全 文 ：第 １２卷第 ２期
２０１４年 ３月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ􀆰 １２ Ｎｏ􀆰 ２
Ｍａｒ􀆰 ２０１４
ｄｏｉ：１０􀆰 ３９６９ ／ ｊ􀆰 ｉｓｓｎ􀆰 １６７２－３６７８􀆰 ２０１４􀆰 ０２􀆰 ００９
收稿日期：２０１２－１０－１７
基金项目：国家自然科学基金（１０８７４１０８）；陕西省自然科学基础研究计划（ＳＪ０８Ａ１６）；２０１０国家级大学生创新实验计划（１０１０７１８１２）
作者简介：李佳媚（ １９８８—），女，陕西宝鸡人，硕士研究生，研究方向：天然产物有效成分的化学研究；孙润广（联系人），教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：
ｓｕｎｒｕｎｇｕａｎｇ＠ ｓｎｎｕ􀆰 ｅｄｕ􀆰 ｃｎ
滑子菇多糖的体外生物活性初步研究
李佳媚１，２，孙润广１，郭国赟１，张　 智１
（１􀆰 陕西师范大学 物理学与信息技术学院，西安 ７１００６２； ２􀆰 陕西服装工程学院，咸阳 ７１２０４６）
摘　 要：为了研究滑子菇水提粗多糖（ＰＮＰ）的体外生物活性，对滑子菇多糖的总还原力、清除 １，１ 二苯基 ２ 苦
苯肼自由基（ＤＰＰＨ·）和由 Ｆｅ２＋诱发的脂质过氧化反应的抑制作用进行研究，采用 ＭＴＴ比色法和胎盘蓝细胞计数
检测对滑子菇水提粗多糖的体外抑制 Ｋ５６２细胞生长作用进行了研究，采用流失细胞术对滑子菇多糖作用人白血
病 Ｋ５６２细胞后的细胞周期进行了研究。 结果表明：滑子菇水提粗多糖 ＰＮＰ 具有一定的还原能力；在高质量浓度
（８００ μｇ ／ ｍＬ）时具有接近于 Ｖｃ清除 ＤＰＰＨ·的能力，达 ４１􀆰 ２８％；ＰＮＰ 对 Ｆｅ２＋诱发的脂质过氧化反应具有一定的抑
制作用，并且随着浓度的增加抑制作用逐渐增强，但总的增长趋势不大；ＭＴＴ实验表明 ＰＮＰ 对 Ｋ５６２细胞的体外增
长有抑制作用，在质量浓度为 ８００ μｇ ／ ｍＬ和作用时间为 ４８ ｈ时，可达到最高的抑制率 ３５􀆰 ０３％。 流式细胞术对细胞
周期的检测表明滑子菇多糖能够阻滞人白血病 Ｋ５６２细胞于 Ｇ１期。
关键词：抗氧化；抗肿瘤；滑子菇；滑子菇多糖
中图分类号：Ｑ５３；Ｒ７３　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１４）０２－００４４－０７
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ｆｒｏｍ Ｐｈｏｌｉｏｔａ ｎａｍｅｋｏ
ＬＩ Ｊｉａｍｅｉ１，２，ＳＵＮ Ｒｕｎｇｕａｎｇ１，ＧＵＯ Ｇｕｏｙｕｎ１，ＺＨＡＮＧ Ｚｈｉ１
（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃｓ ａｎｄ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａａｎｘｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ′ａｎ ７１００６２，Ｃｈｉｎａ；
２． Ｓｈａａｎｘｉ Ｆａｓｈｉｏｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉａｎｙａｎｇ ７１２０４６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｕｎｇｕｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｈａｄ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ，Ｐｈｏｌｉｏｔａ ｎａｍｅｋｏ ｗａｓ ｐｌａｎｔ
