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Dissolving straw cellulose in LiCl/DMAc assisted with microwave for preparing reducing sugars

微波条件下LiCl/DMAc溶解稻秆纤维素制备还原糖



全 文 :第9卷第1期
2011年1月
生 物 加 工 过 程
ChineseJournalofBioprocessEngineering
Vol.9No.1
Jan.2011
doi:10.3969/j.issn.1672-3678.2011.01.002
收稿日期:2010-07-18
基金项目:黑龙江省自然科学基金资助项目(B200908);哈尔滨理工大学创新性实验计划项目(2009)
作者简介:邢丽欣(1985—),女,黑龙江齐齐哈尔人,硕士研究生,研究方向:生物质能源;巩桂芬(联系人),副教授,Email:ggfhust@163.com
微波条件下 LiCl/DMAc溶解稻秆纤维素制备还原糖
邢丽欣,巩桂芬
(哈尔滨理工大学 材料科学与工程学院,哈尔滨 150040)
摘 要:利用氯化锂/N,N 二甲基乙酰胺(LiCl/DMAc)溶剂体系在微波控制条件下对稻秆纤维素进行溶解预处理
以提高纤维素酶解糖化效率。考察了微波时间和微波强度对产糖量及还原糖转化率的影响。通过扫描电镜
(SEM)和热重分析仪(TG)对预处理前后稻秆纤维素的微观形貌及热稳定性进行表征,并利用高效液相色谱仪
(HPLC)对酶解糖液进行糖成分鉴定和含量分析。结果表明,微波加热能够有效促进LiCl/DMAc对稻秆纤维素的
溶解。与原生稻秆相比,经微波 LiCl/DMAc法溶解后再生纤维素出现明显解聚,热分解温度由 290℃降至
220℃。在微波功率为 385W、加热溶解时间为 7min时,所得稻秆纤维素还原糖转化率由 3090%上升至
9867%;HPLC谱图表明,糖液中主要成分为葡萄糖和木糖,分别占所得还原糖总量的4374%和4855%。
关键词:LiCl/DMAc;微波;稻秆纤维素;还原糖转化率;得糖率
中图分类号:O636.11    文献标志码:A    文章编号:1672-3678(2011)01-0005-05
DissolvingstrawceluloseinLiCl/DMAcassistedwith
microwaveforpreparingreducingsugars
XINGLixin,GONGGuifen
(ColegeofMaterialsScienceandEngineering,HarbinUniversityofScienceandTechnology,Harbin150040,China)
Abstract:Lithiumchloride/N,Ndimethylacetamide(LiCl/DMAc)solventwasusedtodissolvestraw
celuloseassistedbymicrowaveheating,inordertoimprovetheeficiencyofenzymatichydrolysis.
Efectsofmicrowavetimeanddensityonyieldsandconversationofreducingsugarswerestudied.Micro
morphologyandthermostabilityofregeneratedstrawcelulosewerecharacterizedbyscanningelectronmi
croscopy(SEM)andthermalgravimetricanalyzer(TG).Throughhighperformanceliquidchromatogra
phy(HPLC),componentsinhydrolyzatewerefurtherconfirmedandtheircontent/concentrationwas
quantitativelyanalyzed.TheresultsshowedthatthedissolutionofstrawceluloseinLiCl/DMAcsolvent
waspromotedduetomicrowaveheating.Comparedwithoriginalcelulose,thestrawtreatedbymicro
waveLiCl/DMAcmethoddepolymerizedintofragmentsandthermaldecompositiontemperaturedecreased
from290℃ to220℃.Conversationofreducingsugarincreasedfrom3090% to9867%,undercon
drtionsofmicrowavepowerat385Wfor7minHPLCanalysisofsaccharificationproductsrevealedthat
glucoseandxyloseweremajorcomponentsinhydrolysatesolution,itarivedat4374% and4855% of
totalreducingsugar.
