全 文 ：综述与专论
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2010年第 9期
绿色荧光蛋白在转基因研究中的应用
张雨丽 张桂征 苏红梅 蒙艺英 闭立辉
(广西蚕业科学研究院,南宁 530007)
摘 要: 绿色荧光蛋白 ( g reen fluorescent prote in, GFP)是一种能够自身催化形成生色团并在蓝光或紫外光激发下发出
绿色荧光的蛋白。有现代生物学北斗星之美誉的它, 在生物学的很多领域都有广泛应用。GFP具有荧光稳定、易于检测、表
达调控简单、生物安全性好等优点,在转基因研究中的各个方面均应用颇多。就 GFP在转基因研究中的应用特点及应用进展
做一综述。
关键词: 绿色荧光蛋白 ( GFP) 转基因研究 应用
Applications of Green Fluorescent Protein in Transgenic Research
Zhang Yuli Zhang Guizheng SuH ongm ei M engY iying B iL ihui
(Guangx i Research A cademy of Sericultural Science, N anning 530007)
Abstrac:t The green fluorescent pro tein( GFP) is a k ind o f lum inescence prote in, wh ich can cata ly ze itse lf into chrom ophores and
em it g reen fluorescent when exposed to b lue light or u ltravo ilet light. GFP w as ca lled b ig d ipper o f m ode rn b io logy, wh ich w as used
w idely in m any fields of b io logy. GFP possesses the triple advantage of stable fluorescence, inc luding easy inspection, sim ple express ion
and regu lation, safe to o rganism s, thus, it has been used w ide ly in m any aspects o f transgenic research. Th is artic le briefly introduced the
characteristics and prog ress o f GFP application in transgen ic research.
Key words: G reen fluorescent prote in( GFP ) T ransgen ic research Applications
收稿日期: 20100504
作者简介:张雨丽,女,硕士研究生,助理农艺师,研究方向:家蚕分子育种; Em ai:l ZYL8324@ 126. com
1962年 Sh imomura等 [ 1, 2 ]最早从水母中分离并
描述了绿色荧光蛋白 ( g reen fluorescent protein,
GFP) , 该蛋白在紫外光或蓝光激发下发荧光。
Cha lf ie
[ 3]首次发现 GFP在无任何底物和辅助因子
情况下,也能在活细胞内发荧光,可用于标记细胞和
蛋白质。T sien[ 4 ]则率先提出了 GFP发光的化学机
制,并发展了不同颜色的 GFP突变体。瑞典皇家科
学院把 2008年的诺贝尔化学奖授予了以上 3人。
科学研究人员利用 GFP能够在分子水平方便地追
踪许多生命活动的发生与发展过程。例如, 能看到
大脑神经细胞的发育过程和癌细胞的传播方式等。
GFP直接将生物学研究由以前的 死物学 !变成了
活物学 !,大大推动了生物学的发展。目前 GFP基
因已经在生物学的诸多研究领域得到应用, 在转基
因研究中的应用也颇多。GFP基因应用到转基因研
究中具有检测简便、荧光稳定、生物安全性好等优
点, 所以逐步成为转基因研究的良好材料和工具。
1 GFP在转基因研究中的应用特点
目前转基因研究与应用的发展十分迅速, 将
GFP基因应用到转基因研究中, 具有其它基因所无
法比拟的以下诸多优点。
1. 1 GFP荧光稳定,易于检测
GFP的荧光较稳定,抗光漂白能力比荧光素强,
能耐受较长时间的光照。GFP在 pH7 - 12范围内
都能正常发光; 对高温 ( 70∀ )、碱性、除垢剂、盐、有
机溶剂和大多数普通酶等都有较强抗性 [ 5]。
GFP中的发色团是由其一级结构中的一段三肽
自然形成,该发色团的形成只需要氧气,不依赖于酶
或者其它辅助因子,仅以紫外光或蓝光激发,即可发
出绿色荧光。用肉眼、荧光显微镜均可以观察到,且
灵敏度高,还可进行表达量的半定量或定量检测。
另外, GFP中氨基酸的替换可产生不同光谱特性的
2010年第 9期 张雨丽等 :绿色荧光蛋白在转基因研究中的应用
突变体,且增强了荧光强度,适合在不同物种中专性
表达。Tsien[ 6, 7]发展了颜色迥异的 GFP突变体,包
括蓝色荧光蛋白 BFP( blue fluorescent prote in)、青色
荧光蛋白 CFP( cyan fluorescent protein)和黄色荧光
蛋白 YFP( ye llow fluorescent pro te in)。随着研究深
入,抗酸、抗漂白、亮度高 (消光系数与量子产率乘
积 )、成熟快及单体结构的 GFP变体将越来越多,激
发和发射光谱范围也将不断拓宽, 对该蛋白的检测
将越来越容易。
1. 2 表达调控简单,构建载体方便
GFP中的发光团由一些常见的非特异氨基酸构
建而成,它的翻译后修饰过程不需要原有水母 (A.
