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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2015, 31(9):125-130
山羊产羔率是一个低遗传力的数量性状，其遗
传力只有 0.1 左右［1］，所以用常规育种技术难以改
良产羔数性状，而产羔率主要取决于每个发情周期
中母羊的排卵数。山羊在出生前，卵巢上便形成了
大量原始卵泡。初情期前，卵泡虽能发育，但不能
成熟排卵，当发育到一定程度时，便闭锁（atresia）
退化［2］。初情期后，在每个发情周期中可发育的卵
泡多达几十个，但单胎品种最终能发育到成熟排卵
的卵泡一般只有 1-2 个，其余卵泡中途闭锁死亡，
而多胎品种则有多个卵泡能发育到成熟排卵［3］。藏
山羊发育较慢，性成熟较晚，一年 1 胎［4，5］，金堂
黑山羊一年 2-3 胎［6］，在分子水平上对这两种山羊
繁殖性能进行比较研究具有重要意义。
Apaf-1（Apoptotic protease activating factor-1）即
凋亡蛋白酶活化因子 -1 和 Apaf-2 是体内重要的凋
亡 激 活 剂。 细 胞 凋 亡（Apoptosis） 是 程 序 性 细 胞
收稿日期 ：2014-12-21
基金项目 ：西南民族大学研究生创新型科研项目（CX2014SZ71）
作者简介 ：罗斌，男，硕士研究生，研究方向 ：动物遗传育种与繁殖 ；E-mail ：romben@sina.com
通讯作者 ：字向东，硕士，教授，研究方向 ：动物遗传育种与繁殖 ；E-mail ：zixd@sina.com
山羊 Apaf-1 和 Apaf-2 基因的 cDNA 克隆、序列分析及
组织表达
罗斌  卢建远  马力  胡亮  刘霜  杨珂伟  字向东
（西南民族大学 国家民委动物科学重点实验室，成都 610041）
摘 要： 采集 5 只多胎金堂黑山羊和 5 只单胎藏山羊在发情期的卵巢、垂体等组织样，进行 Apaf-1 和 Apaf-2 基因的 cDNA 克隆、
序列分析，以及定量 PCR 技术对其 mRNA 进行组织表达量研究。结果表明，克隆出 Apaf-1 基因长度为 3 750 bp，编码 1 249 个氨基酸，
Apaf-2基因编码区全长为318 bp，编码105个氨基酸。这两个基因在两种山羊中序列相同，没有突变，且在5种组织中的表达均无差异。
表明凋亡基因 Apaf-1 和 Apaf-2 在动物的进化中比较保守，与山羊多羔性状的相关性需要进一步研究。
关键词 ： 山羊 ；Apaf-1 基因 ；Apaf-2 基因 ；定量 PCR
DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.09.017
cDNA Cloning，Sequence Analysis and Tissue Expression of Apaf-1
and Apaf-2 Gene of Goats
Luo Bin Lu Jianyuan Ma Li Hu Liang Liu Shuang Yang Kewei Zi Xiangdong
（The Key Laboratory of Animal Science of State Ethnic，Affairs Commission，Southwest University for Nationalities，Chengdu 610041）
Abstract: We collected the pituitary, ovary and other tissue samples of 5 Tibetan goats and 5 Jintang black goats at estrus stage, cloned
cDNA of Apaf-1 and Apaf-2, analyzed their sequences, and investigated their mRNA expression of tissues by qPCR. The results showed that ：
the coding region sequence（CDS）of goat Apaf-1 gene was 3 750 bp long encoding 1 249 amino acids, and the CDS of Apaf-2 gene was 318 bp
encoding 105 amino acids. The two genes showed the same sequences in both of goats, no mutation and no differential expression in 5 tissues.
Our data suggested that gene Apaf-1 and Apaf-2 in animal’s evolution were conservative, and the correlation with the trait of goat’s prolificacy
needs further studies.
