全 文 ：第 １２卷第 ５期
２０１４年 ９月
生 物 加 工 过 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ １２ Ｎｏ ５
Ｓｅｐ ２０１４
ｄｏｉ：１０ ３９６９ ／ ｊ ｉｓｓｎ １６７２－３６７８ ２０１４ ０５ ０１３
收稿日期：２０１４－０３－１１
基金项目：江西省重点新产品计划（２００５２５２７）
作者简介：张丽铃 （ １９８７—），女，江西新余人，硕士研究生，研究方向：蛋白制剂的工艺；何淑琴 （联系人 ），高级工程师， Ｅ⁃ｍａｉｌ：
４６９０６８０１８＠ ｑｑ ｃｏｍ
人凝血因子Ⅷ制剂冻干工艺
张丽铃，何淑琴，梁小明，黄 璠
（江西博雅生物制药股份有限公司，抚州 ３４４０００）
摘 要：优选了人凝血因子Ⅷ（ＦⅧ）制剂的冻干工艺。 通过电阻法测定共晶点，再采用正交试验法，对预冻温度、主
要干燥温度、主干燥时间、解析温度与真空压力等进行研究以优选冻干工艺，得到最佳的冻干工艺：－４０ ℃预冻
１ ５ ｈ；主要干燥温度从－４０ ℃升温至－３３ ℃，再从－３３ ℃升温至 ０ ℃，总耗时 ３６ ｈ，真空压力为 ３０ Ｐａ；解析温度维
持在 ３５ ℃，真空压力为 ５ Ｐａ，于终点测试压力无变化时结束。 由于该工艺冻干出的人凝血因子Ⅷ制剂符合《中国
药典》３部该项下的质量要求，经验证该冻干工艺能够应用于人凝血因子Ⅷ制剂的大规模生产。
关键词：冻干；人凝血因子Ⅷ；正交试验
中图分类号：Ｒ９７３＋ １ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－３６７８（２０１４）０５－００７４－０６
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｆｒｅｅｚｅ⁃ｄｒｙｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ⅷ
ＺＨＡＮＧ Ｌｉｌｉｎｇ，ＨＥ Ｓｈｕｑｉｎ，ＬＩＡＮＧ Ｘｉａｏｍｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｆａｎ
（Ｊｉａｎｇｘｉ Ｂｏｙａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．，Ｆｕｚｈｏｕ ３４４０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｆｒｅｅｚｅ⁃ｄｒｙｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ⅷ （ＦⅧ） ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ Ｅｕｔｅｃｔｉｃ ｐｏｉｎｔ
ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｋｅｙ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆ ＦⅧ ｖａｃｕｕｍ ｆｒｅｅｚｅ⁃ｄｒｙｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｆｒｅｅｚｅ⁃ｄｒｙｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ： ｐｒｅ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ａｔ － ４０ ℃ ｆｏｒ １ ５ ｈ， ｍａｉｎ
ｄｒｙｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｆｒｏｍ －４０ ｔｏ －３３ ℃， ｔｈｅｎ ｔｏ ０ ℃， ｔｏｔａｌ ｔｉｍｅ ３６ ｈ， ａｎｄ ｖａｃｕｕｍ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ３０ Ｐａ． Ｔｈｅ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ｗａｓ ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ ａｔ ３５ ℃， ｖａｃｕｕｍ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｗａｓ ５ Ｐａ， ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ｆｉｎｉｓｈｅｄ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｔｅｓｔ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｃｈａｎｇｅｄ． Ｔｈｅ ＦⅧ ｂｙ ｔｈｉｓ ｐｒｏｃｅｓｓ ｍｅｔ ｔｈｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｆｒｅｅｚｅ⁃ｄｒｙｉｎｇ；ｈｕｍａｎ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ⅷ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
人凝血因子Ⅷ（ＦⅧ）是 １ 种血浆糖蛋白，在正
常人血浆中的质量浓度约为 ０ １～０ ２ ｇ ／ ｍＬ，半衰期
为 １２ ｈ。 在人体凝血过程中，ＦⅧ的缺陷会导致某
种严重的遗传性出血性疾病———甲型血友病［１］。
甲型血友病目前仍没有根治的方法，是终生性疾
病，只能进行替代性治疗，输注凝血因子 ＦⅧ是治疗
甲型血友病的首选。 但是，目前国内市场上的 ＦⅧ
产品严重不足，危及国内患者的健康和生命安全。
为保留 ＦⅧ的生物活性，且便于运输、储存，须
将制剂进行冻干。 冻干过程能除去制剂中 ９５％ ～
９９％的水分，使产品能长期保存而不变质［２］。 但生
物制品热稳定性差且组成结构差异明显，至今还没
有通用的数字化冻干体系，而在不恰当参数下进行
冻干很容易使生物制品变性失活［３－４］。 因此，笔者
所在单位正积极研制 ＦⅧ制剂，以期能为血友病患
者提供更多安全、有效的药品。
１ 材料和方法
１ １ 主要材料
人凝血因子Ⅷ（未冻干，每瓶 １０ ｍＬ 为 ２２０ ＩＵ），
批号为 Ｓ２０１３０５０１、Ｓ２０１３０６０２ 和 Ｓ２０１２０６０３，由江西
博雅生物制药股份有限公司生产，以质量分数 ２％的
甘氨酸作为冻干保护剂。
１ ２ 主要设备
凝血因子 Ⅷ 促凝活性检测试剂盒， 购于
Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ 公司；全自动血凝分析仪
（ＡＣＬ７０００型），购于美国贝克曼公司；真空冷冻干
燥机（ＬＹＯ １０ ＬＹＯ １５ 型），购于上海东富龙科
技股份有限公司。
１ ３ 方法
１ ３ １ 溶液共晶点的测定［５］
溶液共晶点采用简易的电阻法测量，用 ２ 根粗
细适当而又互相绝缘的铜丝插入盛有样品溶液的
容器中，作为电极。 在铜电极附近插入 １支温度计，
然后放入－８０ ℃的冰箱中冷冻至完全冻结，取出，将
电极接入万用电表电阻档，缓慢对样品进行升温，
记录升温过程中的样品温度及对应的电阻值。 开
始电阻很大，近无限，当样品温度升高后，电阻值开
始变小，当升到某一温度时，电阻值大幅下降，并接
近于 ０，这时对应的温度即为样品的共晶点温度。
１ ３ ２ 冻干产品质量的评价［６］
１）目检外观应为乳白色疏松体，复溶后溶液应
为无色澄清液体，可带轻微乳光。
２）水分按卡尔费休氏法测定，质量分数应不高
于 ３ ０％。
３）复溶时间：将供试品平衡至 ２５ ～ ３７ ℃，按标
示量加入 ２５～３７ ℃灭菌注射用水，轻轻摇动，应于
３０ ｍｉｎ内完全溶解。
１ ３ ３ 人凝血因子Ⅷ活性的测定
凝血因子Ⅷ活性测定采用全自动凝血仪及检
测试剂盒进行检测，方法参照文献［７］。
１ ３ ４ 单因素试验
在进行正交试验之前，先参照本公司凝血类产
品人纤维蛋白原的成熟冻干工艺，选择影响冻干的
４个主要因素：预冻时间、主干燥温度、主干燥时间、
