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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2010 年第 7 期
溶瘤单纯疱疹病毒的叶酸 －聚乙二醇化修饰及
其生物学活性检测
韦炜1 郭冬薇2 方煜翔1 薛京伦1 郭圣荣2 田聆1
(1复旦大学生命科学学院 遗传学研究所暨遗传工程国家重点实验室，上海 200433;
2上海交通大学药学院，上海 200240)
摘 要: 溶瘤单纯疱疹病毒(oncolytic HSV)是一种重要的具有临床应用前景的病毒，但是该病毒的感染缺乏肿瘤细胞
靶向性，因而在相当程度上限制了其进一步的临床应用。首先把特异结合肿瘤细胞表面叶酸受体的叶酸(FA)与聚乙二醇
(PEG)进行化学交联，然后用 PEG化的叶酸对溶瘤单纯疱疹病毒 G207 进行共价表面化学修饰，并检测修饰后的病毒 FA-
PEG-HSV和 PEG-HSV的物理和生物学活性。结果显示，FA-PEG-HSV和 PEG-HSV的稳定性较未修饰的 HSV有所提高，但病
毒活力则分别下降为未修饰 HSV的 22. 5%和 27. 5%，而 FA-PEG-HSV对叶酸受体过表达的肿瘤细胞 KB的感染效率则比叶
酸受体低表达 A549 细胞提高了 300%。以上结果表明，FA-PEG-HSV是一种成功的叶酸受体靶向性溶瘤病毒复合体。
关键词: 溶瘤单纯疱疹病毒 叶酸 聚乙二醇化 病毒重靶向 基因治疗
Biological Evaluation on Oncolytic Herpes Simplex Virus with
PEGylated Folate Modification
Wei Wei1 Guo Dongwei 2 Fang Yuxiang 1 Xue Jinglun 1 Guo Shengrong 2 Tian Ling 1
(1State Key Laboratory of Genetic Engineering，Institute of Genetics，School of Life Sciences，Fudan University，Shanghai 200433;
2School of Pharmacy，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 200240)
Abstract: Herpes Simplex Virus I is a promising oncolytic virus in clinical application． However，viral tropism，which direct vi-
rus infects normal tissues，is one of the major problems hindered the development of HSV-1． To overcome that，poly(ethylene glycol)
(PEG)or folate conjugated PEG (FA-PEG)was immobilized on the surface of HSV-1，and biological properties were evaluated． PEG-
lyated HSV-1 has higher zeta potential value than unmodified virus，suggesting that PEGlyation has increased the stability of HSV-1 in
colloidal dispersions． The viral viability of PEG-HSV and FA-PEG-HSV was 27. 5% and 22. 5% compared to naked HSV-1． The retar-
