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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2011 年第 10 期
人热休克蛋白 90AB1 基因克隆、
原核表达、中试发酵及纯化
刘凯胜1 王绍祥1 刘忠1 张嘉萱1 张庶民2 王一飞1
(1 暨南大学生物医药研究开发基地 广东省生物工程药物重点实验室 基因工程药物国家工程研究中心，广州 510632;
2中国药品生物制品检定所，北京 100050)
摘 要: 通过克隆人热休克蛋白 90AB1 基因(Hsp90AB1) ，构建其原核表达载体 pET28a(+)-hHsp90AB1，表达纯化获
得目的蛋白，为 hHsp90 靶向药物筛选奠定基础。提取宫颈癌 HeLa细胞总 RNA，并经 RT-PCR获得 hHsp90AB1-cDNA。以 hH-
sp90AB1-cDNA为模板进行 PCR体外扩增，胶回收纯化 hHsp90AB1。将 hHsp90AB1 及 pET-28a(+)质粒经 NdeⅠ和 SalⅠ双
酶切、胶回收纯化酶切片段后，体外连接酶切片段，使其定向重组，再将重组 DNA 转化 DH5α，经复苏后，在含卡那霉素的 LB
固体养基上筛选出阳性克隆。挑取 LB固体培养基上的单菌落经酶切及测序鉴定，证实为阳性克隆，即 pET28a-hHsp90AB1 体
外重组成功，命名为 pET28a(+)-hHsp90AB1。重组质粒转化 Rosetta(DE3)菌株，IPTG诱导表达，并对表达条件优化，以及通
过 SDSA-PAGE和 Western blotting分析均表明 Hsp90AB1 蛋白得到了正确的表达，且表达产物以可溶性形式存在，优化条件下
蛋白表达量约占菌体总蛋白 13%。接种到 18 L发酵罐中试发酵，表达产物经 Ni-NTA凝胶亲和层析，蛋白纯度达到 98%。
关键词: 热休克蛋白 90AB1(Hsp90β) 克隆 原核表达 中试发酵 纯化
Cloning，Prokaryotic Expression，Pilot Fermentation and
Purification of Human Heat Shock Protein 90AB1
Liu Kaisheng1 Wang Shaoxiang1 Liu Zhong1 Zhang Jiaxuan1 Zhang Shumin2 Wang Yifei1
(1Biomedicine Research and Development Center of Jinan University，Guangdong Provincial Key Laboratory of Bioengineering Medicine，
National Engineering Research Center of Genetic Medicine，Guangzhou 510632;2National Institute for the Control of
Pharmaceutical and Biological Products，Beijing 100050)
收稿日期:2011-03-21
基金项目:国家高技术研究发展计划“863”计划(2007AA02Z142)
作者简介:刘凯胜，男，硕士，研究方向:分子生物学;E-mail:liukaisheng1987@ 163． com
通讯作者:王一飞，男，博士，教授，研究方向:分子生物学;E-mail:twangyf@ jnu． edu． cn
Abstract: Through cloning human Hsp90AB1 and constructing its prokaryotic expression vector，the purified protein laid the foun-
dation for vitro screening of Hsp90 inhibitors． The total RNA was isolated from HeLa cells and the cDNA was gained by RT-PCR． hH-
sp90AB1-cDNA as a template for PCR，gel extraction and purification of the hHsp90AB1，hHsp90AB1 and pET-28a(+)DNA were di-
gested by NdeⅠ and SalⅠ，respectively． After purification，the two fragments obtained were ligased using T4DNA ligase． This recombi-
nant DNA was then transformed into E． coli competent cells DH5α and positive clones were selected on the LB agarose plate containing
Kanamycin． Single clones were identified by double digestion with NdeⅠ and SalⅠ，and two fragments with the size 5. 4 kb and 2. 1 kb
were produced as expected． After gene sequencing，the hHsp90AB1 gene was successfully inserted into the prokaryotic expression vector
