全 文 ：植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2008, 25 (3): 337-343, w w w .chinbullbotany.com
收稿日期: 2007-03-13; 接受日期: 2007-11-29
基金项目: 湖北省生物资源保护与利用重点实验室开放基金(No.2007010)、国家林业局自然保护区研究中心项目(No.460-8101)和宜
昌市科技局重点攻关项目(No.A06209)
* 通讯作者。E-mail: chenf j616@163.com
.组织培养简讯.
珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生
熊丹 1 , 陈发菊 1 , 2*, 梁宏伟 1 , 王玉兵 1
1三峡大学生物技术研究中心, 湖北省天然产物研究与利用重点实验室, 宜昌 443002
2湖北民族学院湖北省生物资源保护与利用重点实验室, 恩施 445000
摘要 以香果树(Em menopterys henryi)未成熟种子为试材, 探讨不同的接种量、基本培养基、糖浓度及植物生长调节物质
等对体细胞胚胎生长的影响, 建立稳定的香果树胚性细胞悬浮培养与植株再生体系。结果表明: 悬浮培养条件下, 最适接种量
为2%(鲜重); 较适合的基本培养基为MS; 蔗糖浓度为1%时容易使球形胚聚合体愈伤化, 浓度为3%和6%适合球形胚聚合体增
殖, 浓度为9%则容易使球形胚聚合体褐化; 添加0.5 mg.L-16-BA 和0.5 mg.L-1 NAA的MS液体培养基, 当初始蔗糖浓度为
3%, 然后逐步提高到6%则有利于香果树各个发育阶段的同步化; 子叶胚转到不含任何植物生长调节物质的MS固体培养基中
可以长成正常植株。
关键词 胚性悬浮细胞, 香果树, 植株再生, 体细胞胚胎发生
熊丹 , 陈发菊 , 梁宏伟 , 王玉兵 (2008). 珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生. 植物学通报 25, 337-343.
植物细胞悬浮培养(plant cell suspension culture)
在现代生物学研究中有着广泛的应用。植物悬浮细胞
系可以用来分离原生质, 制造人工种子, 筛选突变体, 生
产次生代谢物质以及进行植物细胞代谢生理和生化特征
等方面的研究。
香果树(Emmenopterys henryi), 别名丁木, 为茜草
科(Rubiaceae)香果树属高大乔木, 我国特有单种属植
物, 第四纪冰川幸存的古老孑遗树种。香果树的分布零
散, 种群数量不多, 自然条件下种子萌发力极低, 天然更
新能力差, 现存数量有限, 处于濒危状态, 已被列为国家
二级重点保护植物和林业部公布的国家珍贵树种。该
树种在我国主要分布在江西、福建、湖南和湖北等地
海拔 400-1 400 m 的土壤湿润肥沃的山坡和谷地。香
果树材质洁白细密, 纹理通直, 是一种优良用材树种。
它树姿优美, 花色艳丽, 也是很好的观赏植物(傅立国和
金鉴明, 1992)。迄今为止, 国内外通过体细胞胚发生途
径来大量繁殖香果树的报道很少, 仅有姬飞腾等(2005)
利用香果树叶片为外植体, 通过固体和悬浮培养诱导出
体细胞胚胎, 但对于细胞悬浮培养的相关影响因子尚未
有系统的研究报道。本文以香果树未成熟种子为外植
体, 探讨不同的接种量、基本培养基、糖浓度及生长
调节物质等对体细胞胚胎生长的影响, 建立了稳定的细
胞悬浮培养与植株再生体系, 以期为香果树的细胞工程
和基因工程研究奠定基础。
1 材料与方法
香果树(Emmenopterys henryi Oliv)幼嫩果实于2004年
8月采自神农架自然保护区。取香果树幼嫩果实(果龄
30天左右)在洗涤液中用软刷刷洗, 然后用洗涤液浸泡
30分钟, 自来水冲洗2小时, 在超净工作台上用75%乙
醇灭菌 1分钟, 0.1%HgCl2消毒 15分钟, 无菌水清洗 5
次。用手术刀纵向切开果皮, 挑出未成熟种子备用。
1.1 胚性愈伤组织的诱导
将未成熟种子接种到附加 2.0 mg·L-1 6-BA的MS 固体
338 植物学通报 25(3) 2008
培养基(Murashige and Skoog, 1962)中培养。6天后
产生浅绿色致密愈伤组织, 继续培养4天后, 将浅绿色愈
伤组织转移到附加 0.1 mg·L-16-BA和 0.5 mg·L-1NAA
的MS培养基上培养 30天, 浅绿色愈伤组织逐渐变为黑
色。继代培养 40 天, 从黑色的愈伤组织表面生长出浅
黄色疏松的胚性愈伤组织。在培养基中添加 3%(w/v)蔗
糖和 0. 8% (w/ v)琼脂。用 0 . 1 m o l ·L-1HCl 或 0 . 1
mol·L-1NaOH调节 pH值, 在灭菌前各培养基 pH值为
6.0, 121°C灭菌 20 分钟。培养温度为 (25±2)°C, 光照
强度为 2 000 µmol·m-2·s-1, 光照时间每天 16小时。
1.2 悬浮体系的建立
1.2.1 球形胚聚合体的获得
将浅黄色胚性愈伤接种到含0.5 mg.L-16-BA和0.5 mg.
