N a H P q 缓冲液 (困
3
.
0一 8 . 0 ) 或 0 . 1 m ol / L 甘氨酸一 N : o H 缓
冲液 (团8 . 5一 1 . 0) ,中 , 于 30 ℃保温 24 小
时 , 加声 .4 5 、 .0 5 0 01 / L 乙酸缓冲液调回
pH
, 按常法测活力。 X 一 I 的稳定 p H 范围
{装)盏之摆妇U门
图 4 提纯的木聚塘酶的薄层凝胶等电来焦图
igF
. 呼 P人 e I F o f p u对6 e d x yl a D a , e ,
盆· X 一 I ; 2 . X 一 11; 3· X 一川 ; 4 . X se l v
50
誉ó甲四匆比
长鹅餐孚
温度 T e m p e r a r u r e (℃ )
图 ` 温度对木聚枪酶活力的影响
F泣9 . 6 E任。 c t o f t e田 p e r a t u r e o n x , l a n ” 。 a山 v i诊
O— O X砚. — . X ~ 11O · ` -一 O X · 111
翻为 5 . 0一 9 . 0 , X 一 n 为 6 . 0一 10 . 0 , x 一 lT l 为
7
.
0一 10 . 0 (图 7 ) 。
4
. 酶的热稳定性 : 将酶液分别于 30 一
95 ℃保温 30 分钟后 ,立即冰浴 , 然后按常
曾宇成等 : 海枣曲霉木聚施酶的提纯和性质
ō勺入é,`亡é
(米à办!、ǐ1。局n卫s洪长犯暇裤
O L七一 』一 L 广 _ _ , _ ,_ 卜 , _ _ . _ , . 、2 4 6 8 10 12PH
图 7 木聚糖酶在不同 p H 的稳定性
F ig
.
, s七a b i l i t萝 o f x y l a n a , e s o n d i f f e r e o t PH
O— O X 一 I. — . X 一 1 1O - - - 一 O X 一 1 11
祛测剩余活力。 将剩余活力对温度作图 ,
并以剩余活力为 50 沁时的温度作为 半失
活温度 ( t奋) , 则 X 一 I 、 X 一 11 和 X 一 11 的
勺 分别为 9 0 、 6 0 和 5 5℃ (图 8 ) o
j
)0
弓工)的2507一艺乡之-留匀n!P铝侧只犯服簇
温度 T e m p e r a t u r e (℃ )
图 8 木聚搪酶的热稳定性
H e a 。 , t a b i l i t y o f x y l a n a , e ,
O 一— O X 一 l
. — 一 . X 一王I
O
- -一 O X 一 1! I
从以上结果可以看到 , x 一 I 、 x 一 H 和
X
一
m 的最适 p H 均在 4 . 0一 5 . 0 左右 , 其稳
定 p H 却在 6一 1 0 这说明酶的最适 `赶和
稳定 p H 之间虽有一定关系 , 但二者却 又
确实体现了酶的两种不 同性质。 X 一 I 的最
适温度与 X 一 n 和 X 一 n l 相差不大 , 而热
稳定温度却比 X 一 n 和 X 一 n l 高得多。 这
似乎表明 , 酶的最适温度虽然直接与其热
稳定性有关 , 但却不一定与耐热温度完全
一致 ,可能还受其他一些因素的影响 。 X 一 I
在 70 ℃以上的高温下并未失活 , 却不显示
活力。 而在耐热性试验中 , 高温保温后再
降到较低温度 , 酶又重新显示催化活性 。这
大概是高温下酶分子的构象发生 了变 化 ,
在常温下又可逆地恢复到有活力的正常构
象。 据报道氏 ,] , 大多数微生物来源的木聚
糖酶的最适 p H 和 p H 稳定范 围 、 最 适 温
度与热稳定温度都基本上一致 。 只有黑曲
霉 ESJ 和奇异长嚎壳菌 ( C e r a z o c 夕, ilt P a r a d o -
xa ) lt’] 等来源的木聚糖酶 , 其稳定 p H 范围
高于其最适 p H , 而与 X 一 I 、 X 一 11 和 X 一 111
相似。 x 一 n 和 x 一 In 的最适温度与热 稳
定性的关系也与乳 白耙 菌 [’1 、 硬 毛 栓 菌
( rT
a m 。 t o hi o ut ` )15tJ 等来源的木聚糖酶相
似。 而像 x 一 I 那样 , 热失活温度远高于其
最适温度 , 在微生物来源的木聚糖酶中并
不多见。
5
. 酶的抑制剂 : 将酶液与终 浓度为
1 m m of / L 的各种化学试剂于 30 ℃保温 30
分钟 , 再按常法测活力。 测定结果如表 2 。
A g +
、
H g
, + 对 X 一 I 、 X 一 11 和 X 一n l 均有
较强烈的抑制作用 , 这与大多数微生物来
源的木聚糖酶一致 【3 .’1 。 M n Z十 对这三个酶
也有较强烈的抑制作 用 , 而 B了十 、 C犷十 、
e u , +
、
P b , + , Z n , + 及 E D T A 对这三个酶
的活力都没有明显影响 , 这表明金属离子
不为这几个酶的活力所必需。 10 m m ol / L
S D S 对 X 一 I 的活 力 影 响不 很 显 著 , 对
x
一
n 则有强烈的抑制 作 用 , 但 1 m m ol / L
S D S 对 X 一 n 的活力影响不大 。 然而 , 即
使 s D s 浓度 低 到 0 . 1 m m ol / L , 仍可 使
X 一m 的活力完全丧失。 与此相反 , 4 m ol / L
或 1 m ol / L 服均对 x 一 I 有较强烈的抑制
微 生 物 学 报 27 希
农 2 各种化学试荆对木班抽蔺活力的影响
T a b l e Z E 丘e c t o f v a r i o u sc h e m i e a l s
t h e a e ti 丫 i t y o f x y l a n a e s s
了。一X琴芝试剂
Re a g e n t
浓度
C o n C n
-
( m m
o l /L )
相对活力R e l a t i v e a e t i v i t y (% )
X 一 111
。 亏
。
,
。
7
。
2
。
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。
,
。
,
。
,
。
9
二卜 几 .一 早 . 一` l 一一 -司 L一一一习 L we
0
.