pET-28a(+)by recombination technique in vitro． The recombinant plasmid was transformed into Rosetta(DE3)strain，and then in-
duced with IPTG． The target fusion protein was successfully expressed and identified in a soluble form by SDS-PAGE and Western blot-
ting analysis，and the fusion protein was about up to 13% of the total protein． During the pilot fermentation with optimal condition in the
18 L culture medium，the purity of the protein was 98% after purification by Ni-NTA chromatography．
Key words: Human heat shock protein 90AB1 (hHsp90β) Clone Prokaryotic expression Pilot fermentation Purification
2011 年第 10 期 刘凯胜等:人热休克蛋白 90AB1 基因克隆、原核表达、中试发酵及纯化
热休克蛋白 90(Hsp90)是细胞内最活跃的分子
伴侣之一，广泛参与细胞的信号转导、激素应答及转
录调控过程［1］，其主要功能是维持细胞蛋白质稳
定［2］，提高细胞对应激的耐受性，增强抗氧化作用
使细胞维持正常的生理功能［3］。哺乳动物细胞中
的 Hsp90 家族由 3 种成员组成:胞质伴侣，包括
Hsp90-AA1(可诱导型 /主要型)和 Hsp90-AB1(组成
型 /次要型) ;同功异质体内质网伴侣 GRP94(葡萄
糖相关蛋白 94) ;线粒体同族体 Hsp75 /TRAP1(肿
瘤坏死因子受体相关蛋白 1)［4］。在发生应激反应
时，Hsp90 可以和那些由于环境刺激而使自身构象
发生改变的蛋白相互作用，保证蛋白进行适当的折
叠并防止其非特异性聚集，从而维持细胞的正常活
性。正常状态下 Hsp90 表达量较低，受细胞周期调
控，主要存在于胞质中，应激时 Hsp90 迅速进入细
胞核，其诱导合成在转录和翻译两个水平上调，能提
高细胞抗应激能力。肿瘤细胞对 Hsp90 抑制剂特
别敏感的原因之一就在于肿瘤细胞中 Hsp90 呈现
出持续的高表达［5］，这种高表达不需要热刺激，突
变或异常蛋白质也可以刺激其合成。目前 Hsp90
已经成为肿瘤治疗的新靶点［6］。为了进行体外药
物蛋白结合试验［7］，靶向筛选 Hsp90 抑制剂［8］，本
研究将人 Hsp90AB1 克隆到 pET-28a(+)载体中，
进行原核表达，经过中试发酵，纯化获得了目的蛋
白，为进行后续研究奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 菌种、质粒、细胞、血清及培养基 大肠杆菌
DH5α购自 Promega 公司;表达菌株大肠杆菌 BL21
(DE3)、Rosetta(DE3)和载体 pET-28a(+)质粒购
自 Novagen公司;HeLa细胞购自美国典型菌种保藏
中心(ATCC) ;DMEM 培养基和胎牛血清(fetal bov-
ing serum，FBS)均购自 Gibco。
1． 1． 2 主要试剂、仪器和材料 细胞总 RNA 提取
Trizol试剂、逆转录 RT-PCR 试剂盒购自 Invitrogen
公司;引物由上海生工合成;DEPC 购自北京鼎国生
物技术有限公司;1 kb DNA Marker、限制性内切酶
NdeⅠ和 SalⅠ及 T4 连接酶均购自宝生物工程(大
连)有限公司;KOD Plus购自 TOYOBO公司;质粒抽
提和 DNA回收及纯化试剂盒购自 OMEGA 公司;层
析系统为 KTA Purifier系统，购自 Pharmacia (GE)
公司;核酸蛋白分析仪购自 Beckman Coulter;TRYP-
TONE 和 YEAST EXTRACT购自 OXOID 公司;发酵
罐购自美国 NBS公司;低温高速离心机和连续流离
心机购自 Beckman Coulter;针对 Hsp90AB1 的 C 端
山羊抗人单克隆抗体购自 Santa Cruz，鼠抗山羊二抗
购自 Millipore。
1． 1． 3 培养基配方 LB培养基:蛋白胨 10 g，酵母
提取物 5 g，NaCl 10 g，加纯水定容至 1 L，121℃、
30 min灭菌备用;固体 LB 培养基为每 100 mL 液体
LB 培养基加 1. 5 g 琼脂粉，121℃、30 min 灭菌
备用。
补料培养基:蛋白胨 64 g，酵母提取物 24 g，甘油
100 mL，加纯水定容至 1 L，115℃、20 min灭菌备用。
发酵培养基:蛋白胨 17 g，酵母提取物 5 g，
K2HPO4·3H2O 4. 26 g，KH2PO4 1. 5 g，NaCl 4 g，加
纯水定容至 1 L，121℃、30 min灭菌备用。
中试培养基:蛋白胨 220 g，酵母提取物 300 g，
Na2HPO4·12H2O 556. 08 g，KH2PO4 29 g，加纯水定
容至 16 L，121℃、30 min灭菌备用。