ｆｕｎｇｕｓ ｏｆ ｅｄｉｂｌｅ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｖａｌｕｅ． Ｗａｔｅｒ⁃ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｃｒｕｄｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｆ Ｐｈｏｌｉｏｔａ ｎａｍｅｋｏ， ｗｅｒｅ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ． Ｔｈｅｉｒ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ＤＰＰＨ ｍｅｔｈｏｄ， ｔｈｅ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｂｙ Ｆｅ２＋
ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ ＭＴＴ ａｓｓａｙ，ａｎｄ ｐｌａｃｅｎｔａ ｂｌｕｅ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ􀆰 Ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ
ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＰＮＰ ｏｎ Ｋ５６２ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ􀆰 Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＰＮＰ ｈａｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ＤＰＰＨ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｔｈａｔ ｏｆ Ｖｃ ｏｎ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ􀆰 ＰＮＰ ｈａｄ
ａｃｔｉｏｎｓ ｏｎ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ􀆰 ＭＴＴ
ａｓｓａｙ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＰＮＰ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｋ５６２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ，ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｄｏｓｅ⁃ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｄ ｔｉｍｅ⁃
ｂａｓｅｄ ｅｆｆｅｃｔ，ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｓ ３５􀆰 ０３％ ｗｈｅｎ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＰＮＰ ｉｎ ８００ μｇ ／ ｍＬ ｆｏｒ ４８ ｈ􀆰 Ｉｎ
ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＰＮＰ ｃｏｕｌｄ ｂｌｏｃｋ ｔｈｅ Ｋ５６２ ｃｅｌｌ ｉｎ
