全 文 ：研究报告
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2010年第 11期
文蛤胞内铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与序列分析
朱丹 1, 2 李宏俊 2 高祥刚2 苏浩2 赫崇波 2
( 1辽宁师范大学生命科学学院,大连 116029; 2辽宁省海洋水产科学研究院 辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室,大连 116023)
摘 要: 文蛤 (M eretrix m eretrix )是我国重要的滩涂养殖贝类之一,由于病害等原因, 特别是红肉病的蔓延, 文蛤增养殖
业的发展受到严重制约。铜锌超氧化物歧化酶 ( Cu /ZnSOD ) 是活性氧清除酶系中最重要的酶, 在生物体内参与清除氧自由
基, 防御分子损伤和机体衰老等诸多生物事件。通过构建 SMART全长 cDNA文库和 RACE的方法,克隆得到了文蛤胞内 Cu /
ZnSOD ( icCu /ZnSOD )的全长 cDNA序列。生物学软件分析表明, 该序列全长为 1 383 bp, 5 UTR为 45 bp, 3 UTR为 876 bp,
开放阅读框长度为 462 bp,编码 153个氨基酸, Cu原子分别与 H is46、H is48、H is63、H is119配位, Zn则与 H is63、H is71、H is80和
Asp83配位, 半胱氨酸 Cys57和 Cys145之间形成唯一的链内二硫键。蛋白质结构中心是由 8条反向平行的 折叠围成的圆桶
状结构。文蛤 icCu /ZnSOD与紫贻贝等其它 9种海洋贝类的 Cu /ZnSOD具有较高的同源性。
关键词: 文蛤 铜锌超氧化物歧化酶 表达序列标签 cDNA文库
Molecular C loning and Sequence Analysis of an Intracellular
Cu /Znsuperoxide D ismutase Gene from Hard C lam
(Meretrix meretrix )
Zhu Dan
1, 2 L iH ong jun2 Gao X ianggang2 Su H ao2 H e Chongbo2
(
1
College of L ife Sciences, Liaoning N ormal University, Dalian 116029;
2
Liaoning K ey Laboratory of M arine F isheryM o lecular Biology, Liaoning O cean and F ishery Science Institute, D alian 116023)
Abstrac:t M eretrix m eretr ix is one o f Ch ina! s im po rtant econom ic, w idely d istr ibuted in E ast A sia a long the coast. Spec ies su
perox ide d ismuta ses are an ub iqu itous fam ily o f enzym es tha t function to e fficien tly ca ta lyze the d ism uta tion of superox ide an ions. In
the present study, the intrace llular Cu /ZnSOD gene ( icCu /ZnSOD ) o fM eretrix m eretrix ( deno ted as MmCu /ZnSOD ) w as ob
ta ined th rough constructing SMART cDNA library and RACR approaches. The fullleng th cDNA o fMmCuZnSOD was 1 383 bp w ith
a 462 bp open read ing fram e encod ing 153 am ino ac ids. The deduced am ino ac id ofMmCu /ZnSOD shared high sim ilar ity w ith the
icCu /ZnSOD s from other spec ies, ind icating thatMmCu /ZnSOD shou ld be a new m em ber o f icCu /ZnSOD fam ily. Severa l h igh ly
conse rved m o tifs inc lud ing Cu, Zn b ind ing sites (H ( 46), H ( 48) , H ( 63), H ( 119) fo r Cu b ind ing, and H ( 63) , H ( 71), H ( 80) , D
( 83) for Zn b inding ), intrace llu lar disulfide bond and tw o Cu, Zn SOD signatures w ere a lso identified in MmCu /ZnSOD. Through
tertiary structure prediction, m ain spa tia l structure o f prote in isbarre.l The Cu /ZnSOD inM eretr ix m eretr ix is h ighly hom o logous to
Cu /ZnSOD in Crasso strea ariakensis and other nine shellfish.