Key words: goat ；Apaf-1 gene ；Apaf-2 gene ；qPCR
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.9126
死亡（Programmed cell death，PCD）的一种表现形
态。1996 年在细胞凋亡研究中，首次揭示出两个
与凋亡密切相关的蛋白 Apaf-1 和 Apaf-2。而 Apaf-1
的 cDNA 是 Zou 等［7］在 1997 年克隆出来的，并证
实是线虫 CED-4 的人类同源物，它在哺乳动物线
粒体依赖性凋亡通路和胚胎发育中至关重要，电子
显微镜确认的 Apaf-1 分散于细胞质中，而不是在线
粒体或其他的细胞器［8］。Apaf-1 在细胞凋亡中处于
核心地位，其功能涉及有细胞增殖、分化和凋亡等
各个方面［9，10］。人体内一系列信号转导级联反应
均以 Apaf-1 为靶而调节凋亡体。Apaf-2 是细胞色素
C（CytC），是一个线粒体起源的细胞凋亡信号，进
行 线 粒 体 CytC 信 号 转 导 途 径［11］， 参 与 Apaf-1 和
Casp-9 等因子结合构成凋亡体。正常状态下 CytC 不
能通过外膜，而在 NO、过氧化物酶等因子的诱导下
线粒体发生聚集，CytC 便释放到胞质中［12］。排卵前
卵泡发育过程中涉及一系列的细胞增殖和凋亡事件，
目前对卵泡细胞增殖机制的研究比较深入。有研究
结果显示不同绵羊、山羊品种 FSH 和 LH 的血清浓
度及其受体在卵巢中的表达量与其排卵率之间无显
著相关性［13，14］，而对卵泡发育过程中的细胞凋亡机
制的研究则未见报道。因此，本研究对单胎山羊和
多胎山羊 Apaf-1 和 Apaf-2 基因进行序列分析和组织
表达分析，以期为研究山羊多胎机制提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及样品采集 本实验选取健康藏山
羊、金堂黑山羊各 5 只，金堂黑山羊选自四川金堂，
连续 3 胎产 3 羔山羊品种 ；藏山羊选自四川省理县，
连续 3 胎单羔的单胎山羊品种。由于藏山羊一般在
秋季发情，且较晚，所以本实验在 10 月份对选取的
10 只羊同期发情处理 ：将孕酮阴道栓（CIDR）放入
山羊阴道内，11 d 后取出，取出前一天肌肉注射氯
前列醇纳 2 mL，在取出 CIDR 后 40 h 左右进行屠宰
山羊，屠宰后采取垂体、子宫、卵巢、输卵管和肝
脏组织样于已经标记的冻存管中，迅速投入液氮中
带回实验室，-80℃保存备用。
1.1.2 主 要 酶 及 试 剂 孕 酮 阴 道 栓（CIDR） 产
自 新 西 兰， 前 列 腺 素 产 自 加 拿 大 ；2×Taq PCR
MasterMix、 动 物 组 织 总 RNA 提 取 试 剂 盒、DNA
Marker DL2000 均购自上海天根生物科技有限公司 ；
反转录试剂盒购自 Fermentas（MBI）公司 ；X-Gal、
IPTG、氨苄青霉素、克隆载体 pMD19-T Vector 购
自大连宝 TaKaRa 生物工程有限公司 ；DNA 凝胶回
收试剂盒购自爱思进生物技术（杭州）有限公司 ；
E.coli DH5α 感受态细胞购自康迪生物技术有限公司，
八连管、盖子及 SsoAdvancedTM SYBRÒGreenSupermix
购自百乐公司。
1.2 方法
1.2.1 样 品 总 RNA 提 取 及 反 转 录 同 一 时 间 将
10 只羊（金堂黑山羊和藏山羊各 5 只）的 5 种组
织 ：子宫、卵巢、输卵管、垂体和肝，采用 Trizol
法提取 RNA［15］；cDNA 使用反转录试剂盒 Thermo
Scientific RevertAid First Strand Cdna Synthesis Kit 进
行合成。
1.2.2 引物设计与合成 目前羊中暂无 Apafs 基因序
列的公布，所以参照牛的 Apafs 基因，根据 GenBank
中 已 公 布 的 牛 Apaf-1 和 Apaf-2（CYCS） 基 因 序 列
（登录号 NM001191507 和 NM001046061），利用引物
设计软件 Primer Premier5 设计克隆引物和荧光定量
引物，定量引物参照牛的基因和克隆出的山羊的全
基因序列跨内含子设计，见表 1。其中，Apaf-1 采用
分段克隆的策略设计简并引物，设计 3 对引物分段
扩增 cDNA 片段，引物由上海 Invitrogen 公司合成。
