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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2016, 32(2):165-171
L-茶氨酸（L-Theanine，L-The）由日本科学家
于 1949 年首次从绿茶中分离得到［1］，是茶叶中特有
的游离氨基酸，是天然茶叶中的重要风味物质，具
有抑制苦味物质、改善产品风味的作用。同时 L-The
还有镇静放松［2，3］、降低血压［4，5］、控制体重［6］、
增强免疫应答［7，8］、预防肿瘤［9，10，11］等功效，因
此在食品添加剂和保健品中被广泛应用。L-The 自然
界含量极少，从茶叶中提取成本很高，因此化学合
成法是目前研究的主要方向。但是化学合成法存在
反应时间长、收率低等缺点，同时由于需要采用高
压惰性气体保护，因而生产成本居高不下。近年来，
微生物发酵法和酶转化法已成为研究的热点。
γ-谷氨酰转肽酶（γ-Glutamyltranspeptidase，GG-
T，EC 2.3.2.2）是谷胱甘肽代谢途径中的一个关键酶，
收稿日期 ：2015-03-12
作者简介 ：傅嘉懿，女，硕士研究生，研究方向 ：工业酶技术 ；E-mail ：rorjil@hotmail.com
通讯作者 ：吴敬，女，博士，教授，研究方向 ：基因工程和分子酶学工程 ；E-mail ：jingwu@jiangnan.edu.cn
γ-谷氨酰转肽酶补料法合成 L-茶氨酸工艺研究
傅嘉懿1  陈晟2  吴敬1
（1. 江南大学 食品科学与技术国家重点实验室，无锡 214122 ；2. 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，无锡 214122）
摘 要 ： 对 γ-谷氨酰转肽酶酶法制备 L-茶氨酸的工艺进行优化。通过恒速补料的策略，以 200 mmol/L L-谷氨酰胺和 2 mol/L
乙胺盐酸盐作为初始底物，37℃、pH10.0 条件下反应，每 2 h 补加 100 mmol L-谷氨酰胺，反应 14 h，最终 L-谷氨酰胺底物总浓度
为 900 mmol/L，L-茶氨酸的生成量达到 573.2 mmol/L，转化率达到 63.7%，生产强度为 40.9 mmol/（h·L）。采用变速流加的工艺，
以同样的初始条件进行反应，每 2 h 补加 L-谷氨酰胺至初始浓度 200 mmol/L，反应 15 h，最终 L-谷氨酰胺总浓度为 600 mmol/L，L-
茶氨酸的生成量达到 445.8 mmol/L，转化率为 74.3%，生产强度为 29.7 mmol/（h·L）。
关键词 ： γ- 谷氨酰转肽酶 ；L- 茶氨酸 ；恒速补料 ；变速补料
DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.02.022
A Research of L-theanine Synthesis with Two Feeding Methods of
L-glutamine Using γ-glutamyltranspeptidase
FU Jia-yi1 CHEN Sheng2 WU Jing1
（1. State Key Laboratory of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi 214122 ；2. Key Laboratory of Industrial Biotechnology
of Ministry of Education，School of Biotechnology，Jiangnan University，Wuxi 214122）
Abstract: The optimization of L-theanine production by γ-GGT（gamma-glutamyltranspeptidase）was investigated. The constant
speed feeding strategy was performed using 200 mmol/L L-glutamine and 2 mol/L ethylamine hydrochloride as the initial substrates，under
the condition of 37℃，pH10.0，100 mmol/L L-glutamine was added every 2 hours and the reaction sustained for 14 hours. Eventually the
total concentration of L-glutamine and L-theanine were 900 mmol/L and 573.2 mmol/L respectively. The conversion rate of L-theanine reached
63.7%，and the production intensity was 40.9 mmol/（h·L）. The variable speed feeding process conducted for 15 hours with the same initial
conditions，and the adding L-glutamine to the initial concentration of 200 mmol/L in every 2 hours. After 15 hours，600 mmol/L of L-glutamine
was converted to L-theanine with a final concentration of 445.8 mmol/L and the conversion rate and production intensity reached 74.3% and 29.7
mmol/（h·L）.