Ｇ１ ｐｈａｓｅ􀆰
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ；ａｎｔｉｔｕｍｏｒ；Ｐｈｏｌｉｏｔａ ｎａｍｅｋｏ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
　 　 多糖是自然界中含量最丰富的生物大分子物
质，具有储存能量、构成生物体结构物质、抗病毒、
抗衰老等功能，有些多糖还是非特异性的免疫增强
剂，具有免疫调节和抗肿瘤的生物活性［１－２］。 生物
体在新陈代谢过程中会不断地产生自由基，包括单
线态氧和过氧自由基等活性氧，这些活性氧能与体
内的生物大分子，诸如 ＤＮＡ、蛋白质或者脂质发生
反应从而削弱它们的功能，从而引发许多种疾病如
癌症、心脑血管疾病的发生［３］。
植物多糖具有强抗氧化活性，菌类中的香菇多
糖、灵芝多糖、冬虫夏草多糖等具有自由基清除能
力，从而表现出抗氧化特性，因此此类天然的抗氧
化剂可以有效地保护人体免受自由基伤害，防止一
些慢性疾病的发生［４］。 寻找有抗氧化活性和抗肿
瘤活性的天然化合物具有重要的科学意义。
滑子菇又叫作珍珠菇、滑菇，是一种重要的真
菌，属于珍稀品种，在植物学分类上属真菌门、担子
菌亚门、散菌目、盖球菇科、磷伞属，是集食用和药
用一体的菌类植物［５］。 滑子菇多糖是滑子菇的主
要成分之一，笔者主要运用热水提醇沉法从滑子菇
中提取多糖，从体外抗氧化活性和体外抑制肿瘤细
胞生长作用两方面对滑子菇多糖的体外生物活性
进行研究，以期为功能食品的开发和利用提供实验
依据和理论参考，具有重要的生物学意义和潜在的
应用前景。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 材料与试剂
１􀆰 １􀆰 １　 材料
滑子菇水提多糖（ＰＮＰ），由陕西师范大学生物
物理与生物医学工程研究室制备；Ｋ５６２ 细胞来自中
国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。
１􀆰 １􀆰 ２　 试剂
无支原体新生牛血清，浙江天杭生物科技有限
公司；ＲＰＭＩ Ｍｅｄｉｕｍ １６４０，美国 Ｇｉｂｃｏ 公司；ＭＴＴ，美
国 Ａｍｒｅｓｃｏ公司；ＤＭＳＯ、医用酒精、１，１ 二苯基 ２
苦苯肼自由基（ＤＰＰＨ·）、硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）、牛
血清蛋白（ＢＳＡ）、ＲＮａｓｅ，碘化吡啶（ＰＩ）均为国产分
析纯试剂；实验所用水均为三次蒸馏水。
１􀆰 ２　 仪器
Ｏｌｙｍｐｕｓ ＴＨ４ ２００型倒置显微镜，日本奥林巴
斯公司；ＨＨ·ＣＰ ０１Ｗ 型 ＣＯ２ 细胞培养箱，上海博
讯事业有限公司医疗设备厂；ＹＰ６０１Ｎ 型电子天平，
上海精密科学仪器有限公司；ＴＤＬ８０ ２Ｂ 型台式离
心机，上海安亭科学仪器厂；超净工作台、ＤＧ５０３２
型酶联免疫检测仪，南京华东电子集团医疗仪器设
备有限责任公司；ＳＺ ９７ 型自动三重纯水蒸馏器，
上海亚荣生化仪器厂；ＣＦ１６ＲＸ 型高速离心机，日本
日立公司；ＴＵ １８１０ 型紫外可见分光光度计，北京
谱析通用仪器有限责任公司；ＨＨ ４ 型数显恒温水
浴锅，上海浦东物理光学仪器厂；血球计数板，上海
市求精生化试剂仪器有限公司。
１􀆰 ３　 试验方法
１􀆰 ３􀆰 １　 滑子菇多糖的制备
滑子菇多糖采用热水提醇沉的方法制备。
１􀆰 ３􀆰 ２　 Ｋ５６２细胞的培养
人白血病细胞系 Ｋ５６２ 培养在含有 １０％（体积
分数）小牛血清和 １００ ＩＵ 双抗 （青、链霉素）的
