全 文 ：第 １２卷第 ３期
２０１４年 ５月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ􀆰 １２ Ｎｏ􀆰 ３
Ｍａｙ ２０１４
ｄｏｉ：１０􀆰 ３９６９ ／ ｊ􀆰 ｉｓｓｎ􀆰 １６７２－３６７８􀆰 ２０１４􀆰 ０３􀆰 ００７
收稿日期：２０１２－１２－１２
基金项目：国家重点基础研究发展计划（９７３ 计划）（２００９ＣＢ７２４７０）；江苏省普通高校研究生科研创新计划（ＣＸＺＺ１２＿０４４０）
作者简介：王　 欢（１９８８—），女，山东招远人，硕士研究生，研究方向：生物酶固定化及催化；韩萍芳（联系人），教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｐｆ＠ ｎｊｔｅｃｈ􀆰 ｅｄｕ􀆰 ｃｎ
海泡石吸附固定化猪胰脂肪酶
王　 欢１，２，胡集铖１，李　 亚１，韩萍芳１
（１􀆰 南京工业大学 生物与制药工程学院，南京 ２１１８００；２􀆰 上海市尚德实验学校，上海 ２０１３１５）
摘　 要：以海泡石作为猪胰脂肪酶（ＰＰＬ）的固定化载体，考察采用物理吸附的方法制备固定化脂肪酶的条件。 结
果表明：在固载时间 ４ ｈ、反应磷酸盐（ＰＢＳ）溶液 ｐＨ ６􀆰 ０、反应温度 ２５ ℃时，可达最大比酶活 ３０９ Ｕ ／ ｇ，固定化酶的
化学稳定性和热稳定性均较高。 同时利用红外谱仪（ＦＴ ＩＲ）和扫描电子显微镜（ＳＥＭ）的分析手段对固定化猪胰
脂肪酶试样进行分析，进一步确定了海泡石材料在固定化酶中的作用。
关键词：固定化；猪胰脂肪酶；海泡石
中图分类号：Ｑ８１４􀆰 ２；ＴＱ４２４􀆰 ２４　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１４）０３－００３７－０５
Ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｌｉｐａｓｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｏｎ ｓｅｐｉｏｌｉｔｅ
ＷＡＮＧ Ｈｕａｎ１，２，ＨＵ Ｊｉｃｈｅｎｇ１，Ｌｉ Ｙａ１，ＨＡＮ Ｐｉｎｇｆａｎｇ１
（１􀆰 Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｇｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ
２􀆰 Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｈａｎｇｄｅ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｃｈｏｏｌ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１３１５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｌｉｐａｓｅ（ＰＰＬ） ｗａｓ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｏｎ ｓｅｐｉｏｌｉｔｅ ｂｙ ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｄｓｏｒｂｅｄ ｍａｘｉｍｕｍ ａｃｔｉｖｉｔｙ （ ３０９ Ｕ ／ ｇ） ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ
ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ ４ ｈ，ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐＨ ６􀆰 ０，ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ２５ ℃ ． Ｔｈｅ
ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ＰＰＬ ｓｈｏｗｅｄ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ａｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙ ａｔ ｈｉｇｈｅｒ ｐＨ ａｎｄ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈｅｒｍａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ
ｆｒｅｅ ＰＰＬ􀆰 Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ， Ｆｏｕｒｉｅｒ ｔｒａｎｓｆｏｒｍ ｉｎｆｒａｒｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ （ ＦＴ⁃ＩＲ）， ｓｃａｎｎｉｎｇ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ
（ＳＥＭ） ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｅｐｉｏｌｉｔｅ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ
ｏｆ ｌｉｐａｓｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ􀆰
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ；ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｌｉｐａｓｅ；ｓｅｐｉｏｌｉｔｅ
　 　 作为生物催化剂，酶在工业、医药、农业和食品
等各个领域有着广泛的应用［１］。 在资源、能源短缺
和环境不断恶化的今天，酶促转化已被提到相当重
要的战略高度［２］。 但是，游离酶在实际使用过程中
对环境十分敏感，同时很难从反应体系中被分离回
收和重复利用，这些缺点是酶促反应产业化的技术
瓶颈［３］。 为了克服这些问题，在 ２０世纪 ６０年代，酶
固定化技术应运而生且快速发展起来。
随着对酶固定化技术研究的深入，探索高效
廉价的载体引起了人们的重视。 海泡石具有截面
积为 ０􀆰 ３６ ｎｍ× １􀆰 ０６ ｎｍ 的管状贯穿通道及高达
９００ ｍ２ ／ ｇ的理论表面积［４］ 。 在通道和孔洞中可以
吸附大量的水或极性物质，包括低极性物质，因
此，海泡石具有很强的吸附能力［５］ 。 由于海泡石
具有以上这些特点，使之具备作催化剂载体的良
好条件［６］ 。
脂肪酶（ｌｉｐａｓｅ，Ｅ Ｃ ３􀆰 １􀆰 １􀆰 ３，甘油酯水解酶）是
一类特殊的酯键水解酶，能分解生物产生各种天然
油脂，主要水解由甘油和 Ｃ１２ 原子以上的长链脂肪
酸形成的甘油三酯。 其重要特征是在异相系统
（油 水）界面上水解特殊酯（脂肪酸甘油酯）类作为
重要的工业用酶被广泛应用于食品、制革、饲料洗
涤和油脂化工等工业领域［７－８］。
笔者以海泡石为载体固定化猪胰脂肪酶
（ＰＰＬ），并考察固定化酶的最适条件及稳定性、最适
ｐＨ等理化性质，以期为进一步的应用奠定基础。
１　 材料和方法
１􀆰 １　 材料
猪胰脂肪酶（ ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｓ ｌｉｐａｓｅ，ＰＰＬ），南
京奥多福尼生物技术有限责任公司；海泡石 （ ４７
μｍ，预处理）；Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ１２３（ ＥＯ２０ ＰＯ７０ ＥＯ２０）、柠
檬酸、三乙酸甘油酯、磷酸（分析纯），国药集团化学
试剂有限公司； ＮａＨＣＯ３、 ＮａＨ２ ＰＯ４、 Ｎａ２ ＨＰＯ４ 和
ＮａＯＨ（分析纯），广东汕头西陇化工厂。
１􀆰 ２　 分析测试仪器
ＤＳＨＺ ３００Ａ 型恒温振荡器（太仓市试验设备
厂），８５ １型磁力搅拌器（金坛医疗设备厂），ＰＨＳ
３Ｃ型 ｐＨ 测定仪（上海盛磁仪器有限公司），ＧＬ
２１Ｍ型离心机（上海离心机械研究所），Ｎｅｘｕｓ ６７０
傅里叶红外光谱仪（ＦＴ ＩＲ） （美国 Ｎｉｃｏｌｅｔ 公司），
ＪＥＭ ２０１０ＵＨＲ高分辨透射电镜（ＳＥＭ）仪（日本电
子光学公司）。
１􀆰 ３　 海泡石的预处理
取原矿样放入烧杯中，加入适量蒸馏水（体积
比 １ ∶５），磁力搅拌 １０ ｍｉｎ 后，水化过夜。 倾去上层
悬浮物，取中间层悬浊液。 下层沉淀物按上述方法
再处理几次，把得到的所有悬浊液抽滤，所得固体
在 １０５ ℃下烘干［９］。
１􀆰 ４　 脂肪酶的固定化
取 ２ ｍｇ ／ ｍＬ的酶溶液 ４０ ｍＬ、海泡石 ８０ ｍｇ，加
入 １００ ｍＬ 具塞三角烧瓶中，混合液在 ２５ ℃、１１０
ｒ ／ ｍｉｎ的条件下，进行酶固定化。 混合液反应到一定
时间后，取出烧瓶在 １０ ℃、３ ０００ ｒ ／ ｍｉｎ 条件下离心
１０ ｍｉｎ。 上清液用考马斯亮蓝蛋白测试方法测定其
蛋白含量，上清液中减少的蛋白量即是海泡石材料
上所固定的酶蛋白量，固定化的酶蛋白与载体量的
比例可以由 Ｐａ ＝（ρｉ－ρｆ）Ｖ ／ ｍ计算得出，式中：Ｐａ 为
单位载体上固定的酶蛋白的量（ｍｇ ／ ｇ），ρｉ和 ρｆ为反
应前后酶溶液的质量浓度（ ｇ ／ Ｌ），Ｖ 为反应液体积
（ｍＬ），ｍ为使用的载体质量（ｇ）。
１􀆰 ５　 酶活的测定
在 １００ ｍＬ的三角瓶中加入 ２ ｇ 三乙酸甘油酯、
