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ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－３６７８．２０１２．０５．０１０
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ＣＨＯｃｅｌｓａｎｄｉｔｓｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ＬＩＳｈｉｃｈｏｎｇ，ＹＥＬｉｎｇｌｉｎｇ，ＬＩＵＨｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＺｈｅｎｇｇｕａｎｇ，
ＧＡＯＬｉｈｕａ，ＨＵＸｉａｎｗｅｎ，ＣＨＥＮＺｈａｏｌｉｅ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００７１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｅｆｉｃｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｆｏｒｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｐｒｏｕｒｏｋｉｎａｓｅ（ｒｈＰｒｏＵＫ）ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃ
ｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｈｉｃｋｅｎβｇｌｏｂｉｎＭＡＲｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｈｕｍａｎｅｌｏｎｇａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒａｌｐｈａ１（ｈＥＦ１α）
ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｉｎｇｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ａｎｄＲＮＡｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｔｈｅｏｕｔｐｕｔｓｅｑｕｅｎｃｅ．ＴｈｅｒｈＰｒｏＵＫｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｒｅａｃｈｅｄ１２９９ＩＵ／ｃｅｌｓ６／ｄｉｎＣＨＯ（Ｃｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒｏｖａｒｙ）ｃｅｌｌｉｎｅｓ．ＴｈｅｒｈＰｒｏＵＫ
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｐｕｒｉｆｉｅｄｗｉｔｈｃａｔｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒａｐｈｙ，ｇｅｌｅｘｃｌｕｓｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｐｒｏｃｅｓｓｒｅｓｕｌｔｅｄｉｎｒｈＰｒｏＵＫｐｕｒｉｔｙｏｖｅｒ９５％ ｗｉｔｈｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｏｆ
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［１］　ＫａｓａｉＳ，ＡｒｉｍｕｒａＨ，ＮｉｓｈｉｄａＭ，ｅｔａｌ．Ｐｒｉｍａｒｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｓｉｎｇｌｅ
ｃｈａｉｎｐｒｏｕｒｏｋｉｎａｓｅ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９８５，２６０（２２）：
１２３８２１２３８９．
［２］　ＣｏｌｅｎＤ，ＺａｍａｒｏｎＣ，ＬｉｊｎｅｎＨＲ，ｅｔａｌ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｐｌａｓｍｉｎｏ
ｇｅｎｂｙｐｒｏｕｒｏｋｉｎａｓｅ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９８６，２６２（３）：
１２５９１２６６．
［３］　ＴｏｏｍｂｓＣＦ．Ｎｅｗｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓｉｎｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｃｕｒ
ＯｐｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌ，２００１，１（２）：１６４１６８．
［４］　
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．
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［Ｊ］．
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，２００８，７（５）：４３０４３２．
［５］　ＷｅｃｈｅｓｌｅｒＬＲ．Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃｔｈｅｒａｐｙｆｏｒａｃｕｔｅｉｓｃｈｅ
ｍｉｃｓｔｒｏｋｅ［Ｊ］．ＮｅｗＥｎｇＪＭｅｄ，２０１１，３６４：２１３８２１４６．
［６］　ＮｏｒｄｔＴＫ，ＢｏｄｅＣ．Ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓ：ｎｅｗｅｒｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃａｇｅｎｔｓａｎｄ
ｔｈｅｉｒｒｏｌｅｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｊ］．Ｈｅａｒｔ，２００３，８９：１３５８１３６２．
［７］　ＳｔｉｃｋＴ，ＨｅｎｒｙＭＴ．Ｅｆｉｃａｃｙｏｆｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃａｇｅｎｔｓｉｎｔｈｅｔｒｅａｔ
ｍｅｎｔｏｆｐｕｌｍｏｎａｒｙｅｍｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．ＥｕｒＲｅｓｐｉｒＪ，２００５，２６：
８６４８７４．
［８］　ＣｈｅｎＺＬ，ＷｕＢＣ，ＬｉｕＨ，ｅｔａｌ．Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｈｉｆｔａｓａｐｒｏｃｅｓｓ
ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｓｔｅｐｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｐｒｏｕｒｏｋｉｎａｓｅｂｙａｒｅｃｏｍ
ｂｉｎａｎｔＣｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒｏｖａｒｙｃｅｌｌｉｎｅｉｎｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｐｅｒｆｕｓｉｏｎ
ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．ＪＢｉｏｓｃｉＢｉｏｅｎｇ，２００４，９７（４）：２３９２４３．
［９］　ＪｅｓｐｅｒｓｅｎＪ，ＡｓｔｒｕｐＴ．Ａｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｆｉｂｒｉｎｐｌａｔｅａｓｓａｙｏｆｆｉｂｒｉｎｏ
ｌｙｔｉｃａｇｅｎｔｓ：ｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙａｎｄｐｒｅｃｉｓｉｏｎ
［Ｊ］．Ｈａｍｏｓｔａｓｉｓ，１９８３，１３（５）：３０１３１５．
［１０］　
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１９９８：８８８８９７．
［１１］　
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［Ｊ］．
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，２００９，２０（３）：４２２４２５．
［１２］　ＢａｒｎｅｓＬＭ，ＤｉｃｋｓｏｎＡＪ．Ｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｆａｃｔｏｒｉｅｓｆｏｒｅｆｉｃｉｅｎｔ
ａｎｄｓｔａｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＣｕｒＯｐｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００６，
１７：３８１３８６．
［１３］　ＤｅｅｒＪＲ，ＡｌｉｓｏｎＤＳ．Ｈｉｇｈｌｅｖｅｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｉｎｍａｍ
ｍａｌｉａｎｃｅｌｓｕｓｉｎｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｓｅｑｕｅｎｃｅｓｆｒｏｍ ｔｈｅ
ＣｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒＥＦ１ɑｇｅｎｅ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＰｒｏｇ，２００４，２０：８８０
８８９．
［１４］　ＧｉｒｏｄＰＡ，ＺａｈｎＺａｂａｌＭ，ＭｅｒｍｏｄＮ．Ｕｓｅｏｆｃｈｉｃｋｅｎｌｙｓｏｚｙｍｅ５′
ｍａｔｒｉｘａｔａｃｈｍｅｎｔｒｅｇｉｏｎｔｏｇｅｎｅｒａｔｅｈｉｇｈｐｒｏｄｕｃｅｒＣＨＯｃｅｌｌｉｎｅｓ
［Ｊ］ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ，２００５，９１（１）：１１１．
［１５］　ＫｉｍＫＳ，ＫｉｍＭＳ，ＭｏｏｎＪＨ，ｅｔａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
ａｎｔｉｂｏｄｙｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎＨＥＫ２９３ＥｃｅｌｓｂｙＷＰＲＥ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎ
ｏｌＢｉｏｐｒｏｃＥｎｇ，２００９，１４：６３３６３８．
［１６］　ＢｕｋｏＡＭ，ＫｅｎｔｚｅｒＥＪ，ＰｅｔｒｏｓＡ，ｅｔａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｐｏｓｔ
ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｄｏｍａｉｎｏｆｕｒｉｎａｒｙｔｙｐｅ
ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ［Ｊ］．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，１９９１，８８：
３９９２３９９６．
［１７］　ＳａｒｕｂｂｉＥ，ＮｏｌｉＭＬ，ＲｏｂｂｉａｔｉＦ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｌｙｃｏｓｙｌａ
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