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Optmiization of ultrasound-assisted extraction technology by response surface methology for extracting polysaccharide of Jujube

响应面法优化超声波法提取红枣多糖工艺



全 文 :第 13卷第 5期
2015年 9月
生  物  加  工  过  程
Chinese Journal of Bioprocess Engineering
Vol􀆰 13 No􀆰 5
Sep􀆰 2015
doi:10􀆰 3969 / j􀆰 issn􀆰 1672-3678􀆰 2015􀆰 05􀆰 008
收稿日期:2014-06-04
作者简介:赖  颖(1981—),女,辽宁朝阳人,讲师,研究方向:发酵工程、生物能源,E⁃mail:lydia2050@126􀆰 com
响应面法优化超声波法提取红枣多糖工艺
赖  颖,赵锦慧,陈  茹
(周口师范学院 生命科学与农学学院,河南 周口 466001)
摘  要:以新郑红枣为原料,利用响应面法优化超声波提取红枣多糖工艺。 以红枣多糖的提取率为参考指标,研究
料液比、提取次数、提取时间 3个因素对红枣多糖提取率的影响。 在单因素试验的基础上,利用 Box⁃Behnken 中心
组合试验设计及响应面分析,对料液比、提取次数和提取时间进行优化组合,考察 3个因素对红枣多糖提取率的影
响。 结果表明:提取红枣多糖的最佳工艺条件为液料比 16 ∶ 1(mL / g)、提取次数 2次、提取时间 38 min,在此最佳条
件下,红枣多糖的实际提取率为 7􀆰 25%;证明此工艺可应用于红枣多糖的大规模提取。
关键词:红枣多糖;响应面法;超声波提取;Box⁃Behnken设计
中图分类号:S665􀆰 109+􀆰 2        文献标志码:A        文章编号:1672-3678(2015)05-0042-05
Optmiization of ultrasound⁃assisted extraction technology by response
surface methology for extracting polysaccharide of Jujube
LAI Ying,ZHAO Jinhui,CHEN Ru
(College of Life Science and Agriculture,Zhoukou Normal University,Zhoukou 466001,China)
Abstract:The purpose was to optimize the extraction of polysaceharides from Jujube. Using extraction
yield as criteria, we evaluated the effect of several parameters with the single factor experiment,including
solid to liquid ratio,separate times,and extraction time. Then we selected three factors that influenced
more significantly on polysaccharide extraction to design Box⁃Behnken center united experiment by
response surface methodology,so to study the interaction of the three factors with the extraction yield of
polysaccharide from Jujube. The optimum extraction conditions were as follows: liquid to solid ratio of 16 ∶
1 mL / g,separate times for 2 times,extracting time setting for 38 min. Under optimal conditions, yield of
Jujube polysaceharides was 7􀆰 25%. Our study provides the basis for large scale production of Jujube poly
saccharides.
Keywords:Jujube; response surface methodology; ultrasound⁃assisted extraction; Box⁃Behnken design
    红枣,又名华枣、刺枣、美枣、良枣,是鼠李科植物
枣属的成熟果实,含有丰富的营养,而且味道甜美[1]。
红枣的原产地为中国,主要分布于黄河流域,其主要
活性成分为生物碱类、黄酮类、维生素类和多糖等。
随着新型分离技术以及生命科学技术的发展,对多糖
生理活性的研究正受到人们越来越多的重视。 有实
验表明,红枣多糖具有明显的抗补体活性以及抗肿瘤
活性,还有促进淋巴细胞增殖的作用,同时对抗氧化
和提高免疫力具有重要作用[2-3]。
目前,用于提取红枣多糖的方法主要有 5种,分
别是热水提取法、酶提取法、碱液提取法、超声提取
