全 文 ：第 ! 卷第 # 期
$%&% 年 && 月
生"物"加"工"过"程
*
8FM3$%&%
DFC"&%37#7 ,^3C11L3$ ?#6!3$%&%3%#3%%6
收稿日期"$%&% ?%# ?%$
基金项目"江苏省无锡市 (% 资助项目
作者简介"刘信宁$&7!0%#男#山东烟台人#硕士研究生#研究方向"药物合成与生物催化技术&汤鲁宏$联系人%#副教授#Z-J@C/"B@LX/G
! 抗坏血酸洛芬酯非水相酶促合成的动力学与热力学
刘信宁#汤鲁宏
$江南大学 医药学院#无锡 $&0&$$%
摘"要"对酶法合成 ! 抗坏血酸洛芬酯$芬维*酯%的反应动力学与热力学进行研究#确定了最有效的酶促反应环
境( 合成布洛芬维*酯的最优条件"转速$%% E,JCL#温度#( j#加酶量 (f$以底物的质量分数计%#底物浓度
& JF/,N#平衡所需时间## <#平衡时产物质量分数为 &7g%6f&合成酮洛芬维 *酯的最优条件"$%% E,JCL##% j#加
酶量 6g(f#底物浓度#%% JJF/,N#平衡时间&$ <#产物质量分数为 &%g#f&合成氟比洛芬维 *酯的最优条件"
$%% E,JCL##( j#加酶量 (f#底物浓度0%% JJF/,N#平衡时间&00 <#产物质量分数为 #g6#f( 对底物进行了比较#
得到了各自的动力学与热力学参数( 布洛芬米氏常数为 %g&%&
#
JF/,N#?
J@b
n$g#!
#
JF/,$JCL$X%#热力学平衡常数
为 %3&##&酮洛芬的分别为%g&00
#
JF/,N#&$g76
#
JF/,$JCL$X%#%g%7&&氟比洛芬的分别为%g&!(
#
JF/,N#7g(
#
JF/,$JCL$X%#%g%(((
关键词"酯&脂肪酶&洛芬
中图分类号"+#03$""""文献标志码".""""文章编号"$ ?#6!$$%&%%%# ?%% ?%6
M./0F.:15/GF-04I2GK/5I.:127!H51:24JK694270/01F041
1K/F-01.1:5F56KL0GJK 6.9510./BHI0F-K6HBHJ3F5/26
NOTPCL-LCLX#5.8VNG-
BCJH## <#&7g%6f FIAFLAHLBE@BCFL FI2EFDGAB1& @LD aHBF2EFIHL"$%% E,JCL##% j#6g(f IFE@DDCLXHL-
;KJHdG@LBCBK##%% JJF/,NFI1G:1BE@BHAFLAHLBE@BCFL#&$ <#&%g#f& @LD I/G2EFIHL"$%% E,JCL##( j#
(f IFE@DDCLXHL;KJHdG@LBCBK#0%% JJF/,NFI1G:1BE@BHAFLAHLBE@BCFL#&00 <##g6#f34H1G/B1_HEH
JFDH/HD B
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JF/,N#?