Key wo rds: M eretr ix m eretrix Cu /ZnSOD EST cDNA library
收稿日期: 20100512
基金项目:辽宁省科学技术计划重大、重点项目 ( 2008203001) ,辽宁省海洋与渔业科研计划项目 ( 200801) , 国家海洋公益性行业科技专项
( 2 00805037 )
作者简介:朱丹, 女,硕士研究生 ,研究方向: 水产动物分子遗传学; Em a i:l zhudan2104@ 163. com
通讯作者:赫崇波 ,男,研究员, 硕士生导师, 研究方向:水产分子遗传学; Em ai:l hechongbo@ hotm ai.l com
文蛤 (M eretrix m eretrix )是一种重要的海水增
养殖滩涂贝类,主要分布于朝鲜、日本、越南、印度
和中国沿海。在我国主要分布于辽宁辽河口、山
东黄河口、江苏长江口和广西的北海等海区,是我
国主要的出口鲜活水产品之一。近 10年来,由于
病害等原因,特别是红肉病的蔓延, 文蛤增养殖业
生物技术通报 B io technology Bulletin 2010年第 11期
的发展受到严重制约。因此, 对文蛤病害特别是
其自身免疫抗性的研究, 已经成为解决文蛤产业
瓶颈的重要途径。
作为一种重要的免疫相关基因,超氧化物歧化酶
( superoxide d ismutase, SOD),是生物体内一种重要的
抗氧化酶, 对于清除活性氧自由基 ( reactive oxygen
spec ies, ROS),防止活性氧自由基破坏细胞的组成、
结构和功能,保护细胞免受氧化损伤具有十分重要的
作用,对生物体防御毒性起着关键作用 [ 1, 2]。SOD按
其结合的金属离子的不同,主要可分为 3类: Cu /Zn
SOD、MnSOD和 FeSOD,其中铜锌超氧化物歧化酶
在生物体内分布相对广泛,也是目前为止研究得最多
的超氧化物歧化酶 [ 3]。已有研究表明铜锌超氧化物
歧化酶在生物体内有胞内形式 ( icCu /ZnSOD )和胞
外形式 ( ECSOD)两种 [ 4 ]。
Cu /ZnSOD与贝类免疫水平密切相关 [ 5] , 能够
增强吞噬细胞防御能力和整个机体的免疫功能 [ 6 ] ,
使细胞免受 ROS的毒害 [ 1 ]。由于 Cu /ZnSOD的存
在,健康水生动物体内环境中的活性氧自由基能够
维持在有利无害的较低水平 [ 7]。但是当 Cu /Zn
SOD活性降低时, 生物体内自由基量就会过多, 势
必打破这种有利状态, 因此, Cu /ZnSOD在贝类中
是一种十分重要的免疫相关基因。孙虎山等 [ 8]对
栉孔扇贝中的铜锌超氧化物歧化酶的活性和性质进
行了研究,证明了 Cu /ZnSOD的高稳定性和栉孔扇
贝可作为 SOD的提取材料。N i等 [ 9 ]通过同源克隆
的方法得到了栉孔扇贝铜锌超氧化物岐化酶 ( C f
SOD ) cDNA全长, 并通过菌刺激后的 RTPCR试验
得出了 C fSOD是一种诱导型急性免疫蛋白, 并能在
鳗弧球菌属及光球菌感染的免疫反应中发挥重要作
用。包永波等 [ 5]通过研究, 得到了海湾扇贝 Cu /Zn
SOD基因的全长, 并分析出海湾扇贝 Cu /ZnSOD基
因包含 4个外显子和 3个内含子, 并通过菌刺激试
验和体外表达证实了海湾扇贝 Cu /ZnSOD在免疫防
御中的重要作用。L i等 [ 10]通过同源克隆及 RACE
克隆得到了菲律宾蛤仔的细胞内铜锌超氧化物歧化
酶 ( VpSOD ) cDNA全长, 并通过鳗弧菌刺激试验得
出了 VpSOD蛋白为诱导型急性免疫蛋白的结论。
而目前还未见文蛤 Cu /ZnSOD基因方面的研究报
道,已有的有关文蛤的研究都集中于组织病理学和
流行病学调查方面 [ 11- 13]。本研究旨在通过对文蛤
Cu /ZnSOD基因的克隆与序列分析, 为进一步研究
Cu /ZnSOD基因与文蛤自身的抗逆性提供基础
资料。
1 材料与方法
11 材料
试验用文蛤采自辽宁省盘山县双台子河口, 在
室内暂养 2 d后,取健康文蛤 ( 3龄, 壳长 45 - 55
cm,个体重量 271- 397 g )肠、外套膜和肝胰脏组
织, 放入液氮中保存。
