全 文 ：第７卷第３期
２００９年５月
生 物 加 工 过 程
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ．７Ｎｏ．３
Ｍａｙ２００９
收稿日期：２００８０９１０
基金项目：四川省科技厅应用基础研究资助项目（０５ＪＹ０２９ ０３６ １）；四川省教育厅自然科学科研项目（２００５Ａ０３０）
作者简介：官兴颖（１９８２—），女，重庆人，硕士研究生，研究方向：分子酶学；陈 惠（联系人），教授，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｈｕｉ＠ｓｉｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
枯草芽孢杆菌 Ｃ ３６内切葡聚糖酶基因的克隆
及其在大肠杆菌中融合表达
官兴颖，吴振芳，吴 琦，胥 兵，陈 惠
（四川农业大学 生命科学与理学院，雅安 ６２５０１４）
摘 要：以自行分离筛选出的天然枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｃ ３６的染色体ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增得到含有
内切葡聚糖酶基因的ＤＮＡ片段，将其克隆到 ｐＭＤ １８Ｔ载体中，序列分析表明，克隆得到的 ＤＮＡ片段全长１６０２
ｂｐ，编码一个含有４９９个氨基酸的多肽。与其他芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因序列比对，其核苷酸同源率为９０％ ～
９３％，其编码的氨基酸序列的同源性在９０％～９８％，已将此基因注册ＧｅｎＢａｎｋ（ＤＱ７８２９５４）。将含内切葡聚糖酶基
因的重组克隆质粒进行亚克隆，用ＫｐｎⅠ和ＥｃｏＲⅠ双酶切后，与相同酶切的表达载体 ｐＥＴ ３２ａ相连接，并导入大
肠杆菌ＢＬ２１中表达。蛋白质电泳实验结果表明在 ６４７×１０４处有表达蛋白带。经测定表达蛋白比酶活力达
９９０２Ｕ／ｍＬ，为出发菌Ｃ ３６（６３７８Ｕ／ｍＬ）的１５５倍。
关键词：枯草芽孢杆菌；克隆；内切葡聚糖酶基因；表达；序列
中图分类号：Ｑ７８１；Ｑ７８５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－３６７８（２００９）０３－００６８－０５
Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅｇｅｎｅ
ｆｒｏｍＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＣ３６ｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｉｌ
ＧＵＡＮＸｉｎｇｙｉｎｇ，ＷＵＺｈｅｎｆａｎｇ，ＷＵＱｉ，ＸＵＢｉｎｇ，ＣＨＥＮＨｕｉ
（ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ′ａｎ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｇｅｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅｆｒｏｍＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＣ３６ｗａｓｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏＥ．ｃｏｉｌｃｌｏｎｉｎｇｐｌａｓ
ｍｉｄｐＭＤ１８ＴｂｙＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｗｈｏｌｅｌｅｎｇｔｈｏｆｔｈｅｇｅｎｅｗａｓ１６０２ｂｐ，ｅｎｃｏｄｉｎｇ４９９ａｍｉｎｏ
ａｃｉｄｓ．Ｔｈｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅｇｅｎｅｓｈａｒｅｄｈｉｇｈｄｅｇｒｅｅｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｔｏｔｈａｔｏｆｏｔｈｅｒｔｙｐｉ