J@b
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#
JF/,$JCL!X%#=n%g%((3
M0K N24G1"H@1BHE&/C2@1H&2EFIHL
""自从 $% 世纪 !% 年代 R@a@等*&+相继发现一些
酶在无水的环境下仍具有催化活性后#越来越多的
人致力于非水介质中酶结构和功能的研究#使得传
统酶学领域迅速产生出一个全新的分支非水
酶学$LFL@dGHFG1HL;KJF/FXK%( 在非水相酶催化的
研究领域中#人们对脂肪酶的探索非常积极#已广
泛应用于油脂加工)食品)医药)日化等行业*$+ (
维生素 *是维持机体正常生理功能的重要维
生素之一#广泛参与机体氧化)还原等复杂代谢过
程*+ #易溶于水#可以很好地被人体吸收( 芳基丙
酸类的非甾体抗炎药具有良好的抗炎)解热和镇痛
作用*0+ #但此类药物都难溶于水#且具有胃肠道副
作用等缺点*(+ ( 为提高该类药物的水溶性和生物
利用度#以便更好地应用于临床#本实验室通过酶
促有机合成技术*#+ #将洛芬类药物$布洛芬)酮洛
芬)氟比洛芬%和维生素*$cA%有选择性地结合#合
成一种新的化学单体#以期获得一类水溶性好)生
物利用度高)副反应相对较小的消炎镇痛药物(
本文研究酶)底物)溶剂等多种因素在酶催化
反应中的作用和影响#在此基础上#探讨非水相酶
法合成芬维*酯反应的动力学和热力学机制#以确
定最有效的酶促反应环境(
D?材料与方法
D=D?试剂
脂肪酶8FMF;KJ0(#诺维信公司提供&其余试
剂均为分析纯(
D=B?主要仪器
5SR $$ 型空气振荡器#江苏太仓市实验设备
厂&\ $%%% 型高效液相色谱仪#日本日立公司(
DWO?实验方法
由一定量的布洛芬$或酮洛芬)氟比洛芬%和相
应比例的 ! 抗坏血酸及叔戊醇等溶剂组成反应体
系#考察底物浓度)溶剂)酶质量分数)反应温度)摇
床转速对反应速率的影响(
DWP?分析方法
薄层层析法#$## 二氯靛酚显色法*6+ #高效液
相色谱法(
DWR?定量方法
根据高效液相色谱已建立的芬维 *酯的标准
曲线#利用峰面积积分法计算所生成的芬维 *酯的
质量分数(
B?结果与讨论
BWD?摇床转速对芬维,酯合成反应速率的影响
在其他条件均相同的情况下#在 % i$(% E,JCL
范围内测定分别以布洛芬)酮洛芬和氟比洛芬为底
物时摇床转速对反应速率的影响#结果见图 &( 由
图 & 可知"在转速较低时#由于传质阻力大#反应速
率也较低&随着转速增大#反应速率也随之逐渐增
大&当摇床转速增大至$%% E,JCL以上时#反应速率
不再显著增加#说明此时外扩散限制与传质因素对
反应的影响已经可以忽略( 所以#把摇床转速设定
为 $%% E,JCL(
图 D?摇床转速对反应速率的影响
Q.;=D?#70:F12742F54K 1900G2/405:F.2/A062:.FK
BWB?温度对芬维,酯合成反应初速率的影响
有机相中固定化酶具有较高的热稳定性#固
定化酶在有机相中的最适温度比水相中的要
高*!+ ( 温度不但影响酶的催化活性和操作稳定
性#也影响底物的状态以及底物和产物的传质速
度( 在其他条件均相同的情况下#在 0( i6% j范
围内测定 种底物的温度对反应速率的影响#实
验结果见图 $(
图 B?温度对反应速率的影响
Q.;=B?#70:F127F0I9045F3402/405:F.2/A062:.FK
0 生"物"加"工"过"程"" 第 ! 卷"
""由图 $ 可知"温度对芬维 *酯的合成反应速率
具有较大的影响( 随着温度的升高# 种底物合成
! 抗坏血酸棕榈酸酯的反应速率都迅速升高( 当
分别达到最适温度后#随着温度的继续升高#反应
速率反而迅速降低( 种底物合成芬维*酯的最适
温度分别为 #()#%)#( j(
B=O?酶的添加量对芬维,酯合成反应速率的影响
""在其他条件相同的情况下#分别研究酶的质量
分数对以布洛芬)酮洛芬)氟比洛芬为底物的合成
反应速率的影响#结果见图 ( 由图 可知"随着酶
质量分数的增大#反应速率逐渐加快#当酶质量分
数达到某一值时#反应速率基本保持恒定#这是由
于底物已被酶全部消耗#故酶促反应速率保持不
变( 当酶质量分数达到最适宜浓度#即底物为布洛
芬时 (f#酮洛芬时 6g(f#氟比洛芬时 (f#反应速
率达到恒定(
图 O?酶的质量分数对反应速率的影响