法以及微波提取法[4]。 采用超声波辅助萃取,利用
超声波的空化效应增加溶剂穿透力,提高物质的浸
出速度和溶出次数,既能温和地将植物组织分解,
又能保持其生物活性不会遭到破坏,同时也会提高
红枣多糖的提取率[5]。
本文中笔者以河南新郑红枣为研究材料,进行
单因素试验设计[6-8],分析单因素试验结果,采用
Design⁃Expert软件设计中心组合实验方案优化河南
红枣多糖的提取工艺[9-11],探究利用超声波法提取
红枣多糖的工艺流程,以期为红枣多糖的进一步开
发利用提供参考。
1  材料和方法
1􀆰 1  实验材料
1􀆰 1􀆰 1  材料
新郑红枣,由周口师范学院实验中心提供。 浓
H2SO4、苯酚和无水乙醇等试剂皆为市售国产分析纯。
1􀆰 1􀆰 2  仪器
S22PC型可见分光光度计,上海棱光技术有限
公司;KQ2200型超声波清洗器,昆山市超声仪器有
限公司;1011 型电热鼓风干燥箱、FW 100 型高速
万能粉碎机,北京科伟永兴仪器有限公司;AL204 型
电子天平,梅特勒 托利多仪器有限公司;HWS12 型
电热恒温水浴锅,上海一恒科技有限公司。
1􀆰 2  实验方法
1􀆰 2􀆰 1  红枣多糖的提取工艺
将红枣洗净后去核,于烘箱中烘干,120 ℃下烘
干 3 h,烘干结束后,摊晾至凉,用万能粉碎机将红枣
粉碎,称取一定质量的红枣粉于锥形瓶中,加一定
体积的蒸馏水。 置于超声波清洗器中,在设定条件
下提取一定时间,然后向其中加入约 3 倍体积的无
水乙醇,使其沉淀,随后用抽滤机抽滤,即可得红枣
粗多糖。
1􀆰 2􀆰 2  红枣多糖含量的测定
采用苯酚 硫酸比色法测定样品中的多糖含
量[12-14]。 红枣多糖提取率计算见式(1)。
多糖提取率 = ρV / m × 100% (1)
式中:ρ为提取溶液中粗多糖质量浓度,g / mL;V为提
取溶液总体积,mL;m为提取所用的红枣粉质量,g。
1􀆰 2􀆰 3  单因素试验设计
取红枣粉 2􀆰 50 g,分成所需份数,以料液比、提
取次数、提取时间 3 个因素进行单因素设计。 液料
比选取 8 ∶ 1、12 ∶ 1、16 ∶ 1和 20 ∶ 1 mL / g,提取次数选
取 1、2和 3 次,提取时间选取 20、30、40 和 50 min,
研究各单因素对红枣多糖提取率的影响。
1􀆰 2􀆰 4  响应面试验设计
在单因素试验结果的基础上,确定提取次数 A、
提取时间 B、料液比 C 的范围,每一个自变量的高、
中、低实验水平分别为 1、0、-1 进行编码,根据 Box⁃
Behnken中心组合试验原理,以红枣的出糖率为响
应值设计三因素三水平的组合进行试验,试验水平
与组合见表 1。
表 1  响应面法设计因素和水平
Table 1  The response surface method design
factors and levels
水平 A提取次数 /次
B提取时间 /
min
C液料比 /
(mL·g-1)
-1 1 20 8 ∶ 1
0 2 35 14 ∶ 1
1 3 50 20 ∶ 1
2  结果与讨论
2􀆰 1  提取时间对红枣多糖提取率的影响
设定提取次数为 1次,液料比为 12 ∶ 1 mL / g,考
察提取时间(20、30、40 和 50 min)对红枣多糖提取
率的影响,结果如图 1所示。 由图 1可知:随着超声
提取时间的增加,红枣多糖提取率不断增高,并在
超声时间为 40 min 时,红枣多糖提取率最高;但超
声时间继续增高时,红枣多糖提取率反而下降。 这
可能是因为超声时间比较短时,红枣中的多糖浸出
不够充分;超声时间过长时,红枣多糖的结构可能
被破坏,反而导致红枣多糖的提取率下降,所以红
枣多糖的提取时间 40 min为宜。
图 1  提取时间对红枣多糖提取率的影响
Fig􀆰 1  Effect of extracting time on extraction yield
of polysaccharide from Jujube
2􀆰 2  提取次数对红枣多糖提取率的影响
设定提取时间为 40 min,液料比为 12 ∶ 1 mL / g时,
34  第 5期 赖  颖等:响应面法优化超声波法提取红枣多糖工艺
考察提取次数(1、2和 3次)对红枣多糖提取率的影响,
结果如图 2所示。 由图 2可知:当提取次数为 2次时,
红枣多糖提取率为 6􀆰 89%,进一步增加提取次数时,红
枣多糖提取率与提取次数为 2次时的出糖率相比,增加
的幅度不大,从节约能耗、减少工序和生产周期时间以及
节约成本的角度来考虑,提取次数 2次为宜。
图 2  提取次数对红枣多糖提取率的影响
Fig􀆰 2  Effects of extracting times on extraction yield of
polysaccharide from Jujube
2􀆰 3  液料比对红枣多糖提取率的影响
设定提取次数为 2次,提取时间为 40 min,考察液
料比对红枣多糖提取率的影响,结果如图 3所示。 由
图 3可知:材料的液料比不同时,红枣多糖的提取率也
明显不同。 当液料比从 8 ∶ 1升到 16 ∶ 1 mL / g时,红枣多
糖的提取率由 5􀆰 45%上升到 7􀆰 13%;当液料比继续增
加时,红枣多糖的提取率反而下降,这说明提取时的液
料比与红枣多糖的浸出过程密切相关。 这可能是因为
溶剂的量增多时,溶剂对超声的能量吸收增多;相对
的,红枣对超声的能量吸收减少,细胞壁破坏得不完全
而导致多糖提取率下降,所以液料比以16 ∶ 1 mL / g
为宜。