L-1NAA 的MS 液体培养基中, 添加 3% 蔗糖, 100 mL
三角瓶中加 50 mL液体培养基。置摇床上培养, 转速
为每分钟120转, 培养温度(25±2)°C, 光照强度为1 000
µmol·m-2·s-1, 光照时间每天 16小时。每 14天继代 1
次, 继代时用 60目尼龙网过筛处理, 使其大小均一。继
代2次后, 显微观察, 悬浮培养物主要由球形胚聚合体组
成。将获得的大小均一的球形胚聚合体作为初始材料
用于筛选对体细胞胚胎发生最适的基本培养基、接种
量、蔗糖浓度和植物生长调节剂等。
1.2.2 不同接种量对球形胚聚合体生长的影响
分别以 0.4%、1.0%、2.0%、3.0% 和 5.0%(w/v)接
种量(鲜重)将球形胚聚合体接种到含 0.5 mg·L-16-BA和
0.5 mg·L-1NAA的MS液体培养基中, 添加3%蔗糖, 每
个处理重复 4次。培养 14 天后, 观察球形胚聚合体的
生长情况并统计其生长量。
选取较优的接种量(2.0%)处理组测定悬浮培养物生
长过程中 pH值和生长量的变化, 设4个重复, 每隔 2天
取其充分摇匀的悬浮培养物 5 mL, 8 000×g离心 10分
钟, 将沉淀物称重, 同时测上清液 pH值, 共测定 10次。
1.2.3 基本培养基对球形胚聚合体生长的影响
将球形胚聚合体以2.0%的接种量接种到1/2MS(大量元
素减半,其余成分同 M S )、M S、B 5( L l o y d an d
McCown, 1980)和WPM (Gamborg et al. ,1968) 4种
基本培养基中, 不添加任何生长调节剂, 每个处理设4个
重复。培养 14 天后, 观察球形胚聚合体的生长情况并
统计其生长量。
1.2.4 不同浓度的蔗糖对球形胚聚合体生长的影响
将 1.0 g球形胚聚合体接种到 50 mL附加0.5 mg·L-1 6-
BA 和 0.5 mg·L-1NAA的MS 液体培养基中, 添加不同
浓度的蔗糖(0、1%、3%、6% 和 9% )。每个处理
设 4个重复。14 天后观察球形胚聚合体的生长情况并
统计其生长量。
1.2.5 不同种类和浓度的生长调节物质及蔗糖浓度
对体细胞胚胎同步化的影响
将球形胚聚合体转到MS 液体培养基中, 附加 0.01 mg
·L-1 NAA 和 0.005、0.01、0.05和 0.1 mg·L-1 6-BA,
培养基编号依次为D1、D2、D3 和 D4, 编号 D5为附
加 0.5 mg·L-1 6-BA和0.5 mg·L-1 NAA 的MS液体培
养基, 并添加不同浓度的蔗糖(1%、3% 和 6% )。每
个处理设 4个重复。隔适当时间换液, 更换液体时蔗
糖浓度有所改变。观察不同种类和浓度的生长调节
物质及蔗糖浓度对体细胞胚胎不同发育阶段同步化的
影 响。
1.3 数据处理
用 SPSS 13.0软件分析数据, 以最小显著差数法(LSD)
评价差异的显著性。
2 结果与分析
2.1 不同初始细胞密度下的球形胚聚合体的增殖
在悬浮培养过程中, 球形胚聚合体不停地产生新的球形
胚, 同时体积较大的球形胚脱离球形胚聚合体, 继续培
养, 得到了心形胚、鱼雷形胚和子叶胚, 最后获得成熟