Key words: γ-glutamyltranspeptidase ；L-theanine ；constant speed feeding ；constant speed feeding
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.2166
2002 年 Suzuki 等［12］研究报道，Escherichia coli K-12
来源的 GGT 酶可以将 L-谷氨酰胺（L-Gln）上的 γ-
谷氨酰基转移到乙胺受体上，催化合成 L-The。由
于这一过程位点特异性和光学选择性强，无需对反
应物进行保护和脱保护，反应过程中也不消耗 ATP，
因此利用 GGT 酶转肽活性制备系列 γ-谷氨酰基类化
合物的研究成为生物催化领域的热点。
在实验室前期工作中已对 GGT 酶制备茶氨酸
进行了初步研究，在 L-Gln 浓度为 200 mmol/L 时，
L-The 的摩尔转化率为 78%，同时发现 L-The 的摩
尔转化率随 L-Gln 浓度的升高而降低，在底物浓度
为 500 mmol/L 和 1 000 mmol/L 时， 转 化 率 分 别 为
58% 和 45%，产物浓度分别为 290.2 mmol/L 和 450
mmol/L［12］，目前对高底物浓度条件合成 L-The 的研
究尚无报道。在工业化生产中，较高的底物浓度可
大大降低 L-The 的生产成本，因此本研究采用不同
的补料策略，以期提高 L-The 在高浓度底物下的产
量，为 L-The 的酶法工业化制备奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
菌种为实验室保存，L-Gln（上海生工生物工程
股份有限公司），乙胺盐酸盐（上海生工生物工程股
份有限公司），L-The 标品（Sigma 公司），其他试剂
均为国产分析纯。
1.2 方法
1.2.1 粗酶液制备 菌种活化后按体积分数 2% 的
接 种 量 接 入 发 酵 培 养 基 中，25℃、200 r/min 培 养
48 h，装液量为 250 mL 发酵瓶装 50 mL。培养结束
后将培养液以 8 000 r/min 离心 20 min，收集上清液。
1.2.2 GGT 酶活测定方法 以 γ-谷氨酰对硝基苯胺
和双甘二肽为底物进行颜色反应［13］。酶活测定体系
为 1 mL，含终浓度为 5 mmol/L γ-谷氨酰对硝基苯胺，
80 mmol/L 双甘二肽，50 mmol/L 硼砂 -NaOH 缓冲液，
pH10.0，在 37℃下加入 20 μL 适当稀释的酶液反应
5 min 后，加入 4 mol/L 醋酸溶液 400 μL 终止反应，
在分光光度计 410 nm 处测定吸光值。该条件下每分
钟生成 1 μmol 对硝基苯胺所需的酶量定义为一个酶
活单位（U）。
1.2.3 酶法合成 L-The 取一定浓度的 L-Gln 和乙
胺盐酸盐用硼砂 -NaOH 缓冲液溶于 500 mL 烧杯中，
加入一定量酶液，调节 pH 为 10.0，体系终体积为
300 mL，放置于 37℃恒温水浴锅，以 150 r/min 的搅
拌转速进行酶反应，定时取样进行分析。
1.2.4 L-The 的检测 以高效液相色谱（HPLC）检
测分析产物浓度［14］。
1.2.4.1 样品处理 反应液取样后用 10%（W/V）的
三氯乙酸等体积稀释，室温放置 1-2 h，12 000 r/min
离心 10 min，再用 0.22 μm 水相针式滤器过滤，此
时样品可于 HPLC 检测。
1.2.4.2 流动相配置 A 相（1 L）：无水醋酸钠 4.52
g，加入 1 L 去离子水，搅拌溶解，再加入 225 μL 三
乙胺，醋酸调节 pH 到 7.2±0.05，后加入 5 mL 四氢
呋喃，混合后备用。
B 相（1 L）：无水醋酸钠 4.52 g，去离子水定容
为 200 mL，醋酸调节 pH 到 7.2±0.05，再加 400 mL
甲醇（色谱纯）和 400 mL 乙腈（色谱纯）。
A，B 相配置完毕后需用无油真空泵过膜抽滤，
其中 A 相使用 0.22 μm 的纤维素膜，B 相使用 0.45
