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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2016, 32(2):203-210
1966 年，Friedenstein 等［1-3］ 首 次 从 大 鼠 骨 髓
中分离鉴定出具有造血支持功能的干细胞，并证明
其在体外可以分化为骨细胞及脂肪细胞。在此基础
上，Owen 及其同事提出间充质干细胞（Mesenchymal
收稿日期 ：2015-09-06
基金项目 ：国家自然科学基金项目（31101698），内蒙古杰出青年自然科学基金项目（2011JQ03）
作者简介 ：马苏日古嘎，女，硕士研究生，研究方向 ：干细胞生物学 ；E-mail ：1017955583@qq.com
通讯作者 ：刘鹏霞，女，副教授，硕士生导师，研究方向 ：干细胞生物学 ；E-mail ：Liupengxia@imu.edu.cn
阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞体外分离培养及鉴定
马苏日古嘎1  彭航2  刘佳佳3  张亦婷4  桂花1  刘鹏霞1
（1. 内蒙古大学生命科学学院，呼和浩特 010021 ；2. 西安交通大学前沿科学技术研究院 骨骼关节疾病与治疗研究中心，西安 710061 ；
3. 中国科学院微生物研究所，北京 100101 ；4. 中国科学院上海药物研究所 药物安全性评价中心，上海 201203）
摘 要 ： 探讨阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞（Arbas cashmere goat bone marrow-derived mesenchymal stem cells，gBM-
MSCs）体外分离培养，并对其生物学特性进行系统的鉴定，进一步深入分析体外诱导时多向分化相关基因动态表达情况。结果显
示，原代培养的 gBM-MSCs 呈梭形或纺锤形、放射状排列的细胞集落，能够连续稳定传代至 15 代以上 ；免疫荧光及流式细胞术检
测显示，gBM-MSCs 表达间质系特异性表面标志物，如 ：CD13、CD29、CD44、CD106、CD90 及 CD166，不表达造血干细胞表面标
志物 CD45 及 CD34 ；体外诱导实验证实该细胞具有多向分化潜能，能够向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞分化 ；荧光定量 PCR 实
验结果显示，gBM-MSCs 多向分化相关基因的表达水平随着诱导天数的增加呈上升趋势。实验结果证实阿尔巴斯绒山羊骨髓中分离
培养的细胞具备 gBM-MSCs 的生物学特性。
关键词 ： 阿尔巴斯绒山羊 ；间充质干细胞 ；培养 ；分化 ；生物学特性
DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.02.028
Isolation，Culture and Identification of Bone Marrow-derived
Mesenchymal Stem Cells from Arbas Cashmere Goat
MA Su-ri-gu-ga1 PENG Hang2 LIU Jia-jia3 ZHANG Yi-ting4 GUI Hua1 LIU Peng-xia1
（1. College of Life Sciences，Inner Mongolia University，Hohhot 010021 ；2. Bone and Joints Research Center，Frontier Institute of Science
and Technology，Xi’an Jiaotong University，Xi’an 710061 ；3. Institute of Microbiology，Chinese Academy of Sciences，Beijing 100101 ；
4. Center for Drug Safety Evaluation and Research，Shanghai Institute of Materia Medica，Chinese Academy of Sciences，Shanghai 201203）
Abstract: Here we isolated and cultured Arbas cashmere goat bone marrow-derived mesenchymal stem cells（gBM-MSCs）in vitro,
identified the biological characteristics of gBM-MSCs, and analyzed the dynamic expressions of differentiation genes while induced in vitro. The
primary cultured gBM-MSCs were spindle cell-based, showing radial colony arrangement, and stably and continuously passed down for over 15
generations. The detections by immunofluorescence and flow cytometry showed that gBM-MSCs were positive for mesenchymal specific markers,
such as CD13, CD29, CD44, CD106, CD90 and CD166, but negative for hematopoietic stem cell surface markers CD45 and CD34. The induction
in vitro confirmed that gBM-MSCs owned the multiple differentiation potential, and differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocyte.
Real-time PCR further indicated that the expressions of differentiation genes increased throughout the culture period. Our results confirmed that
the isolated and cultured cells from the bone marrow of Arbas cashmere goat possessed the biological characteristics of gBM-MSCs. Our findings
promoted the basic research of MSCs in livestock and laid a theoretical foundation for the further application of gBM-MSCs in transgenic breeding
and tissue engineering.