1.2.3 山羊 Apafs 基因的 PCR 扩增 以反转录 cDNA
为模板进行 PCR 反应，反应体系为 25 μL ：上下游
引 物（20 pmol/L）cDNA 模 板各 1 μL，2× Taq PCR
Master Mi×12.5 μL，ddH2O 9.5 μL。PCR 反应条件为：
95℃预变性 3 min ；94℃变性 30 s，退火温度 Apaf-1
三 个 片 段 分 别 是 50.6℃、54.4℃ 和 54.4℃，Apaf-2
是 58℃ 40 s，72℃延伸 90 s，35 个循环 ；72℃延伸
5 min ；4℃保存。PCR 产物用 1% 凝胶电泳后，按
照爱思进生物工程有限公司胶回收试剂盒进行回收
纯化。
1.2.4 克隆测序及生物信息学分析 将胶回收产物
与克隆载体 pMD19-T Vector 于 16℃连接 12 h。将连
接反应产物转化宿主菌 E.coli DH5α 感受态细胞，涂
布于含氨苄青霉素（Amp）的 LB 固体平板上，于
2015,31(9) 127罗斌等 ：山羊 Apaf-1 和 Apaf-2 基因的 cDNA 克隆、序列分析及组织表达
37℃恒温箱培养 12 h。挑选白色单克隆菌落于含
Amp 的 LB 液体培养基 37℃振荡培养 16 h，并进行
菌液 PCR 鉴定，产物用 1% 琼脂糖凝胶电泳检测后，
挑选阳性克隆菌液金堂和藏山羊的各 2 mL 送交上海
英骏生物技术有限公司测序。
1.2.5 实时荧光定量 PCR 检测 将提取的山羊 5 个
组织的总 mRNA，运用 Real-time PCR 方法检测不
同组织 mRNA 以及内参 β-actin 基因的表达量。反
应体系为 10 μL ：上下游引物各 0.8 μL、模板 dDNA
0.5 μL、SYBR Green Supermix 5 μL、ddH2O 2.9 μL。
PCR 反 应 条 件 为 ：95℃ 预 变 性 3 min ；95℃ 变 性
10 s，61.2℃退火 20 s，65℃延伸 5 s，40个循环 ；
65℃延伸 5 min ；4℃保存。实验结果用 SPSS17.0 及
Excel2007 进行统计分析，用 Pfaffi［16］法分析 Apaf-
1、Apaf-2 基因在两种山羊不同组织中的相对表达量，
计算公式为 ：
Ratio=（1+E1）
Ct1/（1+E2）
Ct2
其中，E1 表示目的基因的扩增效率 ；E2 表示内参基
因的扩增效率 ；Ct1 表示对照样本中目的基因的 CT
值与实验样本中目的基因 CT 值之差，Ct2 表示对照
样本中内参基因的 CT 值与实验样本中内参基因的
CT 值之差。
2 结果
2.1 Apafs基因胶回收结果
吸取 5 μL Apafs 基因胶回收产物与 1 μL loading
buffer 混匀，对其进行电泳检测，用 1% 琼脂糖凝胶
电泳检测条带。结果（图 1）显示，第 1、2 泳道与
预期大小 1 942 bp 基本一致，第 3、4 泳道与预期大
小 1 369 bp 基本一致，第 5、6 泳道与预期大小 774
bp 基本一致 ；第 7、8 泳道为金堂黑山羊和藏山羊
Apaf-2 基因目的条带，与预期大小 639 bp 基本一致，
且目的条带较明亮，有利于后续实验的进行。
表 1 克隆及定量引物序列
基因 序列（5-3） 产物长度 /bp 登录号
Apaf-1（片段 1） F1 ：ACAGCCCTAGTGACCCTC
R1 ：CAGCTTAGCTTGCCGATA
1942 KP245916
Apaf-1（片段 2） F2 ：TTCTTGGACGACAGCCATTTC
R2 ：TGGATGTGCCGAACAGTGG
1369
Apaf-1（片段 3） F3 ：CACTGTTCGGCACATCCA
R3 ：TAAAAGAGGTCAACTTACATCAC
774
Apaf-1（定量） F ：CAATACCTTGTTGGCGACTG
R ：TCTTCTACTGAAATCGGAGCA
102
Apaf-2 F ：GCGTGTCCTTGGGCTTAG
R ：TCTTTAGAATGGGAAAAATGAT
639 KMB823520
Apaf-2（定量） F ：CGAAAGACAGGTCAGGCTC
R ：AGGGATGTACTTCTTGGGATT
117
M ：DNA Marker DL2000 ；1，3，5 ：金堂黑山羊 Apaf-1 基因 ；2，4，6 ：藏
