全 文 ：第９卷第１期
２０１１年１月
生 物 加 工 过 程
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ．９Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２０１１
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－３６７８．２０１１．０１．００１
收稿日期：２０１０－０７－２６
基金项目：国家自然科学基金资助项目（２０８７６０７８）；国家高技术研究发展计划（８６３计划）资助项目（２００９ＡＡ０２Ｚ０８）；ＮＳＦＣ 广东联合基金项目
（Ｕ０７３３００１）；中石化项目（２０７０３５）
作者简介：张红漫（１９６８—），女，四川自贡人，博士，副教授，研究方向：生物质能源、现代分离分析及代谢组学，Ｅｍａｉｌ：ｈｍｚｈａｎｇ＠ｎｊｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ
中和剂对稀酸蒸爆玉米秸秆酶解效果的影响
张红漫１，赵 晶１，林增祥２，黄 和２
（１．南京工业大学 理学院，南京 ２１０００９；２．南京工业大学 生物与制药工程学院，南京 ２１０００９）
摘 要：以稀酸蒸爆的玉米秸秆为研究对象，考察直接水洗、Ｃａ（ＯＨ）２、ＮａＯＨ、氨水中和物料至ｐＨ５，在固液比１∶１０、酶添
加量为每克纤维素１４Ｕ（滤纸酶活）的酶解条件下对纤维素转化率的影响。结果表明：水洗、Ｃａ（ＯＨ）２、ＮａＯＨ、氨水中和物
料酶解７２ｈ后，纤维素转化率分别为９１７％、８０７％、８３１％及８１７％。同时对影响纤维素酶解效率的各种因素进行了探
讨。从综合成本及后续发酵过程考虑，用氨水中和稀酸蒸爆物料更适合于工业化生产。
关键词：玉米秸秆；酶水解；中和；蒸爆
中图分类号：Ｑ５５６ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－３６７８（２０１１）０１－０００１－０４
Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｇｅｎｔｓｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｃｏｒｎ
ｓｔｏｖｅｒｐｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｄｉｌｕｔｅａｃｉｄｍｅｄｉａｔｅｄｓｔｅａｍｅｘｐｌｏｓｉｏｎ
ＺＨＡＮＧＨｏｎｇｍａｎ１，ＺＨＡＯＪｉｎｇ１，ＬＩＮＺｅｎｇｘｉａｎｇ２，ＨＵＡＮＧＨｅ２
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ；
２．ＣｏｌｅｇｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｏｒｎｓｔｏｖｅｒｓｐｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｄｉｌｕｔｅｓｕｌｐｈｕｒｉｃａｃｉｄｍｅｄｉａｔｅｄｓｔｅａｍｅｘｐｌｏｓｉｏｎｗｅｒｅｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｄｔｏ
ｐＨ５ｗｉｔｈＣａ（ＯＨ）２，ＮａＯＨａｎｄＮＨ４ＯＨ，ｏｒａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｌｙｗａｓｈｅｄｗｉｔｈｗａｔｅｒｔｏｔｈｅｓａｍｅｐＨ．Ｔｈｅｃｅｌｕ
ｌｏｓｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｒａｔｅｓｂｙｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｓｏｌｉｄｅｌｉｑｕｉｄｒａｔｉｏｏｆ１∶１０ａｎｄｃｅｌｕ