ＲＰＭＩ １６４０溶液中，在 ５％ＣＯ２、饱和湿度、３７ ℃环境
下生长，取处于生长对数期的细胞进行试验。
１􀆰 ３􀆰 ３　 滑子菇多糖总还原能力的测定
采用铁氰化钾还原法测定滑子菇多糖的总还
原能力［６］，１ ｍＬ 不同质量浓度的滑子菇多糖 ＰＮＰ
溶液和抗坏血酸 Ｖｃ 溶液（２５、５０、１００、２００、４００ 和
８００ μｇ ／ ｍＬ）中依次加入 ｐＨ为 ６􀆰 ６的磷酸盐缓冲液
２􀆰 ５ ｍＬ和 １％的铁氰化钾 ２􀆰 ５ ｍＬ 摇匀，置于 ５０ ℃
恒温水浴中反应 ２０ ｍｉｎ 后取出快速冷却，随后加入
１０％三氯乙酸（ＴＣＡ）溶液 ２􀆰 ５ ｍＬ，４ ０００ ｒ ／ ｍｉｎ、４ ℃
条件下离心 １０ ｍｉｎ，取上清液 ２􀆰 ５ ｍＬ，加入 ２􀆰 ５ ｍＬ
蒸馏水和 ０􀆰 ５ ｍＬ 的 １％ＦｅＣｌ３ 溶液，混合均匀后静
置 １０ ｍｉｎ，７００ ｎｍ波长下测吸光度值（Ａ７００），试样还
原能力与 Ａ７００值成正比。
１􀆰 ３􀆰 ４　 滑子菇多糖清除 １，１ 二苯基 ２ 苦苯肼自
由基（ＤＰＰＨ·）能力的测定
参照陈奕等［７］的方法，称取一定量的 ＤＰＰＨ·用
少量无水乙醇溶解，然后用 ５０％ 乙醇配成 ３０
μｍｏｌ ／ Ｌ的溶液，取 ２ ｍＬ ＤＰＰＨ 溶液，分别加入 ０􀆰 ２
ｍＬ 不同质量浓度 （ ２５、 ５０、 １００、 ２００、 ４００ 和 ８００
μｇ ／ ｍＬ）的滑子菇水提粗多糖溶液和 Ｖｃ溶液（Ｖｃ为
阳性对照）中，摇匀，放入 ２５ ℃恒温水浴中反应 １５
ｍｉｎ后取出，测定 ５２５ ｎｍ 波长下的吸光值 ＯＤ，以
０􀆰 ２ ｍＬ ５０％乙醇代替试样作为空白对照管，以 ２ ｍＬ
５０％乙醇代替 ＤＰＰＨ 溶液作为试样参比管，并以等
体积蒸馏水和 ５０％乙醇混合液空白调零，按照同样
的方法测定 ５２５ ｎｍ波长下的吸光值，试样对ＤＰＰＨ·
的清除作用按式（１）计算。
５４　 第 ２期 李佳媚等：滑子菇多糖的体外生物活性初步研究
清除率 ＝
１ － （Ａｉ － Ａ ｊ）
Ａｃ
× １００％ （１）
式中：Ａｉ 为试样管的吸光值；Ａ ｊ为试样参比管的吸光
值；Ａｃ为空白对照管吸光值。
１􀆰 ３􀆰 ５　 滑子菇多糖对 Ｆｅ２＋诱发的脂质过氧化反应
的抑制作用
参照张尔贤等［８］的方法，取 ｐＨ ７􀆰 ４５ 磷酸盐缓
冲液 （ＰＢＳ） ０􀆰 １ ｍｏｌ ／ Ｌ 配制卵黄悬液［Ｖ（卵黄） ∶
Ｖ（ＰＢＳ）＝ １ ∶２５］，吸取卵黄悬液 ０􀆰 ２ ｍＬ，分别加入
０􀆰 １ ｍＬ 不同质量浓度（２５、５０、１００、２００、４００ 和 ８００
μｇ ／ ｍＬ）的滑子菇水提粗多糖溶液和抗坏血酸 Ｖｃ
溶液 （ Ｖｃ 为阳性对照） 中，再加入 ０􀆰 ２ ｍＬ ２５
ｍｍｏｌ ／ Ｌ的 ＦｅＳＯ２溶液，然后加入 １􀆰 ５ ｍＬ ０􀆰 １ ｍｏｌ ／ Ｌ
ｐＨ ７􀆰 ４５的 ＰＢＳ，３７ ℃恒温振荡 １５ ｍｉｎ，取出后加入
０􀆰 ５ ｍＬ ２００ ｇ ／ Ｌ 的三氯乙酸（ＴＣＡ），３ ５００ ｒ ／ ｍｉｎ 离
心 １０ ｍｉｎ，吸取 ２ ｍＬ上清液加入 ８ ｇ ／ Ｌ ＴＢＡ １ ｍＬ，
加塞，放入沸水浴中 １５ ｍｉｎ，冷却后，以空白管（３
ｍＬ ＰＢＳ 代替）调零，于 ５３２ ｎｍ 处比色测定吸光度
值，以 ０􀆰 １ ｍＬ蒸馏水代替试样作为空白对照管，按
同样处理方法测定 ５３２ ｎｍ波长下的吸光值，试样抗
氧化活性（ＡＯＡ）用对卵黄脂蛋白脂质过氧化的清
除率按式（２）计算。
清除率 ＝
Ａ０ － Ａ
Ａ０
× １００％ （２）
式中：Ａ０为空白对照管吸光值；Ａ为试样管吸光值。
１􀆰 ３􀆰 ６　 ＭＴＴ 法检测滑子菇多糖对 Ｋ５６２ 细胞的体
外增殖活性
取处于对数生长期的状态良好的 Ｋ５６２ 细胞，