山羊 Apaf-1 基因 ；7，8 ：分别为金堂黑山羊和藏山羊 Apaf-2 基因
图 1 Apaf-1 和 Apaf-2 基因 PCR 产物电泳检测
1941
bp
774
bp
1 2 3 4 M 5 6
1369
2000
bp
639
bp
M 7 8
1000
750
500
250
100
2.2 Apafs基因的核苷酸序列分析
测序结果显示，两种山羊的基因序列无碱基变
化。将获得的基因序列提交 NCBI，Apaf-1 基因全
长 CDS 为 3 750 bp， 登 录 号 KP245916 ；Apaf-2 基
因 CDS 全 长 是 318 bp， 登 录 号 KMB823520。 通 过
DNAman 分析金堂黑山羊和藏山羊与其他物种 Apaf-1
和 Apaf-2 基因 CDS 区的核苷酸序列同源性，Laserg-
ene 建立同源图，结果（图 2 和图 3）显示，Apaf-1
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.9128
基因 CDS 区的核苷酸序列与绵羊（XM_004006637）、
牛（NM_001191507.1）、野猪（XM_003481742）、马
（XM_005606535）、家猫（XM_003989131）、人（AF-
149794.1）、 猕 猴（XM_001086717.2） 和 褐 家 鼠
（AF218388）的同源性分别为 99.4%、97.3%、92.3%、
91.5%、91.5%、86.9%、86.7% 和 84.2% ；Apaf-2 基
因 CDS 区的核苷酸序列与绵羊（XM_004013157.1）、
藏羚羊（NM_005976593.1）、牛（NM_001046061.2）、
野 猪（NM_001129970.1）、 虎 鲸（XR_183516.1）、
家 马（HQ889872.1）、 狼（NM_001197045.1） 和 黄
家鼠（XM_005340301.1）、小家鼠（NM_007868.4）、
人 类（NM_018947.5） 的 同 源 性 分 别 为 99.7%、
99.4%、98.4%、94%、93.1%、92.1%、91.2%、
91.2%、90.3% 和 89.3%。
用 MEGA6.0 软 件 的 邻 接 法（Neighbor-Joining
method，NJ）构建系统进化树，Apaf-1 基因系统进
化树结果（图 4）表明，山羊和绵羊亲缘关系最近，
山羊先与绵羊聚为一类，再与牛聚为一类，与野猪
聚为一类，然后与马聚成一大类后，最后与人、猴、
鼠为一类 ；Apaf-2 基因系统进化树结果（图 5）表
明，山羊和绵羊亲缘关系最近，山羊先与绵羊聚为
一类，与牛聚为一类，然后与虎鲸、家马、狼聚为
一类，最后与人、黄家鼠和小鼠为一类，这与哺乳
动物的进化程度一致。
1
1
2
3
4
5
6
D
iv
er
ge
nc
e/
%
7
8
9
10
9.8
9.9
15.5
2.8
15.7
2.8
18.9
9.2
2.8
90.9
7.4
12.9
9.1
12.9
9.0
16.4
7.9
9.1
90.8
93.0
13.0
9.2
13.0
9.1
17.1
8.5
9.2
86.1
88.2
88.2
14.5
2.1
14.5
21.6
14.4
14.5
97.3
91.5
91.5
86.9
14.7
0.6
18.1
8.2
0.0
85.9
88.2
88.2
98.0
86.7
14.7
21.6
14.4
14.7
97.3
91.6
91.5
86.9
99.4
86.8
18.1
8.2
0.6
83.6
85.5
85.0
81.5
84.2
81.6
84.2
17.4
18.1
91.4
92.5
92.0
86.9
92.3
87.0
92.3
84.7
8.2
97.3
91.5
91.5
86.9
100.0
86.7
99.4
84.2
92.3
3
Percent Identity/%
4 5 6 7 8 9 102
1 ：家牛（Bos tarus）；2 ：家马（Equus caballus）；3 ：家猫（Felis catus）；4 ：
人类（Homo sapiens）；5 ：金堂黑山羊（Jintang black goat）；6 ：猕猴（Macaca
mulatta）；7 ：绵羊（Ovis aries）；8 ：褐家鼠（Rattus norvegicus）；9 ：野猪（Sus
scrofa）；10 ：藏山羊（Tibetan goat）