Q.;=O?#70:F127G.7040/F6.9510:2/:0/F45F.2/1
2/405:F.2/A062:.FK
BWP?底物$!%浓度对芬维,酯合成反应速率的影响
""在 ! 抗坏血酸和酶量等其他条件相同的情况
下#改变 种底物的浓度#测出相应的反应速率#结
果见图 0( 由图 0 可知"合成反应速率随着底物浓
度的增大而加快( 此后#反应速率变化的趋势逐渐
变缓#最后达到一最大值( 继续增加底物浓度时#
反应速率反而下降#这可能是由于底物的抑制作用
导致的*7+ ( 故应以出现最大值时的浓度为反应最
适宜底物浓度#若再增大底物浓度#不仅使分离提
纯过程复杂化#并有可能减小反应速率(
BWR?反应溶剂对芬维,酯合成反应速率的影响
溶剂也是影响反应的一个重要因素#反应体系
中加入溶剂后#反应底物的浓度降低#与酶接触的
表面积增大#转化率明显提高( 不同溶剂对脂肪酶
酯化反应的影响是由于溶剂的疏水性不同引起的(
图 P?底物浓度对反应速率的影响
Q.;=P?#70:F12713J1F45F0:2/:0/F45F.2/1
2/405:F.2/A062:.FK
此反应底物是由维生素 *和洛芬类药物组成#两类
底物分别为亲水性与疏水性的物质#作为反应底物
互不相溶( 因此#需选择有一定亲水性$即有一定
极性%的溶剂#这样对维生素 *有一定溶解性( 同
时极性又不能太强#否则极易造成酶的失活( 实验
所选用的脂肪酶8FMF0( 在不同有机介质中催化维
生素*与布洛芬的反应初速率如表 & 所示( 表 & 结
果表明"在叔戊醇)叔丁醇)甲苯)丙酮中#由 8FMF
0( 催化的反应均可以发生#反应相对初速率各不
相同#而在氯仿中#催化反应不能发生(
表 D?溶剂对反应速率的影响
E5J60D?#70:F12724;5/.:126A0/F12/405:F.2/A062:.FK
溶剂 反应速率,$
#
JF/!JCL
?&
!X
?&
%
叔戊醇 %g6
叔丁醇 $(g#
甲苯 &%g
丙酮 &7g!
氯仿 %
BW@?动力学参数的确定
在传统的水溶液体系中#酶催化反应符合经典
米氏方程#而在非传统反应介质中#由于在有机溶
剂中的不溶解性#酶以分散的固相参与反应#反应
本身为非均相#反应机制变得更加复杂#应当考虑
传质等因素对反应的影响( 在反应过程中#若底物
或产物在液相主体和固定化酶外表面之间存在着
浓度梯度时则会引起外扩散( 同时#固定化酶催化
的反应与固定化酶颗粒内部的物理结构常数)反应
物系的性质等因素有关时会影响其内部阻力的变
化而发生内扩散*7+ ( 由 $g& 可知#提高摇床转速能
够减少外扩散与传质引起的传质影响&由 $g 可知#
("第 # 期 刘信宁等"! 抗坏血酸洛芬酯非水相酶促合成的动力学与热力学
酶的添加浓度在最适浓度范围之内时#随着酶浓度
的增加#反应速率逐渐加快#并且呈现线性关系(
这说明内扩散对整个反应的影响不大#反应主要是
由动力学所控制( 因此#建立以下动力学模型可忽
略扩散以及传质对反应速率的影响(
$g#g&"无底物抑制的浓度范围及其动力学常数
脂肪酶催化反应符合双底物=CLX-=FLX` C-`C反
应机制方程*&%+ #经过脂肪酶 $Z%先与芳基丙酸
$4*++S%结合形成脂肪酶 酸复合物$Z-4*++S%#
接着该复合物转变成酰基脂肪酶中间体$Y%#在释
放出水后#该酰基酶中间体被 ! 抗坏血酸$4q+S%
进攻而形成芬维*酯$4*++4%#并释放出游离的脂
肪酶*&&+ (
按照上述机制#反应应当符合动力学方程式
?E
?
J@b
=
J.
+
.
F
=
J`
+
`
F&
$&%
式中"?为反应初速率#
#
JF/,$JCL!X%&?
J@b
为反应最
大速率#
#
JFN,$JCL!X%&+
.
和 +
`
分别为 ! 抗坏血
酸和底物的浓度#JF/,N(
通过 $g0 中已经测定的底物浓度下的反应初速
率#分别作双倒数曲线#结果见图 ( i6(
图 R?布洛芬合成芬维,酯反应的 DY1
!
与 DY5的关系
Q.;=R?X065F.2/J0FN00/DY1
!
5/GDY5./1K/F-01.127
! 51:24JK6.J394270/01F04742I.J394270/
""由于 ! 抗坏血酸在叔戊醇溶剂中是微溶的#它
在体系中始终过饱和#其浓度可视为恒定#此反应
可看 作 是 单 底 物 反 应( 则 将 式 $ & % 改 为
NCLH_H@MHE-`GEa方程
&
?