μm 尼龙膜，并将抽滤后的流动性与超声清洗器中超
声 15-30 min 排除气泡。
1.2.4.3 衍生化试剂及程序 柱前衍生化反应采用
邻苯二甲醛（OPA）与 2- 巯基乙醇联用，缓冲液为
0.4 mol/L 的硼酸缓冲液（pH10.2），具体试剂配方和
柱前衍生化程序由 Agilent 公司提供。
1.2.4.4 HPLC 色谱条件 检测系统 ：Agilent 120 ；
色谱柱 ：Eclipse XDB-C18 5 μm（4.6 mm×150 mm）；
流动相 ：乙腈一水（75∶25）；流速 ：0.8 mL/min ；柱
温 ：40℃ ；紫外检测波长 ：338 nm。
梯度洗脱程序 ：流动相完全由 A、B 两相组成，
初始比例为 A∶B = 92∶8（V/V），一个样品分离时
间为 20 min，流动相混合比例呈匀速线性变化，具
体条件为 ：0-12 min，B 相为 8%-26%（V/V）；12-
14 min，B 相为 26%-100%（V/V）；14-15.5 min，B
相 保 持 100%（V/V）；15.5-18.5 min，B 相 为 8%-
100%（V/V）；18.5-20 min，B 相保持 8%（V/V）。
1.2.5 L-The 产率的计算 L-The 摩尔转化率公式 ：䖜ॆ⦷% ӗ⢙ѝL-TheⲴ᪙ቄ䟿৽ᓄᓅ⢙L-GlnⲴ᪙ቄ䟿 ×100%
2016,32(2) 167傅嘉懿等：γ-谷氨酰转肽酶补料法合成 L-茶氨酸工艺研究
2 结果
2.1 酶转化生产L-The补料初始条件的确定
前期研究表明，采用酶转化法生产 L-The 时，
底物浓度过高会导致 L-The 转化率下降，其原因主
要是因为高浓度的底物 L-Gln 对 GGT 酶具有抑制作
用，因此考虑使用较低的初始底物浓度，反应过程
中补加 L-Gln 的补料策略以实现 L-The 的高浓度底
物高转化率生产。为确定补料过程的初始条件，首
先研究了不同底物浓度和不同加酶量对 L-The 合成
的影响。根据前期工作的结果，GGT 酶催化合成
L-The 在底物浓度较低的条件下反应速度较快，且
转 化 率 较 高［13］， 因 此 选 择 研 究 L-Gln 浓 度 为 200
mmol/L 和 100 mmol/L 条件下，研究不同加酶量对反
应的影响。
首先以 200 mmol/L L-Gln 和 2 mmol/L 乙胺盐酸
盐为底物，研究加酶量为 2、6 和 10 U/mL 时，对
L-The 合成的影响。结果（图 1）显示，在加酶量为
2 U/mL 时，酶转化在前 3 h 反应较快，后 2 h 反应
逐渐趋于平衡 ；而在加酶量为 6 U/mL 和 10 U/mL 时，
酶转化在前 2 h 反应较快，后 3 h 反应逐渐平衡。在
反应进行至 2 h 时，L-The 对底物 L-Gln 的摩尔转化
率分别为 29.5%、54.4% 和 58.9%，反应 5 h 转化率
分别为 62.4%、69.3% 和 77.1%。以 100 mmol/L L-Gln
和 1 mol/L 乙胺盐酸盐为底物，研究加酶量为 2、4
和 6 U/mL 时对 L-The 合成的影响。结果（图 2）显
示，当加酶量分别为 2、4 和 6 U/mL，反应进行至
2 h 时，L-The 对 L-Gln 的摩尔转化率分别为 44.2%、
60.2% 和 80.9%，最终转化率分别为 80.4%、92.5%
和 93.6%。
综上所述，在不同底物浓度的条件下，加酶量
L-
Th
e䖜ॆ⦷/% 8070605040
30
20
10
0
0 2 ৽ᓄᰦ䰤h 4 6 L-Gln浓度/mmol·L-1  18020016014012010080206040 0 2 ৽ᓄᰦ䰤h 4 66 U/mL2 U/mL10 U/mL6 U/mL2 U/mL10 U/mL
图 1 L-Gln 初始浓度为 200 mmol/L 的过程曲线
L-
Th
e䖜ॆ⦷/% 801006040
20
0
80
100
60
40
20
0
0 2 ৽ᓄᰦ䰤h 4 6 L-Gln浓度/mmol·L-1  0 2 ৽ᓄᰦ䰤h 4 64 U/mL2 U/mL6 U/mL4 U/mL2 U/mL6 U/mL
