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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2011 年第 7 期
重金属锌单克隆抗体的制备及鉴定
赵丽1，2 王凤龙1 杨慧2 李鹏2 李霞2，3
(1内蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特 010018;2北京市农林科学院蔬菜研究中心，北京 100097;
3北京农产品质量检测与农田环境监测技术研究中心，北京 100097)
摘 要: 通过双功能螯合剂 S-2-(4-异硫氰苄基)-二乙烯三胺五乙酸(ρ-SCN-Bn-DTPA)将锌离子(Zn2 +)分别与载体蛋
白匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin，KLH)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)偶联。通过二喹啉甲酸(bicin-
choninic acid，BCA)法测抗原蛋白浓度，对抗原、KLH和 BSA分别进行紫外分光光度计扫描，十二烷基磺酸钠 －聚丙烯酰胺凝
胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)进行定性鉴定，利用石墨炉原子吸收分光光度法检
测抗原中 Zn2 +含量等，成功获得了免疫抗原 Zn-DTPA-KLH 和检测抗原 Zn-DTPA-BSA、DTPA-BSA。用 Zn-DTPA-KLH 免疫
BALB /c小鼠，通过细胞融合，极限稀释法亚克隆，间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)筛选，获得
了 1 株稳定分泌抗重金属锌抗体的杂交瘤细胞株(Z1A5)。Z1A5 染色体数目在 100 以上，所分泌的抗体为 IgM 亚类，轻链为
kappa型，腹水型抗体效价高达 1∶ 51 200。本研究为锌离子残留免疫学检测方法的建立提供了物质及技术基础，对提高风险
评估工作的效率和质量，保障食品安全有重要现实意义。
关键词: 重金属 锌 螯合抗原 单克隆抗体 间接酶联免疫吸附法
Preparation and Characterization of Specific Monoclonal
Antibodies Against Zinc
Zhao Li1，2 Wang Fenglong1 Yang Hui2 Li Peng2 Li Xia2，3
(1College of Animal Science and Medicine，Inner Mongolia Agricultural university，Hohhot 010018;
2Vegetable Research Center of Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Beijing 100097;
3Beijing Research Center for Agri-food Testing and Farmland Monitoring，Beijing 100097)
Abstract: Zinc ions were coupled to protein carrier keyhole limpet hemocyanin(KLH)and bovine serum albumin(BSA) ，respec-
tively，using bifuntional chelator(S-2-(4-Isothiocyanatobenzyl)-Diethylenetriamine Pentaacetic Acid，ρ-Scn-Bn-DTPA)． After the assay
for concentration of the antigen with bicinchoninic acid(BCA)method，the antigen and carrier protein(KLH and BSA)were scanned
with ultraviolet spectrophotometer，and verified with sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE)． Concentra-
tion of zinc ion in antigen determined with graphite-furnace atomic absorption spectrometry． The results indicated antigen Zn-DTPA-