Key words: Arbas cashmere goat ；mesenchymal stem cells ；culture ；differentiate ；biological characteristics
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.2204
stem cells，MSCs）这一概念［4，5］。目前，已经证实
MSCs 是中胚层来源的一类多能干细胞，具有自我更
新及多向分化潜能，广泛存在于胎儿和成体多种组
织器官中，例如：骨髓、脂肪、羊水、骨骼肌、胎肺、
胎肝、脐血、脐带和胎盘等［6-11］。其中，骨髓中的
含量高，分离及获取操作简便，可于自身获取等特
点一直深受研究人员的青睐，因此骨髓来源的 MSCs
研究比较普遍 ；但是，目前绒山羊骨髓 MSCs 体外
分离培养的文献报道极少。
绒山羊作为经济价值很高的家畜，有关其生物
学研究对当代畜牧业发展具有重大的战略意义。目
前的绒山羊转基因克隆大多使用的是成纤维细胞，
它的一个显著的缺点是培养传代数目有限、基因转
染后存活率低，这一缺点已成为绒山羊转基因新品
种培育的瓶颈。本研究从阿尔巴斯绒山羊骨髓中分
离培养 MSCs，并对其生物学特性进行系统研究，旨
在深入了解大型偶蹄类动物骨髓 MSCs 的生物学特
性，为后续转基因动物新品种培育及组织工程提供
参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 阿尔巴斯绒山羊 3-5 月龄流产胎
儿 5 个。
1.1.2 主 要 试 剂 DMEM/F12、IMDM、 胎 牛 血 清
（Hyclone 公司产品）；胰酶、L-谷氨酰胺、地塞米松、
吲哚美辛、β-磷酸甘油、维生素 C、黄嘌呤、Giemsa
染液、DAPI 染液（Sigma 公司产品）；油红 O（上海
紫一试剂厂）；转化生长因子 -β、人碱性成纤维细
胞生长因子、人表皮生长因子（Pepro Tech 公司产
品）；阿利新蓝染液（阿拉丁公司产品）；氨水（永
大公司产品）；CCK-8 试剂盒（Beyotime 公司产品）；
TRLzol 裂解液（Ambion 公司产品）；反转录试剂盒
（TaKaRa 公司产品）；兔多克隆抗体 CD13、CD29、
CD34、CD44、CD45、CD90、CD106 和 CD166（ 博
士德产品）；山羊抗兔 FITC-IgG（Protein Tech 产品）；
定量 PCR 引物均由大连宝生物（TaKaRa）公司设计
并合成，序列见表 1。
1.2 方法
1.2.1 细胞分离和培养 无菌条件下取阿尔巴斯绒
山羊 3-5 月龄流产胎儿腿骨，用培养基冲洗获取骨
髓，加入肝素抗凝。置 20 mL DMEM/F12 培养基中，
1 000 r/min 离心 10 min，收集细胞 ；再加入完全培
养基（含有 DMEM/F12，50 ng/mL 人表皮生长因子，
10 ng/mL 人碱性成纤维细胞生长因子，10-8 mol/L 地
塞米松，2 mmol/L 谷氨酰胺，5% 胎牛血清，100 U/mL
青霉素 / 链霉素），将细胞悬浮后接种到 10 mm 培养
皿中，随后置于 37℃、5% CO2、饱和湿度培养箱中
培养，48 h 后全量换液，以后每隔 2 d 换液，当细
胞生长至 80% 融合时用 0.25% 胰蛋白酶进行 1∶2
的消化传代。培养的过程中，倒置相差显微镜下观
察细胞形态和生长状况。
1.2.2 细胞增殖能力检测 取分离至 3 个不同个体
的处于对数生长期的第 4 代 gBM-MSCs，加入完全
培养基稀释为 2×104/mL 细胞悬液，按每孔 100 μL
接种到 96 孔板中，每隔 2 d 换液 ；接种后的第 1 天
起，每隔 24 h 加入 10 μL CCK-8 试剂，置于 37℃恒
温箱中孵育 4 h，用酶标仪检测 450 nm 处的吸光值，
连续检测 7 d，并用 GraphPad Prism 5 软件进行数据
处理。
1.2.3 细胞核型分析 取第 15 代处于对数生长期
的 gBM-MSCs，加入 80 μL 0.1 mg/mL 秋水仙素，置
37℃恒温培养箱中孵育 3.5 h ；消化收集细胞，加入
8 mL 0.075 mol/L KCl 低渗液，置于 37℃水浴锅，孵
育 30 min，固定，滴片 ；Gimesa 染色 15 min，自来
水冲洗，自然晾干，油镜下观察细胞中期染色体形