胚。悬浮培养中初始细胞密度对球形胚聚合体的增殖
有显著影响(表 1)。初始细胞密度太小(接种量为 1%)或
339熊丹等: 珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生
太大(接种量为 5%)时, 球形胚聚合体的增殖较少; 当接
种量为 2% 或 3% 时, 球形胚聚合体的增殖没有显著差
异, 都比较大; 但接种量为 3% 时, 培养一段时间后, 球
形胚聚合体颜色逐渐由浅黄色变成灰褐色, 并且培养液
由澄清变浑浊。因此, 初始细胞密度为 2% 最有利于香
果树球形胚聚合体的增殖。
球形胚聚合体的鲜重变化呈 S形曲线, 整个生长周
期可分为缓慢生长期(第 0-8天)、对数生长期(第 8-14
天)和停滞期(第 14-18天)(图 1)。培养液 pH值的变化
近似 V 形曲线(图 2)。在接种后 1-8天内 pH值不断下
降, 从 6.0下降到最低点4.6, 此阶段球形胚聚合体增长
缓慢; 第8-14天pH值迅速回升, 从4.6增加到5.71, 此
阶段球形胚聚合体增长迅速; 第14-16天, pH值缓慢回
升, 此时球形胚聚合体增加缓慢; 第 16天以后 pH值和
球形胚聚合体的增加都几乎停滞, 此时如不及时更换新
鲜培养基, 悬浮细胞将老化死亡。
2.2 基本培养基对球形胚聚合体生长的影响
先期诱导的胚性愈伤组织(图 3A, B), 经培养处理(1.2.1
节)获得了球形胚聚合体作为悬浮培养初始材料(图
3C)。将球形胚聚合体以 2% 的接种量接种到 1/2MS、
MS、B5和WPM 4种基本培养基中, 不添加任何植物
生长调节剂。14 天后, 球形胚聚合体的生长情况和生
长量如表 2。在 B5基本培养基中球形胚聚合体生长迅
速, 生长量最大, 球形胚聚合体逐渐长成半透明的球形
胚、心形胚和鱼雷胚(图 3D), 并得到较多半透明的绿色
子叶胚, 但胚状体的颜色逐渐变成浅灰黄色, 向非胚性愈
伤发展。在MS 基本培养基中, 球形胚聚合体颗粒均一
且细碎, 浅黄色结实的球形胚较多, 生长量较大。在
WPM基本培养基中, 球形胚聚合体增殖较少, 逐渐长成
透明的球形胚、心形胚、鱼雷胚和毛状的绿色子叶胚,
同时有乳白色的子叶胚生成(图3E), 颗粒非常不均一, 胚
表 1 接种量对香果树球形胚聚合体增殖的影响
Table 1 Effects of innoculation quantity on proliferation of globular embryos of Emmenopterys henryi
Innoculation quantity(%) 0.4 1.0 2.0 3.0 5.0
Grow th y ield(g) 2.2±0.40 c 4.2±0.12 b 5.5±0.47 a 6.3±0.33 a 5.3±0.40 ab
同一行数字后不同字母分别代表 0.05水平差异显著。
Means preceding the same letter for each line w ere not diff erent statist ically at 5% probability as determined by LSD mult iple
comparisons.