解析温度和真空压力（因解析温度和真空压力对产
品质量影响具有协同性，故将两者设定为 １ 个因
素）进行单因素试验。 拟定的冻干工艺：将制品降
温到比 １ ３ １试验所得的药液共晶点（Ｘ）低 ３０ ℃，
设为预冻温度，预冻 １ ｈ；主要干燥温度为 Ｘ－２０ 到
０ ℃；主干燥时间、真空压力为 ３０ ｈ、３０ Ｐａ；解析温
度维持在 ３０ ℃，真空压力为 ３ Ｐａ，终点测试压力无
变化时结束。 进行单因素试验时，其他因素按起始
拟定的冻干工艺进行，单因素水平见表 １。
表 １ 单因素实验设计
Ｔａｂｌｅ １ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
水平
因素
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
预冻时间 ／ ｈ 主要干燥温度 ／ ℃ 主干燥时间 ／ ｈ 解析温度 ／ ℃ 真空压力 ／ Ｐａ
１ ０ ５ Ｘ－２５ ®０ ２８ ２５ ３
２ １ ０ Ｘ－２３ ®０ ３０ ２７ ３
３ １ ５ Ｘ－２１ ®０ ３２ ３０ ３
４ ２ ０ Ｘ－１９ ®０ ３４ ３３ ５
５ ２ ５ Ｘ－１７ ®０ ３６ ３５ ５
１ ３ ５ 正交试验设计
根据单因素试验结果，选出各因素 ３ 个较佳的
水平进行正交试验。 使用正交设计助手软件进行
试验设计，选用 Ｌ９ ３４正交表，每次取批号 Ｓ２０１３０５０１
未冻干药液 ５０瓶进行冻干，共 ９次试验。
１ ３ ６ 优选实验
将正交试验中分别以外观合格率、水分和复溶
时间为衡量指标，筛选出的较优冻干工艺进行进一
步的筛选。 每次取批号为 Ｓ２０１３０５０１ 未冻干药液
５０瓶，按一种冻干工艺进行冻干，以外观合格率、水
分、复溶时间及凝血因子Ⅷ效价为综合衡量指标，
筛选出最优的冻干工艺。
１ ３ ７ 验证实验
将批号为 Ｓ２０１３０６０２、Ｓ２０１３０６０３ 的 ＦⅧ药液，
５７ 第 ５期 张丽铃等：人凝血因子Ⅷ制剂冻干工艺
分成 ６批，每批 １００ 瓶。 按 １ ３ ６ 优选实验筛选出
的最优冻干工艺进行冻干，验证该工艺的适用性。
２ 结果与讨论
２ １ 共晶点的测定结果
冻干过程中温度与电阻的关系曲线见图 １。 从
图 １中电阻变化的转折点可知：测定 ＦⅧ的共晶点
为－１０ ℃。 本试验采用简易的万用表电阻法，由于
在测定过程中存在电解作用且万用表对高阻值灵
敏不高。 因此，用这种方法测量所测共晶点可能存
在一定误差，但从实验结果来看仍有参考价值。
图 １ 冻干过程中温度与电阻的关系曲线
Ｆｉｇ １ Ｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
ｉｎ ｆｒｅｅｚｅ⁃ｄｒｙｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ
２ ２ 单因素试验结果
按照单因素试验安排表进行试验，得出各因素
对产品质量的影响，具体结果见表 ２～表 ５。
表 ２ 预冻时间对产品质量的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｔｉｍｅ ｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ ｑｕａｌｉｔｙ
预冻时间 ／
ｈ
外观合格率 ／
％
水分含量 ／
％
复溶时间 ／
ｍｉｎ
０ ５ ４８ ５ ５ １５
１ ０ ８１ ３ ６ １２
１ ５ ８７ ３ ３ ９
２ ０ ８６ ３ １ １３
２ ５ ６５ ３ １ ２２
由表 ２可知：预冻时间仅 ０ ５ ｈ 时，冻干产品水
分含量太高；预冻时间从 １ 到 ２ ｈ，外观合格率能达
到 ８０％以上；预冻时间延长到 ２ ５ ｈ时，外观合格率
明显降低，且时间长、能耗高，因此选择预冻时间 １、
１ ５和 ２ ｈ作为正交试验的水平。
由表 ３结果选择－３３、－３１和－２９ ℃作为主要干
燥温度的 ３个水平参与正交试验。
表 ３ 主干燥温度对产品质量的影响