调整细胞密度为 ５×１０４ 个 ／ ｍＬ接种到 ９６孔板中，每
孔 １００ μＬ细胞悬液，放入 ３７ ℃、５％ ＣＯ２和饱和湿
度环境下培养 ２４ ｈ 后，调零孔和对照组，每孔加入
１００ μＬ 无血清培养基溶液，实验组每孔加入 ＰＮＰ
溶液（质量浓度分别为 ２５、５０、１００、２００、４００ 和 ８００
μｇ ／ ｍＬ），每组做 ６ 个平行，继续分别培养 ２４、４８ 和
７２ ｈ后，每孔加入 ５ ｍｇ ／ ｍＬ的ＭＴＴ溶液 ２０ μＬ放入
孵箱培养 ４ ｈ，１ ０００ ｒ ／ ｍｉｎ离心 ５ ｍｉｎ，弃去上清液，
每孔加入 １８０ μＬ 的 ＤＭＳＯ，轻微振荡 １５ ｍｉｎ，用酶
联免疫检测仪在 ４９２ ｎｍ下测光吸收值 ＯＤ。 按照式
（３）计算细胞增殖抑制率。
细胞增殖抑制率 ＝ ［（对照组 Ａ 值－实验组 Ａ
值） ／对照组 Ａ值］ ×１００％ （３）
１􀆰 ３􀆰 ７　 台盼蓝细胞计数检测细胞存活率
质量浓度分别为 ２５、５０、１００、２００、４００ 和 ８００
μｇ ／ ｍＬ且处理过的 Ｋ５６２ 细胞悬液与 ０􀆰 ４％台盼蓝
以体积比 ９ ∶１的比例混合，３ ｍｉｎ 内利用血球计数板
计数。
１􀆰 ３􀆰 ８　 细胞周期检测实验
取处于对数生长期的状态良好的 Ｋ５６２ 细胞，
调整细胞密度为 ５×１０４个 ／ ｍＬ 接种到 ２４ 孔板中，放
入 ３７ ℃，５％ ＣＯ２和饱和湿度环境下培养 ２４ ｈ后，对
照组加入无血清培养基溶液，实验组每孔加入 ＰＮＰ
溶液（质量浓度分别为 ２５、５０、１００、２００、４００ 和 ８００
μｇ ／ ｍＬ），继续培养 ４８ ｈ；随后将孔板内的细胞悬液
分别收集于 ＥＰ 管中，１ ０００ ｒ ／ ｍｉｎ 转速下离心 ５
ｍｉｎ，弃去上清液，底层沉淀用预冷的 ＰＢＳ（含 １％
ＢＳＡ）清洗 ２次，将细胞重悬于 ５００ μＬ 的 ＰＢＳ 缓冲
液中，混合均匀后逐滴加入预冷的 ７０％乙醇，４ ℃条
件下固定过夜；将固定之后的细胞离心弃去上清
液，ＰＢＳ（含 １％ＢＳＡ）清洗 ２ 次，将细胞重悬于 ５００
μＬ的 ＰＢＳ中，加入 ５ μＬ的 ＲＮａｓｅ Ａ（１０ ｍｇ ／ ｍＬ）在
３７ ℃条件下避光反应 ３０ ｍｉｎ后置冰浴终止反应，加
入 ２５ μＬ ＰＩ（碘化吡啶）染色，４ ℃避光反应 ３０ ｍｉｎ，
上流式细胞仪检测。
２　 结果与讨论
２􀆰 １　 滑子菇水提粗多糖总还原力的测定
滑子菇水提粗多糖 ＰＮＰ 和阳性对照组 Ｖｃ 在
７００ ｎｍ波长下的吸光度值如图 １所示。
图 １　 ＰＮＰ的还原能力
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＰＮＰ
由图 １ 可以看出：滑子菇水提粗多糖有一定的
还原能力，且其还原能力随着多糖质量浓度的增大
而增强，但是其还原能力远低于 Ｖｃ，一般而言，物质
的还原能力越强其抗氧化能力也越强，由此说明滑
子菇水提粗多糖具有较弱的还原能力。
６４ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １２卷　
２􀆰 ２　 滑子菇水提粗多糖对 ＤＰＰＨ·的清除作用
　 　 ＤＰＰＨ·在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其
醇溶液呈深紫色，具有单一的电子，故能够接受一
个电子或是 Ｈ＋，在 ５１４ ｎｍ波长处有最大吸收峰，当
存在自由基清除剂时，ＤＰＰＨ·的单电子被捕捉从而
使其颜色变浅，因而在 ５１４ ｎｍ 处的吸光值亦下降，
从而可以用来评价化合物的抗氧化能力［９］。 滑子
菇水提粗多糖对 ＤＰＰＨ·的清除作用结果见图２。