geting specificity of FA-PEG-HSV towards KB cells (folate receptor overexpression)enhanced 300% compared to A549 cells (folate
receptor low expression)． The results showed that FA-PEG-HSV was a successful folate receptor-targeted oncolytic virus．
Key words: Oncolytic HSV-1 Folate PEGlyation Viral retargeting Gene therapy
收稿日期:2010-04-06
基金项目:“863”计划重点项目(2007AA021010)
作者简介:韦炜，男，硕士研究生，研究方向:癌症基因治疗;E-mail:albert2803@ gmail． com
通讯作者:田聆，男，副教授，E-mail:tianling@ fudan． edu． cn
溶瘤单纯疱疹病毒 I 型(herpes simplex virus
type I，HSV-1)是近年来被广泛研究的代表性溶瘤
病毒(oncolytic virus)之一，显示出良好的临床应用
前景［1］。首先，HSV-1 具有感染宿主细胞范围广，
感染效率高和感染非分裂细胞等优点，且 HSV感染
细胞后不整合进基因组，因而安全性较好。其次，
HSV-1 本身具有胸苷激酶(thymidine kinase，TK)基
因，它可以将没有细胞学毒性的药物前体(如阿昔
洛韦、更昔洛韦等)转换成细胞毒性代谢产物，从而
杀死癌细胞［2］。最重要的是，溶瘤 HSV-1 可通过癌
症细胞间的间隙连接(gap junctions)转移到相邻癌
细胞，从而有效提高肿瘤细胞感染效率。另外，HSV
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2010 年第 7 期
在细胞中的复制周期仅为 20 h，而另一种常见溶瘤
病毒腺病毒(adenovirus)的复制周期则需要 48 － 72
h，因而溶瘤 HSV 具有比较优势［3］。许多临床前研
究和临床研究都表明 HSV 对神经胶质细胞瘤、肝
癌、胰腺癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤
等多种肿瘤都具有一定的治疗作用［3］。
然而，与其它病毒类似，HSV-1 的宿主细胞范围
广，并非专一感染肿瘤细胞，也能感染正常细胞和组
织，虽然溶瘤 HSV-1在正常细胞中不能复制增殖，但
却可诱导免疫反应，影响肿瘤细胞的病毒摄入量，降
低其抗肿瘤活性。因而，对病毒的天然嗜性(viral
tropism)进行修饰或改造，使之重靶向(retargeting)于
肿瘤细胞，实现溶瘤病毒的靶向转导(transductional
targeting) ，一直是溶瘤病毒研究的重要方向［4］。
本研究就针对大多数肿瘤细胞常常过表达叶
酸受体(folate receptor) ，设计并构建出聚乙二醇化
叶酸(PEGylated folate，FA-PEG)修饰的溶瘤单纯
疱疹病毒复合物，同时检测其生物学活性，以探讨
进行溶瘤 HSV 的转导靶向、增强其抗肿瘤效果的
可行性。
1 材料与方法
1. 1 主要材料和试剂
溶瘤 HSV-1 病毒 G207 (缺失两个拷贝的
ICP34. 5基因，并在 ICP6基因中插入 lacZ基因)由加
拿大不列颠哥伦比亚大学William Jia教授惠赠;Vero
细胞购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库;
A549和 KB细胞购于美国标准菌种收藏所(ATCC) ;
DMEM高糖培养基购于 GIBICO公司;新生小牛血清
(NCS)为复旦大学放射医学研究所产品;胎牛血清