E
=
J
?
J@b
&
+
]
F
&
?
J@b
$$%
根据式$$%#可以求得在 ! 抗坏血酸饱和浓度下#
各底物的表观动力学参数"布洛芬与 ! 抗坏血酸合成
布洛芬维*酯反应的表观米氏常数=
J
n%g&%&
#
JF/,N#
图 @?酮洛芬合成芬维,酯反应的 DY1
!
与 DY5的关系
Q.;=@?X065F.2/J0FN00/DY1
!
5/GDY5./1K/F-01.127
! 51:24JK6`0F294270/01F04742I 0`F294270/
图 ]?氟比洛芬合成芬维,酯反应的DY1
!
与DY5的关系
Q.;=]?X065F.2/J0FN00/DY1
!
5/GDY5./1K/F-01.127
! 51:24JK676394270/01F04742I76394270/
表观?
J@b
n$g#!
#
JF/,$JCL!X%&酮洛芬与 ! 抗坏血酸
合成酮洛芬维 *酯反应的表观米氏常数 =
J
n
%g&00
#
JF/,N#?
J@b
n&$g76
#
JF/,$JCL!X%&氟比洛芬与
! 抗坏血酸合成氟比洛芬维*酯反应的表观米氏常数
=
J
n%g&!(
#
JF/,N#?
J@b
n7g(
#
JF/,$JCL!X%(
如果同一种酶有几种底物#就有几种 =
J
值#那
么=
J
值最小的底物一般称为该酶的最适底物( 不
同的底物有不同的=
J
值#说明同一酶对不同底物的
亲和力不同#一般用 &,=
J
近似地表示酶对底物亲
和力的大小#&,=
J
愈大#表示酶对该底物的亲和力
大#酶促反应易于进行( 在 种底物的最适浓度范
围内#布洛芬的表观米氏常数为 %g&%&#酮洛芬和氟
比洛芬的分别为 %g&00)%g&!(( 可见#布洛芬的 =
J
值最小#&,=
J
最大#即与酶的亲和力最大#酶促反应
易进行(
$g#g$"单底物抑制浓度范围及动力学参数
研究发现以布洛芬和酮洛芬为底物时#当底物
浓度分别升高至 & %%% JJF/,N与 #%% JJF/,N时#
反应的初速率反而下降#不再符合经典米氏方程#
# 生"物"加"工"过"程"" 第 ! 卷"
出现了单底物的抑制作用( 为研究这种现象#在反
应动力学方程式$&%的基础上#修改得到符合单底
物抑制的酶促反应动力学方程式
?E
?
J@b
=
J.
+
.
F
=
J.
+
`
+
.
=
F
=
J`
+
`
F& $%
式中"=
为底物的抑制常数( 将式$%改为双倒数
形式#整理后得到
&
?
E
&
?
J@b
F
=
J.
?
J@b
+
.
F
=
J.
+
`
=
?
J@b
+
.
F
=
J`
?
J@b
+
`
$0%
由于出现抑制现象是在底物为高浓度才发生#
在+
`
较大时#式$0%最右边的一相可以忽略*&&+ ( 这
样#+
`
与 &,?呈线性关系( 将高浓度时底物浓度 +
`
与相对应的 &,?作图#得到图 !#即可求得底物为布
洛芬时反应的抑制常数为%g$07
#
JF/,N#表观米氏
常 数 为 %g&$0
#
JF/,N# 表 观 ?
J@b
为 #g!7
#
JF/,$JCL!X%&底物为酮洛芬时反应的抑制常数为
%g!&
#
JF/,N#表观米氏常数为%g&#!
#
JF/,N#表观
?
J@b
为 &!g6
#
JF/,$JCL!X%(
图 >?底物浓度1
!
与 DY5的线性关系
Q.;=>?T./0544065F.2/J0FN00/1
!