1． 2 方法
1． 2． 1 引物的设计与合成 根据 GenBank 中已公
布的人 Hsp90AB1 mRNA 序列，用分子生物学软件
primer5． 0 设计引物。依据选用的原核表达载体
pET-28a(+)的酶切位点图谱及人 Hsp90AB1 mR-
NA序列酶切位点图谱，设计引物如下:上游引物:
5-GACCATATGATGCCTGAGGAAGTGCACCATG-3
(下划线处为 NdeⅠ酶切位点) ;下游引物:5-
GTCGTCGACCTAATCGACTTCTTCCATGC-3 (下 划
线处为 SalⅠ酶切位点) ，用以扩增人 Hsp90AB1 基
因序列。引物由上海生工生物工程技术服务有限公
司合成。用超纯水溶解引物，终浓度均为20 μmol /L，
分装后 －20℃保存备用。
1． 2． 2 HeLa 细胞总 RNA 的提取及 PCR 模板的制
备 体积分数 10% FBS的 DMEM培养 HeLa 细胞，
待细胞覆盖培养瓶大部分时，提取细胞总 RNA，溶
解在 30 μL DEPC 处理过的超纯水中。取 5 μL 溶
液进行 1%琼脂糖凝胶电泳检测。根据逆转录试剂
盒的要求对抽提到的 RNA 进行逆转录，制备 cDNA
模板。
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生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2011 年第 10 期
1． 2． 3 目的片段的扩增 以 cDNA 为模板，采用
50 μL的反应体系，具体根据 KOD-Plus 的反应体系
进行 PCR，反应程序:94℃ 3 min;94℃ 30 s，62． 4℃
40 s，68℃ 2． 5 min，30 个循环;68℃ 5 min，4℃保存。
反应结束后，对 PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳，并
根据琼脂糖凝胶电泳试剂盒步骤做胶回收，胶回收
产物 － 20℃保存备用。
1． 2． 4 重组质粒的构建 将 pET-28a(+)菌种摇
菌，并根据小量质粒抽提试剂盒步骤抽提质粒，抽提
产物 － 20℃保存备用。根据限制性内切酶反应体系
将目的基因和 pET-28a(+ )质粒进行 NdeⅠ和
SalⅠ双酶切，并将酶切产物用纯化试剂盒进行纯
化，纯化产物按照 T4 连接酶反应体系进行 16℃过
夜连接反应。
1． 2． 5 感受态的制备 用无菌接种环蘸取冻存大
肠杆菌 DH5α菌种，划线于未加抗生素的 LB 平板，
37℃培养 16 h。挑取单个菌落，接种于 4 mL不加抗
生素的 LB 培养基中，37℃ 10 － 12 h，转接至 100 mL
无抗生素的 LB 培养基中，于 37℃摇床(180 r /min)
培养 3 h;分装于两个冰预冷的离心管中，冰上放置
10 min，冷却至 0℃;4℃离心，4 000 r /min × 10 min，
弃上清，用 2 × 10 mL 冰预冷的 0． 1 mol /L 的 CaCl2
重悬沉淀，置冰上;4℃离心，4 000 r /min × 10 min，
弃上清，倒置于无菌的吸水纸上 10 min，2 × 2 mL冰
预冷的 0． 1 mol /L 的 CaCl2重悬沉淀，置冰上;加入
50%的甘油(终浓度为 15%) ，分装于无菌的1． 5 mL
Eppendorf 管(Ep 管) ，4℃备用，其余 － 80℃保存。
同样的办法制作 Rosetta(DE3) (氯霉素抗性)的感
受态，－ 80℃保存备用。
1． 2． 6 转化及菌液 PCR鉴定 将连接产物转化感
受态细菌 DH5α，37℃过夜培养。次日，挑取卡那霉
素抗性的白色菌落，接种于 4 mL 含 1 mmol /L 卡那
霉素的 LB 液体培养基中，振摇培养过夜。取 100
μL菌液离心，弃上清后加入 30 μL 超纯水，沸水浴
10 min，离心后以上清为模板进行 PCR，鉴定引物为
上下游引物，PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，
将有目的条带的菌株用小量质粒快速抽提纯化试剂
盒抽提重组质粒 DNA，琼脂糖凝胶电泳初步鉴定。
1． 2． 7 重组质粒 DNA的酶切分析鉴定 将抽提的
质粒进行 NdeⅠ和 SalⅠ双酶切，酶切产物进行琼脂
糖凝胶电泳，检测酶切结果。菌液 PCR和双酶切鉴
定均成功的菌株保种后测序，以质粒上插入序列两
端固有序列设计引物，由英骏公司协助完成测序
工作。
1． 2． 8 生物信息学分析 将测序得到的 cDNA 序
列在 NCBI 上进行同源性比对(http:/ /www． ncbi．
nlm． nih． gov /BLAST) ;利用 ORF Finder 分析确定基
因的读码框(http:/ /www． ncbi． nlm． nih． gov /gorf /
gorf． html) ;利用 ProtParam工具对氨基酸残基数目、
组成、蛋白质相对分子质量、理论等电点等参数进行
分析 (http:/ /www． expasy． ch / tools /protparam． ht-
ml)。利用 ProtScale 进行蛋白质的疏水性分析(ht-
tp:/ /www． expasy． ch / tools /protscale． html)。用
Clustalw对不同物种 Hsp90AB1 蛋白进行多重比对
(http:/ /npsa-pbil． ibcp． fr /cgi-bin /npsa_automat． pl?