victoria)细胞中任何其它成分或共因子, 在细胞内呈
自主表达。利用 GFP发光时,只需要操纵细胞合成
GFP蛋白,无需复杂的翻译后加工过程, GFP就会自
动折叠催化并开始发光, 在微生物、植物、动物中都
获得了成功的表达。由于 GFP分子量较小, 只含有
238个氨基酸, 编码 GFP的基因序列也较短, 约为
2. 6 kb
[ 8]
,所以它可以很方便地同其它序列一起构
建多种载体,而不至于使质粒过大而影响转化效率。
1. 3 生物安全性好
从目前的研究结果来看, GFP对活细胞基本无
毒害, 转化后细胞可连续传代, 对受体的生长发育及
功能等均无明显影响 [ 9- 11 ]。
2 GFP在转基因研究中的应用进展
2. 1 用于筛选转基因成功个体
外源目的基因转入宿主后, 能稳定整合的频率
低,通常是将携带有目的基因的载体转到若干个宿
主中, 再从该若干个细胞 (或其它 )中筛选出成功转
化并表达目的基因的个体。因此, 如何准确和有效
地区分转化与非转化细胞、筛选转化成功的个体是
转基因研究中重要的一步。在这一步中, 科研工作
者通常是在目的基因上游加一个筛选标记基因,利
用筛选标记基因在移植前进行阳性筛选, 仅把阳性
细胞移入受体,则可大大提高转基因动植物的成功
率,减少转基因个体筛选鉴定的工作量。目前常采
用的筛选标记基因主要有: 氯霉素乙酰转移酶基因
( CAT ), 葡萄糖苷酶基因 ( GUS ) , 荧光素酶基因
( Luc), 新霉素磷酸转移酶基因 ( NPT) ,潮霉素磷酸
转移酶基因 ( HPT )等。利用这些标记基因时, 有些
需要复杂的样品固定和制备过程、昂贵的底物;有些
需要漫长的抗性筛选,对胚胎有一定的毒害作用;大
部分还需要特殊的检测手段, 给转基因研究工作增
加了难度, 均不够理想。而将 GFP应用于标记基
因, 可以避免以上缺陷, 能够有效、快捷的对转基因
个体进行筛选,大大提高了转基因工作效率。
黄国存等 [ 12]分别用花粉管通道法和农杆菌介
导法将携带有 GFP基因的外源基因导入棉花,发现
用手持紫外灯结合显微镜检技术能够快速地对转化
子进行活体筛选鉴定,明显比 GU S检测方法优越。
程在全等 [ 13]用基因枪法将带有绿色荧光蛋白基因
的质粒 pJPM 5和 pSBG700分别转入水稻 TNG67愈
伤组织,在荧光显微镜下观察到了绿色荧光蛋白基
因的表达,绿色荧光蛋白基因表达出的绿色荧光蛋
白信号比植株的自发荧光强得多, 且不会受自发荧
光的太大影响。因此,绿色荧光蛋白基因可以作为
水稻 (甚至小麦、玉米 )转基因研究中的报告基因。
李华等 [ 14]将 GFP表达质粒导入 BHK、DK、RK等真
核细胞,建立真核细胞转基因指示系统, 结果表明,
GFP的表达对胚胎无损伤, 又经济简便, 可避免
半乳糖苷酶等报告基因的不足, 是提高基因转移与
筛选效率的理想途径。V ain等 [ 15 ]第一次对抗生素
筛选与 GFP筛选进行了直接比较,研究表明 GFP能
大大提高转化的工作效率, 减少了转基因植株分子
检测步骤和工作量。
2. 2 用于寻找转基因所需的启动子、增强子等调控
元件
基因的表达调控研究与转基因研究相辅相成,
用转基因方法可研究基因的表达调控,而基因的表
达调控研究可更好地指导并应用于转基因研究。启
动子、增强子等是基因表达调控的重要元件,也是转
基因所需的组件。用不同的启动子与 GFP基因相
连, 构成不同的表达质粒, 用于转化合适的细胞, 通
过观察细胞的荧光强度, 就可以比较判断启动子的
强弱,找出适合用于转基因的启动子。C lontech公
司构建了一种叫启动子报告载体 ( P romo ter reporter
vector) , 即没有启动子的 GFP质粒, 专门用来测试
各种启动子对 GFP表达的效率,以及某些增强子对
GFP表达的调控效果。用玉米 C4PPDK基因 5#端