图 1 悬浮培养过程中细胞生长曲线
Figur e 1 Grow th curve of suspension cells
图 2 细胞悬浮培养过程中 pH值的变化
Figur e 2 Variation in pH during the per iod of culture
340 植物学通报 25(3) 2008
状体的颜色逐渐变成灰黄色, 向非胚性愈伤发展, 继续培
养, 生长越来越差。在 1/2MS培养基中, 浅黄色的球形
胚聚合体逐渐变成灰黄色, 生长缓慢。因此较适合体细
胞生长的基本培养基为 M S 培养基。
2.3 不同浓度的蔗糖对球形胚聚合体生长的影
响
取1.0 g球形胚聚合体接种到50 mL MS液体培养基中,
附加0.5 mg·L-1 6-BA和0.5 mg·L-1 NAA并添加不同浓
度的蔗糖(0、1%、3%、6% 和 9% )。14 天后, 观
察球形胚聚合体的生长情况并统计其生长量(表 3)。结
果显示, 糖浓度对球形胚聚合体的生长影响较大。不加
蔗糖的球形胚聚合体几乎不增殖, 生长非常缓慢; 蔗糖浓
度为 3% 和 6% 的培养基中, 球形胚聚合体增殖量最大;
当蔗糖浓度增加到 9% 时, 浅黄色的球形胚聚合体逐渐
褐化, 球形胚聚合体生长受阻。
2.4 不同种类和浓度的生长调节物质及蔗糖浓
度对体细胞胚胎同步化的影响
将球形胚聚合体接种到含有不同种类和浓度的生长调节
物质及与不同浓度蔗糖组配的液体培养基中摇床培养,
每个处理设 4个重复。间隔适当时间换液, 更换液体时
蔗糖浓度改变。在不同浓度的蔗糖对球形胚聚合体生
长的影响实验中, 发现不加蔗糖时球形胚聚合体几乎不
增殖; 当蔗糖浓度为 9%, 球形胚聚合体易褐化。故在
进行蔗糖浓度对体细胞胚胎同步化的影响实验时, 蔗糖
只选择了 1%、3% 和 6%这 3种浓度, 观察生长调节物
质及蔗糖浓度2个因素对体细胞胚胎不同发育阶段同步
化的影响。
2.4.1 初始蔗糖浓度为 1%时的体细胞胚胎生长情况
将球形胚聚合体转移到含 1% 蔗糖的液体培养基中, 编
号依次为 D1、D2、D3、D4 和 D5, 显示胚生长缓慢
且个体小。D1和 D3中大多数胚为球形胚, 透明, 表面
为絮状, 看似愈伤化(图 3F)。D2、D4和 D5中的胚比
D1和D3规则, 半透明或白色不透明, 愈伤化程度比D1
和 D3低。培养一段时间后, 将来源于附加1%蔗糖(D3)
的培养物转入附加 3% 蔗糖的培养基(D3)中培养。2-3
天后球形胚从一端长出根状物(图3G), 同时也有鱼雷胚,
但一端大多数长出根来, 成为有明显根端的鱼雷胚。接
着用 6% 的蔗糖处理, 有明显根端的鱼雷胚会向子叶胚
方向发展, 这些子叶胚可进一步发育, 长成植株, 但植株
表 2 基本培养基对球形胚聚合体生长的影响
Table 2 Ef fec ts of the basal medium on grow th of somatic embryos of Emmenopterys henryi
Basal medium Grow th y ield(g) Characteris tic s of somatic embryos
1/2MS 1.6±0.17 c Uniform particles, a considerable number of gray ish yellow and compac ted globular embryos
MS 4.0±0.60 b More uniform and f ine particles, a cons iderable number of light yellow and compacted
globular embryos
B5 5.5±0.60 a More uniform and grayish yellow par tic les, a considerable number of green seedlings
WPM 2.4±0.41 c Non-unif orm, semitransparent and grey yellow par ticles, badly grow
同一列数字后不同字母分别代表 0.05水平差异显著。
Means preceding the same letter for each line w ere not diff erent statist ically at 5% probability as determined by LSD mult iple
comparisons.
表 3 不同浓度的蔗糖对球形胚聚合体增殖的影响
Table 3 Ef fec ts of suc rose concentrations on proliferation of somatic embryos of Emmenopterys henryi
Sucrose concentrations(%) 0 1 3 6 9
Grow th y ield(g) 1.1±0.07 d 2.0±0.29 c 5.5±0.47 a 5.4±0.32 a 4.2±0.23 b
同一行数字后不同字母分别代表 0.05水平差异显著。
Means preceding the same letter for each line w ere not diff erent statist ically at 5% probability as determined by LSD mult iple
comparisons.