Keywords:LiCl/DMAc;microwave;strawcelulose;conversationofreducingsugar;yieldsofreducing
sugar
  有限的石化燃料储备和全球人口的不断增加使得
人们日益关注利用可再生生物原料来进行能源生
产[1-4]。木质纤维素是地球上最为广泛且来源丰富的
一种可生物降解的天然生物质原料,可水解为还原性
糖类,而糖类可进一步转化为燃料乙醇等重要能
源[5-6]。天然纤维素由于自身聚集态结构的特点,如
较高的结晶度、分子间及分子内部存在的氢键作用,导
致其具有不溶化、在大多溶剂中不溶解的特点,从而难
以被有效利用,这是天然纤维素制备可发酵还原糖的
最大障碍,导致所得糖化率较低[7]。
现在研究较多的预处理方法主要为浓酸、稀酸和
强碱预处理等。浓酸是较强的水解催化剂,但因其腐
蚀性较大且不易回收受到一定限制;稀酸处理可有效
水解纤维素产糖[8],但对设备要求高、副产物较多;碱
法预处理可通过皂化作用破坏纤维素、木质素及半纤
维素之间的紧密结合,但需对碱处理液作进一步的后
处理,成本较高。此外,其他的预处理方法也都存在
一定的弊端,如可发酵糖产率低、原料利用率不高、成
本较高、污染环境等。因此,通过有效的纤维素溶剂
制得天然纤维素溶液,是实现有效利用天然纤维素生
物质的一条重要途径。
  LiCl/DMAc是溶解性能优异的强极性有机溶剂。
LiCl和DMAc形成氢键配位化合物后,Li+和Cl-紧密
连接,形成强的溶剂化正离子和弱的溶剂化负离子偶
极子,这种强正离子与纤维素羟基作用形成的配位化
合物,可降低纤维素结晶度,促使纤维素溶解,以达到
使结构复杂的纤维素更易被利用的目的。微波加热技
术被视为一种能够有效提高酶水解效率的处理方法,
王振宇等[9-12]对此进行了一些研究,研究表明微波处
理可以有效提高反应速率,改变植物纤维原料的超分
子结构,使纤维结晶区发生变化,提高其反应活性。
本文以来源广泛的水稻秸秆为研究对象,采用
微波和 LiCl/DMAc相结合的技术对其进行溶解预
处理,考察各因素对稻秆产糖的影响,采用扫描电
子显微镜(SEM)和热重分析(TG)仪对处理前后稻
秆的微观形貌及热稳定性进行表征,并利用高效液
相色谱仪(HPLC)对纤维素酶解糖液进行成分鉴定
及含量分析。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
1.1.1 仪器
721型分光光度计,上海精密仪器有限责任公
司;FEISIRIONW扫描电子显微镜,荷兰飞利浦公
司;Pyris6型TG热重分析仪,美国 PerkinElmer公
司;LC 10A型高效液相色谱仪,日本岛津公司;
RID 10A型示差检测器,固定相 Zorbax碳水化合
物分析柱,美国 Agilent公司。JJ 1型精密增力定
时电动搅拌器,江苏金坛中大仪器厂;PJ21C AU
型微波炉,美的集团;ALC 2102型电子天平,北京
赛多利斯仪器系统有限公司;DSY 1 2孔电热恒
温水浴锅,北京国华医疗器械厂;101 2型电热鼓
风干燥箱,上海锦屏仪器仪表有限公司。
1.1.2 原料及试剂
原料:干燥稻秆粉末,哈尔滨近郊,015mm。
试剂:LiCl,AR,沈阳市华东试剂厂;N,N 二甲
基乙酰胺(DMAc),AR,天津市富宇精细化工有限
公司;D 葡萄糖,AR,沈阳市新西试剂厂;D 果糖,
LC,上海惠世生化试剂有限公司;木糖,D 纤维二
糖,LC,美国 SigmaAldrich公司;NaOH,AR,天津市
凯通化学试剂有限公司;纤维素酶,肇东国科北方
酶制剂有限公司;蒸馏水,自制。
1.2 LiCl/DMAc溶剂体系的制备
  准确称取一定量干燥后的无水 LiCl置于干燥
的100mL磨口三口瓶中,以 m(LiCl)∶V(DMAc)=
1∶9的比例向容器内缓慢倒入DMAc,在搅拌且冷凝
回流的条件下缓慢升温,直至白色不溶物 LiCl完全
溶于DMAc,溶液呈无色透明,待用。
1.3 纤维素的溶解
1.3.1 传统溶解法
  将干燥过的稻秆和配制的 LiCl/DMAc溶剂以
1∶50的质量体积比混合置于三口瓶中,于130℃温
度下冷凝回流,溶解3h后停止搅拌和加热,自然冷
却至室温,继续静置16h。
1.3.2 微波溶解法
  按上述比例配制稻秆 LiCl/DMAc混合溶液,
置于锥形瓶中,放入微波炉中,设定微波功率及微
波时间进行反应;反应结束后,取出锥形瓶盖好,于
室温下静置16h,待用。
1.4 纤维素再生及酶解
  将 LiCl/DMAc溶剂/稻秆溶液倒入500mL烧
杯,边磁力搅拌边向烧杯中缓慢加入去离子水使木
质纤维素析出,用蒸馏水充分浸泡洗涤,直至用
AgNO3溶液对浸泡上清液检测不出 Cl