的非翻译片段 ( 5#UTR )与花椰菜花叶病毒的 35S
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生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2010年第 9期
启动子连接, GFP在玉米原生质体中的表达效率比
对照质粒 (只有 35S启动子 )提高近 15倍,因为 5#
UTR片段中含转录增强子 [ 16 ]。将蓝氏贾第虫谷氨
酸脱氢酶 ( GDH )启动子和 GFP构成融合基因, 转化
贾第虫,可以观到绿色荧光, 从启动子的 5#末端进
行逐步缺失,制备一系列突变体并构成融合基因,转
化蓝氏贾第虫,能确定出 GDH启动子核心序列 [ 17]。
2. 3 用于探索不同物种的有效转基因方法
转基因的方法很多, 适用于不同生物的转基因
方法也不同。在做转基因之前,研究者必须先摸索
出最有效的方法, 以提高转基因的成功率。目的基
因构建到表达载体上后的表达情况通常是不清楚的
(有许多表达条件需要摸索 ) ,一旦检测不到基因的
表达, 就很难判断是转基因方法不恰当,还是基因表
达本身出现问题。所以如果直接用目的基因进行有
效转基因方法的探索, 将给转基因工作带来很多困
难。GFP的表达无种属特异性、表达调控及翻译后
修饰过程简单易控制、通常表达量也很高,将目的基
因替换为 GFP基因进行不同生物转基因最优方法
的探索,将会缩小研究难度。
Ro lling等 [ 18]将腺相关病毒载体 (AAV )与 GFP
构建成 rAAVGFP重组质粒, 经视网膜下腔注射到
大鼠眼内,在整个试验过程 ( 4个月 )中均能观察到
GFP的表达信号,说明 AAV能够有效地转染视网膜
色素上皮细胞 ( RPE )。Bennett等 [ 19]将携带有 GFP
的 cDNA重组腺相关病毒 ( rAAV )经视网膜下腔注
射到成年的免疫活性小鼠眼内,用激光扫描眼底镜
进行观察,试验结果表明, rAAV能有效稳定地介导
视网膜基因转移而无明显的毒性及免疫反应。杨国
顺等 [ 20]利用 GFP基因优化了辣椒的遗传转化体
系。Hu等 [ 21]用电激法和 PEG法同时转化玉米和
拟南芥菜 (Arabidop sis )原生质体, GFP在玉米原生
质体中表达, 且 PEG介导比电激法转化效率高; 而
拟南芥菜原生质体中未观察到 GFP表达。但 Sheen
等 [ 22]利用基因枪 (M icropro jectile bombardm ent)轰击
拟南芥菜叶片和根组织, 观察到 GFP的表达。宋军
等 [ 23]以绿色荧光蛋白基因为目标基因, 用脂质体转
染猪胎儿成纤维细胞, 并以绿色荧光蛋白基因转染
后的阳性细胞作为体细胞核移植的核供体, 以体外
成熟卵母细胞为核受体构建了绿色荧光蛋白转基因
克隆猪胚胎,结果表明, 脂质体转染试剂可以高效转
染猪胎儿成纤维细胞,获得的阳性细胞具有支持猪
全程发育的潜能。
2. 4 提高转基因产物的利用率
GFP分子量小,它能与多种蛋白质的 N端或 C
端融合,其表达产物既保持了外源蛋白的生物活性,
又表现出与天然 GFP相似的荧光特性。许多表达
的转基因产物, 特别是一些特殊蛋白, 难以分离纯
化, 而将 GFP与目的基因进行融合表达, 则使分离
纯化变得容易许多。还有研究表明, 改变蛋白质的
末端结构,与 GFP融合,可以增加重组蛋白质的稳
定性 [ 24]。K aba等 [ 25]构建了编码 ECF (东海岸热,
牛的一种致死性原虫病 )子孢子表面抗原 P67的重
组杆状病毒载体,结果只有低水平的表达,而 P67基
因与 GFP的 C端融合则出现较高水平的表达,重组
融合蛋白能够被 P67单克隆抗体识别,非融合蛋白
则不能被识别,这提示融合蛋白能增加重组蛋白质