12 cDNA文库的构建
将各组织在液氮中充分研磨, 加入适量 T aK aRa
RNA iso R eagen,t用 O ligotexTM dT30< Super> mRNA
纯化试剂盒 ( TaKaRa) ,进行 mRNA的分离纯化。根
据 CreatorTM SMART cDNA文库构建试剂盒 ( C lon
tech)说明书, 以纯化后的 3种组织的 RNApoly
( A )
+
mRNA为模板,带有 Sf i I酶切位点的 SMART
IV
TM
O ligonucleo tide和 CDSIII/3 PCR Prim er为引
物, 在反转录酶作用下转录合成 cDNA第 1链。确
定最佳循环数后在 A dvantage 2 PCR K it( C lontech)
作用下合成 cDNA第 2链。双链 cDNA经 Sf i I酶切
及片段纯化后, 连接到 pDNRLIB 载体上。将含有
cDNA的质粒载体转化感受态细胞 DH10B。确认克
隆效率及插入片段大小后,从 3个 cDNA文库中共随
机挑取 3 169个克隆, 由上海美季生物技术有限公司
完成 5 端基因序列测定。
13 文蛤 Cu /ZnSOD基因序列的获得
测序后将所有序列在 NCB I ( http: / /www. ncb.i
n lm. n ih. gov / )网站利用 B lastN和 B lastX工具进行
同源序列搜索比对, 选取与其他生物的 Cu /ZnSOD
基因具有高度相似性的 EST序列。在该 EST序列
的 3 端设计一条正向引物,以载体引物 M13为反向
引物,以菌液 cDNA为模板, 扩增出 1 000 bp大小的
目的片段, 切胶回收 (切胶回收试剂盒为 T aK aRa
Agarose Ge lDNA Purif ication K itV er. 20)后进行克
隆、测序。
14 MmCu /ZnSOD基因序列的生物信息学分析
应用 ORF F inder ( http: / /www. ncb.i nlm. n ih.
gov /gorf /gor.f htm l ) 程序确定正确的开放阅读框,
并应用 B ioEd it软件翻译成氨基酸序列; 通过 NCB I
124
2010年第 11期 朱丹等: 文蛤胞内铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与序列分析
( http: / / www. ncb.i n lm. gov ) BLASTX进行蛋白质
序列相似性检索; 信号肽预测用 S ignalP 30 Server
软件 ( http: / /www. cbs. dtu. dk /serv ices/S ignalP / ) ;
空间结构预测采用 ExPASy SW ISSMODEL软件 ( ht
tp: / / sw issmode.l expasy. org / ) ,模型查看采用用 ras
top软件; 应用 c lusta lx183软件与 MEGA 31软件
构建 N J系统进化树; 用 clustalx183软件与 Gene
Doc软件联合进行多序列比对; 采用蛋白质亚细胞
定位服务器 ( http: / /psort. n ibb. ac. jp / fo rm2. htm l)
对蛋白质进行定位;功能域预测采用 ExPASy Scan
Prosite( http: / /www. expasy. o rg / too ls/scanprosite / )。
2 结果
21 文蛤 Cu /ZnSOD基因 cDNA全长序列的特征
获得的 cDNA序列全长 1 383 bp, 5 UTR为 45
bp, 3 UTR为 876 bp,开放阅读框长度为 462 bp。在
po lyA尾上游 620 bp处存在加尾信号序列 AATA
AA (图 1 )。将该序列命名为 MmCu /ZnSOD, 已
提交到 GenB ank(登录号: GU188694)。
双划线表示起始密码子; * 表示终止密码子;方框表示多聚腺苷酸加尾信号;下划线表示不稳定信号;
灰色阴影区表示 CuZnSOD蛋白家族信号
图 1 MmCu/ZnSOD核苷酸序列和推测的氨基酸序列