图 ２　 滑子菇水提粗多糖对 ＤＰＰＨ·的清除作用
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＰＮＰ ｏｎ ＤＰＰＨ·
由图２可以看出：滑子菇水提粗多糖对 ＤＰＰＨ·具
有一定的清除作用，且随着多糖质量浓度增加，清除
作用也随之增强，当多糖质量浓度增加到 ８００ μｇ ／ ｍＬ
时，滑子菇水提粗多糖对 ＤＰＰＨ·清除率与抗坏血酸
对 ＤＰＰＨ·的清除率相接近，达到 ４１􀆰 ２８％。 表明水提
滑子菇多糖中存在一个捕获 ＤＰＰＨ·的单电子的基
团，可以将其单电子捕捉，达到清除 ＤＰＰＨ·的作用，
从而使其颜色变浅，使在 ５１４ ｎｍ处的吸光值下降。
２􀆰 ３　 滑子菇水提粗多糖对 Ｆｅ２＋诱发的脂质过氧化
反应的抑制作用
　 　 滑子菇水提粗多糖对 Ｆｅ２＋诱发的脂质过氧化反
应的抑制作用见图 ３。 脂质过氧化反应被认为是与
肝脏亚细胞水平和组织水平损伤有关，虽然有证据
表明脂质过氧化不会造成细胞死亡，但是它仍然会
对肝脏损伤产生协同放大作用［１０］。 且脂质过氧化
反应是细胞膜多不饱和脂肪酸发生的一系列自由
基链式反应，与衰老、自身免疫疾病、肝损伤等很多
疾病的发生、发展有关，脂质过氧化反应具有组织
特异性，严重威胁着大脑、心脏、肝脏等器官，如果
存在抗氧化剂，便可通过清除过氧化产物来阻断链
式反应的发生，从而阻止脂质过氧化［１１］。
由图 ３可以看出：滑子菇水提粗多糖具有抑制由
Ｆｅ２＋诱发的脂质过氧化反应的活性，且随着多糖质量
浓度的增加，抑制活性逐渐增强，但总体增强的幅度
图 ３　 滑子菇水提粗多糖的抗脂质过氧化能力
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＰＮＰ ｏｎ ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ
不是很大。 在多糖质量浓度为 ８００ μｇ ／ ｍＬ 时抑制率
达到 １９􀆰 ７２％。 实验结果表明，水提滑子菇多糖中含
有一定量的清除过氧化产物的基团，能够在一定程度
上抑制由 Ｆｅ２＋诱发的脂质过氧化反应。
２􀆰 ４　 滑子菇水提粗多糖对 Ｋ５６２ 细胞的生长抑制
活性
　 　 实验结果用（ ｘ ± ｓ）表示，用统计学分析软件
ＳＰＳＳ１８􀆰 ０进行分析；多组间差异的显著性分析用单
因素方差法进行分析（Ｏｎｅ⁃ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）。
真菌多糖对肿瘤具有直接的细胞毒性，它们可以
抑制肿瘤细胞增殖，诱导分化和细胞凋亡，影响肿瘤
细胞膜的生化特性，并且抑制肿瘤血管形成，同时还
可增强机体免疫功能从而间接地抑制肿瘤生长［１２］。
图 ４为滑子菇水提粗多糖对人白血病 Ｋ５６２ 细
胞的体外增殖抑制作用结果。 由图 ４ 可知：作用时
间为 ２４ ｈ 时，抑制人白血病的 Ｋ５６２ 细胞体外生长
作用较弱，低质量浓度（２５ ～ ２００ μｇ ／ ｍＬ）时抑制作
用与对照组相比没有显著性差异，质量浓度为 ４００
和 ８００ μｇ ／ ｍＬ时抑制作用显著，由于多糖与细胞的
作用时间较短，多糖的抑制活性没有完全表现出
来，因此对 Ｋ５６２ 细胞的生长起到了较弱的抑制作
用；当作用时间延长至 ４８ ｈ时，ＰＮＰ 对 Ｋ５６２细胞的
抑制作用明显增大，在 １００～８００ μｇ ／ ｍＬ质量浓度范
围内抑制作用与阴性对照组相比有显著性差异，在
质量浓度为 ８００ μｇ ／ ｍＬ 时抑制率达到最大为
３５􀆰 ０３％。 赵俊霞等［１３］的研究表明滑子菇多糖能诱
导 Ｋ５６２ 细胞出现典型的凋亡形态，可诱导凋亡相