的稳定性,促使其正确折叠。表达的融合蛋白既具
有原有的正常功能, 又具有绿色荧光特性。岳莉莉
等 [ 26]成功地实现了 GFP与 HBV (乙型肝炎病毒 )抗
原基因融合后在大肠杆菌中高效表达,得到既能发
射荧光又具有抗原性的双功能融合蛋白,为获得一
种新型发光免疫诊断试剂奠定了基础。
2. 5 用于开发转基因彩色品种
GFP高量表达,当荧光蛋白浓度足够高时,肉眼
即可看到鲜艳的绿色。直接以 GFP为目的基因转
入动物,可产生全身为绿色的彩色转基因动物,可用
于艺术及其它领域。应美国芝加哥艺术家爱德华
多卡奇要求,研究人员于 2000年制造出了一只能
发出绿色荧光的兔子 [ 27]。刘艳红等 [ 28 ]采用显微注
射法将绿色荧光蛋白 ( GFP)基因重组表达质粒导入
金鱼受精卵中,得到了发绿色荧光的金鱼。西南大
学的研究人员将 GFP转入家蚕, 得到绿色荧光丝,
进而制成了首件转基因绿色丝绸服装 [ 29] , 该转基因
丝绸实用价值较高。
2. 6 用于转基因物种安全监控与生物防治
近年来,有些转基因植物已开始被大面积种植,
这些转基因植株可能会通过花粉传播等造成目的基
因的漂移,这也是转基因生物安全性研究的重要方
面。为防止抗除草剂和抗病虫害等转化基因向周围
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2010年第 9期 张雨丽等 :绿色荧光蛋白在转基因研究中的应用
环境的漂移扩散, GFP标记将是最理想的检测手段,
只需紫外灯照射,含有 GFP的植株发出绿色荧光,
而非转化植株则没有此荧光,从而对转基因植株进
行大范围分拣,追踪其扩散。
另外,用 GFP标记植物种子、花或其它器官等,
就可方便有效地监测所转目的基因的传递情况,及
时找出漂移的基因, 去除危害。Hudson等 [ 30] 用
GFP标记烟草花粉, 可区分出转基因植物和非转基
因植物的花粉,追踪转基因植物花粉的移动情况、空
间传播方式和传粉机制, 估计出漂移到一定距离外
的转基因植物花粉数量。
在生物防治方面, GFP可帮助有效评估生物农
药的杀虫效果。评估 AcMNPV杀虫剂杀虫效果时,
研究人员在通常情况下仅记录有典型感染症状的害
虫个体而忽视无明显感染症状但确实已经感染或正
在感染的害虫个体, 利用 GFP标记 AcMNPV [ 31 ] ,就
可避免上述问题。并且,通过荧光观察,无需进行分
子生物学鉴定,即可方便地区分杀虫剂致死和天然
病原致死,从而客观准确地评价杀虫剂的毒力。
3 展望
综上所述, GFP的应用已经渗透到了转基因研
究中的各个领域, 并取得了显著的成绩。GFP已经
在转基因大麦、玉米、小麦、洋葱、菠菜、大豆和老鼠
等动植物中成功表达 [ 32 - 38 ]。
但由于基础理论研究远不及应用研究, 还存在
一些问题与不足: 长时间的高强度激发光可能使
GFP产生自由基,对细胞有毒害;转入基因的内在作
用机制研究还不够深入, 转基因动植物筛选制作效
率还比较低等。但随着科技的发展, GFP在转基因
研究中的应用范围也在不断扩大, 例如, 最近的研
究表明 GFP还可以用于检测转基因植物中选择标
记基因的消除 [ 39]。随着 GFP基础理论体系的成熟
完善、新型优良突变体的研究以及与现代转基因技
术的融合, GFP在转基因研究中的应用将更加广泛。
参 考 文 献
[ 1 ] Sh im om ura O, Johnson FH, S aiga Y. E xtract ion, purification and
p ropert ies of aequorin, a b io lum in escen t protein from the lum inous
hydrom edusan, Aequorea. J C ell Com p Phys io,l 1962, 59 ( 2 ) :
223229.