page = npsa_clustalw． html) ;用 Tmpred 网站对蛋白
的跨膜区预测(http:/ /www． ch． embnet． org / soft-
ware /TMPRED_form． html) ;利用 SignalP 信号肽预
测工具对蛋白进行分析 (http:/ /www． cbs． dtu． dk /
services /SignalP /)。
1． 2． 9 三角瓶中诱导表达 将重组质粒转化感受
态菌株 Rosetta(DE3)中，挑取阳性克隆，构建好表
达工程菌后，进行表达条件的优化:接种至50 mL
LB培养基中 37℃培养至 OD值约为 0． 7 － 1． 0 时开
始诱导，诱导温度选用 20℃和 37℃;诱导剂 IPTG终
浓度选用 0． 5 和 1． 0 mmol /L。诱导过程中每隔 2 h
取样，对样品进行 SDS 电泳，染色脱色后分析目的
蛋白表达量。超声波破碎菌体，4℃、10 267 r /min
离心 30 min，分别取上清和沉淀进行 SDS 电泳，分
析目的蛋白是否为可溶性表达。
1． 2． 10 中试发酵 挑取单克隆菌株，接种到 50
mL LB培养基中 37℃摇菌 8 h，然后按 1∶ 50 接种量
接种到 1 000 mL发酵培养基中 37℃继续摇菌过夜。
次日，上罐接种到 18 L中试培养基中 37℃发酵罐继
续培养，OD值达到 7 和 9 之间时开始诱导，根据优
化条件控制发酵罐参数，放罐后离心收集菌体。
1． 2． 11 发酵产物的纯化 发酵罐中诱导表达后，
4℃、9 000 r /min，连续流离心收集菌体，称重。按
100 g湿菌体加 1 L PBS(0． 01 mol /L，pH8． 0)重悬，
超声破碎(400 W，工作 3 s，间歇 6 s，共 300 次) ，
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4℃、10 267 r /min离心 30 min，留取上清。约 10 mL
体积的 Ni-NTA填料装柱，先用纯水洗 2 － 3 个柱体
积，再用 PBS(0． 01 mol /L，pH8． 0)平衡柱子至基
线。平衡后的柱子，卸下填料，与离心后收集的上
清液冰浴搅拌 3 h，沉淀 2 h 后装柱子。用 PBS
(0． 01 mol /L，pH8． 0)洗至基线，然后用含 60 mmol /
L咪唑的 PBS(0． 01 mol /L，pH8. 0)洗脱杂蛋白，再
用含300 mmol /L咪唑的 PBS(0． 01 mol /L，pH8． 0)洗
脱目的蛋白，洗脱过程中每次出峰均分开收集洗脱
液，留样，SDS电泳，考马斯亮蓝染色分析每步出峰
时洗脱液内的蛋白，目的蛋白脱咪唑后用 BCA法测
定蛋白浓度。
1． 2． 12 免疫原性检测 Western blotting 检测目的
蛋白的免疫原性，将纯化的目的蛋白经 10% SDS-
PAGE分离后，200 mA 电流强度 1． 5 h 将目的蛋白
转移到 PVDF膜上，以含 5%脱脂奶粉的 PBST 缓冲
液室温封闭 1 h，1 × PBS、0． 1%吐温 20 洗涤 3 次，然
后用针对 Hsp90AB1 C端的山羊抗人单克隆抗体做
一抗，4℃孵育过夜，用 1 × PBS、0． 1%吐温 20 洗涤 3
次，再与鼠抗山羊二抗室温孵育 1 h，1 × PBS、0． 1%
吐温 20 洗涤 3 次，加发光液，于暗室胶片曝光、显
影、定影。
2 结果
2． 1 总 RNA抽提结果
用 Trizol法从 HeLa细胞中抽提到的 RNA在 1%
的琼脂糖凝胶上进行电泳(图 1) ，得到了 3条带。
图 1 HeLa细胞总 RNA
2． 2 目的片段 PCR扩增结果
