全 文 ：第 １１ 卷第 ６ 期
２０１３ 年 １１ 月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ． １１ Ｎｏ． ６
Ｎｏｖ． ２０１３
ｄｏｉ：１０． ３９６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １６７２ － ３６７８． ２０１３． ０６． ００８
收稿日期：２０１３ － ０１ － ０５
基金项目：国家重点基础研究发展计划（９７３ 计划）（２０１１ＣＢ２００９０６）
作者简介：熊　 强（１９７０—），男，江苏南京人，副教授，研究方向：微生物与发酵工程，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｘｉｏｎｇｑｉａｎｇ＠ ｎｊｕｔ． ｅｄｕ． ｃｎ
人源双歧杆菌的分离纯化及鉴定
熊　 强，杨青丽，韩　 浩
（南京工业大学 生物与制药工程学院，南京 ２１１８００）
摘　 要：利用改良的乳酸细菌（ＭＲＳ）培养基从健康人群的粪便中进行双歧杆菌的分离筛选。 结果表明：在添加有
５ 溴 ４ 氯 ３ 吲哚 β Ｄ 半乳糖苷（Ｘ Ｇａｌ）的 ＭＲＳ培养基上双歧杆菌的菌落呈典型的乳白色并带有蓝色，其
他菌株的菌落呈白色或深蓝色。 实验共分离出 １０ 株疑似菌株，经生理生化试验和 Ｂｉｏｌｏｇ 自动微生物分析系统鉴
定，结果发现其中 ４ 株为双歧杆菌，这 ４ 株菌中有 ３ 株为两歧双歧杆菌，１ 株为长双歧杆菌。 和传统 ＭＢＳ培养基相
比较，改良 ＭＲＳ培养基能显著提高筛选效率。
关键词：双歧杆菌；鉴定；分离；ＭＲＳ培养基
中图分类号：Ｓ８５２． ６　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ － ３６７８（２０１３）０６ － ００３８ － ０４
Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｍ ｈｕｍａｎ ｆｅｃｅｓ
ＸＩＯＮＧ Ｑｉａｎｇ，ＹＡＮＧ Ｑｉｎｇｌｉ，ＨＡＮ Ｈａｏ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ａｎｄ ｒａｉｓｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｅｘｃｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅａｌｔｈｙ ａｄｕｌｔｓ，
ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＭＲＳ ｍｅｄｉｕｍ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｌｏｒｓ ｗｅｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ ＭＲＳ ｍｅｄｉｕｍ
ｗｉｔｈ Ｘ⁃Ｇａｌ，ａｎｄ ｔｈｅ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｏｌｏｎｉｅｓ ｗｅｒｅ ｍｉｌｋｙ ｗｈｉｔｅ ｗｉｔｈ ｂｌｕｅ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ，ｗｈｉｌｅ ｏｔｈｅｒ ｓｔｒａｉｎ
ｃｏｌｏｎｉｅｓ ｗｅｒｅ ｗｈｉｔｅ ａｎｄ ｄａｒｋ ｂｌｕｅ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｓｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇ ａｕｔｏｍａｔｅｄ
ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｙｓｔｅｍ，４ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｏｍ １０ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ， ３ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ Ｂ． ｂｉｆｉｄｕｍ
ａｎｄ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｗａｓ Ｂ． ｌｏｎｇｕｍ． Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ， ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ， ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＭＢＳ
ｍｅｄｉｕｍ，ｔｈｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＭＲＳ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ＭＲＳ ｍｅｄｉｕｍ
　 　 双歧杆菌是 １８９９ 年巴斯德研究院的 Ｔｉｓｓｉｅｒ 博
士首先在以母乳喂养的婴儿粪便中发现并分离出
来的［１］，它是常见的人体肠道菌群中的重要成
员［２］，具有维护肠道生态平衡、抗菌、增强免疫功能
和抗肿瘤等多种生物学功能［３ － ４］。 近年来，随着人
民健康意识的不断提升，双歧杆菌在保健食品的应
用也越来越广泛。 但是由于双歧杆菌是严格厌氧
菌，对营养条件要求特别苛刻［５］，在和其他肠道细
菌共存的条件下分离比较困难。
笔者通过在乳酸细菌（ＭＲＳ）培养基中添加不同的
物质，选择性抑制一些肠道细菌，并根据双歧杆菌的菌
落形态和色泽达到双歧杆菌快递分离和筛选的目的，
以期为以后的科研和生产构建良好的种质资源基础。
１　 材料与方法
１． １　 材料与仪器
１􀆰 １􀆰 １　 试样来源
新鲜粪便：采自南京工业大学的健康学生。
１􀆰 １􀆰 ２　 培养基
缓冲蛋白胨水溶液［６］ （１ Ｌ）：蛋白胨 １０ ｇ，ＮａＣｌ
５ ｇ，Ｎａ２ＨＰＯ４ ２ ｇ，ＫＨ２ＰＯ４ ２ ｇ。
ＭＲＳ固体培养基（１ Ｌ）：胰蛋白胨 ５ ｇ，酵母浸
出粉 ５ ｇ，柠檬酸铁铵 ２ ｇ，乙酸钠 ５ ｇ，Ｎａ２ＨＰＯ４２ ｇ，
ＭｎＳ０４·Ｈ２Ｏ ０􀆰 ０５ ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０􀆰 ５ ｇ，葡萄糖 １５
ｇ，乳糖 ５ ｇ，Ｌ 半胱氨酸盐酸盐 ０􀆰 ５ ｇ，吐温 ８０ １
ｍＬ，琼脂 ２５ ｇ。 调 ｐＨ ６􀆰 ７，１２１℃灭菌 １５ ｍｉｎ。
改良 ＭＲＳ固体培养基：在 ＭＲＳ 培养基的基础
上分别添加 ５ 溴 ４ 氯 ３ 吲哚 β Ｄ 半乳糖苷
（Ｘ Ｇａｌ）０􀆰 ０６ ｇ ／ Ｌ， ＬｉＣｌ ４ ｇ ／ Ｌ。
１􀆰 １􀆰 ３　 仪器设备
ＹＯＸ Ⅱ型厌氧培养箱（上海新苗医疗器械制
造有限公司），ＳＷ ＣＪ １ＦＤ型超净台（苏州安泰空
气技术公司），ＹＸＱ ＬＳ ５０Ｓ１１ 型灭菌锅（上海博
迅实业有限公司医疗设备厂），Ｂｉｏｌｏｇ 全自动微生物
鉴定仪（美国 Ｂｉｏｌｏｇ公司）。
１． ２　 实验方法
１􀆰 ２􀆰 １　 试样的采集与处理
用灭菌竹签迅速挑取新鲜的人体粪便少许，放
入已灭菌好的装有 ９ ｍＬ 的缓冲蛋白胨水溶液的试
管中，充分振荡摇匀，制备菌悬液，然后用无菌缓冲
蛋白胨水溶液进行梯度稀释至 １０ － ７。
１􀆰 ２􀆰 ２　 双歧杆菌的分离和筛选
取适宜的连续 ３ 个梯度的稀释液各 １ ｍＬ 分别