ｃａｌｂａｃｉｌｕｓｉｎＧｅｎＢａｎｋ．Ｔｈｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｗｅｒｅｂｅｔｗｅｅｎ９０％ ａｎｄ９３％．Ｔｈｅｇｅｎｅｈａｓｂｅｅｎｒｅｇｉｓｔｅｒｅｄｉｎ
ＧｅｎＢａｎｋ（ＡｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒＤＱ７８２９５４）．Ｔｈｅｇｅｎｅｆｒｏｍｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｃｌｏｎｉｎｇｐｌａｓｍｉｄｗａｓｓｕｂｃｌｏｎｅｄｉｎ
ｔｏＫｐｎⅠ ａｎｄＥｃｏＲⅠ ｓｉｔｅｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｐＥＴ３２ａｉｎＥ．ｃｏｉｌ．Ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓ
ｍｉｄｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥ．ｃｏｌｉｓｔｒａｉｎＢＬ２１．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆＳＤＳＰＡＧＥｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｂｏｕｔ５３×１０４ｐｒｏ
ｔｅｉｎｏｆｔｈｅｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＥ．ｃｏｌｉｓｔｒａｉｎＢＬ２１．ＴｈｅｅｎｚｙｍａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＥ．ｃｏｌｉｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
ｓｔｒａｉｎｗａｓ９９０２Ｕ／ｍＬ，ｉｔｗａｓａｂｏｕｔ１５５ｆｏｌｄｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｓｔｒａｉｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ；ｃｌｏｎｉｎｇ；ｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｓｅｑｕｅｎｃｅ
在自然界中，许多霉菌［１］和细菌［２］都能产生纤
维素酶，由于细菌所产生的纤维素酶一般最适 ｐＨ
为中性至偏碱性，导致这类酶制剂对天然纤维素的
水解作用较弱。近十几年来，随着中性纤维素酶和
碱性纤维素酶在棉织品水洗整理工艺及洗涤剂工
业中的成功应用，细菌纤维素酶制剂已显示出良好
的使用性能和巨大的经济价值［３－５］。目前纤维素酶
的研究主要集中在纤维素酶基因的克隆、定点诱变
及其表达和分泌等方面，这推动了纤维素酶的研究
进展［６］。
以自行分离筛选出的产中性内切葡聚糖酶的
天然芽孢杆菌 Ｃ ３６为出发菌株，进行内切葡聚糖
酶基因的克隆和序列分析，并在大肠杆菌中进行表
达，为进一步改造产纤维素酶菌株的基因及应用基
因工程手段提高纤维素酶产量奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 菌种和质粒
枯草芽孢杆菌 Ｃ ３６由本实验室筛选；载体
ｐＥＴ３２ａ、大肠杆菌 ＪＭ１０９、ＢＬ２１由本实验室保存，
ｐＭＤ１８ Ｔ载体购自ＴａＫａＲａＢｉｏｔｅｃｈ公司。
１．２ 培养基、酶和试剂
大肠杆菌培养基为ＬＢ培养基［５］。
限制性内切酶和ＰＣＲ试剂购自ＴａＫａＲａＢｉｏｔｅｃｈ
公司。
丙烯酰胺和Ｎ，Ｎ 亚甲基双丙烯酰胺购自 Ｓｉｇ
ｍａ公司；质粒提取试剂盒和凝胶回收试剂盒购自天
根生化科技有限公司，其他试剂均为国产或进口分
析纯。