以逆转录的 cDNA 为模板，根据设计好的引物
进行 PCR，可以得到 2 175 bp 的目的片段，PCR 产
物进行 1%的琼脂糖凝胶电泳(图 2)。
M． DNA Marker;1． Hsp90AB1
图 2 PCR合成 Hsp90AB1 的 DNA序列
2． 3 阳性克隆的 PCR鉴定、双酶切鉴定及序列分析
连接产物转化 DH5α 后涂含有卡那霉素的平
板，37℃ 培养过夜后，挑取单菌落接种在含有 1
mmol /L卡那霉素的 LB 培养基中，37℃过夜培养，
取菌液进行 PCR 鉴定，得到特异的条带;抽提质粒
进行双酶切鉴定，琼脂糖凝胶电泳后得到载体条带
和目的基因条带(图 3)。
M． DNA Marker;1． pET28a-hHsp90AB1 / NdeⅠ + SalⅠ
图 3 重组 pET28a-hHsp90AB1 质粒限制酶分析
2． 4 生物信息学分析结果
对阳性菌进行序列分析，与 GenBank 上列出的
序列用 Blast进行比对，得到的结果与公布的结果一
致。虽然在第 741 个碱基处发生了碱基突变，由
AAG变成了 AAA，但是氨基酸均为赖氨酸，这种改
变是由于 PCR 过程中发生的突变还是由于细胞株
的差异导致，尚需进一步的研究。利用生物信息学
的方法对该基因编码的氨基酸分析结果显示，
Hsp90AB1 的 ORF为 2 175 bp，编码 724 个氨基酸，
理论分子量为 83． 26 kD，理论等电点为 4． 97;预测
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该氨基酸序列不具有信号肽，具有两个跨膜结构，疏
水性区域相对均匀。选择来自人、褐家鼠、非洲爪
蟾、马、斑马鱼、苏门达腊猩猩、红原鸡和猕猴(NCBI
Reference Sequence 分别为 NP _ 031381． 2、NP _
001004082． 3、NP_001025655． 1、NP_001075407． 1、
NP_571385． 2、NP_001126444． 1、NP_996842． 1 和
NP_001182462． 1)8 个物种的 Hsp90AB1 蛋白进行
氨基酸序列的多重比对。结果显示，该基因编码的
氨基酸序列相似性很高，相同序列达到 85． 83%，高
度相似序列为 9． 08%，低度相似序列占 2． 20%，不
同的序列占 2． 89%。
2． 5 表达产物 SDS-PAGE电泳分析
通过对原核表达工程菌 Rosetta(DE3)的优化，
最终确定 20℃、1 mmol /L IPTG、诱导 12 h较为理想
(图 4，图 5)。超声波破碎菌体，4℃、10 267 r /min
离心后 SDS-PAGE分析发现，产物存在于上清，极少
量在沉淀中(图 6) ，表明在优化条件下，目的蛋白在
工程菌 Rosetta(DE3)中以可溶物形式存在。灰度
扫描分析目的蛋白约占菌体总蛋白 13%。
M．蛋白分子量标准;1． 未诱导组;2 － 5． 诱导 2、4、8 及
12 h，20℃;6 － 9． 37℃ 1 mmol /L IPTG 诱导 2、4、8 及
12 h
图 4 诱导温度和时间对蛋白表达的影响
M．蛋白分子量标准;1． 未诱导组;2 － 5． 1． 0 mmol /L
IPTG诱导 2、4、8 及 12 h;6 － 9． 20℃ IPTG诱导 2，4，8 及
12 h
图 5 IPTG诱导浓度和时间对蛋白表达的影响
M．蛋白分子量标准;1，3，5，7．上清;2，4，6，8．沉淀
图 6 表达产物的可溶性分析
2． 6 发酵过程的控制
中试发酵第一次按照摇瓶优化条件诱导 12 h
收菌，其中 OD 值大于 1 时开始连续补料，补料为