KLH，Zn-DTPA-BSA and DTPA-BSA were synthesized successfully． Monoclonal antibodies against zinc were generated by immunizing
BALB /c mice with zinc conjugated antigen(Zn-DTPA-KLH)． The hybridoma cell line producing stably specific monoclonal antibodies
against zinc was by produced fusion of murine splenocytes and SP2 /0 myeloma cells，subcloned by the limiting dilution and screened by
indirect enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) ，named Z1A5． The chromosome numbers of Z1A5 was above 100． The type of se-
crete antibodies from Z1A5 was IgM，kappa． The antibody titers of ascites was up to 1∶ 51 200． These data laid a potency of establishing
immunoassays methods of determining zinc ion residues and had the realistic significance for improving the efficiency and quality of risk
assessment．
收稿日期:2011-02-21
基金项目:国家高技术研究发展计划(“863”计划) (2007AA10Z439) ，国家自然科学基金项目(30671205) ，北京市科委课题(Z09090501040901) ，北
京市农林科学院科技创新能力建设专项(KJCX201101010)
作者简介:赵丽，女，博士研究生，研究方向:动物传染病与免疫病理学;E-mail:nmlizhao@ 126． com
通讯作者:李霞，女，博士，副研究员，研究方向:重金属免疫检测;E-mail:lixia@ nercv． org
Key words: Heavy metal Zinc Chelated antigen Monoclonal antibody Indirect ELISA
2011 年第 7 期 赵丽等:重金属锌单克隆抗体的制备及鉴定
在当代人类使用的金属中，按金属用量计，锌
(Zn)是仅次于铁、铝、铜之后的第四大用量的重金
属［1］。锌参与体内 200 多种酶的合成和活化，是动
物生长发育及维持正常生理机能所必须的微量元
素，但环境污染和饲料、药物添加剂的滥用，造成畜
禽产品重金属残留不同程度超标［2］。摄入过量的
锌会导致机体代谢紊乱;过量的锌是一种作用迅速
的中枢神经毒素，通过对神经细胞的直接损害及
对体内各种物质的拮抗而影响脑功能。高锌还可
明显抑制红细胞的免疫功能，造成雏鸡肝、脾的结
构和功能受损［3］;日粮锌添加 1 300 mg /kg 以上时，
会导致雏鸭患白肌病，肌胃、小肠平滑肌、骨骼肌和
心肌受损［4］;作物中蓄积的重金属离子通过食物链
的生物放大作用进入人畜体内，引起多种疾病甚至
癌症，而且危害还可以遗传到下一代，威胁人畜
健康［5］。
因此，痕量重金属的定量分析在食品和环境检
测等方面都是非常重要的。传统的重金属离子检测
法如无火焰原子吸收光谱法［6］、火焰原子吸收光谱
法［7 － 9］、电感耦合等离子体质谱法［10］、伏安法和离
子色谱法［11］，以及电热原子化原子吸收光谱
法［12 － 15］等，检测必须在具备大型分析仪器的重点实
验室内进行，无法用于现场检测，且受到费用高、处
理量有限和检测时间长等限制［16］，都不利于在生产
中推广应用，难以适应环境及市场产品的现场抽查
及产品进出口快速通关的要求;免疫学检测方法具
有快速、廉价、灵敏和特异性强的优点，可同时完成
高通量样品的检测，建立免疫分析法检测锌离子是
生产及经济发展的需要。
重金属免疫检测技术以重金属特异性单克隆抗
体为基础，而成功制备重金属免疫原是制备单克隆
抗体的关键。本研究报告了用 BCA法、紫外分光光