态及数目，并用 Genus 软件分析。
1.2.4 免疫荧光法检测细胞表面标志物 CD13、CD-
29、CD44、CD90 和 CD106 取 第 4 代 gBM-MSCs，
在 6 孔板内进行细胞爬片，细胞生长至 80% 融合
表 1 实时定量 PCR 引物序列
名称 引物序列（5-3） 长度 /bp
GAPDH
F ：GGAGCACGAGAGGAAGAGAGAG
102
R ：CCTTGGGGATGGAAATGTGT
GLA
F ：ATCTGGGAGTGTGAGGAGGAG
129
R ：CTGGAATCAGGCAGGGATAAA
LUM
F ：GGTGTGTTTCCTCTCCTCTTGG
137
R ：TCAGGGCAGTTACATTCTGGTG
PPARG
F ：GCCTGTATCCCCACCTTATTATTC
113
R ：ACGCTTTATCCCCACAGACC
2016,32(2) 205马苏日古嘎等：阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞体外分离培养及鉴定
时，每孔加入 1.5 mL 4% 多聚甲醛固定 30 min ；加
入封闭液（PBS+2% 牛血清蛋白 +2% 山羊封闭血
清 +2% 脱脂奶粉 +0.15 mol/L 甘氨酸）室温封闭 2
h ；滴 加 1∶200 稀 释 兔 多 克 隆 抗 体 CD13、CD29、
CD44、CD106、CD90，4℃ 孵 育 过 夜，PBS 冲 洗 ；
之后加入 1∶50 稀释异硫氰酸荧光素（FITC）标记
的山羊抗兔 IgG，室温孵育 2 h ；DAPI 染色 15 min
后共聚焦显微镜下观察结果。阴性对照以磷酸盐缓
冲液（PBS）代替第一抗体。
1.2.5 流 式 细 胞 术 检 测 细 胞 表 面 标 志 物 CD34、
CD45 和 CD166 消 化 收 集 第 4 代 gBM-MSCs， 用
F-PBS（含 1% 胎牛血清 PBS）重悬，将细胞以 106
个 / 管分装至 2 mL 离心管中，离心弃上清，分别加
5 μL 兔多克隆抗体 CD34、CD45 和 CD166，避光常
温孵育 2 h，PBS 冲洗，之后加入 1∶50 稀释异硫氰
酸荧光素（FITC）标记的山羊抗兔 IgG，室温孵育
2 h ；补加 F-PBS 冲洗 2 次，离心弃上清，加 800 μL
2% 多聚甲醛固定，流式细胞仪检测，用 FlowJo 7.6.1
软件分析数据。
1.2.6 多向分化潜能检测 消化收集第 4 代 gBM-
MSCs，加完全培养基，将细胞浓度调整至 2×104
个 /mL，接种于六孔板中，培养 24 h 后，更换诱导
培养液，以后每隔 2 d 换液，第 21 天检测诱导结
果。对于成脂肪诱导的细胞，用 1% 油红 O 染色，
倒置荧光显微镜观察脂滴形成情况 ；用 RT-PCR 法
检测脂肪细胞经典基因过氧化物酶体增殖物激活受
体 γ PPARG（Peroxisome proliferator-activated receptor
gamma）的表达。成骨诱导的细胞，用 20 ng/mL 硝
酸 银 染 色， 观 察 钙 盐 沉 积 情 况 ；用 RT-PCR 法 检
测骨细胞经典基因骨钙素蛋白 GLA（Galactosidase
alpha）的表达。成软骨诱导的细胞，用 1% 阿利新
蓝染色，观察酸性黏多糖合成情况，用 RT-PCR 法
检测软骨细胞经典基因光蛋白聚糖 LUM（lumican）
的表达。
成脂肪诱导液 ：IMDM，5% 牛胎血清，1 μmol/L
地塞米松，5 μg/mL 胰岛素，0.5 mmol/L 黄嘌呤，60
μmol/L 吲哚美辛 ；成骨诱导液 ：IMDM，5% 牛胎血
清，0.1 μmol/L 地塞米松，0.05 mmol/L 维生素 C，10
mmol/L β-甘油磷酸 ；成软骨诱导液 ：IMDM，5% 牛
胎血清，10 ng/mL 转化生长因子 -β，10-7 mol/L 地塞
米松，50 μg/mL 维生素 C。
1.2.7 多向分化相关基因动态表达分析 按照上述
1.2.6 中的实验方法诱导培养 gBM-MSCs 后，分别提
取诱导 7、14 和 21 d 后的细胞总 RNA，通过荧光定
量 PCR 法检测诱导不同天数后相应分化基因动态表
达情况。对于成脂肪诱导的细胞，检测脂肪经典基
因 PPARG 的表达趋势 ；对于成骨诱导的细胞，检测