(FBS)为 GIBICO公司产品;异双功能聚乙二醇衍生
物(NH2-PEG-COOH，MW 3000)、甲氧基-PEG-NHS
(mPEG ，MW 2000)、叶酸(FA，MW 441. 4)、二环己基
碳二亚胺(DCC，MW 206. 33)、N-羟基丁二酰胺(NHS，
MW 115. 09)、二甲亚砜(DMSO，MW 78. 13)、1-(3-二甲
氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC，MW 155. 24)购于美
国 Sigma公司;荧光氨(fluorescamine)为 Applichem公
司产 品;HBSS 溶 液，pH7. 4 (137 mmol /L NaCl，
5. 4 mmol /L KCl，0. 25 mmol /L Na2HPO4，0. 44 mmol /L
KH2PO4，4. 2 mmol /L NaHCO3)。
1. 2 细胞培养
非洲绿毛猴肾细胞(Vero 细胞)培养于含有
10% 新生小牛血清的 DMEM 高糖培养基中。叶酸
受体过量表达的人口腔上皮癌细胞(KB 细胞)和叶
酸受体低表达的人肺癌细胞(A549 细胞)培养于含
有 10% 胎牛血清的 DMEM高糖培养基中。所有细
胞都在温度为 37℃，CO2浓度为 5%的细胞培养箱
中培养。
1. 3 单纯疱疹病毒培养
Vero细胞接种于直径为 12. 5 cm的细胞培养皿
中，待细胞长至 80%满时，细胞培养基更换为含有
5%新生小牛血清的 DMEM高糖培养基，并以 MOI =
0. 05 接种溶瘤 HSV病毒 G207。在 37℃，含有 5%
CO2的培养箱中继续培养 72 h。将细胞培养基上
清和细胞碎片收集到无菌的冻存管中，－ 80℃
保存。
1. 4 单纯疱疹病毒纯化
HSV病毒纯化主要参照文献［5］中的方法，并
进行少量改进。将 1. 3 中收集到的病毒上清和细胞
反复冻融 3 次，从而充分裂解细胞，释放出细胞中的
HSV病毒颗粒。将冻融 3 次的病毒液放入离心管
中，5 000 r /min，4℃离心 10 min，收集病毒上清。
12 000 r /min，4℃离心 30 min，进一步去除病毒上清
中的细胞碎片。将初步纯化好的病毒上清液25 mL
加入到无菌的超速离心管中(30 mL;Beckman Coul-
ter)。将 5 mL 含有 25%蔗糖的 HBSS 溶液用移液
管小心的加入到超速离心管管底，25 000 r /min，4℃
超速离心 4 h(离心机转子型号为 Beckman SW28 转
子)。离心后，倒掉上清液，用 250 μL HBSS 重悬超
速离心管底部的 HSV沉淀。将重悬的 HSV 病毒溶
液置于 4℃摇床，轻柔摇过夜。3 000 r /min，4℃离
心 10 min，进一步去除细胞碎片。取出部分纯化后
的病毒进行滴度测定，剩余的病毒 － 80℃保存。
1. 5 单纯疱疹病毒滴度检测
将 Vero细胞以 3 × 105细胞 /孔的密度接种至 6
孔板中。接种 24 h后，待 Vero 细胞长至 100%满时，
去掉细胞培养基，PBS 洗 1 次细胞。然后将事先用
DMEM培养基依次 10 倍稀释好的 HSV 病毒或 PEG
修饰过的 HSV 病毒加入每孔中。在 37℃，含有 5%
CO2的培养箱中孵育 2 h 使病毒与细胞充分结合。
202
2010 年第 7 期 韦炜等:溶瘤单纯疱疹病毒的叶酸 －聚乙二醇化修饰及其生物学活性检测
2 h后，用移液管吸去未与细胞结合的病毒，每孔加入
2 mL新生小牛血清含量为 5%的 DMEM 高糖培养
基，在 37℃，含有 5% CO2的培养箱中继续培养 68 h。
68 h后，用移液管吸去细胞上清，每孔加入浓度为
10%的甲醛固定液 1 mL，室温孵育 30 min 后，吸去
10%甲醛溶液，每孔加入 1 mL 的 10%结晶紫(上海
生工)溶液将Vero细胞染色。室温孵育30 min后，用