注入无菌平皿中，倾注法制备平板，每个稀释度 ２ 块
平皿，待冷却后立即放入厌氧培养箱中 ３７ ℃倒置培
养 ４８ ～ ７２ ｈ。 根据菌落形态结合革兰氏染色结果，
对双歧杆菌疑似菌株进行进一步的划线分离，重复
划线转接，直至获得镜检纯的菌株为止。
１􀆰 ２􀆰 ３　 双歧杆菌的鉴定
首先对筛选出的双歧杆菌疑似菌株进行需氧
性鉴定，然后对需氧性鉴定阴性菌株进行接触酶试
验、甲基红试验、吲哚试验、Ｖ． Ｐ． 试验、硝酸盐还原
试验、明胶液化试验、脲酶试验，淀粉水解试验［７］。
在上述试验的基础上，利用 Ｂｉｏｌｏｇ 自动微生物分析
系统进行鉴定［８］。
２　 结果与讨论
２． １　 菌落及菌落形态的观察
对筛选得到的菌株在 ＭＲＳ培养基上进行培养，
结果发现不同菌株的菌落形状不同、大小不一，有
白色和淡黄色 ２ 种，挑取圆形表面光滑的白色菌落
进行染色，镜检后可以看到菌株有革兰氏阳性菌和
革兰氏阴性菌，呈球形、杆状、细长状等多种形态，
经反复划线后仍然难以得到纯培养物，镜检观察仍
有革兰氏阴性菌存在，双歧杆菌的分离比较困难。
在改良 ＭＲＳ培养基上可以看到平板上菌落形
态各异。 菌落色泽主要有白色、蓝色底蕴乳白色菌
落、蓝色菌落 ３ 种，形态为凸状、圆形且表面光滑。
分别挑取 ３ 种不同颜色的菌落进一步划线分离。 结
果发现：有蓝色底蕴乳白色菌落的菌体特征比较符
合双歧杆菌的形态特征，这与长双歧杆菌在该培养
基上的菌落形态、颜色（图 １）基本一致，且有比较明
显的 Ｖ 型、Ｙ 型和棒状（图 ２），以革兰氏阳性菌居
多；但是白色菌落和蓝色菌落的菌体以直杆状、球
形的为主，且革兰氏阴性菌较多，不符合双歧杆菌
的特性。 这说明在 ＭＲＳ培养基上添加 Ｘ Ｇａｌ可以
提高双歧杆菌的筛选效率。 最终，从 ２５ 份健康学生
的粪便中共获得 １０ 株双歧杆菌的疑似株（编号分
别为 Ｂ３、Ｂ４、Ｂ６、Ｂ８、Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１９、Ｂ２０、Ｂ２３和 Ｂ２４）。
图 １　 长双歧杆菌在改良的ＭＲＳ培养基上的菌落形态
Ｆｉｇ． １　 Ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ． ｌｏｎｇｕｍ ｏｎ
ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＭＲＳ ｍｅｄｉｕｍ
图 ２　 双歧杆菌疑似菌株的菌体形态（ ×１ ０００）
Ｆｉｇ． ２　 Ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｃａｎｄｉｄａｔｅ
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（ ×１ ０００）
本试验的目的是从健康人的肠道中获得双歧
杆菌，由于健康人的肠道中有大量的微生物，因此
９３　 第 ６ 期 熊　 强等：人源双歧杆菌的分离纯化及鉴定
从成人粪便中分离双歧杆菌相对比较困难。 常规
方法所使用的 ＭＲＳ 培养基对目的微生物的鉴别能
力不强，造成筛选的效率不高。 笔者在 ＭＲＳ 培养基
中添加 ＬｉＣｌ（４ ｇ ／ Ｌ）和 Ｘ Ｇａｌ（０􀆰 ０６ ｇ ／ Ｌ），能有效
提高培养基对双歧杆菌的鉴别能力。 一方面，添加
的 ＬｉＣｌ可以抑制大肠杆菌和乳酸菌的生长［９］，选择
性抑制杂菌的干扰；另一方面可以根据菌落的颜色
方便快捷地筛选到目的微生物。 多数双歧杆菌和
乳酸菌在生长中均能产生半乳糖苷酶，使底物
Ｘ Ｇａｌ分解，释放出吲哚从而使菌落显色，不同菌
种由于半乳糖苷酶的活力不同而使菌落呈现不同
的色泽［１０］，依此可作为鉴别依据。 双歧杆菌的菌落
呈乳白色带有蓝色，这与江晓等［１１］所报道的文献结
果一致，而与孙雪等［１２］和刁治民等［１３］所报道的文