图 2 L-Gln 初始浓度为 100 mmol/L 的过程曲线
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.2168
为 2 U/mL 时，酶反应在前 3 h 速率较快，加酶量为
6 U/mL 和 10 U/mL 时，酶反应都在前 2 h 速率较快，
2 h 后反应速率降低，因此初步确定以 2 h 作为后续
补料过程的补料间隔。图 1 和图 2 显示，底物 L-Gln
浓 度 为 200 mmol/L， 加 酶 量 6 U/mL 与 10 U/mL 相
差 7.8%，但是比 2 U/mL 有明显提高，所以加酶量
6 U/mL 是最优条件，此条件下反应 2 h 产物浓度达
到 120 mmol/L 左右。而在 L-Gln 浓度为 100 mmol/L
时，反应 2 h 产物浓度最高仅能达到 80 mmol/L，由
于工业生产追求的是高产量，也就是较高的产物浓
度，所以选择底物浓度 200 mmol/L，加酶量 6 U/mL
作为后续补料过程的初始条件。
2.2 酶转化生产L-The恒速补料策略研究
以 200 mmol/L L-Gln 和 2 mol/L 乙胺盐酸盐为初
始底物，加酶量为 6 U/mL，在 pH 10.0 和 37℃条件
下，研究不同的补料量对 L-The 合成的影响。由于
将底物维持在较低浓度能保持较高的反应速率，所
以选择每 2 h 进行恒速补料，L-Gln 补料量分别为
200、150 和 100 mmol。
首先以每 2 h 添加 200 mmol L-Gln 固体粉末的
补料方式，研究对 L-The 合成的影响。由于合成
L-The 的反应要求 L-Gln 与乙胺盐酸盐的摩尔比在
1∶5-1∶10 范围内，因此在反应过程中每 4 h 补加
400 mmol 乙胺固体以保证乙胺盐酸盐的浓度。结果
（图 3）显示，底物 L-Gln 在反应前 4 h 消耗较大，
每 2 h 浓度下降 120 mmol/L 左右，随着反应进行，
L-Gln 消耗速率逐渐降低，反应至 4-6 h 时，L-Gln
消耗速率为 89.5 mmol/L，6-8 h 为 80.4 mmol/L，分
析原因是由于随着酶转化反应进行，反应液 L-Gln
和 L-The 浓度都逐渐上升，正逆反应速度逐渐达到
平衡，致使反应速率进一步下降。8-11 h 和 11-14 h
底物浓度下降仅为 37.6 mmol/L 和 22.5 mmo/L。反应
至 14 h 最终 L-Gln 的总浓度为 1 000 mmol/L，L-The
的浓度达到 562 mmol/L，转化率为 56.2%。
以每 2 h 添加 150 mmol L-Gln 固体粉末，每 4 h
补加 400 mmol 乙胺盐酸盐固体的补料方式，研究对
L-The 生产的影响。结果（图 4）显示，L-Gln 在反
应前 6 h 消耗较快，每 2 h 消耗量为 120 mmol/L 左
右，6 h 后 L-Gln 消耗速率降低，6-8 h 底物消耗量
为 97.6 mmol/L，8-10 h 底物消耗量为 56.4 mmol/L，
10 h 后反应速率大幅下降，反应在 14 h 左右时达到
平衡。最终 L-Gln 的总浓度为 950 mmol/L，L-The 的
浓度达到 573 mmol/L，转化率为 63.7%。
研 究 以 每 2 h 添 加 100 mmol L-Gln 固 体 粉 末，
每 4 h 补加 400 mmol 乙胺盐酸盐固体的补料方式对
酶转化的影响。结果（图 5）显示，L-Gln 在反应
前 8 h 消耗很快，每 2 h 消耗量为 120 mmol/L 左右，
8 h 后 L-Gln 消耗略有降低，8-10 h L-Gln 消耗量为
80.3 mmol/L，10-12 h 为 54.8 mmol/L，12 h 后 反 应
速率下降，L-Gln 几乎不消耗。而 L-The 在前 12 h
的合成速率都较大，12 h 后速率下降，约在 16 h 达
到平衡。最终 L-Gln 的总浓度为 900 mmol/L，L-The
的浓度达到 610.1 mmol/L，转化率为 67.8%。
2.3 酶转化生产L-The变速补料策略研究