５０ ｍＬ去离子水、１０ ｍＬ ｐＨ为 ７􀆰 ０的缓冲液，磁力搅
拌器搅拌 １０ ｍｉｎ制备成乳浊液。 当溶液 ｐＨ稳定后
记录初始 ｐＨ 值，并加入游离脂肪酶或固定化的脂
肪酶。 反应 ３０ ｍｉｎ，用 ０􀆰 ０２ ｍｏｌ ／ Ｌ的 ＮａＯＨ溶液滴
定，使 ｐＨ回到初始值，记录消耗的 ＮａＯＨ的量。
一个酶活（Ｕ）定义：在 ４０ ℃的条件下，每分钟
内催化 １ μｍｏｌ底物转化为产物所需要的酶量。
２　 结果与讨论
２􀆰 １　 脂肪酶的固定化
２􀆰 １􀆰 １　 固载时间对酶固定化的影响
在磷酸缓冲液（ ＰＢＳ） ｐＨ ７􀆰 ０ 的条件下，考察
固载时间对脂肪酶固定化的影响，结果见图 １。 由
图 １ 可知：脂肪酶在海泡石的最佳固定化时间为
４ ｈ，此时固定化酶活力达到最大值，固定化时间过
长或过短均使固定化酶活力下降。 这是因为随着
时间的延长，过多的酶吸附于载体表面，导致载体
孔道堵塞，酶蛋白分子互相屏蔽，能与底物契合的
酶数量减少。 因此，最佳固定化酶反应时间为
４ ｈ。
图 １　 固定化时间对海泡石固载猪胰
脂肪酶比酶活的影响
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｉｍｅ ｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ
ＰＰＬ ｏｎ ｓｅｐｉｏｌｉｔｅ
２􀆰 １􀆰 ２　 温度对酶固定化的影响
由于温度过高会导致酶变性失活，因此考察不
同温度（２０～５０ ℃）对酶固定化的影响，结果见图 ２。
由图 ２可知：当温度小于 ３０ ℃，所得固定化脂
肪酶的比酶活较高（３０６ Ｕ ／ ｇ）；但是当温度超过 ３０
℃时，酶活急剧下降，这是因为在固定化过程中酶
失活所致。 因此，在脂肪酶固定化过程中温度应控
制在 ２５～３０ ℃之间比较理想，最佳温度为 ２５ ℃。
８３ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １２卷　
图 ２　 温度对海泡石固载猪胰脂肪酶比酶活的影响
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ
ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ＰＰＬ ｏｎ ｓｅｐｉｏｌｉｔｅ
２􀆰 １􀆰 ３　 ｐＨ对酶固定化的影响
考察缓冲液的 ｐＨ 对酶固定化的影响，结果如
表 １所示。
由表 １ 可知：脂肪酶的固定量受 ｐＨ 的影响较
大，在 ｐＨ ５􀆰 ０的缓冲液中，酶的固定量最大为 ９７􀆰 ３６
ｍｇ ／ ｇ；在 ｐＨ ６􀆰 ０～７􀆰 ０ 的缓冲液中，酶的固定量有所
降低，但不明显。 这是因为脂肪酶的等电点为 ５􀆰 ０，当
溶液的 ｐＨ 大于酶分子的等电点时，酶分子带负电；
当溶液的 ｐＨ 小于等电点时，酶分子带正电，同时载
体孔道内表面 ｐＨ比溶液中 ｐＨ要小，在这种情况下，
蛋白质分子表面的正电荷逐渐减少为零电荷，蛋白质
分子间的库伦力在减少，分子之间可以较紧密的单层
排列在载体的内表面［１０－１１］，从而能在 ｐＨ ５􀆰 ０～７􀆰 ０时
得到较高的固定量，并使得酶分子的活力在 ｐＨ ６􀆰 ０
处充分表现出来。 但在 ｐＨ ６􀆰 ０～９􀆰 ０之间，由于酶分
子表面所带电荷从中性变为负值，这时酶分子和载体
表面都带负电荷，彼此之间相互排斥，从而导致酶的
固定量降低，酶活降低［１２］。
表 １　 ｐＨ对酶固定量及酶活的影响
Ｔａｂｌｅ １　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐＨ ｏｎ ＰＰＬ ｅｎｚｙｍｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｎ ｓｅｐｉｏｌｉｔｅ
ｐＨ
Ｐａ ／
（ｍｇ·ｇ－１）
比酶活 ／
（Ｕ·ｇ－１）
５􀆰 ０ ９７􀆰 ３６ ２１３
６􀆰 ０ ８８􀆰 ６７ ３０９
７􀆰 ０ ８７􀆰 ３１ ２７６
８􀆰 ０ ３９􀆰 ５４ １０６
９􀆰 ０ ３８􀆰 ９８ ６５
２􀆰 ２　 固定化酶的酶学性质
２􀆰 ２􀆰 １　 固定化酶的化学稳定性
考察不同 ｐＨ的磷酸缓冲液分别浸泡游离脂肪
酶和海泡石固定化脂肪酶 ３０ ｍｉｎ，然后测定其酶活，
以各自未经浸泡的初始酶活力为 １００％计，计算相
对酶活力，结果如图 ３所示。 由图 ３可知：游离脂肪
酶的酶活大大降低，最高的相对酶活力也未达到
５０％，而且游离酶对酸碱非常敏感；经固定化的脂肪
酶对酸碱的耐受力明显加强，相同 ｐＨ 条件下浸泡
后固定化脂肪酶的相对活力均大于游离酶，而且固
定化脂肪酶在 ｐＨ在 ５􀆰 ０～９􀆰 ０范围内都能维持接近
９０％的较高酶活。
图 ３　 游离脂肪酶和固定化脂肪酶的 ｐＨ稳定性