125
生物技术通报 B io technology Bulletin 2010年第 11期
22 MmCu /ZnSOD基因编码的蛋白序列分析
221 序列分析 开放阅读框共编码 153个氨基
酸。按照标准密码子翻译后的蛋白质推测分子式为
C685H 1105N 199O221 S5,分子量计算值为 1582 kD, 理论
等电点为 603; 氨基酸组成中带正电荷的氨基酸
(A rg+ Lys+ A rg ) 25个, 占 1634% , 带负电荷的氨
基酸 (A sp+ G lu) 21个,占 1373%。极性与极性带
电氨基酸共 76个占 4967% ,非极性氨基酸 77个占
5033%, 极性氨基酸比例较大, 决定了文蛤超氧化
物歧化酶在水中有较好的溶解性。从 NCBI数据库
中查到 9条贝类 Cu /ZnSOD氨基酸序列, 用 clust
a lx183软件对 10条 Cu /ZnSOD的氨基酸序列进行
比对。结果 (图 2)表明, Cu /ZnSOD是高度保守序
列, Cu、Zn与 6个组氨酸 (H is)残基和 1个天冬氨
酸 ( A sp)配位, 其中 Cu原子分别与 H is46、H is48、
H is63和 H is119配位, Zn则与 H is63、H is71、H is80
和 A sp83配位, Cu、Zn共同连接 H is63组成 ∀咪唑
桥 #结构。半胱氨酸 Cys57和 Cys145- SH 基之间
形成的二硫键是 CuZnSOD中惟一的一对链内二
硫键, 这对维持酶结构稳定性有重要作用。
黑色阴影区表示相同的氨基酸残; ∀▼ #表示形成二硫键的两个半胱氨酸; ∀ - #表示 Cu、Zn离子结合位点用
图 2 文蛤 Cu/ZnSOD与其它几种贝类 Cu/ZnSOD的多序列比对
222 蛋白亚细胞定位 利用软件 S ignalP对文蛤
MmCu /ZnSOD氨基酸序列进行信号肽分析未发现
信号肽。运用 TMHMM软件对蛋白进行跨膜预测,并
未发现跨膜区,说明文蛤铜锌超氧化物歧化酶不是分
126
2010年第 11期 朱丹等: 文蛤胞内铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与序列分析
泌蛋白也不是膜蛋白。将氨基酸序列提交到 PSORT
∃蛋白质亚细胞定位服务器 ( http: / /psor.t nibb. ac. jp/
form2. htm l)进行定位,结果显示,该蛋白位于细胞质
中的可能性是 565% , 位于线粒体中的可能性是
217%,在其它细胞器中的可能性较小。
223 蛋白高级结构同源建模 将 MmCu /ZnSOD
蛋白序列提交到 ( http: / / sw issmode.l expasy. org / )网
站,蛋白高级结构同源建模, 结果 (图 3)显示, 蛋白分
子空间结构以 折叠为主, 8条反向平行的 折叠构
成桶状结构中心, 螺旋结构较少, 在肽链首尾相交
处有二硫键形成,这与 1983年 Ta iner等 [ 14]获得的牛
红细胞 Cu /ZnSOD的 02 nm分辨率的电子密度图
所显示出亚基的 桶结构核心,以及整个结构含
螺旋较少的结构特征相符, 证明 MmCu /ZnSOD蛋
白高级结构符合 Cu /ZnSOD的结构特征。
224 蛋白功能域预测与分析 将序列递交到
ExPASy ScanProsite结构域分析数据库, 进行蛋白质
结构域的查找和分析。结果显示, MmCu /ZnSOD
蛋白的 44- 54位氨基酸 ( GFH IHEFGDNT)和 137-
148位氨基酸 ( GNAGARLACGV I)为 Cu /ZnSOD蛋
白的家族信号。
图 3 MmCu/ZnSOD蛋白分子骨架结构预测图
23 MmCu /ZnSOD氨基酸的同源性比对分析
在 NCB I蛋白质数据库中通过 BLAST 对 Mm
Cu /ZnSOD基因编码的蛋白的氨基酸序列进行同
源性检索,结果 (表 1)表明, MmCu /ZnSOD与其他
海洋贝类 Cu /ZnSOD具有较高的相似性,也具有较
高的同源性。同时,由于 Cu /ZnSOD在氨基酸组成