１．３ 内切葡聚糖酶基因的克隆、序列分析及诱导表达
１．３１ 内切葡聚糖酶基因的克隆
以枯草芽孢杆菌 Ｃ ３６基因组为模板，根据已
公布的内切葡聚糖酶基因设计引物，并由博瑞克公
司 合 成，引 物 序 列 引 物 Ｐ上：ＡＴＧＡＡＡＣＧＧＴ
ＣＡＡＴＣＴＣ；引物 Ｐ下：ＣＴＡＡＴＴＴＧＧＴＴＣＴＧＴＴＣＣＣ。内
切葡聚糖酶基因与ｐＭＤ １８Ｔ载体的亚克隆参考文
献［７］。扩增内切葡聚糖酶基因序列由 ＴａＫａＲａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ公司测定。
１．３．２ 内切葡聚糖酶基因的序列分析
采用多种网上信息学数据库及分子生物学软
件对枯草芽孢杆菌Ｃ ３６内切葡聚酶基因序列及其
氨基酸序列进行序列分析和生物信息学预测。
１．３．３ 内切葡聚糖酶基因的诱导表达
根据重组质粒测定的序列，设计表达引物，划
线部分分别为 ＫｐｎⅠ和 ＥｃｏＲⅠ的酶切位点。引物
由 ＴａＫａＲａＢｉｏｔｅｃｈ公司合成。引物 Ｐ上：ＧＧＣＧＧ
ＴＡＣＣＧＡＣＧＡＣＧＡＣＧＡＣＡＡＧＡＡＡＣＧＧＴＣＡＡＴＣＴＣ
ＴＡＴＴＴＴＴＡＴ；引物Ｐ下：ＣＣＧＧＡＡＴＴＣＴＴＡＡＴＴＴＧＧＴ
ＴＣＴＧＴＴＣＣＣＣＡＡＡ
从凝胶上回收１６ｋｂ左右的条带。将纯化的
ＤＮＡ和ｐＥＴ ３２ａ质粒分别用ＫｐｎⅠ和ＥｃｏＲⅠ双酶切
后进行连接、转化。通过菌落ＰＣＲ、酶切筛选鉴定阳
性克隆子，命名为 ｐＥＴ Ｅｎｄ。将 ｐＥＴ Ｅｎｄ工程菌
转接入２０ｍＬＬＢ培养液中（含氨苄青霉素（Ａｍｐ）
１００μｇ／ｍＬ），３７℃，１５０ｒ／ｍｉｎ培养过夜，再转接入２５
ｍＬＬＢ培养液（含Ａｍｐ１００μｇ／ｍＬ）至对数生长期时
加入ＩＰＴＧ至终浓度为１ｍｍｏｌ／Ｌ，再继续培养３ｈ。
１．４ 表达产物的分析和鉴定
取诱导表达前、后的菌悬液及不含有纤维素酶基
因的空载体菌用于ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶进行凝胶电泳分
析。细胞裂解采用超声波细胞破碎法，通过对上清液
进行酶活性测定，并对表达产物进行热稳定性分析。
纤维素酶活力的测定与酶活力的计算参见文献
［８－９］，ＳＤＳＰＡＧＥ电泳检测参照载体操作手册，酶
学性质分析参考文献［１０］。比酶活单位（Ｕ／ｍＬ）定
义为：在５５℃，ｐＨ６８条件下，１ｍＬ酶液每分钟产生
相当于１μｇ葡萄糖所需的酶量。
２ 结果与讨论
２１ 内切葡聚糖酶基因的克隆
以枯草芽孢杆菌基因组ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ，
产物经琼脂糖凝胶电泳后，发现有１条１５００ｂｐ的扩
增条带且最亮，与预计大小一致。将特异性条带割胶
回收，与ｐＭＤ １８Ｔ载体连接，转化大肠杆菌 ＪＭ１０９
宿主菌。菌落ＰＣＲ方法检测阳性克隆子（图１）。
１—ＤＮＡＭａｒｋｅｒⅦ
２—内切葡聚糖酶基因扩增结果；３，４—菌落ＰＣＲ结果
图１ 内切葡聚糖酶基因扩增和菌落ＰＣＲ电泳结果
Ｆｉｇ．１ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅｇｅｎｅ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｏｌｏｎｙＰＣＲ
９６ 第３期 官兴颖等：枯草芽孢杆菌Ｃ ３６内切葡聚糖酶基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达
经酶切、连接和转化反应，在含有氨苄青霉素
和卡那霉素双抗的ＬＢ培养基铺板收获转化子。通
过质粒提取和双酶切反应筛选检测阳性菌株 ｐＥＴ
Ｅｎｄ（图２）。
１— ＫｐｎⅠ单酶切；２—ＥｃｏＲⅠ单酶切；
３，４—ＫｐｎⅠ和ＥｃｏＲⅠ双酶切；５—ＭａｒｋｅｒⅣ。
图２ 重组质粒单、双酶切电泳结果
Ｆｉｇ．２ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
ｐｌａｓｍｉｄｓｐＥＴＥｎｄ
２．２ 内切葡聚糖酶基因的序列分析
ＰＣＲ扩增产物全长１６０２ｂｐ，其中包含了