-为止,抽滤
将滤饼放入鼓风干燥箱(60℃)10h,制得再生纤
维素。
6 生 物 加 工 过 程   第9卷 
  称取 1g经溶解预处理后的再生稻秆装入
50mL锥形瓶中,加入少量蒸馏水,测定其 pH,滴入
配制好的柠檬酸缓冲溶液,将pH调至5,加入4mL
纤维素酶,蒸馏水定容至20mL。将上述混合物摇
匀后,于50℃恒温水浴锅中反应30h。
1.5 DNS法测定还原性物质吸光度
  利用721型分光光度计对酶解液进行表征,采
用DNS法[13]测定糖液中还原糖的含量。所测定的
葡萄糖标准曲线为
Y= 000492+0000954X (1)
式(1)中:Y为吸光度;X为还原糖浓度。
  得糖率及还原糖转化率计算公式为
  得糖率=产糖量/预处理前原料质量 (2)
  还原糖转化率=产糖量/理论产糖量 (3)
2 结果与讨论
2.1 微波 LiCl/DMAc法处理稻秆纤维素
  利用 LiCl/DMAc体系在微波辐射条件下对稻
秆溶液进行预处理,考察微波时间、微波功率对再
生稻秆酶解产糖量及还原糖转化率的影响,结果如
表1所示。
表1 微波 LiCl/DMAc处理稻秆制备还原糖
Table1 Dataofsaccharificationprocessedby
microwaveLiCl/DMAc
微波功率/

微波时间/
min
产糖量/

稻秆得
糖率/%
还原糖
转化率/%
230 10 06372 6372 8850
230 125 06483 6483 9004
230 15 06575 6575 9132
230 175 06685 6685 9285
230 20 06886 6886 9564
385 4 04684 4684 6506
385 5 05378 5378 7470
385 6 06468 6468 8984
385 7 07104 7104 9867
385 8 07005 7005 9729
385 9 06913 6993 9712
385 10 06979 6979 9693
539 3 04945 4945 6868
539 35 05168 5168 7178
539 4 05889 5889 8179
539 45 05913 5913 8212
539 5 06103 6103 8476
211 微波时间对产糖量的影响
  从表1可以看出:在230W及539W条件下,还原
糖得率及转化率均随微波时间的增加而增大,说明在
较长微波时间的处理条件下,稻秆被LiCl/DMAc溶解
和溶胀的程度加深,微波与LiCl/DMAc的共同作用效
果较好,糖得率及转化率大幅提高。在385W条件下,
延长微波时间后,产糖率及转化率反而略有下降,可能
是由于在385W这一较高的功率下加热10min,时间有
些过长,引起了LiCl/DMAc溶剂分子运动过快,导致大
量挥发,没有有效作用于稻秆纤维素表面,从而导致还
原糖得率及转化率降低。
2.1.2 微波功率对产糖量的影响
  从表1可以看出:微波时间持续10min,强度为
230W时所得还原糖转化率885%,要低于385W
时的9693%;同样,分别在4min和5min条件下,
385W时所得糖转化率也均明显低于539W,这说
明在相同微波时间的条件下,增强微波功率可提高
还原糖转化率。3种功率未能在同一时间下比较是
因为微波时间会随功率的增大而明显缩短,若延长
作用时间则导致反应体系喷溅,无法完成后期测试。
在385W的微波强度下,LiCl/DMAc溶解稻秆的
效果较好。LiCl/DMAc分子连续通过不同的晶区和非
晶区时,其中Cl-极易与纤维素分子间氢键结合,破坏
原有的氢键结构。随着微波功率的增加,LiCl/DMAc
溶剂阳离子和Cl-及非晶区纤维素分子链段受热后运
动速率加快,运动区域增大,造成纤维素分子间和分子
内氢键解缔的数目增多,纤维素分子间氢键数目减少,
使晶区和非晶区溶胀的区域扩大,在385W的微波功率
达到最佳的溶解效果。故选择微波功率为385W,微波
时间为7min为最优条件。
2.2 HPLC分析
  对未处理的稻秆及再生稻秆进行酶解糖化,利
用高效液相色谱仪对糖液进行糖成分鉴定及含量
分析,流动相为 V(乙腈)∶V(水)=75∶25,柱温
30℃,流速1mL/min,压力 39MPa。根据可能产
糖的种类而选取的试样有葡萄糖、果糖、木糖和纤
维二糖,所得液相谱见图1。根据出峰位置及峰面
积,计算糖液含量,结果如表2所示。
由图1和表2可知:HPLC分析所得酶解液中
的还原糖成分主要为葡萄糖和木糖,其中葡萄糖为
纤维素水解所得,木糖主要为半纤维素水解而得。
还原糖液中果糖的含量几乎为0,说明葡萄糖未发
生异构化反应。
7 第1期 邢丽欣等:微波条件下LiCl/DMAc溶解稻秆纤维素制备还原糖