上有缺乏色氨酸 ( T rp)和酪氨酸 ( Tyr)的特点 [ 2] ,而
已经得到的 MmCu /ZnSOD在氨基酸组成上, 不含
色氨酸 ( T rp)和酪氨酸 ( Tyr), 这进一步证明该蛋白
质是铜锌超氧化物歧化酶, 该基因是 Cu /ZnSOD的
cDNA。MmCu /ZnSOD可推测为文蛤的 Cu /ZnSOD
基因。
24 MmCu /ZnSOD的分子进化
根据文蛤及其它物种的 Cu /ZnSOD氨基酸序
列, 使用 clusta lx183与 MEGA31软件,采用 N J
表 1 Cu/ZnSOD氨基酸序列同源性比对
种名 登录号 E值 同源性 (% )
地中海贻贝
(Myti lu s ga lloprov inc ia lis)
CAQ685091 3e- 54 71
紫贻贝
(Myt ilu s edu lis)
CAE464431 8e- 53 70
皱纹盘鲍
(H a liotis d iscus d iscu s)
ABG888441 1e- 51 69
褶纹冠蚌
(C ristaria plica ta )
ACI282821 1e- 52 69
近江牡蛎
(Crassostrea ariakensis)
ABF143661 2e- 54 68
太平洋牡蛎
( Cra ssostrea g iga s)
CAD427221 6e- 53 68
栉孔扇贝
(Ch lam ys farreri)
ABD589741 2e- 52 66
海湾扇贝
(A rgopecten irrad ian s)
ACE76954 6e- 50 66
菲律宾蛤仔
( Venerupis ph ilippina rum )
ACU 832361 2e- 49 65
127
生物技术通报 B io technology Bulletin 2010年第 11期
(N e ighborjoining) 法构建了 10种贝类的系统进化
树 (图 4), 近江牡蛎与太平洋牡蛎同属于瓣鳃纲珍
珠贝目牡蛎科,二者先聚为一支;地中海贻贝与紫贻
贝同属于瓣鳃纲贻贝目贻贝科也先聚为一支; 海湾
扇贝与栉孔扇贝同属于瓣腮纲异柱目扇贝科, 它们
也先聚成了一支,但是遗传距离较之前的两科较远。
特别的是,同属于双壳刚得文蛤与菲律宾蛤仔并没
有先聚在一起,而是菲律宾蛤仔与瓣鳃纲的褶纹冠
蚌先聚在了一起。文蛤 Cu /ZnSOD虽然与其它几
种贝类 Cu /ZnSOD的遗传距离较大,但它们都源于
共同的祖先,有很大的同源性,在进化上仍是近邻。
图 4 十种贝类 Cu/ZnSOD的系统进化关系
3讨论
本研究首次报道了文蛤 Cu /ZnSOD基因的 cD
NA序列全长。序列分析结果显示,获得的 cDNA序
列全长 1 388 bp, 5 UTR为 50 bp, 3 UTR为 876 bp,
开放阅读框长度为 462 bp。 3 端非编码区核苷酸序
列所占比例超过 60%,这可能是 3 端非编码区出现
不稳定信号 ATTTA的直接原因, 因为不稳定信号
ATTTA在多余的 mRNA降解中发挥着重要作用。
然而该不稳定信号的出现并非偶然, 在其他贝类
Cu /ZnSOD基因的 cDNA序列中也有发现, 如海湾
扇贝和菲律宾蛤仔的 3 非编码区也都存在 1个不稳
定信号 ATTTA。
在生物体内的 icCuZnSOD和 ecCuZnSOD, 二
者在催化歧化反应时有着相同的速率和相似的动力
学常数。 ecCuZnSOD在 N端存在一小段信号肽,
为分泌型蛋白,主要存在于组织外基质及细胞表面;
icCuZnSOD没有信号肽, 主要存在于细胞质中 [ 15 ]。
贝类 Cu /ZnSOD家族是高度保守的, 结果显示, 本
研究得到的 MmCu /ZnSOD蛋白结构特征为无信
号肽, 无跨膜区, 存在一对惟一的链内二硫键, 高级
结构的结构中心为 8条反向平行的 折叠构成的
桶, 螺旋较少, 存在 4个 Cu原子结合位点 ( H is46、
H is48、H is63、H is119 ), 4个 Zn结合位点 ( H is63、
H is71、H is80、Asp83), Cu、Zn共同连接 H is63组成 ∀咪
唑桥#结构。该结构特征完全符合 icCu /ZnSOD的