１５００ｂｐ的枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因全序
列（图３），含有一个开放阅读框（ＯＲＦ），此 ＯＲＦ编
码一个共有４９９个氨基酸的多肽。已将此基因登
陆 ＧｅｎＢａｎｋ，核酸序列编号为 ＤＱ７８２９５４。枯草芽
孢杆菌 Ｃ ３６葡聚糖内切酶基因与 ＧｅｎＢａｎｋ中登
录的其他５个芽孢杆菌内切葡聚糖基因序列（核
酸序列编号分别为 Ｚ２９０７６、Ｘ０４６８９、ＡＹ０４４２５２、
Ｘ６７０４４、ＡＹ７６６３８１）比较，结果表明：６条基因序列
和同源率在９０％～９３％之间。因此，本研究获得的
枯草芽孢杆菌Ｃ ３６株内切葡聚糖酶基因与其他芽
孢杆菌内切葡聚糖酶基因有高度同源性，但存在一
定的差异，是新的基因序列。枯草芽孢杆菌 Ｃ ３６
内切葡聚糖酶与 ＧｅｎＢａｎｋ中登陆的其他５个芽孢
杆菌内切葡聚糖酶的氨基酸序列（核酸序列编号分
别为 ＣＡＡ８２３１７、ＣＡＡ９７６１０、ＡＡＫ９４８７１、ＡＡＺ２２３２２、
ＡＡＮ０７０１９）比较，结果表明：６条氨基酸同源序列长
图３ 枯草芽孢杆菌Ｃ ３６内切葡聚糖酶基因核苷酸全序列及其编码的氨基酸序列
Ｆｉｇ．３ ＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄｄｅｄｕｃｅｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅｇｅｎｅｉｎＢｓｕｂｔｉｌｉｓＣ３６
０７ 生 物 加 工 过 程 第７卷
度为４１２氨基酸，仅在个别位置的氨基酸残基有所
不同，其同源率在９０％～９８％，具有高度的同源性。
在丹麦技术大学生物序列分析中心（ＣＢＳ）的网
站上，利用ＳｉｎｇｎａｌＰＶ２０ＷｏｒｌｄＷｉｄｅＷｅｂＳｅｒｖｅｒ进
行信号肽切割位点预测。使用革兰氏阳性菌（Ｇ＋）
细菌信号肽预测的 ＮｅｕｒａｌＮｅｔｗｏｒｋｓ（ＮＮ）和 Ｈｉｄｄｅｎ
ＭａｒｋｏｖＭｏｄｅｌｓ（ＨＭＭ）这２种模型进行预测。本研
究的枯草芽孢杆菌 Ｃ ３６内切葡聚糖酶蛋白序列，
其信号肽切割位点在 ２９位和 ３０位氨基酸残基之
间，成熟蛋白为 ４７０氨基酸。通过其 ＮｅｔＮＧｌｙｃ１０
在线分析软件进行 Ｎ 糖基化位点（ＡｓｎＸａａＳｅｒ／
Ｔｈｒ）的预测。在全长氨基酸序列中共有５个潜在的
Ｎ 糖基化位点。当取阈值为０５时，第７６位、２６３
位、３１８位、３５２位和３８６位的 Ａｓｎ残基可能被糖基
化。出发菌株枯草芽孢杆菌Ｃ ３６在密码子的选择
和使用上有明显的偏爱性，本基因在密码子的利用
频率方面也有明显的倾向性，特别是 Ｇｌｙ优先选择
ＧＧＡ和 ＧＧＣ，Ａｌａ优先选择 ＧＣＡ，Ｔｙｒ优先选则
ＴＡＴ，Ｔｈｒ优先选择ＡＣＡ。
此内切葡聚糖酶成熟蛋白（４７０氨基酸），含量最
高的３种氨基酸为甘氨酸（Ｇｌｙ，４３个，９１５％），赖氨
酸（Ｌｙｓ，４１个，８７２％）和天冬酰胺（Ａｓｎ，４０个，
８５１％）；而含量最少的３种氨基酸为半胱氨酸（Ｃｙｓ，
２个，０４３％），甲硫氨酸（Ｍｅｔ，４个，０８５％）和组氨酸
（Ｈｉｓ，９个，１９１％）。因此，不同氨基酸的含量差异
很大。根据内切葡聚糖酶成熟蛋白的氨基酸序列计
算出来的相对分子质量理论值为５２２５×１０４。
进一步分析表明，此内切葡聚糖酶成熟蛋白序
列中，疏水氨基酸２０７个，占总氨基酸的４４０４％，
亲水氨基酸２６３个，占５５９６％；酸性氨基酸５５个，
占１１７０％，碱性氨基酸６３个，占１３４０％。该蛋白
含无规卷曲，含量４９６％，其次是 β 折叠，含量为
２８５％，α 螺旋含量最低，只有２１９％。
２．３ 内切葡聚糖酶基因的诱导表达
阳性基因工程菌经诱导培养后，进行ＳＤＳ
ＰＡＧＥ，与含空载体的 ＢＬ２１菌相比，ｐＥＴ Ｅｎｄ产生
１条特异性的蛋白质条带，此条带的相对分子质量
与内切葡聚糖酶成熟蛋白的计算相对分子质量理
论值相同，为６４７×１０４（图４）。
按方法１４所述，经超声波破菌后，测得含有内
切葡聚糖酶的基因工程菌的细菌裂解液中有较高
的酶活性，总比酶活在最适温度为９９０２Ｕ／ｍＬ，是
出发菌株Ｃ３６（６３７８Ｕ／ｍＬ）的１５５倍。