骨经典基因 GLA 的表达趋势 ；对于成软骨诱导的细
胞，检测软骨经典基因 LUM 的表达趋势 ；以未诱导
的 gBM-MSCs 作为对照，基因相对表达量用 GAPDH
标准化并用 2-ΔΔCt 法运算。
2 结果
2.1 细胞分离和培养
实验对 5 个绒山羊流产胎儿进行了骨髓分离培
养，获得了 5 株 gBM-MSCs。gBM-MSCs 原代培养时
4-6 h 开始贴壁，大约培养 14 d 后达到 80% 汇合，
通过培养基筛选和传代培养去除其他类型的干细胞
和终末分化细胞，传至 P5 时呈现均一的成纤维样细
胞，贴壁生长，状态良好（图 1）。
A
200 μm
B
200 μm
A ：第 5 代 gBM-MSCs ；B ：第 15 代 gBM-MSCs
图 1 阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞形态
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.2206
2.2 细胞增殖能力检测
第 5 代 gBM-MSCs 生长曲线呈 S 型（图 2），接
种后第 0-1 天为潜伏适应期，从第 1 天起快速增殖，
进入对数生长期，第 5 天进入平台期，平台期持续
1-2 d，之后细胞增殖速度显著下降，进入衰退期。
gBM-MSCs 能够进行正常染色体复制和分裂。
2.4 免疫荧光法检测细胞表面标志物 C D 1 3 、
CD29、CD44、CD90和CD106
免疫荧光检测结果显示，第 5 代 gBM-MSCs 表
达间质系表面标志物 CD13（图 4-B）、整合素家族
成 员 CD29（ 图 4-C）、 黏 附 分 子 CD44（ 图 4-D）、
CD106（图 4-E）及 CD90（图 4-F）。
2.5 流式细胞术检测细胞表面标志物CD34、CD45
和CD166
流式细胞术检测结果显示，第 5 代 gBM-MSCs
表达粘附分子 CD166（图 5-A）、不表达造血干细胞
表面标志物 CD34（图 5-B）、CD45（图 5-C）。
2.6 多向分化潜能检测
第 5 代 gBM-MSCs 分别用成脂肪、成骨和成软
骨培养基诱导 21 d 后，进行染色和 RT-PCR 法鉴定。
结果（图 6）显示，成脂肪诱导后细胞质中形成脂
肪颗粒，经油红 O 染色后，能观察到桔红色的脂滴
（图 6-A1），RT-PCR 显示成脂肪诱导后的细胞阳性
表达脂肪经典基因 PPARG（图 6-A3）；成骨诱导后
细胞质中出现钙盐沉积，硝酸银染色呈阳性（图
6B1），RT-PCR 显示成骨诱导后的细胞阳性表达成
骨经典基因 GLA（图 6-B3）；成软骨诱导后细胞质中
形成酸性黏多糖，经阿尔新兰染色后，能特异性着
蓝色（图 6-C1）；RT-PCR 显示成软骨诱导后的细胞
阳性表达软骨经典基因 LUM（图 6-C3）。以上结果
显示，gBM-MSCs 具有多向分化潜能。
1.5
1.0
0.5
0
O
D
٬
0 2 4ᰦ䰤/d 6 8
ṧᵜ1ṧᵜ2ṧᵜ3
不同样本代表来自不同个体的 gBM-MSCs
图 2 第 5 代阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞生长曲线
2.3 细胞核型分析
为验证本实验所分离出的 gBM-MSCs 在体外传
代过程中细胞染色体数目是否完整，我们收集第 15
代 gBM-MSCs 做染色体数目分析，随机选取 20 个样
本进行染色体计数。结果（图 3）显示，所做的第
15 代 gBM-MSCs 中有 95%（19/20）的细胞染色体为
2n=60 条，具有正常二倍体核型，表明体外培养的
1 2 3 4 5 6
7 8 9 10 11 12
13 14 15 16 17 18
19 20 21 22 23 24
25 26 27 28 29 X Y
20 μm
A B
A ：通过软件处理后去掉底色的核型图 ；B ：经过配对的核型图
图 3 第 15 代阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞核型（2n=60）
2016,32(2) 207马苏日古嘎等：阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞体外分离培养及鉴定
2.7 多向分化相关基因动态表达分析