结构特征, 因此断定本研究得到的 Cu /ZnSOD为
icCu /ZnSOD。
值得注意的是, 菲律宾蛤仔与褶纹冠蚌虽然不
同纲,但是在系统进化分析时,两者在进化树上先聚
为一支。菲律宾蛤仔虽然与文蛤同属于瓣鳃纲、帘
蛤目、帘蛤科, 但是它们并没有先聚在一起, 表现出
Cu /ZnSOD的系统进化并不严格按照该基因所属
物种的进化而进化的现象。产生该现象的原因并不
十分明确,猜测可能与 Cu /ZnSOD基因高度保守,
不适于作为系统分类基因有关。
Cu /ZnSOD基因的克隆在文蛤中尚属首次, 克
隆文蛤编码的 Cu /ZnSOD基因并对该序列进行分
析,这为继续了解文蛤的抗逆基因 Cu /ZnSOD的表
达状况提供了基础资料, 也为研究 Cu /ZnSOD与贝
类体内免疫和机体防御等功能研究提供了基础资料。
参 考 文 献
[ 1] K im KY, Lee SY, Cho YS, et a.l M olecu lar characterization andmR
NA exp ress ion during m etal exposure and th erm al stress of copper/
zincand manganesesup eroxide d ism utases in d isk abalon e, H al iotis
discu s d iscus. F ish Shellf ish Imm uno,l 2007: 23( 5 ) : 10431059.
(下转第 133页 )
128
2010年第 11期 齐志涛等 :非洲爪蟾 IL6基因的克隆及生物信息学分析
[ 4] Kaplansk iG, M arin V, M on teroJu lian F, et a.l IL6: a regu lator of
the trans ition from n eutroph il to m onocyte recru itm en t during in flam
m at ion. Trends Imm uno,l 2003, 24 ( 1) : 2529.
[ 5] K ish imoto T, H irano TA. A new in terleukin w ith p leiotrop ic act ivi
t ies. B ioessays, 1988, 9 ( 1) : 1115.
[ 6] IlievDB, Castellan a B, M acKen zie S, et a.l C lon ing and expression a
nalys is of an IL6 hom olog in ra inbow trou t(Oncorhynchu s myki ss) .
M ol Imm uno,l 2007, 44 ( 7) : 18031807.
[ 7 ] Thom pson JD, H iggin s DG, G ibson T. CLUSTAL W: im proving the
sen sitivity of progress ive mu lt iple sequ ence alignm ent through se
quence w eigh ting, pos itionsspecific gap penalties and w e igh tm atrix
cho ice. Nucleic A cids Res, 1994, 22: 46734680.
[ 8] C lew ley JP, Arnold C. MEGALIGN. Th e mu lt ip le alignm en t modu le
ofLASERGENE. M eth odsM olB io,l 1997, 70: 119129.
[ 9] Kumar S, Tamu ra K, NeiM. MEGA3: integrated softw are form olecu
lar evolu tionary genetics analys is and sequ ence alignm en t. Brief
B io inform, 2004, 5( 2 ) : 150163.