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｒｙｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ
ｐｒｏｄｕｃｔ ｑｕａｌｉｔｙ
主干燥
温度 ／ ℃
外观合格率 ／
％
水分含量 ／
％
复溶时间 ／
ｍｉｎ
－３５ ５７ ６ ５ １７
－３３ ７１ ３ ６ ９
－３１ ７９ ３ ６ ８
－２９ ８３ ３ ２ ８
－２７ ６９ ３ １ ９
从表 ４可知：主要干燥时间在 ３４ ｈ 左右，外观
合格率达到 ９１％，水分含量接近国家药典标准［９］，
主干燥时间太短则水分含量高，复溶时间长。
表 ４ 主干燥时间对产品质量的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｒｙｉｎｇ ｔｉｍｅ ｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ ｑｕａｌｉｔｙ
主干燥
时间 ／ ｍｉｎ
外观合格率 ／
％
水分含量 ／
％
复溶时间 ／
ｍｉｎ
２８ ６０ ７ １ １７
３０ ８３ ３ ５ １１
３２ ８７ ３ ４ ７
３４ ９１ ２ ７ ５
３６ ９１ ２ ３ ４
根据表 ５可得：解吸温度、真空压力在 ３３ ℃、５
Ｐａ 和 ３５ ℃、５ Ｐａ下，冻干产品质量可达到 ９０％以上
的合格率。 根据以上的单因素实验结果进行正交
试验，正交试验因素水平如表 ６所示。
表 ５ 解吸温度、真空压力对产品质量的影响
Ｔａｂｌｅ ５ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｖａｃｕｕｍ
ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ ｑｕａｌｉｔｙ
解吸温度 ／
℃
真空压力 ／
Ｐａ
外观合
格率 ／ ％
水分含
量 ／ ％
复溶时间 ／
ｍｉｎ
２５ ３ ６８ ８ ２ １６
２７ ３ ８０ ３ ５ １０
３０ ３ ８７ ３ １ ７
３３ ５ ９３ ２ ２ ６
３５ ５ ９３ １ ９ ３
６７ 生 物 加 工 过 程 第 １２卷
表 ６ 因素位级表
Ｔａｂｌｅ ６ Ｄａｔａ ｏｆ ｆａｃｔｏｒｓ ｇｒａｄｅｓ
水平 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
１ １ ３３ ３２ （３０，３）
２ １ ５ ３１ ３４ （３３，５）
３ ２ ２９ ３６ （３５，５）
２ ３ 正交设计试验结果
将预冻温度设定为－４０ ℃进行正交试验。 各组
试验以目检外观合格率、残余水分含量、复溶时间
作为试验结果，将结果使用正交设计助手软件进行
分析，直观分析结果见表 ７，方差分析结果见表８～
表 １０。
表 ７ 正交试验结果
Ｔａｂｌｅ ７ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ
编号
水平 试验结果
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ 外观合格率 ／ ％ 水分 ／ ％ 复溶时间 ／ ｍｉｎ
１ １ １ １ １ ８７ ３ ３ ７
２ １ ２ ２ ２ ８９ ２ ８ ６
３ １ ３ ３ ３ ９１ ２ ０ ５
４ ２ １ ２ ３ ９５ １ ９ ４
５ ２ ２ ３ １ ９３ ２ ３ ５
６ ２ ３ １ ２ ８９ ２ ６ ５
７ ３ １ ３ ２ ７１ ２ ７ ８
８ ３ ２ １ ３ ６５ ３ ５ １１
９ ３ ３ ２ １ ６８ ３ ２ ９
外观合格率
Ｋ１ ８９ ０００ ８４ ３３３ ８０ ３３３ ８２ ６６７
Ｋ２ ９２ ３３３ ８２ ３３３ ８４ ０００ ８３ ０００
Ｋ３ ６８ ０００ ８２ ６６７ ８５ ０００ ８３ ６６７
Ｒ ２４ ３３３ ２ ０００ ４ ６６７ １ ０００
水分
Ｋ１ ２ ７００ ２ ６３３ ３ １３３ ２ ９３３
Ｋ２ ２ ２６７ ２ ８６７ ２ ６３３ ２ ７００
Ｋ３ ３ １３３ ２ ６００ ２ ３３３ ２ ４６７
Ｒ ０ ８６６ ０ ２６７ ０ ８００ ０ ４６６