根据上述的结果，在恒速补料的情况下，反应
初期底物浓度较低，所以反应速率较快，而反应后
L-
Th
e浓
度
/mmol·L-1 400500600300
200
100
0
400
500
600
300
200
100
0
0 2 ৽ᓄᰦ䰤h4 6 8 10 12 14 16L-Gln浓度/mmol·L-1  L-GlnL-The
图 3 每 2 h 补料 200 mmol 的恒速补料过程曲线
L-
Th
e浓
度
/mmol·L-1 400500600300
200
100
0
400
500
600
300
200
100
0
0 2 ৽ᓄᰦ䰤h4 6 8 10 12 14 16 18 20L-Gln浓度/mmol·L-1  L-GlnL-The
图 4 每 2 h 补料 150 mmol 的恒速补料过程曲线
2016,32(2) 169傅嘉懿等：γ-谷氨酰转肽酶补料法合成 L-茶氨酸工艺研究
期由于底物的累积导致反应变慢，逐渐达到平衡。因
此尝试采用变速补料的工艺，以 200 mmol/L L-Gln 和
2 mol/L 乙胺盐酸盐为初始底物，加酶量为 6 U/mL，
在 pH10.0 和 37℃条件下，每 2 h 测定 L-Gln 的含量，
从而确定补加 L-Gln 的量，保证补料后 L-Gln 浓度
为 200 mmol/L，同时每 4 h 添加 400 mmol 乙胺盐酸
盐固体，研究变速补料对 L-The 合成的影响。结果
（图 6）显示，每 2 h 所需补加的 L-Gln 量在反应前
期较多，随着反应进行，反应速率降低，补加的底
物逐渐减少，反应进行到 18 h 后，反应液中底物
浓度几乎不变，可以认为反应已经达到平衡，所以
不再进行补料。最终 L-Gln 总浓度为 600 mmol/L，
L-The 浓度最终达到 445.8 mmol/L，转化率为 74.3%。
的浓度也不同。表 1 显示，从转化率角度，变速补
料工艺的转化率最高，达 74.3%，但所达到的底物
浓度仅为 600 mmol/L，导致生产强度较低，为 29.7
mmol/（h·L），远低于恒速补料的生产强度。而比较
不同的恒速补料策略，生产强度差异较小，转化率
和产物终浓度都以 100 mmol/2 h 恒速补料工艺最高，
达 67.8% 和 610.1 mmol/L，基本满足了 L-The 在高
底物浓度条件下能达到高转化率和高产物浓度的要
求。因此，以 100 mmol/2 h 恒速补料进行茶氨酸的
生产最能适应工业化生产要求。
3 讨论
L-The 作为一种具有重要价值的非蛋白氨基酸，
已经成为研究茶叶中功能活性成分的热点。目前
L-The 的合成主要以化学合成法为主，但是化学合成
得到的产物存在一定的安全性问题，同时容易产生
DL-型消旋体，因此近年来以酶法合成 L-The 逐渐被
广泛研究。
2002 年， 来 自 日 本 的 Suzuki 等［15］ 利 用 GGT
酶，以 200 mmol/L 的 L-Gln 和 1.5 mol/L 的乙胺为底
物合成 L-The，转化率可达到 60%，产物浓度为 120
mmol/L。Shuai 等［16］ 以 20 mmol/L 的 L-Gln 和 0.05
mol/L 的乙胺为底物，L-The 的转化率达到 94%，产
物 浓 度 为 18.8 mmol/L。 孙 帅［17］ 以 200 mmol/L 的
L-Gln 和 1.8 mol/L 乙胺合成 L-The，反应 36 h 转化
率达到 86%，产物浓度达到 172 mmol/L。李勤等［18］
将来源于 E. coli DH5α 的 GGT 酶基因克隆到高表达
质 粒 pET-32α 中， 并 转 化 E. coli BL21， 构 建 茶 氨
酸生物合成的工程菌，直接以工程菌为催化剂，以
L-Gln 和乙胺盐酸盐为底物，在一定条件下反应 6 h，
L-The 转化率为 41.05%。
利用其它酶转化 L-The 的研究也有报道。1998
年，Tachiki 等［19］利用谷氨酰胺酶，以 500 mmol/L
的 L-Gln 和 1.5 mol/L 的 乙 胺 为 底 物，L-The 的 转
化 率 为 47%， 产 物 浓 度 为 235 mmol/L。2005 年，