5/GDY5
BW]?热力学参数的确定
在叔戊醇为溶剂的反应体系中#以最优浓度的
底物和酶在已确定的相应最优体系中进行反应#体
系中的芬维 *酯的生成量随时间的变化分别如图
7 i&& 所示(
""由图 7 i&& 可知"在叔戊醇溶剂中#分别反应
##)&$ 和 &00 <后体系中的芬维*酯的生成量随反
应时间的延长增加缓慢#说明此时反应已趋近平
衡#延长反应时间并不能有效增加体系中芬维 *酯
的生成量( 因此#在叔戊醇为反应介质的体系中#
热力学达到平衡所需要的时间可以确定(
根据布洛芬为底物的反应达到平衡时反应体
图 a?反应时间对布洛芬维,酯质量浓度的影响
Q.;=a?#70:F127405:F.2/F.I0F2 .J394270/./
F-01K1F0I
图 DC?反应时间对酮洛芬维,酯质量浓度的影响
Q.;=DC?#70:F127405:F.2/F.I0F2 0`F294270/./
F-01K1F0I
图 DD?反应时间对氟比洛芬维,酯质量浓度的影响
Q.;=DD?#70:F127405:F.2/F.I0F2 76394270/./
F-01K1F0I
系内产物与底物的浓度#cA与水的浓度#可以计算
达到平衡时的热力学平衡常数=#计算公式为
=E
+$产物%+$水%
+$布洛芬%+$cA% $(%
式中"+$产物%)+$水%)+$布洛芬%)+$cA%分别为产
物)水)布洛芬和 cA的浓度#JF/,N( 经测定#体系
中的水质量分数为 %g&f#即%g%(# JF/,N&而 cA溶
液始终饱和#浓度为%g%0( JF/,N&布洛芬维 *酯的
6"第 # 期 刘信宁等"! 抗坏血酸洛芬酯非水相酶促合成的动力学与热力学
浓度为%g&&! JF/,N&反应起始的底物布洛芬浓度
为& JF/,N(
根据式$(%可以计算在 #( j下#以布洛芬为底
物的酶促反应热力学平衡常数为 %g&##&同理##% j
下#以酮洛芬为底物的酶促反应平衡常数为 %g%7&&
在#( j下#以氟比洛芬为底物的酶促反应平衡常数
为 %g%(((
平衡常数的大小是反应进行程度的标志#它能
很好地表示出反应进行的完全程度( 一个反应的=
值越大#说明平衡时生成物的浓度越大#反应物剩
余浓度越小#反应物的转化率也越大#也就是正反
应的趋势越强( 可见#在 种底物的酶促反应中#以
布洛芬为底物的反应进行得最完全(
若改变反应起始底物的浓度#在达到平衡时体
系中水含量和 cA含量一定的情况下#可以得到不
同底物浓度下的产物芬维*酯的浓度#计算公式为
(
+E
=+
%
+$cA%
+$S
$
+% F+$cA%
$#%
式中"
(
+均为芬维 *酯浓度#JF/,N&+
%
为起始底物
浓度#JF/,N(
假定底物+
%
为 %g$)%g0)%g#)%g!)&g%)&g$ JF/,N#
通过式$#%计算得到的产物芬维*酯的浓度
(
+#进一
步通过式$6%得到产物固体混合物中芬维*酯的质
量分数(
;E
(
+G
(
+GF$+
%
H
(
+%GI
$6%
式中"G为芬维 *酯的相对分子质量&Gq为洛芬底
物的相对分子质量&$+
%
?
(
+%为平衡时洛芬底物浓
度#JF/,N(
它们三者的关系如表 $ 所示(
表 B?底物浓度对产物质量分数的影响
E5J60B?#70:F12713J1F45F0:2/:0/F45F.2/12/:2/:0/F45F.2/127942G3:F1
+$底物%,
$JF/!N
?&
%
布洛芬 酮洛芬 氟比洛芬
(
+,
$JF/!N
?&
%
;,f
(
+,
$JF/!N
?&
%
;,f
(
+,
$JF/!N
?&
%
;,f
%g$ %g%$0 &7g%6 %g%&0 &%g# %g%%! #g6#
%g0 %g%06 &7g%6 %g%$6 &%g# %g%&6 #g6#
%g# %g%6& &7g%6 %g%0& &%g# %g%$( #g6#
%g! %g%70 &7g%6 %g%(0 &%g# %g%0 #g6#
&g% %g&&! &7g%6 %g%#! &%g# %g%0$ #g6#
&g$ %g&0& &7g%6 %g%!$ &%g# %g%(& #g6#
""由表 $ 可知"不同底物浓度所生成产物的质量
分数为一定值#在反应所得固体混合物中的芬维 *
酯的质量分数分别为布洛芬维 *酯 &7g%6f)酮洛
芬维*酯 &%g#f)氟比洛芬维 *酯 #g6#f( 该结
果是由动力学与热力学的最优参数确定#与底物的
起始浓度无关(
O?结?论
笔者系统研究了酶法合成芬维 *酯反应中的
温度)转速)底物浓度)酶的添加量)平衡时间)平
衡常数等动力学和热力学的参数#确定了最佳的
酶促反应环境#实现了条件的优化( 研究结果显
示"酶 促 合 成 布 洛 芬 维 *酯 的 参 数 为 转 速
$%% E,JCL#温度#( j#底物浓度& JF/,N#加酶量
(f#平衡所需时间 ## <#平衡常数 %g&###平衡时
产物质量分数为 &7g%6f&酮洛芬维 *酯的参数为
转速$%% E,JCL#温度 #% j#底物浓度#%% JJF/,N#
加酶量 6g(f#平衡所需时间 &$ <#平衡常数
%g%7&#质量分数 &%g#f&氟比洛芬维*酯的参数
为 转 速 $%% E,JCL# 温 度 #( j# 底 物 浓 度
0%% JJF/,N#加酶量 (f#平衡时间&00 <#平衡常
数 n%g%((#质量分数 #g6#f( 通过 NCLH_H@MHE-
G`Ea方程#确定了不同底物下的表观 =
J
与 ?