献不一致，这可能是因为所选的培养基不一样。 孙
雪等［１２］在 ＮＰＮＬ 培养基上双歧杆菌的菌落亦呈深
蓝色；刁治民等［１３］在改良的 ＭＲＳ 培养基中添加
Ｘ Ｇａｌ，双歧杆菌菌落呈深蓝色，从而呈现不同的
结果。 造成上述颜色反应不一致的原因也可能和
分离的手段有关，如涂布接种和倾注接种对菌落的
色泽有一定的影响。
２． ２　 生理生化试验结果
１０ 株双歧杆菌疑似菌株进行生理生化试验鉴
定，结果发现 Ｂ８和 Ｂ１９在厌氧和有氧条件下均能生
　 　 　 　 　 　 　
长，因此淘汰这 ２ 株菌，对剩余 ８ 株菌的进一步进行
生理生化试验，结果见表 １。
表 １　 菌株的生理生化试验结果
Ｔａｂｌｅ １　 Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｅｓｔｓ
ｏｎ ｔｈｅ ｃａｎｄｉｄａｔｅ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
试验项目 Ｂ３ Ｂ４ Ｂ６ Ｂ１３ Ｂ１７ Ｂ２０ Ｂ２３ Ｂ２４
接触酶 ＋ － － － － － － －
甲基红 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｖ． Ｐ． － － － － － － － －
吲哚 － － － － － － － －
硝酸盐 ＋ － ＋ － － － － －
明胶液化 ＋ － ＋ － － － － －
脲酶 － － － － － － － －
淀粉水解 － － ＋ － － － － －
　 注：“ ＋ ”为阳性，“ － ”为阴性。
由表 １ 可知：Ｂ３，Ｂ６这 ２ 株菌株不是双歧杆菌，
其余的均可以初步断定是双歧杆菌。
２． ３　 Ｂｉｏｌｏｇ自动微生物分析系统的鉴定结果
对初步确定为双歧杆菌的菌株利用 Ｂｉｏｌｏｇ自动
微生物分析系统进行进一步鉴定。 在 Ｍｉｃｒｏｌｏｇ 应用
程序中选择的培养时间 ２０ ～ ２４ ｈ，鉴定板类型 ＡＮ，
菌株类型 ＡＮ⁃ＧＰ。 鉴定结果见表 ２。
表 ２　 利用 Ｂｉｏｌｏｇ自动微生物分析系统进行菌株鉴定的结果
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｙｓｔｅｍ ｏｎ ｃａｎｄｉｄａｔｅ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
鉴定菌株 Ｂ４ Ｂ１３ Ｂ１７ Ｂ２０ Ｂ２３ Ｂ２４
鉴定结果 Ｂ． ｂｉｆｉｄｕｍ ＮＯ ＩＤ Ｂ． ｂｉｆｉｄｕｍ Ｂ． ｌｏｎｇｕｍ Ｂ． ｂｉｆｉｄｕｍ Ｂ． ｂｉｆｉｄｕｍ
相似度（ＳＩＭ） ０􀆰 ６５８ ０􀆰 ７８９ ０􀆰 ６８９ ０􀆰 ７０９ ０􀆰 ３３９
　 　 　 　 　 　 注：相似度大于 ０􀆰 ５ 的可信度比较高。
　 　 由表 ２ 可知：菌株 Ｂ４，Ｂ１７和 Ｂ２３为两歧双歧杆菌
（图 ３），Ｂ２０为长双歧杆菌（图 ４），而 Ｂ１３未鉴定出，
说明该菌株不是双歧杆菌，而 Ｂ２４的相似度低于
０􀆰 ５，可靠性很低，无法判断其是否是双歧杆菌，可利
用 １６Ｓ ｒＤＮＡ等分子生物学手段进一步鉴定。
由于双歧杆菌菌体形态的不稳定，同一菌株在
生长的不同时期或不同条件下也可能显现不同的
形态［１４］，而且经过多次传代培养后革兰氏染色将会
从阳性转变为阴性［１３］，因此菌株在初次分离时菌体
有比较明显的 Ｖ 型、Ｙ 型和棒状，多次传代后菌体
图 ３　 两歧双歧杆菌的菌体形态（ ×１ ０００）
Ｆｉｇ． ３　 Ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ． ｂｉｆｉｄｕｍ（ ×１ ０００）
０４ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １１ 卷　
的形态变为较小的、弯曲的杆状，有些菌株的革兰