图1 不同处理条件下再生稻秆的HPLC图
Fig.1 HPLCdiagramofricestrawhydrolysis
对比预处理前后稻秆的酶解液还原糖产量及
转化率可知,与未处理直接酶解的原料相比,经
LiCl/DMAc溶解处理后产糖量均有大幅提高,说明
    
LiCl/DMAc处理对木质纤维素溶解和溶胀有明显的
促进作用,酶的可及度均有较大的上升,有利于再生
稻秆的酶解产糖;与仅由 LiCl/DMAc普通加热处理
相比,引入微波作用后,酶解产糖量还有小幅的提高,
这可能是因为 LiCl/DMAc中阴、阳离子在微波辐射
条件下运动程度加剧,变得更加无序所致,从不同方
向和角度都能更加顺利地进攻纤维素分子间及分子
内部,不断引起纤维素结构中氢键的断裂。在再生过
程中,氢键难以重新缔合复原成原有的强极性,使得
纤维素无定形区扩大且变得更加松散,有利于纤维素
酶的进入和附着。LiCl/DMAc和微波共同作用引起
的纤维素无定型区的增大是导致酶解液中糖含量最
终增大的直接原因,其中所得葡萄糖和木糖质量分别
占还原糖总量的4374%和4855%。
表2 HPLC分析及DNS法得糖数据比较
Table2 DataofsaccharificationobtainedbyHPLCanalysisandDNSmethod
试样
HPLC分析 DNS法
m(葡萄糖)/g m(木糖)/g 产糖量/g 产糖量/g 糖转化率/%
未处理的稻秆 00250 01500 01750 02095 3090
LiCl/DMAc处理的稻秆 01066 04686 05752 06648 9806
微波 LiCl/DMAc法处理的稻秆 02926 03248 06174 06690 9867
2.3 SEM分析
  对再生前后的稻秆进行微观形貌观察,结果如
图2所示。
  对比图2中(a)、(b)、(c)各图可知:未处理的
稻秆表面结构平整饱满,结构致密;经 LiCl/DMAc
溶解再生后,稻秆表面被腐蚀,表面呈大面积的碎
裂,附有大小不均的块状体,原有的纤维素致密有
序的骨架被破坏;微波辐射作用后稻秆呈大面积鳞
片状破碎结构,可能是在微波与强极性溶剂 LiCl/
DMAc的共同作用下,LiCl/DMAc溶剂不断从纤维
素结构中去掉和溶解掉稻秆中的半纤维素和木质
素等成分,造成稻秆结构的深度松散,这些形貌上
的变化都增加了酶与底物的接触位点,是酶解加
速、糖产量提高的原因,与前面的酶解结果相符。
图2 再生前后稻秆SEM图
Fig.2 SEM imagesofuntreatedandregeneratedstraw
8 生 物 加 工 过 程   第9卷 
2.4 TG分析
  对再生前后的稻秆进行热质量分析,结果如图
3所示。
图3 不同处理条件下再生稻秆的TG曲线
Fig.3 TGcurvesofuntreatedandregeneratedstraw
  从图3可以看出,处理前后稻秆的热稳定性从
大到小依次为:经 LiCl/DMAc处理稻秆、未处理稻
秆、微波 LiCl/DMAc处理稻秆。经 LiCl/DMAc处
理后稻秆的热稳定性略有上升,而在微波条件下溶
解的稻秆热分解温度降低明显,由原生稻秆的
290℃降至220℃,分解速度较快,剩余残渣质量较
多,说明稻秆在微波作用下经溶解再生后,分子间
大量规整的氢键遭到破坏,分子间作用力减弱,分
子间距扩大,使得分子链段活动更加自由,导致热
分解温度降低[14],有利于进一步水解。
3 结 论
  采用微波 LiCl/DMAc法处理稻秆的较优条件
为微波功率385W,微波时间7min,所得还原糖转
化率由未处理稻秆的 3090%上升至 9867%。
HPLC谱图显示糖液成分主要为葡萄糖和木糖,采
用微波和 LiCl/DMAc共同作用可以促进再生稻秆
酶解产糖率和还原糖转化率的提高;SEM的表面形
貌图显示微波作用下所得再生纤维素的形貌为破
碎变形和堆积的状态,表明 LiCl/DMAc溶剂体系在
微波的作用下加强了对木质纤维素的溶解;TG分析
表明微波 LiCl/DMAc处理后稻秆热分解温度降
低,热稳定性减弱。
由于稻秆本身结晶程度并不是很高,在 LiCl/
DMAc这一强极性溶剂的溶解作用下,稻秆自身结
构已经变得松散无序,而微波的引入是在此基础上
    
进一步促进LiCl/DMAc对稻秆的溶解,显然所得数
据提高幅度不大(由9806%上升至9867%)。但
与传统加热方式下只经 LiCl/DMAc预处理法相比,
微波处理可以大大缩短反应周期,而且操作方便,
简单易行,因而微波辅助这一技术具有一定可行性。
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