图 2 山羊 Apaf-1 基因的同源性分析
1
1
2
3
4
5
6
D
iv
er
ge
nc
e/
%
7
8
9
10
9.8
9.4
10.2
10.9
12.0
11.7
11.6
9.8
8.7
90.9
7.4
9.5
8.4
1.9
1.6
2.2
6.3
5.3
91.2
93.1
11.0
7.6
8.8
8.4
8.4
8.0
7.7
90.6
91.2
88.9
9.1
10.3
10.6
9.9
8.0
7.7
89.9
92.1
92.8
91.5
9.5
9.5
9.5
8.0
7.6
89.0
98.1
91.8
90.6
90.9
0.3
0.3
7.0
6.6
89.3
98.4
92.1
90.3
91.2
89.7
0.6
7.3
6.3
89.3
97.8
92.1
90.9
91.2
99.7
99.4
6.6
6.3
90.9
94.0
92.5
92.5
92.5
93.4
93.1
93.7
8.2
91.8
95.0
92.8
92.8
92.8
93.7
94.0
94.0
94.0
3
Percent Identity/%
4 5 6 7 8 9 10
89.3
98.4
92.1
90.3
91.2
99.7
100.0
84.2
93.1
94.0
11
92.5
92.1
91.5
95.0
91.5
91.5
91.2
91.8
94.3
93.4
11 11.7 1.6 8.4 10.6 9.5 0.3 0.0 0.6 7.3 91.2
12 8.0 8.4 9.1 5.3 9.1 9.2 9.5 8.8 5.9
6.3
7.0 9.5
122
1 ：人类（Homo sapiens）；2 ：家牛（Bos tarus）；3 ：家马（Equus caballus）；
4 ：小家鼠（Mus musculus）；5 ：狼（Canis lupus）；6 ：绵羊（Ovis aries）；7 ：
藏山羊（Tibetan goat）；8 ：藏羚羊（Pantholops hodgsonii）；9 ：虎鲸（Orcinus
orca）；10 ：野猪（Sus scrofa）；11 ：金堂黑山羊（Jintang black goat）；12 ：
黄家鼠（Spermophilus）
图 3 山羊 Apaf-2 基因的同源性分析
Jintang black goat
Tibetan goat
Ovis aries
Bos taurus
Sus scofa
Felis catus
Equus caballus
Homo
Macaca mulatta
Rattus norvegicus
0.02
图 4 藏山羊和金堂黑山羊 Apaf-1 基因的系统进化树
Pantholops hodgsonii
Ovis aries
Tibetan goat
Jintang black goat
Bos taurus
Sus scrofa
Orcinus orca
Equus caballus
Canis lupus
Homo sapiens
Spermophilus
Mus musculus
图 5 藏山羊和金堂黑山羊 Apaf-2 基因的系统进化树
2.3 氨基酸序列分析
克隆获得的山羊 Apaf-1 基因 CDS 全长 3 747 bp，
用 ExPASy 在线对其蛋白质组成进行预测发现，该
基因编码 1 249 个氨基酸，相对分子量为 142.0 kD，
2015,31(9) 129罗斌等 ：山羊 Apaf-1 和 Apaf-2 基因的 cDNA 克隆、序列分析及组织表达
等电点（pI）为 5.94，其氨基酸组成中亮氨酸的含
量最高，占 11.2%，分子式为 C6302H9874N1716O1885S67 ；
该基因编码的蛋白质为中性蛋白，既有亲水性也有
疏 水 性， 存 在 于 细 胞 质 中。Apaf-2 基 因 CDS 全 长
315 bp，编码 105 个氨基酸，相对分子量为 14.5 kD，
pI5.31，丙氨酸含量最高为 32.7% ；在第 15、第 80
和第 97 位氨基酸附近，该蛋白质为疏水，其余部分
为亲水，共价结合于线粒体内膜。
2.4 Apafs基因定量结果的分析
采用实时荧光定量（Real-time PCR）的方法，
以 β-actin 为 参 照， 对 Apaf-1 和 Apaf-2 基 因 在 藏 山
羊和金堂黑山羊 5 个组织中的 mRNA 相对表达量进
行实验，结果（图 6，图 7）表明，Apaf-1 和 Apaf-2