2 0
.
4 0
.
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.
8
Rm
图 9 S sD 一凝胶电泳法测定木聚塘酶的分子 t
Fi g
.
9 D e t“ m i o a t i皿 o f om l e e u la r
w e ig h t, o f x y la n ” 。 b , s珑一 P ^ G E
l
·
, 一球蛋白重链 ? 一 G I山 u l i n , H 一 e h a i n ( 5 0 , 0 0 0 )
2
· 夕p清蛋白 o , a l b u m i。 ( 4 3 , 00 0 )
3
. 碳酸醉酶 c a r bo n 云e 幼 h y d r a s e ( 3 0一 0 0 0 )
,
· 大豆胰蛋白酶抑制荆 oS y b e a n tr y p s i n in h i b i时
( 2 0
,
10 0 )
5
·
a 一乳清蛋白 。 一 L a e七a l b u m in ( 1 4 , 4 0 0 )
10492乃08163“5 。01 0 0弓9 。 1
4 2
。
6
6 5
。
6
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。
4
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。
8
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。
0
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9
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。
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。
6
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8
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6
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8
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n.jn已ù062…Oj;ù助了月,O户矛OrR甘qùJ心9口舀
. .二,二吕
C o n t ro l
A g N O ,
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C a C I
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5 1:石
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l
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。
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1又 10 ,
8
。 2
49
。
8
2 5
。
3
6 0
。
9
作用 , 而对 X 一n 和 X 一m 的抑制作用则
要弱些 。 sD S 和腺均为常用的变性剂 , 然
而 ,这二种试剂对同一来源的 X 一 I 、 X 一 n 和
X 一m 的活力影响大不相同 , 其原因很值
得进一步研究。
6
. 酶 的 分 子 量 : 用 w e b e r 一 o s b o r n
S D S一 P A G E 法测定 。 电泳后 , 根据标准样
品的 R m 值及分子量绘出标准曲线 , 据 此
由待测样品的 Rm 值求出其分子量 。 x 一 I 、
X 一11 和 X 一 111 的分 子 量 分 别 为 2 6 , 5 0 0 、
3 5
,
0 0 0 和 2 2 , 0 0 0 (图 9 ) 。 这几个酶的分子
量都不大 , 而绝大多数微生物来源的木聚
糖酶的分子量也都在这个范围。 一 “ 。 看来 ,
分子量较小是微生物来源的木聚糖酶的一
个特点 。
7
. 酶的等电点 : 由聚焦后酶蛋白在凝
胶上的位置 , 从 p H 一距离图上 查 得 X 一 I 、
X 一11 、 X 一 111 和 X 一 IV 的等电点分别为 4 . 7 、
斗· 4 、 4 . 0 和 4 . 1 (图 1 0 ) o
0 2
, 川卜~ 户 ~ ` . , 闰曰肠~ ~ ~ 山
4 6 8
距离 D i s t a o e e ( c川 )
图 10 薄层凝胶等电聚焦法测定木聚施酶的等电点
曰 g · 1 0 D e t e r m i n a t io n o f i , o e l e e tr i c p o i n t
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·
X
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X 一 I 、 X 一 11和 X 一 111在 D E A E 一 S e Ph a de x
A 一 5 0 离子交换柱上的洗脱次序及 在 盘 状
电泳时的 R m 次序与这几个酶的等电点大
小基本一致 , 而与其分子量的关系较小 。 但
是 , 多次等电聚焦的结果均表明 , X 一 I V 的
等电点略高于 X 一n l , 这与该酶在 O E A E -
se hP ad
e x A 一 50 层析时被洗脱下来的次序
及在盘状电泳时的 Rm 次序相矛盾。 这可
能是 X 一 I V 的分子量远小于 X 一 n l , 或酶
的分子形状不同 , 或含糖量较少 ,或其他某
种未知原因所致 。
4期 曾宇成等 :海枣曲霉木聚糖酶的提纯和性质 3 4 9
5[口 7[890[l[l川 3[l,
8
.酶的紫外光谱 : 样品溶在 p H 5 . 0、
0
.
0 2 m o l / L 乙酸缓冲液中 , 用 H i t ac h i 5 5 7
双光束双波长分光光度计测定 。 x 一 l 、 x 一n
和 X 一 111 分别在 2 7 6 、 2 7 7和 2 7 7 n m 处显
示最大吸收峰 , 而在 2 4 8 、 2 5 0 和 2 5 2 n m 处
显示低谷 , 均为典型的蛋白质吸收峰。 由
其 2 8 0n m 处的吸收度 , 可计算得 X 一 I 、 X 一 n
和 X 一 111的 E橇 分别为 13 . 8 、 2 1 . 4 和 2 8 . 1 。
参 考 文 献
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