关基因 Ｃａｓｐａｓｅ ３ 在 ｍＲＮＡ水平上的表达，从而达
到抑制 Ｋ５６２细胞增殖的作用；当作用时间为 ７２ ｈ
时，ＰＮＰ 对 Ｋ５６２细胞生长不再具有抑制作用，魏文
青等［１４］的研究表明肿瘤药物对肿瘤细胞的生长具
有一个最佳的作用时间，在最佳作用时间之前，抑
７４　 第 ２期 李佳媚等：滑子菇多糖的体外生物活性初步研究
制作用随着作用时间的增加而增强，超过这个最佳 作用时间后，抑制作用随着时间的增长而减弱。
表 １　 滑子菇水提粗多糖ＭＴＴ的试验结果
Ｔａｂｌｅ １　 ＭＴＴ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＰＮＰ
组别 ρ（ＰＮＰ） ／（μｇ·ｍＬ－１）
Ａ４９２值
２４ ｈ ４８ ｈ ７２ ｈ
阴性对照组 ０ ０􀆰 ５８９ ６±０􀆰 ０２７ ２ ０􀆰 ４９６ ８±０􀆰 ０７９ ３ ０􀆰 ８２２ ０±０􀆰 ０３４ ５
１ ２５ ０􀆰 ５７５ ５±０􀆰 ０４０ ８ ０􀆰 ４７７ ８±０􀆰 ０５２ ２ ０􀆰 ９０７ ０±０􀆰 ０２７ ６∗
２ ５０ ０􀆰 ５６４ ５±０􀆰 ０４０ ５ ０􀆰 ４６３ ５±０􀆰 ０５７ ６ ０􀆰 ９０２ ５±０􀆰 ０４３ ９∗
３ １００ ０􀆰 ５５１ ５±０􀆰 ０４７ ３ ０􀆰 ４２５ ８±０􀆰 ０２６ ０∗ ０􀆰 ８８９ ８±０􀆰 ０１７ ２
４ ２００ ０􀆰 ５５０ ８±０􀆰 ０３９ ５ ０􀆰 ４００ ０±０􀆰 ０２６ ２∗ ０􀆰 ８７２ ５±０􀆰 ０９８ ７
５ ４００ ０􀆰 ５３５ ８±０􀆰 ０４９ ８∗ ０􀆰 ３４６ ５±０􀆰 ０５４ ７∗∗ ０􀆰 ８５３ ０±０􀆰 ０４８ １
６ ８００ ０􀆰 ５０２ ０±０􀆰 ０１０ ９∗∗ ０􀆰 ３２２ ８±０􀆰 ０６４ ５∗∗ ０􀆰 ７９６ ０±０􀆰 ０６５ ８
　 　 　 注：与阴性对照组比较，∗Ｐ＜０􀆰 ０５；∗∗Ｐ＜０􀆰 ０１。
图 ４　 不同质量浓度 ＰＮＰ作用 Ｋ５６２细胞 ２４、
４８和 ７２ ｈ后的细胞抑制率
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｋ５６２ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＰＮＰ
ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ２４，４８ ａｎｄ ７２ ｈ
２􀆰 ５　 胎盘蓝细胞计数结果
Ｋ５６２细胞在含有不同浓度的滑子菇多糖的培
养液中分别培养 ２４、４８和 ７２ ｈ 后计数，由图 ５ 可以
看出，计数结果表明：在 ２４ 和 ４８ ｈ 时细胞生长受到
抑制，并且随着多糖浓度的增加细胞数量逐渐减
少，到 ７２ ｈ时基本没有影响，该结果与 ＭＴＴ 实验结
果相一致（表 １）。
２􀆰 ６　 细胞周期检测实验结果
细胞周期分为间期和分裂期（Ｍ 期）２ 个阶段，
间期又分为 ＤＮＡ合成前期（Ｇ１期）、ＤＮＡ合成期（Ｓ
期）和 ＤＮＡ合成后期（Ｇ２ 期），根据有丝分裂细胞
在各个时期 ＤＮＡ 含量的不同，用 ＤＮＡ 染料处理细
胞后就可以将细胞周期区分开来。 不同浓度的滑
子菇多糖作用细胞 ４８ ｈ后对 Ｋ５６２细胞周期的影响
如图 ６ 和表 ２ 所示。 由图 ６ 和表 ２ 可知：与对照组
图 ５　 滑子菇多糖 ＰＮＰ对人白血病 Ｋ５６２
细胞生长曲线的影响
Ｆｉｇ􀆰 ５　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＰＮＰ ｏｎ Ｋ５６２ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｃｕｒｖｅｓ
相比，实验组的 Ｓ 期细胞明显减少，Ｇ２ 期细胞随着