341熊丹等: 珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生
比较弱小。将在添加 1% 蔗糖的D3 中培养 14 天的悬
浮培养物, 转入含 6% 蔗糖的D3中, 胚内部变为绿色,
向非胚性愈伤发展, 不再进一步分化。
2.4.2 初始蔗糖浓度为 3%时的体细胞胚胎生长情况
在蔗糖初始浓度为 3%、编号分别为 D2、D4和 D5中
培养的球形胚聚合体生长较快, 且个体比较大, 表面光
图 3 悬浮培养条件下香果树体细胞胚胎生长情况和植株再生
(A)黑色的愈伤组织和浅黄色胚性愈伤组织; (B) 圆球状的聚集物; (C)悬浮培养初始材料; (D) 在B5培养基中生成的鱼雷胚; (E)在WPM
培养基中生成的乳白色子叶胚; (F) 蔗糖浓度为1%, 激素配比为D3(MS+0.01 mg.L-1 NAA +0.05 mg.L-1 6-BA)培养条件下的球形胚;
(G)长出根的胚; (H) 蔗糖浓度为 3%, 激素配比为D4(MS+0.01 mg.L-1 NAA+0.1 mg.L-1 6-BA )的培养条件下的胚状体; (I) 蔗糖浓度为
3%, 激素配比为 D4的培养条件下的三角形胚; (J) 蔗糖浓度为 3%, 激素配比为D4的培养条件下的鱼雷胚; (K) 蔗糖浓度为 6%, 激素配
比为D4的培养条件下的子叶胚; (L) 蔗糖浓度为 3%, 激素配比为D2 (MS+0.01 mg.L-1 NAA+0.01 mg.L-1 6-BA )和D5 (MS+0.5 mg.L-1
NA A+0.5 mg.L-1 6-BA )的培养条件下的球形胚; (M) 发育完整的植株; (N) 带有明显根端的鱼雷胚; (O) 再生植株
Figur e 3 The grow th of somatic embryos and plant regeneration of Emmenopterys henryi in suspension culture
(A) Dark callus and light yellow embryogenic callus ; (B) Globular aggregates ; (C) Initial mater ials in suspension culture; (D)
Torpedo embryos generated in B5 medium; (E) Oyster w hite cotyledon embryos generated in WPM medium; (F) Globular embryos
generated in the medium w hose sucrose concentration w as 1% and PGR concentration w as D3(MS+0.01 mg.L-1 NA A+0.05 mg.L-1
6-BA); (G) Embryos w ith root; (H) Somatic embryos generated in the medium w hose sucrose concentration w as 3% and PGR
concentration w as D4 (MS+0.01 mg.L-1 NAA +0.1 mg.L-1 6-BA) ;(I) Triangle embryos generated in the medium w hose suc rose
concentration w as 3% and PGR concentration w as D4; (J) Torpedo embryos generated in the medium w hose sucrose concentra-
tion w as 3% and PGR concentration w as D4; (K) Cotyledon embryos generated in the medium w hose sucrose concentration w as
6% and PGR concentration w as D4; (L) Globular embryos generated in the medium w hose sucrose concentration w as 3% and
PGR concentration w as D2 (MS+0.01 mg.L-1 NAA+0.01 mg.L-1 6-BA ) and D5 (MS+0.5 mg.L-1 NAA+0.5 mg.L-1 6-BA ); (M ) Devel-
opmental mature plants; (N) Torpedos w ith obv ious root apex; (O) Regenerated plants
342 植物学通报 25(3) 2008
滑。D4中的体细胞胚胎为透明或半透明(图 3H-J)。在
蔗糖浓度提高到6%的D4中继续培养, 显示无明显根端
的鱼雷胚能进一步发育成子叶胚(图 3K)。D2 和 D5 中
的球形胚为白色不透明(图 3L), 在蔗糖浓度提高到 6%
的 D2 和 D5中培养, 胚经历心形胚、无明显根端的鱼
雷胚和子叶胚, 最后发育成完整的植株(图3M), 其中D5
培养基中生成的再生植株最多。将在初始蔗糖浓度为
3% 的 D2中生长的悬浮培养物转移到含蔗糖 6% 的D2
中, 14天后转入含蔗糖1%的D2培养液中, 愈伤上长出
透明鱼雷胚, 质软, 生长比较均一, 但不能进一步发育。
将初始蔗糖浓度为 3% 的 D2中生长的胚状体转移到含
1% 蔗糖的D2 中, 胚开始褐化, 失去发育能力。
2.5 悬浮体系的建立
本研究证明初始细胞密度为 2%最有利于香果树球形胚
聚合体增殖; 继代周期是 14天; 较适合球形胚聚合体的
基本培养基为 MS。悬浮培养条件下, 1% 的蔗糖浓度
容易使胚愈伤化, 3%和6%的蔗糖浓度适合球形胚聚合
体增殖, 9% 的蔗糖浓度容易使球形胚聚合体褐化。添
加 0.5 mg·L-1 6-BA 和 0.5 mg·L-1 NAA 的MS 液体培