氏染色结果甚至显示为阴性。 此外，由于双歧杆菌
在实验室传代的过程中不能保证严格的厌氧条件，
野生菌株在人工培养条件下可能发生一定的变异，
因此在利用 Ｂｉｏｌｏｇ全自动微生物分析系统鉴定双歧
杆菌前应严格控制传代次数，且应注意接种好的鉴
定板在培养时厌氧环境中不能含 Ｈ２，否则会影响实
验结果的准确性。
图 ４　 长双歧杆菌的菌体形态（ ×１ ０００）
Ｆｉｇ． ４　 Ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ． ｌｏｎｇｕｍ（ ×１ ０００）
３　 结　 论
利用改良的 ＭＲＳ 培养基从健康人的肠道中筛
选得到 １０ 株双歧杆菌疑似菌株，经生理生化和
Ｂｉｏｌｏｇ自动微生物分析系统鉴定，３ 株为两歧双歧杆
菌，１ 株为长双歧杆菌。 和传统 ＭＲＳ 培养基相比
较，改良 ＭＲＳ培养基能显著提高筛选的效率。
参考文献：
［ １ ］ 　 汪雪雁．双歧杆菌的研究进展［Ｊ］ ． 安徽农业大学学报，２０００，
２７（２）：１７５⁃１７７．
［ ２ ］ 　 Ｈａｄａｄｊｉ Ｍ，Ｂｅｎａｍａ Ｒ，Ｓａｉｄｉ Ｎ，ｅｔ ａｌ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｉｖａｂｌｅ
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｂｒｅａｓｔ⁃ｆｅｄ ｉｎｆａｎｔｓ ｆｅｃｅｓ ｉｎ
Ｗｅｓｔ Ａｌｇｅｒｉａ［Ｊ］ ． Ａｆｒ Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００５，４（５）：４２２⁃４３０．
［ ３ ］ 　 Ｙｏｕｎ Ｓ Ｙ，Ｓｅｏ Ｊ Ｍ，Ｊｉ Ｇ Ｅ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］ ． Ｌｅｔｔ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，
２００８，４６（１）：７⁃１３．
［ ４ ］ 　 秦玲玲，廖海印，金雨华，等． 双歧杆菌的分离与培养［ Ｊ］ ． 齐
齐哈尔大学学报，２００８（１）：７８⁃８２．
［ ５ ］ 　 孙丽丽，王超群．双歧杆菌的分离与鉴定［ Ｊ］ ．农产品加工：学
报，２０１１（７）：９９⁃１０１．
［ ６ ］ 　 苏世彦．双歧杆菌的分离、鉴定与驯化［Ｊ］ ．江苏食品与发酵，
１９９８（２）：１０⁃１３．
［ ７ ］ 　 文钰，杨汝德．猪源双歧杆菌的分离纯化及初步鉴定［ Ｊ］ ． 现
代食品科技，２００７（４）：１１⁃１３．
［ ８ ］ 　 曾哲灵，罗敏，梁丽军． Ｂｉｏｌｏｇ 微生物自动分析系统在乳酸菌
鉴定中的应用 ［ Ｊ］ ． 南昌大学学报：理科版，２００８，３２ （４）：
３８５⁃３８８．
［ ９ ］ 　 杜连祥，路福平．微生物学实验技术［Ｍ］． 北京：中国轻工业
出版社，２００６．
［１０］ 　 江晓，陈晓蔚，贾力敏，等． 混合制剂中快速计数双歧杆菌鉴
别培养基的研究［Ｊ］ ．中国乳品工业，２００４，３２（４）：２２⁃２４．
［１１］ 　 江晓，陈晓蔚，曾理，等． Ｘ Ｇａｌ培养基 ＋ ＰＣＲ法快速鉴定酸奶
中的双歧杆菌［Ｊ］．现代预防医学，２００５，３２（１２）：１６２９⁃１６３０．
［１２］ 　 孙雪，陈树兴，朱文学，等． Ｘ Ｇａｌ 在双歧杆菌分离与活菌计
数方面的应用研究［Ｊ］ ．现代食品科技，２００５，２１（２）：６４⁃６５．
［１３］ 　 刁治民，魏克家，陈占全，等． 农业微生物工程学［Ｍ］． 西宁：
青海人民出版社，２００７．
［１４］ 　 凌代文，东秀珠．乳酸细菌分类鉴定及实验方法［Ｍ］． 北京：
中国轻工业出版社，１９９９．
１４　 第 ６ 期 熊　 强等：人源双歧杆菌的分离纯化及鉴定