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐＨ ｏｎ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｆｒｅｅ ａｎｄ
ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｌｉｐａｓｅ
２􀆰 ２􀆰 ２　 固定化酶的热稳定性
将游离脂肪酶和海泡石固定化脂肪酶分别置
于 ６０ ℃环境中处理 ０ ～ ６ ｈ，然后测定处理后的酶
活，计算相对酶活力，以各自未经热处理的初始酶
活力为 １００％计，结果见图 ４。
由图 ４可知：游离酶在 ６０ ℃环境下活力下降很
快，１ ｈ后游离酶的活力基本只有最初活力的 ３３％。
而对于固定化酶，其活力在 ６０ ℃环境下下降比较缓
慢，且反应 ２ ｈ 后固定化酶的活力仍保留最初活力
的 ８７％。 这说明固定化脂肪酶的热稳定性得到了
显著的提高。 酶作为一种蛋白质，其构象对热不稳
定，在高温下会因变性而失活。 当酶蛋白被固定在
载体上后，脂肪酶的三级结构可以得到保护而不至
于被高温破坏，酶活力从孔道中缓慢释放，使得固
定化酶的热稳定性得到了提高。 酶催化反应通常
会在较高温度下进行，固定化酶提高了酶作用效率
和耐热性，这无疑对酶催化反应是非常有利的。
２􀆰 ２􀆰 ３　 固定化酶的可重复利用性
重复利用在酶催化应用方面具有很重要的作
用，尤其在工业上对于节约成本方面显得非常重
要。 图 ５表示的是重复利用次数对酶活的影响结
果。 由图 ５可知：固定化酶的催化活力随重复次数
９３　 第 ３期 王　 欢等：海泡石吸附固定化猪胰脂肪酶
图 ４　 游离脂肪酶和海泡石固定化脂肪酶的热稳定性
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｆｒｅｅ
ａｎｄ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｌｉｐａｓｅ
的增加而下降，但在经过 ５次重复使用后，其活力仍
保留了 ９１ Ｕ ／ ｇ的比酶活。 由于实验中，固定化酶使
用量比较少，在回收脂肪酶的过程时不可避免地存
在一定的损失，这可能也是导致酶活下降的原因之
一。 同时酶分子与材料之间是通过弱的分子间作
用力（氢键、范德华力）吸附，经过多次的反应、分离
和洗涤，也使得酶分子很容易从孔道中脱落［１３－１４］。
因此，就固定化脂肪酶本身而有，其重复使用性能
还是理想的。
图 ５　 使用次数对海泡石固载猪胰
脂肪酶比酶活的影响
Ｆｉｇ􀆰 ５　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｕｓｅ ｃｙｃｌｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ
ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ＰＰＬ ｏｎ ｓｅｐｉｏｌｉｔｅ
２􀆰 ３　 固定化海泡石材料的表征分析
２􀆰 ３􀆰 １　 ＦＴ ＩＲ分析
图 ６为固定化海泡石材料的红外表征结果。 由
图 ６可知：Ｓｉ—Ｏ—Ｓｉ对称和不对称伸缩振动峰出现
在 ４７１、１ ０９５ 和 ８００ ｃｍ－１处。 这些 Ｓｉ—Ｏ—Ｓｉ 键形
成了 ＳｉＯ２网状结构，在脂肪酶固载上去之后，该峰
的强度明显减少，是因为 Ｓｉ—ＯＨ 的基团和脂肪酶
的Ｎ—Ｈ基团产生了氢键。 而且 ２ ８５０到 ２ ９９５ ｃｍ－１
处的Ｃ—Ｈ伸缩振动峰、１ ５７７ｃｍ－１处的 Ｃ—Ｏ伸缩振
动峰、１ ４３４ ｃｍ－１周围的 Ｃ—Ｈ 扭曲振动峰，这些脂
肪酶的特征峰都只出现在固载酶的红外图谱上［１５］。
这些结果均表明，脂肪酶已成功固载在海泡石上。
图 ６　 海泡石材料和固定化脂肪酶的 ＦＴ ＩＲ图谱
Ｆｉｇ􀆰 ６　 ＦＴ⁃ＩＲ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ ＳＥＰ ａｎｄ ＳＥＰ⁃ＰＰＬ
２􀆰 ３􀆰 ２　 ＳＥＭ分析
图 ７为海泡石与固载后海泡石后的 ＳＥＭ 照片
结果。 由图 ７可知：未固载脂肪酶的海泡石和固载
后的海泡石的存在明显差异，对比可以看出脂肪酶
已经聚集固载于海泡石上。
图 ７　 海泡石和固定化酶的海泡石的扫描电镜照片
Ｆｉｇ􀆰 ７　 ＳＥＭ ｉｍａｇｅｓ ｏｆ ＳＥＰ ａｎｄ ＳＥＰ ＰＰＬ
３　 结　 论
采用海泡石制备固定化脂肪酶具有工艺简单、
０４ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １２卷　
条件温和及操作方便的特点。 制备的固定化酶有
较高的酶活，其最适固载时间为 ４ ｈ，磷酸缓冲液 ｐＨ
６􀆰 ０，此时比酶活为 ３０９ Ｕ ／ ｇ。 获得的固定化酶在 ｐＨ