进一步通过荧光定量 PCR 法检测诱导 7、14 和
21 d 后相关分化基因动态表达情况，结果（图 7）显
示，成脂肪细胞诱导后脂肪经典基因 PPARG 表达量
随着诱导天数的增加逐步上升，诱导 21 d 后达到最
高，约上调 1 270 倍（图 7-A）；成骨细胞诱导后骨
细胞经典基因 GLA 的表达也随着诱导天数的增加逐
步上调，诱导 21 d 后达到最高，约上调 165 倍（图
7-B）；成软骨细胞诱导后软骨经典基因 LUM 的表达
量也逐步增加，诱导 21 d 后达到最高，约上调 63
倍（图 7-C）。本实验进一步证实我们分离培养的
gBM-MSCs 具有多向分化潜能，多向分化相关基因
的表达水平随着诱导天数的增加呈上升趋势。
3 讨论
本研究采用全骨髓贴壁培养法，对 5 个绒山羊
流产胎儿进行了骨髓分离培养，用含人表皮生长因
子（EGF）和人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）
等的扩增培养基培养，获得了 5 株细胞，该细胞具
备 MSCs 的生物学特征。有研究证实，培养基中添
加人碱性成纤维细胞生长因子有利于细胞贴壁生
长［12］，同时不影响其多向分化能力［13］；而人表皮
生长因子的添加能够促进细胞增殖，缩短细胞的倍
增时间［14，15］。
目前，MSCs 的鉴定采用 2006 年国际细胞治疗
协会（International Soeiety for Cellular Therapy，ISCT）
提出的标准，包括以下几方面 ：①细胞形态为成纤
A B C
D E F
200 μm 200 μm 200 μm
200 μm 200 μm 200 μm
A ：阴性对照 ；B-F ：gBM-MSCs 均表达间质系表面标志物 CD13（B）、CD29
（C）、CD44（D）、CD106（E）和 CD90（F）
图 4 免疫荧光法检测第 5 代阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干
细胞表面标志物
100
0
C
ou
nt
101 102 103 104
M6
94.3%
0
C
ou
nt
100 101 102
M2
0.962%
0
C
ou
nt
100 101 102 103
M2
0.908%
A B C
A ：gBM-MSCs 表达 CD166 ；B ：gBM-MSCs 不表达造血干细胞表面标志物 CD34 ；C ：gBM-MSCs 不表达造血干细胞表面
标志物 CD45，蓝色曲线代表实验组样本，红色曲线代表同型对照
图 5 流式细胞术检测第 5 代阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞表面标志物
维细胞样，具有贴壁生长特性 ；②阳性表达间质系
表面标志物，如 CD73（SH3 和 SH4），CD105（SH2）
和 CD90（Thy1）等，阴性表达造血干细胞表面标
志 物， 如 ：CD45，CD19，CD19 或 CD79、CD14 或
CD11b 和 HLA-DR 等 ；③具有向脂肪细胞、成骨细
胞和软骨细胞分化的多向分化潜能［16，17］。本实验对
gBM-MSCs 生物学特征进行了系统研究，结果显示，
gBM-MSCs 体外培养时具有贴壁特性，呈梭形或纺
锤形，具有较强的增殖能力，符合 MSCs 的基本特
征 ；可连续稳定传代至 15 代以上，第 15 代 gBM-
MSCs 仍然具备正常二倍体核型 ；第 5 代 gBM-MSCs
表达间质系表面标志物，如 ：CD13、CD29、CD44、
CD106、CD90 及 CD166， 而 不 表 达 造 血 干 细 胞 表
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2016,Vol.32,No.2208
面标志物 CD45 及 CD34 ；体外诱导培养后，gBM-
MSCs 能够向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞分化 ；
以上结果说明我们分离获得的细胞具备 MSCs 的生
物学特性。这一结果与 Ren 等［18，19］的报道相似，
他们研究显示，绒山羊 gBM-MSCs 表达间质系表面
标志物 CD29、CD44 和 CD90，不表达内皮及造血干
细胞表面标志物 CD31 及 CD45，体外可以向骨细胞、