清水冲洗 6 孔板中的 Vero 细胞，数出每孔的空斑数
量，并根据下列公式计算出病毒的滴度值。
病毒滴度 = 空斑数量 × 病毒稀释倍数
1. 6 叶酸 －聚乙二醇的合成与检测
将叶酸与 NHS 形成活化酯，即将叶酸溶于二甲
亚砜(DMSO) ，与二环己基碳二亚胺(DCC) ，n-羟基丁
二酰胺以摩尔比为 1∶ 2∶ 2 的比率反应，搅拌 18 h，整
个反应在氮气保护的条件下进行。将所得混悬物
15 000 r /min离心 30 min，除去白色不溶物，取黄色上
清液。将与上述叶酸活化物摩尔比为 1 ∶ 8 的 NH2-
PEG-COOH溶于 DMSO，在氮气保护的条件下与叶酸
活化物反应 4 h，将所得物质分别在 DMSO和超纯水
中于 4℃条件下分别透析 72 h和 48 h，将最终产品在
－20℃冷冻干燥［6］。将冻干后的产品 FA-PEG 取部
分样品(约 5 mg)溶于氘代 DMSO 中，通过核磁共振
进行检测，确认反应情况及结构。
1. 7 聚乙二醇、叶酸 －聚乙二醇与单纯疱疹病毒进
行化学偶联包被
分取甲氧基-PEG-NHS(mPEG)溶于 2 mL HB-
SS，加入 HSV(HSV 与 mPEG 的比例为每个活病毒
中加入 1 × 107个 mPEG 分子) ，冰浴下反应 4 h［7］。
反应后所得的 PEG-FA在超纯水中于 4℃条件下透
析 48 h，将最终产品在 － 80℃保存。将 FA-PEG-
COOH溶于 2 mL HBSS 中，加入 EDC 和 NHS 进行
活化，其摩尔比为 1∶ 10∶ 10，室温反应 1 h，取活化后
的 FA-PEG-COOH溶于 2 mL HBSS，加入 HSV(HSV
与 FA-PEG-COOH 的比例为每个活病毒中加入 1 ×
107个 FA-PEG-COOH分子) ，在冰浴下反应 4 h ［7］。
反应后所得的 PEG-FA在超纯水中于 4℃条件下透
析 48 h，将最终产品在 － 80℃保存。
1. 8 叶酸 －聚乙二醇 － HSV 病毒(FA-PEG-HSV)
的 PEG化度检测
将荧光氨染料溶于丙酮中，配置成 7 mg /mL 的
荧光氨溶液。在 100 μL 的荧光氨染料中加入
900 μL的 HSV或 FA-PEG-HSV，立刻混合，然后在
黑暗环境下孵育 15 min。通过分光光度计检测荧光
强度，激发波长为 390 nm，发光波长为 475 nm。用
PEG-二胺绘制标准曲线［7］。
1. 9 病毒粒径和 zeta电位检测
将 HSV，PEG-HSV 和 FA-PEG-HSV 溶于超纯
水，用动态光散射仪(Dynamic light scattering instru-
ment，DLS，Malvern公司)分别测定各组病毒颗粒直
径的大小。将 HSV，PEG-HSV和 FA-PEG-HSV分别
溶于 2 mL pH7. 4 的 HBSS 中，用雷射光散射仪
(Zetasizer Nano System，Malvern公司)分别测定各组
病毒的表面 Zeta电位大小。
1. 10 修饰后病毒靶向性检测
KB和 A549 细胞分别以 1 × 105细胞 /孔接种于
24 孔板中，24 h 后，分别用 HSV，PEG-HSV 和 FA-
PEG-HSV以 MOI = 1 感染两种细胞系，在 37℃，含
有 5% CO2的培养箱中培养 72 h，收集细胞和细胞
培养基，化冻 3 次裂解细胞从而释放细胞中的子
代病毒颗粒，检测各组病毒感染细胞后子代病毒
数量。
2 结果
2. 1 叶酸 －聚乙二醇的合成
我们将 DCC /NHS 与叶酸中的 γ-羧酸活化，然
后与 NH2-PEG-COOH 的氨基结合，得到叶酸-聚乙
二醇复合物。并将所得的 FA-PEG-COOH 轭合物
经1H NMR分析，结果如图 1 所示。图 1 中1H NMR
的分析数据表明，叶酸的 C 端与 NHS 形成活化酯，
活化产物再与 PEG的 N端发生反应，说明叶酸已经
成功接入到 NH2-PEG-COOH中，实现了叶酸的 PEG