和热稳定性的适应能力都有显著提高，固定化酶在
６０ ℃环境中保存 ２ ｈ 后仍保留最初活力的 ８７％。
实验表明海泡石是固定化脂肪酶的良好载体。
参考文献：
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ｐｏｒｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ， ａｎｄ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ［ Ｊ］ ． Ｃｈｅｍ Ｍａｔｅｒ，
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ｏｖｅｒ ｍｅｓｏｐｏｒｏｕｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｅｖｅｓ ＭＣＭ⁃４１ ａｎｄ ＳＢＡ⁃１５：ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ
ｏｆ ｐＨ ａｎｄ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ［ Ｊ］ ． Ｊ Ｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ Ｂ，２００４，
１０８：７３２３⁃７３３０．
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ｍｅｓｏｐｏｒｏｕｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｅｖｅ ｓｉｌｉｃａｔｅ ＳＢＡ⁃１５： ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐＨ ａｎｄ
ｐｏｒｅ ｓｉｚｅ［Ｊ］ ．Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ，２００５，１０６９：１１９⁃１２６．
［１３］ 　 Ｍａ Ｈ， Ｈｅ Ｊ， Ｅｖａｎｓ Ｄ Ｇ， ｅｔ ａｌ． Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐａｓｅ ｉｎ ａ
ｍｅｓｏｐｏｒｏｕｓ ｒｅａｃｔｏｒ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＭＣＭ⁃４１［Ｊ］ ． Ｊ Ｍｏｌ Ｃａｔａｌ Ｂ：
Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ，２００４，３０（５ ／ ６）：２０９⁃２１７．
［１４］ 　 Ｙａｄａｖ Ｇ Ｄ， Ｊａｄｈａｖ Ｓ Ｒ． Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｒｅｕｓａｂｌｅ ｌｉｐａｓｅｓ ｂｙ
ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｎ ｈｅｘａｇｏｎａｌ ｍｅｓｏｐｏｒｏｕｓ ｓｉｌｉｃａ ａｎｄ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ
ｉｎ ｃａｌｃｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅ： ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｎｏｎ⁃ａｑｕｅｏｕｓｍｅｍｄｉｕｍ
［Ｊ］ ．Ｍｉｃｒｏｐｏｒｏｕｓ Ｍｅｓｏｐｏｒｏｕｓ Ｍａｔｅｒ，２００５，８６：２１５⁃２２２．
［１５］ 　 Ｚｈｕ Ｋａｉ，Ｗａｎｇ Ｊｉａｎｑｉａｎｇ，Ｗａｎｇ Ｙａｎｈｕａ，ｅｔ ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｒｅｔｉｎｙｌ
ｐａｌｍｉｔａｔｅ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｙ Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ．９９⁃１２５ ｌｉｐａｓｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｏｎ
ｆｉｂｅｒ⁃ｌｉｋｅ ＳＢＡ⁃１５ ［ Ｊ］ ． Ｊ Ｎａｎｏｓｃｉ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ， ２０１１， １１ （ ９）：
７５９３⁃７６０２．
（责任编辑　 荀志金）
１４　 第 ３期 王　 欢等：海泡石吸附固定化猪胰脂肪酶