30%的葡萄糖，实时取样监测，SDS-PAGE 结果(图
7)显示表达量很低;第二次诱导 24 h 收菌，补料为
酵母粉、蛋白胨和甘油配置的培养基，实时取样监
测，SDS-PAGE显示第 20 h表达量较高;第三次发酵
37℃培养至 OD值 7． 6 时开始诱导，诱导温度 20℃，
IPTG终浓度 1 mmol /L，20 h 后收菌，其发酵过程生
长曲线及溶解氧(DO)变化，如图所示(图 8)。
M．蛋白分子量标准;1 － 9．诱导 0、3、6、8、11、14、17、20 及
24 h
图 7 发酵产物 SDS-PAGE分析
图 8 发酵生长曲线及溶解氧变化
2． 7 发酵产物的纯化
发酵罐中诱导表达后收集菌体，称重约 600 g
(湿重) ，破碎菌体离心后纯化目的蛋白，先用 60
mmol /L咪唑洗脱杂蛋白，再用 300 mmol /L 咪唑洗
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脱目的蛋白，洗脱得到的目的蛋白 SDS-PAGE 电泳
(图 9) ，灰度扫描显示目的蛋白纯度约为 98%。
M．蛋白分子量标准;1．纯化蛋白
图 9 SDS-PAGE分析目的蛋白 Hsp90AB1 的纯化
2． 8 Western blotting鉴定
对第三次发酵产物以及纯化蛋白进行 Western
blotting分析(一抗采用山羊制备的人源单克隆抗
体) (图 10) ，得到特异性条带，并且梯度较为明显。
1．上清;2．沉淀;3．纯化蛋白
图 10 目的蛋白 Hsp90AB1 的Western blotting分析
3 讨论
近年发现热休克蛋白与肿瘤发生、发展、生物学
行为及其预后有较密切关系，其中 Hsp90 是热休克
蛋白家族中一个重要的成员［9］，在细胞内具有重要
的生理功能［10］。Hsp90 是多个癌基因通路的重要
组成部分，其每个亚基含有 3 个功能性结构域，分别
是 N-末端腺苷三磷酸(ATP)-结合结构域、参与客体
蛋白结合的中间结构域和含有三角四肽重复(TPR)
结合基序的 C-末端二聚化结构域。此次构建的原
核表达载体 pET28a(+ )-hHsp90 诱导表达后经
SDS-PAGE分离和 Western blotting 证实，能够在大
肠杆菌中高效表达出融合蛋白。载体的插入区前面
具有 6 个重复的 cac，表达的目的蛋白带有 His 标
签，这样可以通过 His 与固定化金属离子 Ni2 +的亲
合力来进行纯化，并且在 His 标签后面有一个凝血
酶位点，纯化出来的蛋白可以用凝血酶切掉前面的
His标签。虽然仍然多出来酶切位点两个氨基酸，
但是距离目的蛋白 ATP口袋较远。由于 Hsp90AB1
含有稀有密码子，不利于表达［11］，在 BL21 中表达困
难［12］，故改为在 Rosetta(DE3)中表达，表达蛋白为
可溶性蛋白。温度对目的蛋白的表达影响较大，温
度较高时较易形成包涵体。中试发酵过程中，补料
采用葡萄糖时抑制了目的蛋白的表达［13］，与乳糖操
纵子有关，补料改为酵母粉、蛋白胨和甘油［14］培养
基后，蛋白表达有效提高，可能因为甘油作为碳源使
得菌体生长过程中不会产生乙酸，利于重组蛋白的
积累［15］。目的蛋白电泳位置在 95 kD处，大于理论
值，这主要是由于目的蛋白带有组氨酸标签和凝血
酶酶切位点，影响了其电泳速率。
4 结论
本研究成功克隆、表达了人 Hsp90AB1 基因，并
采用中试发酵罐技术扩大培养，获取了大量目的蛋
白，为进行 Hsp90 抑制剂的体外结合试验，筛选
Hsp90 抑制剂药物，奠定了良好的基础。
参 考 文 献
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