ｌａｓｅｓｌｏａｄｉｎｇｏｆ１４Ｕ／ｇｃｅｌｕｌｏｓｅｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｆｔｅｒｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｆｏｒ
７２ｈ，ｔｈｅｃｅｌｕｌｏｓｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｒａｔｅｓｏｆｔｈｅｃｏｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｕｐｔｏ９１７％，８０７％，８３１％
ａｎｄ８１７％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｖａｒｉｏｕｓｆａｃｔｏｒｓｏｎｔｈｅｅｆｉｃｅｎｃｙｏｆｃｅｌｕｌａｓｅｈｙｓｒｏｌｙｓ
ｉｓｗｅｒｅａｌｓｏｄｉｓｃｕｓｓｅｄ．Ｃｏｎｓｉｄｅｒｉｎｇｔｈｅｃｏｓｔａｎｄｆｏｌｏｗｉｎｇｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ，ｔｈｅｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ
ＮＨ４ＯＨｗａｓｔｈｅｃｈｏｉｃｅｆｏｒｔｈｅｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｉｚａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｏｒｎｓｔｏｖｅｒ；ｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ；ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ；ｓｔｅａｍｅｘｐｌｏｓｉｏｎ
木质纤维素原料（如秸秆、蔗渣等）经预处理、
酶解及发酵后，用于生产燃料乙醇是目前备受关注
的研究热点［１］。稀酸蒸爆预处理是一种非常有效
的预处理方法，通过稀酸气爆，可将纤维素、半纤维
素和木质素进行分离，打破纤维素的结晶结构，提
高纤维素酶的可及性，使纤维素酶能渗透进纤维素
结构中，从而有效地提高纤维素的酶解效率［２］。但
稀酸蒸爆后的物料酸度较高，需要中和以利于后续
的酶解过程，如果直接用水洗涤至酶解最佳酸度，
则需消耗大量的水，不仅造成水资源的浪费，同时
工业化生产的实际成本较高，因此需加入中和试剂
来获得所需的酸度条件。本文以中试规模得到的
稀酸蒸爆玉米秸秆实际物料为研究对象，考察采用
不同中和试剂中和物料后对纤维素酶解的影响，以
期为工业化实际生产提供基础数据。
１ 材料与方法
１．１ 材料
玉米秸秆稀酸蒸爆物料（由中粮肇东纤维素乙
醇中试工厂提供，预处理条件１７０℃、５５ｍｉｎ、１１３％
Ｈ２ＳＯ４）；纤维素酶由诺维信公司提供，酶液含滤纸酶
活（Ｕ）１４３８Ｕ、ＣＭＣ酶活３０３Ｕ；其他化学试剂均为
分析纯。
１．２ 仪器
ＢＳ１２４Ｓ电子天平（上海安亭科学仪器厂）；
ＳＢＡ ４０Ｃ型生物传感分析仪（山东省科学院生物
研究所）；ＤＳＨＺ ３００Ａ型旋转式恒温振荡器（太仓
市实验设备厂）；ＪＳＭ ５９００型扫描电子显微镜（日
本电子公司）。
１．３ 方法
１．３．１ 预处理
中粮肇东稀酸蒸爆预处理（处理条件应厂方要
求略），蒸爆物料组成（质量分数）：纤维素４７４％，
半纤维素 １８７％，木质素 ２４９％；分别水洗、
Ｃａ（ＯＨ）２、ＮａＯＨ、氨水中和至ｐＨ为５左右，以备下
一步酶解使用。
１．３．２ 纤维素的酶解
称取适量物料，固液比为１∶１０（质量体积比），
用００５ｍｏｌ／Ｌ的柠檬酸缓冲溶液调节 ｐＨ为４８，