[ 2 ] M orise H, Shim om ura O, Johnson FH, et a.l In term olecu lar energy
transfer in the b iolum inescent system of Aequorea. B iochem istry,
1974, 13( 12): 26562662.
[ 3] Chalf ie M, TuY, Eu sk irchen G, et a.l Green f luorescent protein as a
m arker for gene exp ress ion. S cience, 1994, 263( 5148 ): 802805.
[ 4] Ts ien RY. The green fluorescen t p rotein. Annu Rev B ioeh em, 1998,
67: 509544.
[ 5] W ard WW, B okman SH. Reversib le denaturat ion ofA equ orea green
f luorescent p rotein: phys ical separat ion and characterizat ion of th e re
n atured p rotein. B ioch em istry, 1982, 21( 19 ): 45354540.
[ 6] H eim R, Ts ien RY. Eng ineering green fluorescen t protein for im
p roved b righ tn ess, longer w avelengths and fluorescen ce energy tran s
fer. Cu rr B io,l 1996, 6( 2) : 178182.
[ 7] Orm oM, Cub it tAB, Kal lio K, et a.l C rystal structu re of theA equorea
vic toria green fluorescen t protein. Scien ce, 1996, 273 ( 5280 ):
13921395.
[ 8] Prash er DC, E ckenrode VK, W ard WW, et a.l Prim ary s tru cture of
theAequorea v ictoria greenf luorescent protein. Gene, 1992, 111( 2 ):
229233.
[ 9] GubinAN, Reddy B, N joroge JM, et a.l Longterm, stab le expression
of green f luorescent protein in m amm alian cel ls. B iochem B iophys
ResC omm un, 1997, 236( 2) : 347350.
[ 10] Persons DA, A llay JA, A l lay ER, et a.l R etroviralm ed iated trans fer
of the green flu orescen t protein gene into mu rine h ematopoietic cells
facil itates scoring and select ion of tran sduced p rogen itors in v itro
and id ent if icat ion of genetically m od ified cells in vivo. B lood, 1997,
90( 5) : 17771786.
[ 11] Dreyer EB, V orw erk CK, Zurakow sk iD, et a.l In fection w ith adeno
associated virus m ay p rotect again st excitotoxicity. Neu roreport,
1999, 10 ( 14) : 28872890.
[ 12] 黄国存,张寒霜,高鹏, 等. GFP基因在棉花转化中的应用.遗
传, 200 ,l 23( 2 ) : 131134.
[ 13] 程在全,丁玉梅,曾黎琼,等.绿色荧光蛋白基因作为报告基因
在水稻基因转化中的应用研究.云南植物研究, 2002, 24( 3 ):
341351.
[ 14] 李华,刘维全,涂长春,等. GFP转基因指示系统建立的研究.中
国实验动物报, 1998, 6 ( 1) : 5154.
[ 15] V ain P, Worland B, Koh li A, et a.l Th e green f luorescent protein
(GFP ) as a v ital screenab le m arker in rice trans form at ion. Theor
A pp lG enet, 1998, 96 ( 2) : 164169.
[ 16] 李欢,杨皓宇,燕景洲,等. GFP在植物分子生物学研究中的应
用.生物学志, 2008, 25 ( 5) : 5557.
[ 17] 刘全,张西臣.绿色荧光蛋白在寄生虫学研究中的应用.中国人
兽共患病杂, 2005, 21 ( 8) : 728730.
[ 18] Rolling F, ShenWY, Tab ariasH, et a.l Eva luation of adenoassoci
ated virusm ediated gene tran sfer into the rat ret ina by clin ical f luo
rescence photography. H um Gene Th er, 1999, 10 ( 4) : 641648.
19
生物技术通报 B iotechnology Bulletin 2010年第 9期
[ 19 ] Bennett J, Duan D, Engelhardt JF, et a.l Realt im e, non in vasive in
vivo assessm en t of adenoassociated v iru sm ed iated ret inal trans
duct ion. Invest Ophthalm olV is Sc,i 1997, 38( 13 ): 28572863.
[ 20 ] 杨国顺,谢丙炎,杨宇红,等.应用绿色荧光蛋白报告基因优化
辣椒的遗传转化体系.园艺学报, 2004, 31 ( 6) : 737742.
[ 21 ] H uW, C heng CL. Expression ofAequorea green fluorescen t protein
in plan t cells. FEBS Lett, 1995, 369( 23) : 331334.
[ 22] Sheen J, Hw ang S, N iw a Y, et al. Green fluorescent p rotein as a n ew
vitalm arker in p lan t cells. Plant J, 1995, 8( 5) : 777784.