[ 10] Q iZT, N ie P. Com parative study and express ion ana lysis of the in
terferon gamm a gene locus cytok in es inX enopu s tropical is. Imm uno
genet ics, 2008, 60 ( 11) : 699710.
[ 11] Wang T, M artin SA, S ecom bes C J. Tw o interleuk in17Clik e genes
exist in rainb ow t routOncorhynchu smykiss that are d ifferent ially ex
p ressed and m odu lated. Dev Com p Imm uno,l 2010, 34 ( 5 ):
491500.
(上接第 128页 )
[ 2] 田春美,钟秋平.超氧化物歧化酶的现状研究进展.中国热带医
学, 2005, 5 ( 8) : 17301732.
[ 3] 杨卫健,张双全.超氧化物歧化酶的研究及应用前景.淮阴师范
学院学报:自然科学版, 2002, 1( 4 ) : 8286.
[ 4 ] Zelko IN, M arian i TJ, Folz RJ, et a.l Superoxid e d ismu tase mu lt igene
fam ily: a comp arison of the CuZnSOD ( SOD1 ) , M n SOD ( SOD2 ),
and ECSOD ( SOD3 ) gen e st ru ctures, evolut ion, and express ion.
Free Rad ic B iolM ed, 2002, 33( 1) : 337349.
[ 5] Bao YB, L iL, FeiX, Guo FZ, et a.l In tracellu lar copper/ z inc superox
ide d ism utase from bay scallopA rgopecten irradians: its gene struc
ture, mRNA exp ression and recom b inan t protein. F ish& Shellf ish Im
muno logy, 2009, 27 ( 2) : 210220.
[ 6] H oop er C, Day R, S locom be R, et a.l S tress and imm une responses in
ab alone: lim itat ion s in cu rrent know ledge and investigative m ethods
based on oth er m odels. Fish Shellf ish Immuno,l 2007, 22 ( 4 ):
363379.
[ 7] 李丹,李储君,张汉超.超氧化物歧化酶 ( SOD)的研究与展望.中
国医药导刊, 2009, 11( 4) : 615619.
[ 8 ] 孙虎山,李光友.栉孔扇贝血淋巴中超氧化物歧化酶和过氧化氢
酶活性及其性质的研究.海洋与湖沼, 2000, 31 ( 3) : 259264.
[ 9 ] N iD, Song L,i Gao Q ,i et a.l The cDNA clon ing and mRNA exp res
s ion of cytop lasm icC u, Zn superox ide d ism utase ( SOD) gene in sca l
lop C hlamys farreri. Fish Shellf ish Imm uno,l 2007, 23 ( 5 ):
10321042.
[ 10 ] L i C, SunH, Chen A, et a.l Iden tification and ch aracterizat ion of an
in tracellu lar Cu, Znsuperoxide d ism utase ( icCu /ZnSOD ) gene
from clam Ven erup is ph ilippinarum. F ish Shellfish Immuno,l 2009, 28
( 3 ) : 499503.
[ 11 ] 万夕和,顾李生,杨杰,等. 南通沿海文蛤暴发性疾病的组织病
理学研究. 浙江海洋学院学报: 自然科学版, 2006, 25 ( 2 ):
124128.
[ 12 ] 任素莲,张艳艳,邱红,等. ∀红肉病 #文蛤的组织病理学.水产学
报, 2003, 27( 5) : 462467.
[ 13 ] 刘连生,闫茂仓,林志华, 等.引起文蛤暴发性死亡病原菌的分
离和鉴定.微生物学通报, 2009, 36( 1 ): 7177.
[ 14] T ainer JA, Getzoff ED, Richardson JS, Richardson DC. S tructu re and
m echan ism of copper, z inc superoxide d ismu tase. N ature, 1983, 306:
284287.
[ 15] L in Y, Vaseeharan B, Ch en J, et a.l Ident ification of the extracellu lar
copperzin c superox ide d ism utase ( ecC uZnSOD ) gene of the m ud
crab S cylla serra ta and its expression follow ing bglu can and pept i
doglycan in ject ions. M ol Imm uno,l 2008, 45( 5 ): 13461355.
133