酶添加量为每克纤维素１４Ｕ，５０℃于恒温振荡水浴
锅以８０ｒ／ｍｉｎ速率振荡培养７２ｈ。酶解过程中用吸
管取滤液，１００００ｒ／ｍｉｎ离心分离，取上清液待测。
纤维素转化率按下式计算：
纤维素转化率＝ ρ（葡萄糖）ｗ（纤维素）×１１１×ρ（底物）
式中：１１１为纤维素转化为葡萄糖的理论转化系数。
１．３．３ 酶活测定
酶活力测定采用美国国家可再生能源实验室
（ＮＲＥＬ）推荐的标准方法［３］。一个滤纸酶活力的国
际单位（Ｕ）定义为标准反应条件下每分钟生成
１μｍｏｌ葡萄糖的酶量；一个羧甲基纤维素（ＣＭＣ）的
酶活单位（Ｕ）定义为每分钟生成１μｍｏｌ葡萄糖所
需的酶量。
１．３．４ 纤维素含量的测定
纤维素含量采用ＮＲＥＬ推荐的标准方法测定［４］。
１．３．５ 葡萄糖含量测定
葡萄糖含量由 ＳＢＡ ４０Ｃ型生物传感分析仪
测定。
１．３．６ 扫描电镜观察
取少量冷冻干燥试样，真空喷金１０ｍｉｎ后，使
镀膜厚度控制在５～１０ｎｍ，然后在扫描电镜下观察
纤维表面形态和微细结构。
２ 结果与讨论
图１ 中和试剂对纤维素转化率的影响
Ｆｉｇ．１ Ｅｆｅｃｔｓｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓｏｎｔｈｅ
ｃｅｌｕｌｏｓｅｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ
２．１ 不同中和试剂对酶解的影响
稀酸 蒸 爆 预 处 理 物 料 分 别 采 用 水 洗、
Ｃａ（ＯＨ）２、ＮａＯＨ、氨水中和至 ｐＨ为５左右，在相同
酶解条件下比较其纤维素转化率。图１为不同中和
试剂对酶解纤维素转化率的影响。由图１可见：蒸
爆物料经水洗后酶解的纤维素转化率最高，相比
ＮａＯＨ、氨水、Ｃａ（ＯＨ）２中和后的酶解效率，ＮａＯＨ处
理的效果相对较好，氨水次之，Ｃａ（ＯＨ）２最差。酶
解７２ｈ后纤维素转化率均有所提高，且水洗物料酶
解葡萄糖浓度较高，７２ｈ纤维素转化率可达
９１７％。稀Ｈ２ＳＯ４在高温的条件下，木糖和葡萄糖
会降解产生呋喃等抑制物，不利于酶解［５］。
Ｈｅｎｄｒｉｋｓ等［６］的研究也表明：当温度高于１６０℃，木
质素溶解产生石酚酸，酸溶性木质素很容易反应，
若不迅速脱除会在底物上形成沉淀，不利于酶解。
大量水洗可有效脱除已溶解的半纤维素及抑制物，
水洗后物料的酶解纤维素转化率提高且对后续的
发酵有利，但存在水资源的浪费及废水污染等问
题，不适合工业化生产［７－８］。
纤维素的酶解主要分为３个阶段：１）纤维素酶
吸附于纤维素表面；２）纤维素在酶组分的协同作用
２ 生 物 加 工 过 程 第９卷
下水解产生可发酵糖类；３）酶脱吸附。纤维素酶对
纤维素的有效吸附是纤维素酶解的决定性因素。
Ｌｅｅ等［９］的研究表明：纤维素酶解速率取决于酶的
吸附和吸附酶的活性，纤维素酶吸附结构域能否在
酶解过程中高效地进行吸附分离作用是提高纤维
素酶解速率的决定因素。由图１可见：在酶水解初
期（２４ｈ内），Ｃａ（ＯＨ）２中和物料的纤维素转化率最
低。这可能是由于 Ｃａ（ＯＨ）２与稀 Ｈ２ＳＯ４中和时生
成的ＣａＳＯ４沉淀吸附于纤维素表面，降低了纤维素
的活性位点，妨碍了纤维素酶吸附结构域对纤维素
的有效吸附，使纤维素酶的催化结构域缺少底物而
不能发生作用，从而降低了酶与纤维素的可及度，
导致酶解效率降低。与水洗物料的９１７％纤维素
转化率相比，用 Ｃａ（ＯＨ）２、ＮａＯＨ、氨水中和后物料
酶解７２ｈ纤维素转化率分别为 ８０７％、８３１％及
８１７％。相比较而言，氨水中和可以为后续发酵提
供Ｎ源，应该是更适用于工业生产的选择。
２．２ ＳＥＭ分析及ＥＤＳ分析
Ｃａ（ＯＨ）２中和会生成溶解度较小的ＣａＳＯ４，ＣａＳＯ４
沉积于物料表面会影响酶解，ＮａＯＨ、氨水中和则不会
引起此问题，因此为了进一步考察Ｃａ（ＯＨ）２中和对纤