神经细胞诱导分化。
在此基础上，我们通过荧光定量 PCR 法检测多
向分化相关基因 PPARG、GLA 和 LUM 动态表达情
况。Rosen 等研究显示，PPARG 通过结合脂肪细胞
特异基因，如脂肪酸结合蛋白和脂肪细胞 P2 基因，
在脂肪形成过程中扮演重要角色［20，21］。我们发现成
脂肪诱导后 PPARG 表达量随着诱导天数的增加逐步
上升。GLA 是成骨特异性表达基因，与骨矿化基质
的形成有关［22，23］。我们发现成骨诱导后 GLA 表达
CTRL Adipo
PPARG
GAPDH
A3 CTRL Osteo
GLA
GAPDH
B3 CTRL Chon
LUM
GAPDH
C3
A1 B1 C1
A2 B2 C2
100 μm 100 μm 100 μm
100 μm100 μm100 μm
A1 ：脂肪诱导实验组 ；A2 ：脂肪诱导对照组 ；A3 ：RT-PCR 检测脂肪细胞经典基因 PPARG 表达。B1 ：成骨诱导实验组 ；
B2 ：成骨诱导对照组 ；B3 ：RT-PCR 检测骨细胞经典基因 GLA 表达。C1 ：软骨诱导实验组 ；C2 ：软骨诱导对照组 ；C3 ：
RT-PCR 检测软骨细胞经典基因 LUM 表达。（GAPDH ：内参 ；CTRL ：阴性对照）
图 6 体外诱导第 5 代阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞向脂肪、成骨和软骨细胞分化
1500
1000
500
0
PP
AR
G
e
xp
er
es
si
on
le
ve
l
0 7ᰦ䰤d ᰦ䰤d ᰦ䰤d14 21
A
200
150
100
50
0
G
LA
e
xp
er
es
si
on
le
ve
l
0 7 14 21
B
80
60
40
20
0
LU
M
e
xp
er
es
si
on
le
ve
l
0 7 14 21
C
A ：成脂肪细胞诱导后脂肪经典基因 PPARG 的表达 ；B ：成骨细胞诱导后成骨经典基因 GLA 的表达 ；C ：成软骨细胞诱导后软骨经典基因 LUM 的表达
图 7 实时定量 PCR 法检测诱导后分化相关基因的动态表达
2016,32(2) 209马苏日古嘎等：阿尔巴斯绒山羊骨髓间充质干细胞体外分离培养及鉴定
随着诱导天数的增加逐步上调，此结果与 Açil 等［24］
的研究一致，他们发现人骨髓 MSCs 成骨分化过程中，
碱性磷酸酶和骨钙蛋白表达上调。LUM 编码形成亮
氨酸丰富的蛋白多糖家族，包括聚糖、双链蛋白聚
糖和纤维调节蛋白，也可能参与到胶原原纤维的构
建［25］。我们发现成软骨诱导后 LUM 表达量同样随
着诱导天数的增加逐步上升，诱导 21 d 时，表达显
著上调。本实验发现体外诱导培养 gBM-MSCs 后，
多向分化相关基因的表达水平随着诱导天数的增加
呈上升趋势，进一步证实 gBM-MSCs 具有多向分化
潜能。
综上所述，采用全骨髓贴壁培养法能够从阿
尔巴斯绒山羊骨髓中分离 gBM-MSCs，获得的 gBM-
MSCs 具有自我更新及多向分化潜能。此培养法操作
简单，可大量分离及纯化 gBM-MSCs，可以为后续
转基因动物新品种培育及组织工程提供充足种子细
胞，具有重要现实意义。
4 结论
本研究从阿尔巴斯绒山羊骨髓中分离培养获得
了 gBM-MSCs，该细胞符合国际细胞治疗协会提出
的 MSCs 鉴定标准，具备 MSCs 生物学特性，可以用
于后续实验研究。
参 考 文 献
［1］Friedenstein AJ, Piatetzky-Shapiro II, Petrakova KV. Osteogenesis
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1966, 16 ：381-390.
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Hematol, 1976, 4（5）：267-274.
［3］Owen M, Friedenstein AJ. Stromal stem cells ：marrow-derived
osteogenic precursors［J］. Ciba Found Symp, 1988, 136 ：42-60.
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（责任编辑 马鑫）