度计扫描法、SDS-PAGE 和石墨炉原子分光吸收法
等多种方法对合成的抗原进行鉴定，也报告了重金
属锌离子螯合物的单克隆抗体的获得、鉴定方法和
结果。本研究为建立重金属锌的免疫学检测方法和
后续研究(如适合现场检测的便携检测仪等)奠定
基础，将应用于农畜产品的抽样检测及进出口通关
的快速检验［17］。
1 材料与方法
1. 1 材料
锌粉、匙孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白
(BSA)、佐剂(FCA、FICA)、聚乙二醇(PEG)购于美
国 Sigma公司;双功能螯合剂 S-2-(4-异硫氰苄基)-
二乙烯三胺五乙酸(ρ-Scn-Bn-DTPA)购于美国 Mac-
rocyclics公司;HEPES购于北京华美生物工程公司;
抗体亚型鉴定试剂盒购于瑞士 Roche 公司;BCA 蛋
白质浓度检测试剂盒购于美国 Novagen 公司;
BALB /c小鼠购于中国军事医学科学院动物中心;
酶联免疫分析仪购于美国 BIO-RAD公司;全自动洗
板机购于美国 Thermo electron 公司;纯水系统、Cen-
tricon YM-30 超滤管购于美国 Millipore公司。
1. 2 方法
1. 2. 1 抗原的制备 免疫抗原 Zn-DTPA-KLH的制
备:(1)称取 10 mg ρ-SCN-Bn-DTPA 溶于 0. 6 mL
pH9. 73 的 HEPES缓冲液后，取 0. 133 mL上述溶液
加入反应器，再加入浓度为 150 mg /mL的 Zn(NO3)2
溶液 7. 5 μL，调节 pH至 7. 4、室温反应 10 min;(2)
再向其中加入 0. 14 mL pH9. 73 的 HEPES 缓冲液、
1. 695 mL浓度为 5. 9 mg /mL的 KLH溶液，调节 pH
至 9. 0，室温搅拌，反应 12 h。
检测抗原 Zn-DTPA-BSA的制备:(1)称取10. 668
mg ρ-SCN-Bn-DTPA，加入 0. 4 mL pH9. 73 的 HEPES
缓冲液后，取 0. 4mL上述溶液加入反应器，再加入浓
度为 150 mg /mL的 Zn(NO3)2溶液 7 μL，调节 pH至
7. 4、室温反应 10 min; (2)再向其中加入 1. 2 mL
pH9. 73的 HEPES 缓冲液、浓度为 50 mg /mL的 BSA
溶液 0. 4 mL，调节 pH至 9. 0，室温搅拌，反应 12 h。
检测抗原 DTPA-BSA 的制备:制备步骤同 Zn-
DTPA-BSA，用去离子水替代金属溶液即可。
偶联反应后，对蛋白质复合物进行分离纯化，
CentriconYM-30 超滤离心管预先用 0. 1 mol /L 二乙
烯三胺五乙酸溶液浸泡过夜，然后用 pH9. 73 的
HEPES缓冲液充分冲洗。用 CentriconYM-30 过滤
除去未参与反应过量的 Zn2 +、DTPA及 Zn-DTPA，分
离纯化时先用 pH9. 73 的 HEPES 缓冲液洗涤超滤
管 1 次，再用 pH7. 4 的 HEPES缓冲液洗涤两次。纯
化后所得的抗原分装于 － 20℃保存。
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生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2011 年第 7 期
1. 2. 2 抗原的鉴定
1. 2. 2. 1 抗原的蛋白浓度测定 将分离纯化后的
抗原样品适当稀释，用 BCA 蛋白定量试剂盒，参照
BCA试剂盒步骤测定 570 nm 的光吸收值，通过标
准曲线计算样品溶液中抗原蛋白浓度。
1. 2. 2. 2 抗原与载体蛋白的紫外分光光度计扫描
用 pH7. 4 的 HEPES 缓冲液作空白，分别取 10 μL
BSA液和 KLH 液及其相应的抗原及半抗原，用
pH7. 4 的 HEPES 缓冲液稀释至蛋白浓度为 0. 5 mg /
mL，在波长 200 － 320 nm范围内进行紫外分光光度
计扫描。
1. 2. 2. 3 抗原中锌的含量测定 用 pH7. 4的 HEPES缓
冲液作空白，将离心纯化后的抗原用 pH7. 4的HEPES缓
冲液稀释适当倍数后，参照 GB /T 17141-1997，用石
墨炉原子吸收分光光度法法检测抗原中的 Zn2 +
浓度［18］。
1. 2. 2. 4 抗原与载体蛋白 SDS-PAGE 用 5%浓缩
胶，6% 分离胶，点样量 20 μL /孔，对 BSA、DTPA-
BSA和 Zn-DTPA-BSA进行垂直 SDS-PAGE 电泳;用