维素酶解的影响，对水洗物料和Ｃａ（ＯＨ）２中和物料进
行了扫描电镜（ＳＥＭ）分析及能谱（ＥＤＳ）分析。图２为
稀酸蒸爆预处理物料经水洗（图２（ａ））及Ｃａ（ＯＨ）２中
和（图２（ｂ））后的ＳＥＭ图。由图２可知：经稀酸蒸爆处
理后，纤维素已没有结晶区和非结晶区的区别，由长条
状的晶束变成了絮状绒毛状，其间夹杂着不规则的孔
洞，质地较疏松。稀酸蒸爆过程会使一部分半纤维素
降解成可溶性的木糖及寡聚糖等，水洗过程可去除这
部分半纤维素，使更多的纤维素暴露出来，提高酶解效
率。图２（ａ）中可见水洗后物料的结构更为疏松，孔隙
较多。而用Ｃａ（ＯＨ）２直接中和，由于生成的ＣａＳＯ４溶解
度较小，势必会造成部分ＣａＳＯ４沉积在物料表面从而影
响酶解。从图２（ｂ）可见：经Ｃａ（ＯＨ）２中和的物料未见
明显的ＣａＳＯ４颗粒沉积，只是隐约可见有微小颗粒夹杂
其间。为进一步确定ＣａＳＯ４的存在，又对其进行了能谱
分析，结果如图３所示。由图３可知：Ｃａ（ＯＨ）２中和的
物料中含Ｃａ、Ｓ、Ｏ元素（图３（ｂ）），而水洗物料中未检
测到Ｃａ、Ｓ元素的存在（图３（ａ）），从而说明Ｃａ（ＯＨ）２
中和物料中有ＣａＳＯ４存在。
图２ 稀酸蒸爆物料经水洗（ａ）和Ｃａ（ＯＨ）２中和（ｂ）后的ＳＥＭ图
Ｆｉｇ．２ ＳＥＭ ｏｆｄｉｌｕｔｅａｃｉｄｃａｔａｌｙｓｅｄｓｔｅａｍｅｘｐｌｏｓｉｏｎｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｄｗｉｔｈｗａｔｅｒａｎｄＣａ（ＯＨ）２
图３ 稀酸蒸爆物料经水洗（ａ）和Ｃａ（ＯＨ）２（ｂ）中和后的能谱图
Ｆｉｇ．３ ＥＤＳｏｆｄｉｌｕｔｅａｃｉｄｃａｔａｌｙｓｅｄｓｔｅａｍｅｘｐｌｏｓｉｏｎｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｄｗｉｔｈｗａｔｅｒａｎｄＣａ（ＯＨ）２
３ 第１期 张红漫等：中和剂对稀酸蒸爆玉米秸秆酶解效果的影响
２．３ 阳离子对酶活的影响
采用中和剂调节酸度，是在体系中引入硫酸盐，
实验考察不同阳离子对纤维素酶活的影响（表１）。
从表１可知：低浓度的阳离子（Ｎａ＋、ＮＨ４
＋）对纤维素
酶活的影响相对较小，这是由于当阳离子浓度较低
时，可能只与酶表层附近的原子或基团发生相互作用
而使酶的构象发生一定程度的变化［１０］，如果这种变
化能使酶分子中的电子传递进行得更加流畅，就可表
现为激活作用。由表１还可知：随着阳离子浓度的增
加，其对纤维素酶活的抑制作用也增加。这可能是由
于浓度增加后，阳离子进入了酶分子的内部结构，导
致其构象变化太大，使该部位的电子传递功能受到影
响，因而可表现出从激活作用逐渐转变为抑制作用，
或者随着离子浓度增加，抑制作用增强［１１］。其中
Ｃａ２＋对纤维素酶活的影响最大，Ｃａ２＋浓度为５ｍｍｏｌ／Ｌ
时，纤维素酶活降低了４９２％。这可能是因为 Ｃａ２＋
能与纤维素酶活性中心上半胱氨酸残基（Ｃｙｓ）的巯基
（—ＳＨ）相结合，从而抑制酶活；同时Ｃａ２＋作为二价金
属离子，其对酶分子结构构象变形的影响也会更大，
因而抑制作用会更强。这一结论也与前述Ｃａ（ＯＨ）２
中和后纤维素转化率最低相一致。ＮＨ４
＋对纤维素酶
活的影响相对较小，浓度为５ｍｍｏｌ／Ｌ时也仅使纤维
素酶活降低１９７％。因此工业生产上考虑氨水中和
也是合理的。
表１ 阳离子对纤维素酶活的影响
Ｔａｂｌｅ１ Ｅｆｅｃｔｓｏｆｃａｔｉｏｎｓｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃｅｌｕｌａｓｅ
离子种类
ｃ（离子）／
（ｍｍｏｌ·Ｌ－１）
ＣＭＣ比酶活／
（Ｕ·ｍＬ－１）
酶活提高率／
％
空白 ０ ７１２ ０
Ｃａ２＋
５
１
６７７
６９３
－４９２
－２６７
Ｎａ＋
５
１
６８８
７１５
－３３７
０４２
ＮＨ＋４
５
１
６９８
７０７
－１９７
－０７０