养基, 初始蔗糖浓度为 3%, 然后逐步提高蔗糖浓度到
6% 有利于香果树体细胞胚胎不同发育阶段的同步化。
以 2.0%的接种量将球形胚聚合体接种到含 0.5 mg·L-1
6-BA和0.5 mg·L-1NAA的MS液体培养基中, 添加3%
蔗糖, 培养 14天, 平均 1.0 g培养物可产生约 1.1×105
个球形胚, 有 95% 的球形胚发育为子叶胚。
2.6 植株再生和移栽
将香果树带有明显根端的鱼雷胚(图3N)接种到不添加任
何生长调节物质的MS 固体培养基中, 结果显示不能长
成植株, 但将其转入含 0.5 mg·L-1 6-BA和 0.5 mg·L-1
NAA的MS 固体培养基中, 则可以萌发成植株。将已经
长出2片子叶的子叶胚转移到不含任何植物生长调节物
质的MS固体培养基上, 茎端先发育, 然后开始长根, 最
终长成正常植株(图 3O )。子叶胚转变为再生植株的频
率可达100%, 形态上没有观察到畸形苗, 移栽成活率达
95 % 以上。
3 讨论
细胞悬浮培养是植物细胞生产工业化必经的重要步骤,
通过悬浮培养可获得大量的体细胞胚。与固体培养相
比, 细胞悬浮培养具有细胞繁殖速度快, 能大规模培养和
可提供大量均匀一致的植物细胞培养物的特点。本实
验中, 液体培养的悬浮细胞分裂速度快, 球形胚数量多
且较同步, 并可以得到较多的各个时期的胚。球形胚经
过体胚成熟和体胚萌发等步骤, 成功获得了体胚的再生
植 株 。
蔗糖在体胚发生过程中不仅可作为碳源, 而且可作
为渗透剂调节培养基渗透势(Pa rk and Ahn, 2005;
Shohael et al., 2006; Jheng et al., 2006)。本实验中,
蔗糖的浓度不同, 则香果树体细胞胚胎的生长情况也有
些不同。当初始蔗糖浓度比较低时, 胚容易发生早熟现
象, 胚个体小, 容易愈伤化, 且几天后就跨越正常的发育
阶段长出根来, 生成的植株比较弱小。在初始蔗糖浓度
为 3%的培养基中, 胚个体大, 生长正常, 不易再次愈伤
化, 最有利于形成正常的香果树体细胞胚。在悬浮培养
过程中逐步提高蔗糖浓度有利于香果树体细胞胚胎不同
发育阶段的同步化。在蔗糖浓度改变的过程中, 改变的
范围不宜过大, 应逐渐提高糖浓度, 如果糖浓度跨度过
大, 则形成的胚极易愈伤化。
进一步研究利用生物反应器大规模生产香果树体细
胞胚胎, 将会节约成本, 提高生产效率。由于体胚发生
体系较为稳定, 可以在分子水平上研究胚胎发生的机
理。体细胞胚胎发生系统是遗传转化研究的良好受体
系统, 利用农杆菌介导的转化方法, 可以转入有用抗性基
因, 进行遗传改良研究。
参考文献
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343熊丹等: 珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生
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1Ke y L aborato ry of Natural Produ cts Re search and De vel opme nt of Hub ei P rovince, Bio tech nol ogy Re sea rch Cen ter of Ch ina Three
Go rge s Un ive rsi ty, Yichan g 4 430 02, Chi na
2Ke y L aborato ry of Bio logi c Reso urces P rotect ion an d Ut il i zat ion of Hub ei Pro vin ce, Hub ei Institu te for Na tio nali tie s,
En shi 44 500 0, Chi na
Abstr act Embryogenic cell suspension cultures w ere established from calli of immature seeds of Emmenopterys henryi . Callus
could be obtained from immature seeds on MS solid medium augmented w ith 2.0 mg·L-1 6-benzylaminopur ine (6-BA) and 3%
sucrose. Embryogenic calli w ere induced on MS basal medium supplemented w ith 0.1 mg·L-1 N-acetyl aspar tate (NAA) and 0.5 mg
·L-1 6-BA. Numerous somatic embryoids appeared on MS liquid basal nutr ient medium w ith 0.5 mg·L-1 NA A and 0.5 mg·L-1 6-BA. The
optimal value of the init ial cell density w as 2.0% ( fresh w eight). Several parameters that might be assoc iated w ith grow th w ere
determined over a 14-day period. The embryo-der ived plantlets w ith w ell-developed roots and shoots w ere transfer red success-
fully to the greenhouse, w ith a high survival rate of 95%.
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(责任编辑: 白羽红)
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