多糖质量浓度的增加先增多随后有减少，而 Ｇ１ 期
的细胞明显增加，表明滑子菇多糖阻滞细胞的周期
在 Ｇ１期。
表 ２　 滑子菇多糖对 Ｋ５６２细胞周期的影响
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＰＮＰ ｏｎ Ｋ５６２ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ
ρ（ＰＮＰ） ／
（μｇ·ｍＬ－１）
不同周期的细胞占总细胞量 ／ ％
Ｇ１期 Ｓ期 Ｇ２期
对照 ４１􀆰 ７５ ５８􀆰 ２５ ０
２５ ７６􀆰 ７４ ０ ２３􀆰 ２６
５０ ９９􀆰 ５１ ０ ０􀆰 ４９
１００ １００ ０ ０
２００ １００ ０ ０
４００ １００ ０ ０
８００ １００ ０ ０
８４ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １２卷　
图 ６　 ＰＮＰ作用 Ｋ５６２细胞 ４８ ｈ后细胞周期的检测结果
Ｆｉｇ􀆰 ６　 Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＰＮＰ ｏｎ Ｋ５６２ ａｆｔｅｒ ４８ ｈ
２􀆰 ７　 光学显微镜观察
图 ７ （ ａ ～ ｇ）分别为 ２５、５０、１００、２００、４００ 和
８００ μｇ ／ ｍＬ 的滑子菇水提粗多糖处理人白血病
Ｋ５６２ 细胞 ４８ ｈ 后和空白对照组 Ｋ５６２ 细胞的倒
置荧光显微镜观察图。 从图 ７ 可以观察到：随着
滑子菇水提粗多糖质量浓度的增加，细胞密度和
数量发生了显著变化。 正常生长状态下的人白
血病 Ｋ５６２ 细胞成规则的圆球状，分布均匀，细胞
接触紧密，生长速度快。 图 ７ 中滑子菇水提粗多
糖作用 ４８ ｈ 后，随着质量浓度的增加细胞密度逐
渐下降，细胞形态发生了改变，部分细胞体积增
大，有些细胞甚至发生溶解破裂。 说明 Ｋ５６２ 细
胞加入滑子菇水提粗多糖后细胞生长受到抑制
并且发生形态变化，分析可能的原因是滑子菇多
糖可以诱导癌细胞凋亡并且具有细胞毒性，从而
影响肿瘤细胞膜表面的生化特性，抑制了肿瘤细
胞的增殖。
９４　 第 ２期 李佳媚等：滑子菇多糖的体外生物活性初步研究
图 ７　 滑子菇水提粗多糖与 Ｋ５６２细胞作用 ４８ ｈ后倒置显微镜观察图
Ｆｉｇ􀆰 ７　 Ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｉｍａｇｅｓ ｏｆ ＰＮＰ ｏｎ Ｋ５６２
３　 结　 论
主要对滑子菇水提粗多糖的体外生物活性进
行了研究，通过实验可以得出滑子菇水提粗多糖具
有很好的抗氧化能力；并且具有一定的还原能力；
当多糖质量浓度为 ８００ μｇ ／ ｍＬ 时，滑子菇水提粗多
糖对 ＤＰＰＨ·的清除作用接近于抗坏血酸，达到
４１􀆰 ２８％的抑制效果；滑子菇水提粗多糖还具有抑制
脂质过氧化的作用，当多糖的质量浓度为 ８００
μｇ ／ ｍＬ时达到最高抑制率 １９􀆰 ７２％；同时滑子菇水提
粗多糖对 Ｋ５６２细胞的体外增殖具有显著的抑制作
用，在多糖质量浓度为 ８００ μｇ ／ ｍＬ与作用时间为 ４８
ｈ时，抑制率最高可达到 ３５􀆰 ０３％，同时滑子菇多糖
能够阻滞人白血病 Ｋ５６２ 细胞周期于 Ｇ１ 期。 综合
表明滑子菇水提粗多糖有较好的体外生物活性，为
研究开发滑子菇多糖提供了一定的实验依据。
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（责任编辑　 周晓薇）
０５ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １２卷