J@b
#得
出了对酶亲和力最大的底物布洛芬( 该研究
内容对酶反应工艺的确定和酶反应器的选择具有
一定的参考价值(
参考文献"
*&+"R@a@.#)/:@LFM.Q3ZL;KJ@BCAA@B@/K1C1CL FEX@LCAJHDC@*W+3
]ACHLAH#&7!0#$$0"&$07-&$(&3
*$+"苑博华#蔡宇杰#廖祥儒#等3低温脂肪酶的产酶条件优化及其
酶学性质*W+3中国生物工程杂志#$%&%#%$%"#6-63
UG@L F`
JHLB@BCFL AFLDCBCFL IFE@AF/D-@ABCMH/C2@1H@LD HL;KJ@BCAA<@E@A-
BHEC;@BCFL*W+3*
杂志#$%%7#&7$$%"0(6-0#%3
R<@LXY@LX#V@F4FLX34H1H@EA< 2EFXEH11FIB
A
*W+3*
*0+"马
!
#张宁#王凤山3酮洛芬临床应用概况*W+3食品与药品#
$%%6#7$0%"00-0#3
Q@` C@F#R<@LX8CLX#[@LXYHLX1<@L3+MHEMCH_FL A/CLCA@/@22/C-
A@BCFL FIaHBF2EFIHL*W+3YFFD @LD \EGX#$%%6#7$0%"00-0#3
*(+"陈淡#胡晋红#范国荣#等3酮洛芬的制剂研究*W+3药学进展#
$%%&#$($0%"$&7-$$3
*
A@/]ACHLAH1#$%%&#$($0%"$&7-$$3
*#+"汤鲁宏#张浩#孙云飞3非水相酶促 ! 抗坏血酸棕榈酸酯合成
的动力学*W+3无锡轻工大学学报#$%%%#&7$0%"07-(3
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*6+"汤鲁宏#孙云飞#张浩3薄层扫描法测定 ! 抗坏血酸棕榈酸酯
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*!+"夏目西卡玛尔#吾满江艾力3脂肪酶催化合成棕榈酸维生素 *
酯的研究*W+3应用化工#$%%6##$0%"6-6(3
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*7+"赵晶晶#王芳#邓利3酶促棕榈酸鲸蜡酯合成的底物抑制作用
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反应动力学研究*W+3生物工程学报#&777#&($0%"(-(#3
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国内简讯
兰州化学物理研究所利用废弃食用油制备生物柴油技术获国家发明专利
中国科学院兰州化学物理研究所的*F盐催化剂研发课题组近年来开展了用废弃食用油制备生物柴油
的研究#将废弃食用油去杂质)脱水#进行预处理#然后加入无水乙醇作为萃取剂脱酸#再加入碱性复合催化
剂和甲醇溶液在 % i#% j下酯化 %g( i&g( <#最后经过分离)蒸馏得到生物柴油#生物柴油最高收率达到
7$g0f( 该技术获得国家发明专利$专利号"RN$%%#&%%0%&!g(%(
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7"第 # 期 刘信宁等"! 抗坏血酸洛芬酯非水相酶促合成的动力学与热力学