化修饰。
2. 2 FA-PEG-HSV的 PEG化度检测
荧光氨染料能够和病毒表面膜蛋白的羧基进行
共价结合，通过分光光度计检测荧光氨染料的荧光
强度可以测得样品的分光值(A)。将样品的分光值
在用标准品 PEG-二胺被绘制的分光值-蛋白浓度标
准曲线上得到样品的蛋白浓度。本次试验对照组
HSV的蛋白浓度为 3. 73 × 10 －7 mol /mL，FA-PEG-
HSV的蛋白浓度为 2. 91 × 10 －7 mol /mL，由于两组
样品中的病毒浓度相同。因此，可根据公式:FA-
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生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2010 年第 7 期
PEG-HSV 的 PEG 化度 = 1-(FA-PEG-HSV 组的蛋
白浓度 /HSV组的蛋白浓度) ，得出 FA-PEG-HSV 组
的 PEG化度为(22. 0 ± 0. 1)%。
图 1 叶酸(A)以及 FA-PEG-COOH(B)轭合物的1H NMR核磁谱图
2. 3 FA-PEG-HSV的 PEG化度检测
为了检测修饰后病毒颗粒的直径的变化，利用
动态光散射仪(Dynamic light scattering instrument，
DLS)测定了 HSV，PEG-HSV和 FA-PEG-HSV 3 种病
毒的粒径大小(图 2) ，3 组病毒的粒径大小分别为
(249. 5 ± 3. 06)nm，(312. 2 ± 6. 57)nm和(298. 5 ±
9. 92)nm。由于 PEG或 PEG-FA在溶液中有一定的
空间结构，因此，PEG修饰后 HSV的粒径较未修饰的
HSV病毒明显增大。其中 PEG-HSV组的粒径比 HSV
组增大了 62. 7 nm，增幅为 25. 1%;FA-PEG-HSV组的
粒径比HSV组增大了 49 nm，增幅为 19. 6%。
为了进一步检测修饰后病毒的理化性质，用雷
射光散射仪(Zetasizer Nano System)分别测定了
HSV和 PEG修饰后病毒的带电状况(图 3)。HSV，
PEG-HSV和 FA-PEG-HSV 三组病毒的 Zeta 电位分
别为(－ 12. 94 ± 1. 93)mV，(－ 23. 40 ± 1. 61)mV
和(－ 18. 21 ± 1. 41)mV。Zeta 电位的绝对值的大
小决定了病毒在溶液中的稳定性，绝对值越大，病毒
的稳定性越好。由此可见 PEG 修饰后的病毒较未
修饰的 HSV病毒稳定性有所提高。
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病毒粒径和 Zeta 电位结果表明我们成功的用
FA-PEG修饰了 HSV。
图 2 HSV和 PEG修饰的 HSV粒径大小
图 3 HSV和 PEG化修饰病毒 Zeta电位大小
2. 4 病毒活力检测
为了测定病毒包被后毒力损失情况，分别对纯化
后和进行化学修饰反应后的病毒进行了滴度测定，其
中 HSV组除了反应体系中没有加入 PEG或 FA-PEG
外其他操作与修饰组相同。病毒滴度检测的结果显
示，纯化后的 HSV 病毒毒力为 2 × 108 PFU/mL;HSV
组，PEG-HSV组，FA-PEG-HSV 组毒力分别为 6 × 107
P，5. 5 ×107 P和 4. 5 ×107PFU/mL。各组的病毒损失
率分别为 70%，72. 5%和 77. 5%。以上结果表明病
毒修饰反应过程对病毒的活力有一定影响。
2. 5 病毒靶向性检测
为了检测叶酸-聚乙二醇包被的 HSV(FA-PEG-
HSV)对叶酸受体过量表达的 KB细胞和叶酸受体低
表达的 A549 细胞靶向性的差异，分别将 3 组病毒
(HSV，PEG-HSV 和 FA-PEG-HSV)以 MOI = 1 感染