３ 结 论
本文采用中粮肇东中试工厂的稀酸蒸爆物料，
分别采用水洗、Ｃａ（ＯＨ）２、ＮａＯＨ及氨水中和至 ｐＨ
为５左右，其物料酶解 ７２ｈ纤维素转化率分别为
９１７％、８０７％、８３１％及 ８１７％。尽管水洗能得
到较高的纤维素转化率，但这一过程会消耗大量的
水资源，因而不适合于工业化生产。Ｃａ（ＯＨ）２中和
由于其生成的 ＣａＳＯ４溶解度较小，沉积的 ＣａＳＯ４颗
粒吸附于纤维素物料表面，降低了纤维素酶的可及
性而使酶解效率降低。同时 Ｃａ２＋对纤维素酶活有
明显的抑制作用，当Ｃａ２＋浓度为５ｍｍｏｌ／Ｌ时，可使
纤维素酶活下降４９２％。从成本及对后续发酵过
程的影响来看，选择氨水中和不仅成本较为低廉，
同时可为后续发酵过程提供一部分 Ｎ源，因而氨水
中和更适合于工业化生产。
参考文献：
［１］ ＤａｗｓｏｎＬ，ＢｏｏｐａｔｈｙＲ．Ｕｓｅｏｆｐｏｓｔｈａｒｖｅｓｔｓｕｇａｒｃａｎｅｒｅｓｉｄｕｅｆｏｒ
ｅｔｈａｎｏｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，９８（９）：
１６９５１６９９．
［２］ ＬａｓｅｒＭ，ＳｃｈｕｌｍａｎＤ，ＡｉｅｎＳＧ，ｅｔａｌ．Ａｃｏｍｐａｒｉｓｉｏｎｏｆｌｉｑｕｉｄ
ｈｏｔｗａｔｅｒａｎｄｓｔｅａｍｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｏｆｓｕｇａｒｃａｎｅｂａｇａｓｓｅｆｏｒｂｉｏ
ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｔｏｅｔｈａｎｏｌ［Ｊ］．ＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００２，８１
（１）：３３４４．
［３］ ＡｄｎｅＹＢ，ＢａｋｅＲＪ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｃｅｌｕｌａｓｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｒ］．
ＮＲＥＬ／ＴＰ５１０４２６２８．Ｃｏｌｏｒａｄｏ：ＮａｔｉｏｎａｌＲｅｎｅｗａｂｌｅＥｎｅｒｇｙＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ，１９９６：１１１．
［４］ ＲｕｉｚＲ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓａｎｄｌｉｇｎｉｎｉｎ
ｂｉｏｍａｓｓ［Ｒ］．ＮＲＥＬ／ＴＰ５１０４２６１８．Ｃｏｌｏｒａｄｏ：ＮａｔｉｏｎａｌＲｅｎｅｗ
ａｂｌｅＥｎｅｒｇｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，２００８：１１６．
［５］ ＭａａＨ，ＬｉｕＷ Ｗ．Ｅｎｈａｎｃｅｄｅｎｚｙｍａｔｉｃｓａｃｃｈａｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｉｃｅ
ｓｔｒａｗｂｙｍｉｃｒｏｗａｖｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．ＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
２００９，１００（３）：１２７９１２８４．
［６］ ＨｅｎｄｒｉｋｓＡＴＷＭ，ＺｅｅｍａｎＧ．Ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｔｏｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｄｉ
ｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙｏｆｌｉｇｎｏｃｅｌｕｌｏｓｉｃｂｉｏｍａｓｓ［Ｊ］．ＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
２００９，１００（１）：１０１８．
［７］ ＺｈｕＺＧ，ＳａｔｈｉｔｓｕｋｓａｎｏｈＮ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｃｏｒｎｓｔｏｖｅｒｐｒｅ
ｔｒｅａｔｅｄｂｙｄｉｌｕｔｅａｃｉｄａｎｄｃｅｌｕｌｏｓｅｓｏｌｖｅｎｔｂａｓｅｄｌｉｇｎｏｃｅｌｕｌｏｓｅ
ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ：ｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ，ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ａｎｄ
ｓｕｂｓｔｒａｔｅａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，
２００９，１０３（４）：７１５７２５．
［８］ ＬｕＹＦ，ＷａｎｇＹＨ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｈｉｇｈｓｏｌｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｅｎｚｙ
ｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓａｎｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｓｔｅａｍｅｘｐｌｏｄｅｄｃｏｒｎｓｔｏｖｅｒ
ｂｉｏｍａｓｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，１６０
（２）：３６０３６９．
［９］ ＬｅｅＹＨ，ＦａｎＬＴ．Ｋｉｎｅｔｉｃｓｔｕｄｉｅｓｏｆｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｉｎ
ｓｏｌｕｂｌｅｃｅｌｕｌｏｓｅ：ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｒａｔｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１９８２，２４（１１）：２３８３２４０６．
［１０］ ＫｉＨＮ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｌｕｃａｎａｓｅ
ｘｙｌａｎａｓｅＣｅｌＭ２ｒｅｖｅａｌｓｔｈｅｍｅｔａｌｅｆｅｃｔａｎｄｓｕｂｓｔｒａｔｅｂｉｎｄｉｎｇ
ｍｏｉｅｔｙ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａ
ｔｉｏｎｓ，２０１０，３９１（４）：１７２６１７３０．
［１１］ ＡｂｄｕｌＪ．Ｋｉｎｅｔｉｃｓａｎｄｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓｏｆａｎｏｖｅｌｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅ
（ＣＭＣａｓｅ）ｆｒｏｍｇｙｍｎｏａｓｃｅｌａｃｉｔｒｉｎａｐｒｏｄｕｃｅｄｕｎｄｅｒｓｏｌｉｄｓｔａｔｅｃｏｎ
ｄｉｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＩｎｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００８，３５（６）：５１５５２４．
４ 生 物 加 工 过 程 第９卷