[ 23 ] 宋军,王振坤,孔庆然,等.利用体细胞核移植技术生产表达绿
色荧光蛋白转基因猪胚胎的研究.东北农业大学学报, 2008, 39
( 3 ): 6469.
[ 24 ] M atrajtM, N ish iM, FraunholzM J, et a.l Am in oterm ina l contro l of
transgen ic protein expression levels inTorop lasm a g ond ii. M ol B io
chem Parasito,l 2002, 120 ( 2) : 285289.
[ 25 ] Kab a SA, N ene V, M usoke AJ, et a.l Fus ion to green fluorescen t
protein im proves expression levels ofTh eileria parva sporozoite su r
face ant igen p67 in insect cells. Paras ito logy, 2002, 125 ( 6 ) :
497505.
[ 26 ] 岳莉莉,齐义鹏,林宏,等.绿色荧光蛋白与 HCV核心蛋白的融
合以及在大肠杆菌中的高效表达. 生物工程学报, 1997, 13
( 4 ): 368374.
[ 27 ] 新华网.钱永健. 杭州钱氏家族真的出了诺贝尔奖得主 [ EB /
OL ]. 2008109. h ttp: / / cs.j x inhuanet. com /200810 /09 /conten t_
14594364. htm.
[ 28 ] 刘艳红,肖调义,苏建明,等.用显微注射法将绿色荧光蛋白基
因导入金鱼受精卵中表达.上海水产大学学报, 2002, 11 ( 2 ) :
102105.
[ 29 ] 新华网.世界首件转基因丝绸服装重庆面世 [ EB /OL] . 20098
29. h ttp: / /www. cq. x inhuanet. com /photonew s /200908 /29 /con
ten t_17541602. h tm.
[ 30] H udson LC, C hamberlain D, Stew artCN Jr, et al . GFPtagged pol
len to m on iter pollen flow of transgen ic p lan ts. M ol Eco l Notes,
2001, 1( 4 ): 321323.
[ 31] L iu CY, W ang CH, Wang JC, et al. S tim u lat ion of bacu lov iru s tran
scrip tom e exp ress ion in m ammal ian cells by baculov iral tran scrip
tional act ivators. Journal of G eneral V iro logy, 2007, 88 ( 8 ):
21762184.
[ 32] Carlson AR, Letarte J, Ch en J, Kasha K. V isual screen ing ofm icro
sporederived transgen ic b arley( H ordeum vulg are L. ) w ith green
fluorescen t p rotein. P lant C ellRep, 2001, 20 ( 4) : 331337.
[ 33] G eestAHM, Petolino JF. Expression of am od ified green f luorescent
p rotein gene in transgen ic m aize plan ts and progeny. Plan t C ell
Rep, 1998, 17( 10) : 760764.
[ 34] Kaepp ler HF, M enon GK, Skadsen RW. T ran sgen ic oat p lan ts via
v isual selection of cells express ing green fluorescen t protein. Plant
Cel lRep, 2000, 19 ( 7) : 661666.
[ 35] Eady CC, Weld RJ, L ister CE. Ag robacterium tum efa cien sm ed iated
tran sform ation and tran sgen icp lant regeneration of on ion ( A llium
cepa L. ) . P lan tC ell Rep, 2000, 19( 4) : 376381.
[ 36] Zh ang HX, Zeevaart JAD. An efficien tAgroba cterium tum efa cien s
m ed iated trans form at ion and regenerat ion system for cotyledons of
sp inach( Sp inacia oleracea L. ) . Plant Cell Rep, 1999, 18 ( 7 /8 ):
640645.
[ 37] Ponappa T, Brzozow sk iAE, Fin er JJ. Trans ien t exp ress ion and sta
b le tran sform ation of soybean u sing th e jellyf ish green f luorescent
p rotein. P lant C ellRep, 1999, 19 ( 1) : 612.
[ 38] Jones CA, H urley M I, B lack TA, et a.l Exp ress ion of a ren in /GFP
tran sgene in m ouse emb ryon ic, extraemb ryon ic, and adu lt t issues.
Phys iolG enom ics, 2000, 4 ( 1) : 7581.
[ 39] 贾洪革,吕玲飞,庞飞奇,等.用绿色荧光蛋白监测转基因植物
中选择标记基因的消除.生物工程学报, 2004, 20( 1 ) : 1015.
20