3%浓缩胶，5%分离胶，点样量 15 μL /孔，对 KLH
和 Zn-DTPA-KLH进行垂直 SDS-PAGE 电泳。电泳
结束后，用考马斯亮蓝 G-250 染色，脱色。
1. 2. 3 小鼠的免疫及融合小鼠的选择 首次免疫
时，免疫抗原与等体积的弗氏完全佐剂充分混匀后
乳化 1 － 2 h［19］，每只 BABL /c小鼠腹腔注射 200 μg
抗原。3 周后第二次免疫，相同剂量抗原与等体积
的弗氏不完全佐剂充分乳化后免疫，以后每隔 2 周
免疫一次，方法同第二次免疫。第三次免疫及以后
每次免疫后 7 d，尾静脉采血，分离血清，间接 ELISA
测定血清的效价和产生抗体的特异性，选择效价较
高、差异率(%)最大的小鼠用于融合，融合前 3 d加
强免疫无需乳化，所用抗原 Zn-DTPA-KLH 剂量为
600 μg /只。
间接 ELISA法:(1)包被:用 HBS(10 mmol /L，
pH7. 4)稀释 Zn-DTPA-BSA 和 DTPA-BSA，并以相
同的浓度 2. 5 mg /L分别包被到 96 孔酶标板上，50
μL /孔，4℃过夜或 37℃孵化 2 h; (2)封闭:PBST
洗涤 5 次，拍干，按 100 μL /孔加 3% BSA，37℃封
闭 1 h;(3)一抗:洗涤同上，加入相同的待检血清，
以未免疫小鼠的血清作阴性对照，50 μL /孔，37℃
孵化 1 h;(4)酶标二抗:洗涤同上，辣根过氧化物
酶标记的羊抗小鼠 IgG /IgM(混合物)1∶ 5 000 稀释
后，50 μL /孔，37℃孵育 1 h; (5)显色:洗涤同上，
加入显色液 TMB，50 μL /孔，37℃孵育 15 min;(6)
终止反应:按 50 μL /孔加 1 N盐酸终止反应;⑦酶
标仪上测 OD450值，以空白孔调零。差异率计算公
式:差异率(%)= (OD450 Zn-DTPA-BSA － OD450 DTPA-BSA)/
OD450 DTPA-BSA × 100%。
1. 2. 4 细胞融合，阳性融合孔的筛选及阳性细胞的
克隆化 融合前 1 d 制备饲养细胞，将细胞浓度调
至 1 × 105 /mL，按 0. 1 mL /孔加到 96 孔细胞培养板
内，备用。取小鼠脾脏及处于对数生长期的 SP2 /0
骨髓瘤细胞株以 6∶ 1 数量比混合，用 50% PEG介导
融合，将融合后的细胞加入到含饲养细胞的培养板
中，0. 1 mL /孔，37℃，5% CO2培养箱培养。待细胞
长满孔底的 1 /3 后，检测融合孔上清，方法同 1. 2. 3
中间接 ELISA 法，一抗是细胞上清，用未融合孔做
阴性对照。用极限稀释法克隆阳性细胞，细胞上清
的检测方法同阳性融合孔的筛选。
1. 2. 5 杂交瘤染色体的鉴定 取对数生长期杂交
瘤细胞株 Z1A5 和 2E8-E3 用终浓度为 0. 05 － 0. 1
mg /L的秋水仙素处理 4 － 6 h，收集细胞后用低渗
KCL溶液处理 30 min，固定液固定，滴加细胞悬液
到 4℃预冷的载玻片上，室温自然干燥，Giemsa 染
色，经光学显微镜观察，挑选细胞形态完整染色体分
散均匀的细胞计数。每株计数 5 个细胞，记录染色
体数目并算出平均值。
1. 2. 6 杂交瘤分泌抗体稳定性的测定 将杂交瘤
细胞株 Z1A5 和 2E8-E3 冻存后，过一段时间再复苏
并且连续培养后测抗体效价。检测方法同阳性融合
孔的筛选，用 Zn-DTPA-BSA 包被酶标板，二抗用辣
根过氧化物酶标记的羊抗小鼠 IgM(1∶ 10 000)。
1. 2. 7 抗锌离子抗体亚型的鉴定 取出正在培养
的杂交瘤细胞株 Z1A5 细胞上清，按 1 ∶ 50 稀释后，
按照单抗亚型鉴定试剂盒 ISOStripTM Monoclonal An-
tibody Isotyping Kit 说明书操作，取稀释液 0. 15 mL
加入试剂盒小管中，室温放置 1 min。待其自然溶解
后，轻轻混匀。然后将试剂条插到小管底部，大约 5
min后，即可见与杂交瘤细胞株所分泌的抗体亚类
和轻链类型对应的指示条带所在位置。
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2011 年第 7 期 赵丽等:重金属锌单克隆抗体的制备及鉴定
1. 2. 8 腹水型单克隆抗体的制备及检测 取8 － 10
周龄的雌性 BABL /c 小鼠，腹腔注射石蜡油 0. 5
mL /只，1 － 2 周后分别腹腔注射 1 × 106个 Z1A5 细
胞，7 － 10 d 后密切观察动物的健康状况与腹水征
象，抽取腹水。室温放置 30 min 后，4℃放置 1. 5 －