KB和 A549细胞，在感染后 72 h收集细胞和培养基
上清，并检测细胞和培养基中子代病毒总含量。试验
结果表明，HSV，PEG-HSV 和 FA-PEG-HSV 3 组病毒
分别感染 KB细胞 72 h 后，细胞中的病毒数分别为
1. 5 ×104、1 × 102和 6 × 102 PFU/mL。上述 3 组病毒
分别感染 A549 细胞 72 h 后，细胞中子代病毒总量
分别为 2. 3 × 104、3. 8 × 103和 7. 5 × 103 PFU/mL。
PEG-HSV组对 KB细胞的感染能力是未改造前病毒
的 0. 67%，而 FA-PEG-HSV 组对叶酸受体过量表达
的 KB 细胞的感染能力是病毒修饰前的 4%。FA-
PEG-HSV组较 PEG-HSV组病毒对 KB细胞靶向性提
高(600 ±50)%。PEG-HSV、FA-PEG-HSV对 A549 细
胞感染能力分别为病毒修饰前的17%和 33%，而 FA-
PEG-HSV组较 PEG-HSV组对 A549细胞的靶向性提
高(200 ±10)%(图 4)。以上结果表明 FA-PEG-HSV
的叶酸受体靶向特异性提高了 300%。
图 4 FA-PEG-HSV对 KB细胞(叶酸受体过量表达)
和对 A549 细胞(叶酸受体低表达)的靶向特异性
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生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2010 年第 7 期
3 讨论
溶瘤病毒治疗(oncolytic virotherapy)是近年来
广受关注的肿瘤基因治疗新策略。与传统的基因治
疗不同，溶瘤病毒(oncolytic virus)不依赖于外源治
疗基因，而依靠病毒自身特异性地在肿瘤细胞内复
制增殖，从而导致细胞裂解而杀死肿瘤细胞，而裂解
的细胞所释放出的病毒又可进一步感染周围的肿瘤
细胞，从而起到治疗肿瘤的作用。但是，溶瘤病毒的
细胞嗜性亦如野生型病毒，不仅感染肿瘤细胞，也可
感染正常细胞，虽然其在正常细胞中不能复制增殖，
但也因此存在一定的安全性问题，会激起机体的免
疫反应，影响到抗肿瘤效果。因此，溶瘤病毒嗜性的
靶向性改造或重构是溶瘤病毒治疗中亟待解决的一
个问题。通常，病毒嗜性的重构策略大体上分为不
改造病毒基因组的重靶向和改造病毒基因组的重靶
向两种［8］。本研究采用的重靶向策略属于前者，即
通过病毒表面修饰带有细胞靶向作用的聚乙二醇化
叶酸分子来实现病毒的重靶向。
叶酸(Folate，FA)是人体必需的维生素，但人体
不能合成，需摄取外源性叶酸。人体摄入叶酸主要
是通过还原型叶酸转运蛋白、质子偶联的叶酸转运
蛋白和叶酸受体，前两种蛋白广泛分布于人体细胞，
并且没有与叶酸偶联药物的结合能力［9］，而叶酸受
体在绝大多数正常组织中几乎不表达，但在多种上
皮来源的肿瘤组织中过量表达，如卵巢癌、子宫癌、
脑癌、肾癌、头颈肿瘤等［10］，同时叶酸-叶酸受体具
有高亲和力，通过 FR介导的内吞作用，能有效将叶
酸及其偶联物等摄入细胞。因此，叶酸受体介导的
靶向给药系统已广泛应用于包括基因药物在内的多
种抗肿瘤药物研究中，并已取得良好的进展［9］。
G207 是第二代溶瘤 HSV 病毒，具有病毒神经
毒力低、对温度敏感、对 GCV超敏感等多种优点，被
广泛用于治疗恶性胶质瘤、恶性脑膜瘤等神经系统
恶性肿瘤的治疗，同时，在前列腺癌、乳腺癌、卵巢
癌、黑色素瘤、结肠癌、头颈部鳞癌等多种肿瘤动物
模型中也显示出良好的抑瘤效果，目前已进入临床
研究阶段［11］。
本研究以 G207 为模式溶瘤 HSV 病毒，用 PEG
化叶酸进行共价表面化学修饰，构建出了 FA-PEG-
HSV复合物，并对病毒复合物的物理性质和生物学
活性进行了检测，结果显示 PEG修饰后的病毒粒径
较修饰前增大约 60 nm，这与 Oh 等［7］构建的 PEG