复溶时间
Ｋ１ ６ ０００ ６ ３３３ ７ ６６７ ７ ０００
Ｋ２ ４ ６６７ ７ ３３３ ６ ３３３ ６ ３３３
Ｋ３ ９ ３３３ ６ ３３３ ６ ０００ ６ ６６７
Ｒ ４ ６６６ １ ０００ １ ６６７ ０ ６６７
使用正交设计助手软件进行设计，由表 ７可知： 以外观合格率为衡量标准时，由各因素极差大小可
７７ 第 ５期 张丽铃等：人凝血因子Ⅷ制剂冻干工艺
知各因素主次关系（由主到次，下同）为 Ａ、Ｃ、Ｂ、Ｄ，
较优的冻干工艺为 Ａ２Ｂ１Ｃ３Ｄ３；以水分含量为衡量标
准时，各因素主次关系为 Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｂ，较优的冻干工
艺为 Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ３；以复溶时间为衡量标准时，各因素
主次关系为 Ａ、 Ｃ、 Ｂ、 Ｄ， 较优的冻干工艺为
Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ２ 或 Ａ２Ｂ１Ｃ３Ｄ２。 从上述 ３ 个指标分析均得
出同样的结果，即预冻的时间是最大的影响因素，
其次是主干燥的时间，主干燥温度和解吸的温度与
压力影响较小。
由方差分析表 ８ ～表 １０ 可知：以外观合格率为
衡量指标时，因素 Ａ（预冻时间）和因素 Ｃ（主干燥的
时间）有显著性影响，其他因素无显著统计学意义。
以复溶时间为衡量指标时，因素 Ａ（预冻时间） 有显
著性影响，相比之下，主干燥的温度、主干燥的时间、
解析温度与压力对水分残留量均无显著性影响。 将
Ａ２Ｂ１Ｃ３Ｄ３、Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ３、 Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ２ 及 Ａ２Ｂ１Ｃ３Ｄ２ 进行下
一步的对比优选实验。
表 ８ 外观合格率方差分析
Ｔａｂｌｅ ８ Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｅｌｉｇｉｂｉｌｉｔｙ
ｒａｔｅ ｉｎ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ
因素 偏差平方和 自由度 Ｆ比 Ｆ临界值 显著性
Ａ １０４４ ２２２ ２ ６７１ ０９４ １９ ０００ ∗
Ｂ ６ ８８９ ２ ４ ４２７ １９ ０００
Ｃ ３６ ２２２ ２ ２３ ２７９ １９ ０００ ∗
Ｄ １ ５５６ ２ １ ０００ １９ ０００
误差 １ ５６ ２
表 ９ 水分含量方差分析
Ｔａｂｌｅ ９ Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｃｏｎｔｅｎｔ
因素 偏差平方和 自由度 Ｆ比 Ｆ临界值 显著性
Ａ １ １２７ ２ ８ ８７４ １９ ０００
Ｂ ０ １２７ ２ １ ０００ １９ ０００
Ｃ ０ ９８０ ２ ７ ７１７ １９ ０００
Ｄ ０ ３２７ ２ ２ ５７５ １９ ０００
误差 ０ １３ ２
２ ４ 优选实验结果
４种较优的冻干工艺进行对比优选实验，结果
见表 １１。 从表 １１ 可知：Ａ２Ｂ１Ｃ３Ｄ３ 为最优的冻干工
艺方案，依照此方案冻干工艺进行验证实验。
表 １０ 复溶时间方差分析
Ｔａｂｌｅ １０ Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ ｔｉｍｅ
因素 偏差平方和 自由度 Ｆ比 Ｆ临界值 显著性
Ａ ３４ ６６７ ２ ５１ ９７５ １９ ０００ ∗
Ｂ ２ ０００ ２ ２ ９９９ １９ ０００
Ｃ ４ ６６７ ２ ６ ９９７ １９ ０００
Ｄ ０ ６６７ ２ １ ０００ １９ ０００
误差 ０ ６７ ２
表 １１ 优选实验结果
Ｔａｂｌｅ １１ Ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
冻干
工艺
外观合
格率 ／ ％
水分含
量 ／ ％