2 min后 12 000 r /min，离心 2 min，取上清 － 20℃保
存备检。梯度稀释腹水型抗体后检测小鼠腹水效
价，检测方法同 1. 2. 3 中间接 ELISA法，一抗为稀释
后的腹水。
2 结果与分析
2. 1 抗原的鉴定
2. 1. 1 抗原的蛋白浓度测定 绘制标准曲线后，据
检测结果得出的公式 y = 0. 0009x + 0. 0126(R2 =
0. 9954) ，y表示 OD570，x 表示蛋白浓度(mg /L) ，计算
出上清中抗原蛋白浓度。Zn-DTPA-BSA: (25. 155 ±
0. 038)mg /mL，Zn-DTPA-KLH: (4. 195 ± 0. 014)
mg /mL，DTPA-BSA:(9. 242 ±0. 015)mg /mL。
2. 1. 2 抗原与载体蛋白的紫外扫描 如图 1 所示，
BSA在 231 nm 和 278 nm 各有一个吸收波峰，DT-
PA-BSA在 231 nm和 278 nm 附近也各有一个吸收
波峰，吸收波峰略有飘移，在 229 － 278 nm之间属于
高吸收值的区域，完全抗原 Zn-DTPA-BSA与其相应
的载体蛋白和 DTPA-BSA相比，吸收波峰略有飘移，
在 229 － 278 nm 之间也属于高吸收值的区域，在最
大吸收峰的吸收值比 BSA，DTPA-BSA 要高，载体蛋
白和抗原的紫外扫描曲线在 220 － 320 nm之间完全
没有重叠之处。完全抗原 Zn-DTPA-BSA 紫外扫描
的特征既具有 BSA的特征，还具有 DTPA-BSA 的特
征，这证明了抗原合成可能成功。
图 1 BSA、DTPA-BSA和 Zn-DTPA-BSA的紫外光谱
如图 2 所示，KLH 在 238 nm，282 nm 各有一个
吸收波峰，完全抗原 Zn-DTPA-KLH 与 KLH 相比吸
收波峰发生了飘移，在最大吸收峰的吸收值比 KLH
要高，载体蛋白和抗原的紫外扫描曲线在 220 － 320
nm之间完全没有重叠之处。完全抗原 Zn-DTPA-
KLH，紫外扫描的特征具有 KLH 的特征，又不与
KLH重叠，这证明了抗原合成可能成功。
图 2 KLH和 Zn-DTPA-KLH的紫外光谱
2. 1. 3 抗原中锌的含量 石墨炉原子吸收光谱法
检测抗原中全 Zn2 + 的含量结果显示，Zn-DTPA-
BSA、Zn-DTPA-KLH、DTPA-BSA和 HEPES中的含量
依次为(295 ± 0. 3)μg /mL，(49. 5 ± 0. 5)μg /mL，0
μg /mL和 0 μg /mL。未通过螯合剂连到蛋白的
Zn2 +在分离纯化时已被过滤，结果从超滤后的上清
中检测出了 Zn2 +且含量较高，表明 Zn2 +通过螯合剂
连到蛋白质上，进一步证明抗原合成成功。
2. 1. 4 抗原与载体蛋白 SDS-PAGE 电泳 结果如
图 3 所示，由于 DTPA-BSA 联有螯合剂，与 BSA 相
比，分子量变大，DTPA-BSA 电泳条带滞后。同理，
Zn-DTPA-BSA与DTPA-BSA及 BSA相比，分子量变大，
且由于 Zn2 +带正电，所以电泳条带滞后且模糊。
M．蛋白质分子量标准;1． BSA;2． DTPA-BSA;3． Zn-DTPA-BSA
图 3 BSA、DTPA-BSA和 Zn-DTPA-BSA的
SDS-PAGE电泳图
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生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2011 年第 7 期
图 4 中 3 条带是 KLH 使用二巯基乙醇切后的
亚基条带，KLH分子量大(大于 2 000 kD)分子量虽
然无法确定，但可以看出，二巯基乙醇切后的 Zn-
DTPA-KLH与 KLH 的各亚基相比，分子量变大，且
由于 Zn2 +带正电，所以电泳条带滞后且较模糊，可
判断亚基上已交联上半抗原，由此可定性判断抗原
合成成功。
M．蛋白质分子量标准;1． KLH;2． Zn-DTPA-KLH
图 4 KLH及 Zn-DTPA-KLH的 SDS-PAGE电泳图
2. 2 小鼠免疫后抗体效价及融合小鼠的选择
从表 1 可见，1 号小鼠抗 Zn-DTPA的抗体水平
较高且差异率最大，即 1 号小鼠产生针对 Zn2 +的
抗体特异性最强，所以选 1 号小鼠用于融合。
表 1 第 5 次免疫后小鼠血清中抗体效价
小鼠编号 OD450 Zn-DTPA-BSA OD450 DTPA-BSA 差异率(%)
1
2
3
4
5
未免疫
1. 467 ± 0. 057