化修饰的腺病毒所增加的粒径相若(≈70 nm) ，表
明 HSV 病毒的 PEG 化修饰过程与腺病毒类似，虽
然二者与细胞嗜性相关的结构(衣壳、囊被等)并不
相同，也同时间接说明我们成功地用 PEG 包被了
HSV病毒。
PEG化叶酸修饰的 HSV复合物的稳定性是影响
病毒的重靶向的重要因素，因此，继续检测了病毒复
合物的 Zeta电位水平，Zeta 电位主要用于评价病毒
颗粒在胶体中的稳定性，Zeta 电位绝对值越大，病毒
颗粒越稳定，越不易凝聚。试验结果表明，PEG 化修
饰的病毒 Zeta 电位的绝对值较 HSV组高，说明通过
PEG修饰，HSV在溶液中的稳定性有所提高。同时，
我们还进一步研究了HSV的 PEG化叶酸修饰过程对
HSV活力的影响，研究发现化学修饰反应后的 3组病
毒(HSV、PEG-HSV和 FA-PEG-HSV)较修饰前病毒毒
力分别损失了 70%、72. 5%和 77. 5%。以上结果表
明 3组病毒的毒力损失率相似，说明 HSV 毒力损失
主要发生在病毒修饰反应阶段，而 PEG、FA-PEG对病
毒的活力影响甚微。
为进一步证实 PEG 化叶酸修饰的 HSV 的复合
物对肿瘤细胞的特异性靶向转导功能，将 3 组病毒
(HSV、PEG-HSV和 FA-PEG-HSV)分别感染叶酸受
体过量表达的 KB 细胞以及叶酸受体低表达的
A549 细胞，然后分别检测感染细胞及细胞上清中的
病毒含量，发现各组 A549 细胞中的病毒总量高于
KB细胞，这可能是两种细胞对 HSV 病毒易感性的
差异造成的。同时，PEG-HSV组病毒对 KB 和 A549
细胞的感染效率分别为 HSV 组病毒的 0. 67% 和
17%，病毒感染效率的降低可能与 PEG的空间位阻
效应有关，PEG可能屏蔽了病毒的原有靶向性降低
了病毒感染效率。加入叶酸作为细胞特异性配体
后，FA-PEG-HSV对 KB 和 A549 细胞的感染能力有
所增加，分别增加了 600%和 200%(图 4)。以上结
果说明 FA-PEG-HSV 的靶向性提高了 300%，表明
FA-PEG-HSV能够通过叶酸-叶酸受体的相互作用
特异地靶向 HSV进入叶酸受体过量表达的细胞。
总之，本研究成功地构建了 PEG化叶酸修饰的
HSV 复合体 FA-PEG-HSV，并成功地重靶向 FA-
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2010 年第 7 期 韦炜等:溶瘤单纯疱疹病毒的叶酸 －聚乙二醇化修饰及其生物学活性检测
PEG-HSV到叶酸受体过量表达的肿瘤细胞中，为溶
瘤 HSV的靶向转导研究开辟了一条新的思路。
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·科学出版社新书·
基因克隆与操作
(生命科学前沿丛书)(原书第二版)
(英)克里斯托弗· 豪 著 李慎涛 等译
978-7-03-027438-0 ￥55． 00 2010 年 5 月
内容简介:本书作者克里斯托弗· 豪是剑桥大学植物与微生物生物化学专业的教授，
教授分子生物学达 20 年。本书是对第一版的完全更新，反映了基因克隆和操作领域最新
的进展，对重组 DNA 技术进行了全面而简洁的介绍:首先阐释了生物化学的基本原理;然
后介绍了 PCR 以及使用大肠杆菌宿主和质粒、噬菌体和杂合载体进行克隆;之后介绍了文
库的构建和筛选，以及如何对克隆化序列进行改造、灭活和表达;最后讨论了在许多其他生
物中进行的遗传操作，包括细菌、真菌、藻类，以及植物、昆虫和哺乳动物。
本书是为要使用重组 DNA 技术的高年级本科生、研究生和科研工作者而作，重点放在
特定类型克隆载体上，以帮助读者理解并能够在新的实验状态下提出适当的策略。本书还
介绍了一系列“现实的”生物学问题，以使读者能够评估自己对知识的理解并准备考试。
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