１—ｐＥＴ Ｅｎｄ诱导之前；
２～９—分别为ｐＥＴ Ｅｎｄ诱导２，３，４，５，６，７，８，９ｈ；
１０—不含内切葡聚糖酶基因的ｐＥＴ ３２空载体；
１１—蛋白质相对分子质量标准；箭头指示表达蛋白。
图４ 内切葡聚糖酶基因表达产物的ＳＤＳＰＡＧＥ分析
Ｆｉｇ．４ ４ＳＤＳＰＡＧＥａｎａｌｙｓｉｓｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ
ｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅｇｅｎｅｉｎＥ．ｃｏｉｌＢＬ２１
２．４ 表达产物的部分酶学性质测定
２．４．１ 内切葡聚糖酶的最适反应ｐＨ
以不同ｐＨ的缓冲液配制质量分数为１％的底
物（ＣＭＣ Ｎａ），取１ｍＬ不同 ｐＨ的底物与１００μＬ
适当稀释的酶液５０℃反应３０ｍｉｎ，测得不同 ｐＨ下
的酶活力（图５）。图５结果表明，该酶的最适反应
ｐＨ为６０，在ｐＨ４５～７５范围内酶活可达最大酶
活的８０％以上。
图５ 内切葡聚糖酶的最适反应ｐＨ
Ｆｉｇ．５ ＯｐｔｉｍａｌｐＨｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅ
２．４．２ 内切葡聚糖酶的ｐＨ稳定性
将酶液置于不同 ｐＨ的缓冲液于５０℃保温３０
ｍｉｎ，测定残余酶活力，以原酶液的酶活作为１００％
（图６）。结果表明，内切葡聚糖酶在 ｐＨ＜４的缓冲
溶液中５０℃处理３０ｍｉｎ后相对酶活力不到最高酶
活力的６０％，而当ｐＨ≥４时，酶活力相对稳定，可保
持在最高酶活的７０％以上。
１７ 第３期 官兴颖等：枯草芽孢杆菌Ｃ ３６内切葡聚糖酶基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达
图６ ｐＨ对酶稳定性的影响
Ｆｉｇ．６ ＥｆｅｃｔｓｏｆｐＨｏｎｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｅｎｚｙｍｅ
２．４．３ 内切葡聚糖酶的最适反应温度
在最适反应 ｐＨ环境下，将酶液分别在不同温
度下与底物反应３０ｍｉｎ后测定各反应酶活力（图
７）。由图７可知，该酶的最适反应温度为６５℃。
图７ 内切葡聚糖酶的最适反应温度
Ｆｉｇ．７ Ｏｐｔｉｍａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｎｄｏｇｌｕｃａｎａｓｅ
２．４．４ 内切葡聚糖酶热稳定性测定
酶液分别置于不同温度下保温 ３０ｍｉｎ，再与
５０℃测定残余酶活力，以最高酶活作为１００％（图
８）。图８结果表明，内切葡聚糖酶在５０℃处理３０
ｍｉｎ后酶活力最高，在３０～６０℃相对稳定，可保持
在最高酶活的９０％以上。
图８ 温度对酶稳定性的影响
Ｆｉｇ．８ Ｅｆｅｃｔｓｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｅｎｚｙｍｅ
３ 结 论
１）从自主分离的枯草芽孢杆菌 Ｃ ３６基因组
中克隆了内切葡聚糖酶全基因，并对基因序列进行
了测定和分析。该基因与已报道的大多数芽孢杆
菌内切葡聚糖酶基因的结构基本一致，长度约为
１５ｋｂ，存在一个开放阅读框（ＯＲＦ），转录起始密码
子也是ＡＴＧ（Ｍｅｔ）。但是，不同菌株来源的结构基
因长度及核苷酸组成有所不同，同源性仅为２２％ ～
３５％不等，同种菌株的同源性可高达９０％以上。
２）采用原核表达载体 ｐＥＴ ３２ａ，实现内切葡
聚糖酶基因在大肠杆菌中融合表达，比酶活力为
９９０２Ｕ／ｍＬ，是原产酶菌的１５５倍。对基因工程
菌ｐＥＴ Ｅｎｄ表达内切葡聚糖酶的最适反应温度、
最适反应ｐＨ、热稳定性和 ｐＨ稳定性等酶学性质进
行了初步研究。结果表明该酶的最适反应温度为
６５℃，最适 ｐＨ为６０，在３０～６０℃及ｐＨ４５～７５
处理后残余酶活力可保持最高酶活的８０％以上。
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２７ 生 物 加 工 过 程 第７卷