的 mRNA 在山羊输卵管、卵巢、子宫、垂体、肝中
都有表达 ；金堂黑山羊的 Apaf-1 在卵巢和输卵管中
表达量较高，藏山羊的 Apaf-2 基因在肝脏和子宫中
表达量较高，总体上 Apaf-1 相对表达量低于 Apaf-2，
但两个品种间差异不显著（P>0.05）。
3 讨论
细胞凋亡（PCD）［17］对于多细胞生物个体发育
的正常进行，自稳平衡的保持，抵御外界各种因素
的干扰等起着重要的作用。近年来，对细胞凋亡的
研究已从聚焦细胞核的改变，转向对于线粒体呼吸
链变化的研究。在细胞凋亡的研究［18］中揭示出３
个与凋亡密切相关的蛋白细胞凋亡蛋白酶活化因子
参与了细胞凋亡的过程，包括 Apaf-1、细胞色素 c
（Cytc/Apaf-2） 和 Casp-9（Apaf-3）3 个 成 员， 参 与
激活 caspase，通过与 Bcl-2 家族等蛋白因子的相互
作用来调控 PCD 进程。Apaf-1 与凋亡抑制基因是独
立的，如 Bcl-2 通过胱天蛋白酶非依赖性机制保护线
粒体功能，从而保护细胞，但不依赖于 Apaf-1［19］。
而 Apaf-2（细胞色素 C，cytochrome C，Cytc）是呼
吸链中的一个基本成分，在氧化还原和能量代谢中
起着重要的作用，同时细胞色素 C 是线粒体启动凋
亡程序的关键物质［20］。Gabriel 等［21］ 给细胞注射
外源性 Cytc 后发现线粒体调节的凋亡通路可不依赖
Apaf-1/Casp-9，而由线粒体膜释放凋亡诱导因子 AIF
介导完成。本实验蛋白质分析证实了 Apaf-1 蛋白存
在于细胞质中，与 Kirsten 等［22］的研究结果一致，
人的 Apaf-1 基因位于染色体 12q23，Apaf-2 蛋白为
水溶性蛋白，位于线粒体内膜外侧。
与凋亡相关的基因很多，但在哺乳动物上很少
通过凋亡因子来研究对繁殖的影响。本实验在两种
山羊不同组织中对凋亡蛋白酶活化因子 Apaf-1 和
Apaf-2 基因进行克隆、定量表达在多胎和单胎上进
行对比，两个基因核苷酸序列无差异，表达也没有
差异，与绵羊同源性达 99.7% 和 99.4%。藏山羊和
金堂黑山羊 Apaf-1 和 Apaf-2 基因编码区序列与牛、
人、小鼠、褐家鼠均有较高的同源性，说明 Apaf-1
和 Apaf-2 基因在哺乳动物中均具有较高的保守性。
根据 Apaf-1 和 Apaf-2 基因编码区核苷酸序列构建的
分子系统进化树和同源图，山羊和绵羊亲缘关系最
近，其次为藏羚羊、牛，各个分支置信度高，表明
系统进化树的结果可靠。Apaf-1 和 Apaf-2 的 mRNA
0.0000
0.0002
0.0004
0.0006
0.0008
0.0010
0.0012
0.0014
0.0016
0.0018
0.0020
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图 6 Apaf-1 基因在藏山羊和金堂黑山羊不同组织中的相对
表达量（x- ±s）
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
0.40
0.45
থᐒ 㛍 ඲փ ᆀᇛ 䗃থ㇑mRNA相对表达量
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图 7 Apaf-2 基因在藏山羊和金堂黑山羊不同组织中的相对
表达量（x- ±s）
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.9130
在研究的两个山羊品种的卵巢、子宫、输卵管、肝
脏和垂体都有表达，但品种间无显著差异（P>0.05），
说明这两个基因不是影响单胎和多胎的主要基因。
4 结论
本 实 验 采 用 RT-PCR 技 术 首 次 克 隆 了 山 羊
Apaf-1 基因和 Apaf-2 基因，高繁金堂黑山羊与低繁
藏山羊的这两种基因 CDS 编码区序列无核苷酸差异，
山羊和其他物种有着很高的同源性，这两种基因在
生物进化上高度保守。Apaf-1 基因包含一个 3 750 bp
的开放阅读框，编码 1 249 个氨基酸 ；Apaf-2 基因
CDS 为 318 bp 编码 105 个氨基酸。两个基因在两种
山羊的表达无显著差异。
参 考 文 献
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（责任编辑 马鑫）