1. 473 ± 0. 060
1. 394 ± 0. 162
1. 372 ± 0. 131
1. 284 ± 0. 056
0. 236 ± 0. 007
0. 797 ± 0. 020
1. 050 ± 0. 040
1. 073 ± 0. 004
1. 008 ± 0. 076
0. 859 ± 0. 009
0. 344 ± 0. 005
83. 949
40. 218
29. 962
36. 111
49. 476
－ 31. 395
2. 3 细胞融合，阳性融合孔的筛选及阳性细胞的克
隆化
融合后 3 － 5 d，可见有克隆细胞生长，细胞集落
生长至孔底的 1 /3 － 1 /2 时，对其上清液用间接
ELISA方法进行检测，对检测为阳性孔的细胞，以有
限稀释法克隆 3 次，结果(图 5)显示，细胞株 Z1A5、
2E8-E3、3D3-D7 和 4F8-H5D6 抗体效价都大于阴性
对照的 2. 1 倍，判定为阳性杂交瘤，而 4F8-H5D6 差
异率几乎为 0，Z1A5、2E8-E3 和 3D3-D7 三株细胞上
清抗体效价的差异率大于 0，其中 Z1A5 和 2E8-E3
抗体效价及差异率都较大，说明这两株细胞分泌的
抗体针对 Zn2 +离子的特异性较强，可作为后续试验
研究对象。
图 5 克隆后杂交瘤细胞株抗体效价
2. 4 杂交瘤细胞染色体核型分析
SP2 /0 细胞的染色体数目平均为 68 条，脾细胞
染色体数目平均为 40 条，而杂交瘤细胞的染色体数
目均在 100 以上，高于两亲本细胞的染色体数目，说
明细胞株 Z1A5 和 2E8-E3 是 SP2 /0 细胞和脾细胞
的杂交产物。
2. 5 杂交瘤分泌抗体稳定性的测定
经检测显示，细胞株 Z1A5 分泌抗 Zn-DTPA 单
克隆抗体的水平未见下降(图 6) ，表明抗体的稳定
性较好，同时可证明亚克隆较成功。效价稍有波动，
是由于取细胞上清备检时间间隔不同以及每次检测
之间的误差所致，属正常;而细胞株 2E8-E3 分泌抗
体的水平在下降(图 7) ，可能是克隆不成功或细胞
株染色体丢失所致。
图 6 杂交瘤细胞株 Z1A5 分泌抗体稳定性
2. 6 抗锌离子抗体 Ig类和亚类的鉴定
当最前端条带出现在两对“+”中间时，抗体亚
类和轻链指示条带分别在 M 和 k 位置，即细胞株
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2011 年第 7 期 赵丽等:重金属锌单克隆抗体的制备及鉴定
Z1A5 所分泌的抗体均为 IgM亚类，轻链为 kappa 型
(图 8)。
图 7 杂交瘤细胞株 2E8-E3 分泌抗体稳定性
图 8 细胞株 Z1A5 分泌抗体类型
2. 7 腹水型单克隆抗体效价检测
取得细胞株 Z1A5 腹水型抗体后检测腹水抗体
效价可达 1∶ 51 200(图 9)。
图 9 Z1A5 腹水型抗体效价检测
3 讨论
自 1985 年 Reardan 等［20］成功制备针对金属螯
合物的抗体，基于抗体的免疫学检测方法为重金属
检测提供了一种新策略，本实验室正致力于多种重
金属免疫检测方法的建立［21］。
特异性的双功能螯合剂 DTPA 螯合 Zn2 +，形成
能被动物免疫系统识别的螯合物，但 Zn-DTPA 是分
子量低于 1 kD的半抗原，免疫原性低，不足以引起
免疫反应［22］。DTPA 除了能螯合金属离子之外，还
能与载体蛋白偶联，可以成功制备重金属复合物抗
原［23，24］。有多种蛋白质如 KLH、BSA 和 OVA 等能
作为载体蛋白，但从诱发免疫应答的角度来看，KLH
的免疫原性优于 BSA和 OVA等，因此本研究用 KLH
作为载体蛋白来免疫小鼠以期产生更强的免疫应答。
重金属锌单克隆抗体制备的关键在于重金属免
疫原的制备，所以本研究运用的一系列鉴定方法结
果表明抗原合成成功，这为之后重金属锌的单克隆
抗体的成功制备提供了可靠的保证。选择差异率最
大的 1 号小鼠的脾脏进行细胞融合为成功获得重金
属锌的单克隆抗体提供另一重保证。
本研究得到的细胞株 Z1A5 分泌的抗体效价
高，差异率大，产生针对 Zn-DTPA 的抗体特异性强，
即成功获得了抗 Zn-DTPA的单克隆抗体，目前正在
纯化抗体并对抗体的各项性能进行鉴定。该工作的
完成为其他抗重金属抗体的制备提供了可行的方
法，也为重金属免疫检测方法的建立及应用奠定坚
实的基础。
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(责任编辑 马鑫)
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