复溶时间 ／
ｍｉｎ
凝血因子
Ⅷ效价 ／
（ ＩＵ·瓶－１）
Ａ２Ｂ１Ｃ３Ｄ３ ９８ １ ６ ３ ２０５
Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ３ ９８ １ ５ ３ ３ ２００
Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ２ ９７ １ ５ ３ ５ ２０２
Ａ２Ｂ１Ｃ３Ｄ２ ９９ １ ８ ３ ３ ２０４
２ ５ 验证实验结果
表 １２ 为验证结果。 由表 １２ 可知：６ 次验证实
验冻干后的制品各项检定结果均符合《中国药典》
２０１０年版 ３ 部的要求［７］。 冷冻干燥可排除药品制
剂中 ９６％以上的水分，这样可以使干燥后的药品干
粉能长期保存而不变质［８］。 实验结果间误差较小，
表明该冻干工艺的稳定性良好，适用性强。
表 １２ 验证实验结果
Ｔａｂｌｅ １２ Ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｃｏｎｆｉｒｍａｔｏｒｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
批号 外观合格率 ／％
水分含量 ／
％
复溶时间 ／
ｍｉｎ
Ｓ２０１３０６０２ １ ９９ １ ５ ３
Ｓ２０１３０６０２ ２ ９９ １ ５ ３
Ｓ２０１３０６０２ ３ ９８ １ ４ ２
Ｓ２０１３０６０３ １ ９８ １ ６ ２
Ｓ２０１３０６０３ ２ ９９ １ ５ ３
Ｓ２０１３０６０３ ３ ９９ １ ５ ２
根据预冻时间，常将冻结方法分为快速冻结
法、缓慢冻结法和反复冻结法。 快速冻结法产生的
冰晶较小，间隙小，不利于升华干燥速度慢，但所得
产品均匀；缓慢冻结法产生的冰晶较大，利于升华
８７ 生 物 加 工 过 程 第 １２卷
干燥时水分的排出，但易造成喷瓶；反复冻结法，是
将产品冷冻到共晶点以下温度之后，进行回热处
理，可以变小结晶为大结晶，得到晶体间隙大的孔
隙率，从而提高干燥的效率，缩短干燥时间，但是容
易使产品结构发生变化［９］。
本工艺采用的是快速冻结法，采用一定的冻结
速度使制品迅速形成冰的网状结构，增加小颗粒的
冰品，从而使制品中组分分布均匀，冻后制品外观
好。 另外冻干过程是 １个复杂的相变过程，在冻结、
冻融、干燥和储存过程中，存在着多种诱导人凝血
因子Ⅷ变性的因素，因此须进一步研究使用保护剂
来稳定人凝血因子Ⅷ制剂。
３ 结 论
本试验采用简易的万用表电阻法来初步测定
人凝血因子Ⅷ药液的共晶点在－１０ ℃左右，因此设
定预冻温度为－４０ ℃。 此时生物制品可实现玻璃化
冻结，冰晶呈玻璃态，对制品的损伤较小。 在试验
中每批制品的总装量及瓶装量均一致，避免总装量
及瓶装量对冻干效果的影响。 通过正交实验得出
最佳冻干工艺为 Ａ２Ｂ１Ｃ３Ｄ３，即：－４０ ℃预冻 １ ５ ｈ；
主要干燥温度从－４０ ℃升温至－３３ ℃，再从－３３ ℃
升温至 ０ ℃，总耗时 ３６ ｈ，真空压力为 ３０ Ｐａ；解析温
度维持在３５ ℃，真空压力为 ５ Ｐａ，终点测试压力无
变化时结束。 在该工艺条件下冻干产品的外观合
格率可达到 ９８％以上，含水量仅为 １ ４％ ～１ ６％，复
溶时间只需 ２ ～ ３ ｍｉｎ，符合《中国药典》 ２０１０ 版要
求。 通过 ６次实验对该工艺进行验证，制品都得到
较好的冻干效果。 该研究得出的人凝血因子Ⅷ制
剂的冻干工艺，在生产中具有工艺稳定、可控的实
际意义，也将为研究其他冻干生物制品的冻干工艺
提供参考。
参考文献：
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［ ２ ］ 胡志青．环境参数测量的现状和前景［ Ｊ］ ．系统理论与实践，
２０００，２０（１）：３⁃５．
［ ３ ］ 卢锦汉，章以洁，赵瑾．医学生物制品学［Ｍ］．北京：人民卫生
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（责任编辑 周晓薇）
９７ 第 ５期 张丽铃等：人凝血因子Ⅷ制剂冻干工艺