Yamamoto 等［20］ 报 道 了 以 200 mmol/L 的 L-谷 氨 酸
钠和 1.2 mol/L 的乙胺为底物，L-The 的转化率达到
85%，浓度为 170 mmol/L 的产物。2008 年，Tachiki
等［21］ 以 300 mmol/L 的 L-Gln 和 0.9 mol/L 的 乙 胺
为底物，获得 L-The 的转化率为 55%，浓度为 165
L-
Th
e浓
度
/mmol·L-1 400500600300
200
100
0
400
500
600
300
200
100
0
0 2 ৽ᓄᰦ䰤h4 6 8 10 12 14 16 18 20L-Gln浓度/mmol·L-1  L-GlnL-The
图 5 每 2 h 补料 100 mmol 的恒速补料过程曲线
L-
Th
e浓
度
/mmol·L-1 400500300
200
100
0
400
500
300
200
100
0
0 2 ৽ᓄᰦ䰤h4 6 8 10 12 14 16 18L-Gln浓度/mmol·L-1  L-GlnL-The
图 6 变速补料过程 L-Gln 和 L-The 浓度曲线
2.4 不同补料工艺的研究
通过对恒速补料和变速补料工艺的比较发现，
不同的转化工艺所需的反应周期不同，产生的 L-The
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.2170
mmol/L 的产物。Yokoyama 和 Itoh［22，23］分别报道了
一种在介孔硅材料上固定化谷氨酰胺酶，再由其催
化合成 L-The 的方法。2008 年，Yamamoto 等［24］利
用 γ-谷氨酰甲胺合成酶，以 600 mmol/L 的 L-谷氨酸
钠和 0.6 mol/L 的乙胺为底物，L-The 的转化率可达
到 100%，产物浓度达到 600 mmol/L。
传统的酶转化过程中，在底物浓度较低的情况
下，L-Gln 消耗速率较快，L-The 合成速度快 ；而在
高底物浓度下，L-Gln 消耗减慢，产物合成速率较慢。
因此本实验研究了不同的补料方法，并通过比较得
出以 200 mmol/L 的 L-Gln 和 2 mol/L 的乙胺盐酸盐
为初始底物，加酶量 6 U/mL，每 2 h 补加 100 mmol
L-Gln，反应 16 h 为最优工艺。在最优条件下 L-The
的 转 化 率 可 以 达 到 67.8%， 产 物 浓 度 达 到 610.1
mmol/L，生产强度为 38.1 mmol/（h·L）。
4 结论
通 过 采 用 恒 速 补 料 和 变 速 补 料 的 策 略， 在
L-Gln 浓 度 为 900 mmol/L 和 600 mmol/L 时， 转 化
率分别达到 67.8% 和 74.3%，生产强度分别为 38.1
mmol/（h·L）和 29.7 mmol/（h·L）。本研究通过补
料工艺进行 L-The 的合成，即使在高底物浓度下，
仍能获得令人满意的底物转化率，且步骤简单，成
本低廉，具有较好的应用前景。
参 考 文 献
［1］ Sakato Y. The chemical constituents of tea ：III. A new amide
theanine［J］. Nippon Nogeik Kaishi, 1949, 23 ：262-267.
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表 1 不同补料工艺的比较
补料工艺 底物浓度 /（mmol·L-1） 产物浓度 /（mmol·L-1） 转化率 /% 反应周期 /h 生产强度 /（mmol·h-1·L-1）
200 mmol/2 h 1000 562.0 56.2 14 40.1
150 mmol/2 h 950 573.2 63.7 14 40.9
100 mmol/2 h 900 610.1 67.8 16 38.1
变速补料 600 445.8 74.3 15 29.7
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（责任编辑 马鑫）