图 3  材料的液料比对红枣多糖提取率的影响
Fig􀆰 3  Effects of material ratio of liquid to solid on
extraction yield of polysaccharide from Jujube
2􀆰 4  响应面设计结果分析
依据上述单因素试验的结果,以红枣多糖提取
率作为参考,以 A(提取次数)、B(提取时间)、C(液
料比)为自变量,采用多元二次回归的方程拟合试
验结果,设计了响应面实验组合来优化河南红枣多
糖的提取工艺,响应面设计方案及结果如表 2所示。
表 2  响应面设计方案及结果
Table 2  Results and design of the response surface
试验号
编码水平
A B C
多糖提取率 /

1 0 -1 1 5􀆰 30
2 0 0 0 7􀆰 27
3 0 0 0 7􀆰 13
4 0 0 0 7􀆰 30
5 -1 1 0 5􀆰 85
6 0 0 0 7􀆰 26
7 1 0 1 6􀆰 21
8 -1 -1 0 5􀆰 06
9 0 0 0 7􀆰 21
10 1 1 0 6􀆰 96
11 0 1 1 5􀆰 53
12 1 0 -1 6􀆰 52
13 -1 0 -1 5􀆰 75
14 0 -1 -1 5􀆰 96
15 -1 0 1 4􀆰 64
16 1 -1 0 6􀆰 10
17 0 1 -1 6􀆰 31
采用 Design⁃Expert 统计软件对试验结果进行
多元回归拟合试验,得到的回归分析结果见表 3。
由回归方差分析显著性检验表明,由实验数据所得
的模型 F 值为 52􀆰 77,P 值小于 0􀆰 000 1,说明该模
型的回归极显著,并且此模型的 R2 = 0􀆰 995 1,表明
该模型的自变量与其响应值之间的线性关系显著,
与实际的试验拟合度比较高,所以可以用于超声波
法提取红枣多糖试验的理论预测。 由表 3 可知,提
取次数(A)、液料比(C)、提取次数的平方项(A2)、
提取时间的平方项(B2)、液料比的平方项(C2)对红
枣多糖的提取率影响极其显著,提取时间(B)对红
枣多糖的提取率高度显著,提取次数与液料比的交
叉项(AC)影响显著,其他项不显著。 由于提取时设
定的时间、确定的次数和材料的液料比这 3 个因素
对红枣中多糖出糖率的影响并不是简单的线性关
系,采用 Design⁃Expert统计软件对上表进行多元回
归分析,明确各因素对响应值 Y 的影响,得到回归
44 生  物  加  工  过  程    第 13卷 
方程: Y = 7􀆰 23 + 0􀆰 56A + 0􀆰 28B - 0􀆰 36C - 0􀆰 62A2 -
0􀆰 62B2-0􀆰 84C2+0􀆰 017AB+0􀆰 20AC-0􀆰 030BC。 通过
比较回归方程中一次项系数绝对值的大小可以判
断影响红枣多糖各因素的主次。 本实验中对红枣
多糖提取率影响的大小依次为提取次数、材料的液
料比、提取时间。
表 3  响应面设计试验方差分析及回归系数显著性检验
Table 3  The response surface design of variance analysis and regression coefficient significance test
方差来源 自由度 平方和 均方 F值 P>F 显著性
A 1 2􀆰 520 0 2􀆰 520 0 106􀆰 650 0 <0􀆰 000 1 ∗∗∗
B 1 0􀆰 620 0 0􀆰 620 0 26􀆰 310 0 0􀆰 001 4 ∗∗
C 1 1􀆰 020 0 1􀆰 020 0 43􀆰 270 0 0􀆰 000 3 ∗∗∗
A2 1 1􀆰 610 0 1􀆰 610 0 68􀆰 110 0 <0􀆰 000 1 ∗∗∗
B2 1 1􀆰 640 0 1􀆰 640 0 69􀆰 220 0 <0􀆰 000 1 ∗∗∗
C2 1 2􀆰 940 0 2􀆰 940 0 124􀆰 470 0 <0􀆰 000 1 ∗∗∗
AB 1 0􀆰 001 2 0􀆰 001 2 0􀆰 050 0 0􀆰 826 4
AC 1 0􀆰 160 0 0􀆰 160 0 6􀆰 770 0 0􀆰 035 3 ∗
BC 1 0􀆰 003 6 0􀆰 003 6 0􀆰 150 0 0􀆰 707 9
模型 9 11􀆰 220 0 1􀆰 250 0 52􀆰 770 0 <0􀆰 000 1 ∗∗∗
缺失项 3 0􀆰 150 0 0􀆰 049 0 11􀆰 110 0 0􀆰 020 7 ∗
残余项 7 0􀆰 170 0 0􀆰 024 0 ∗
误差 4 0􀆰 018 0 0􀆰 004 4
总和 16 11􀆰 390 0
  注:∗∗∗差异极显著(P<0􀆰 001);∗∗差异高度显著(P<0􀆰 01);∗差异显著(P<0􀆰 05)。
图 4  提取次数和提取时间的交互作用对
红枣多糖提取率的响应面
Fig􀆰 4  The response surface and contour of extraction yield
of polysaccharide from Jujube on interaction
between extracting times and extracting time
2􀆰 5  双因素交互作用的分析
双因素交互作用的分析结果如图 4~6所示。 由
图 4可知:当提取次数或提取时间固定时,红枣多糖
的提取率随着提取时间或提取次数的增加呈先增大
再减少的趋势,二者具有明显的交互作用。 由图 5可
知:随着材料的液料比逐渐增加时,红枣多糖的提取
图 5  提取次数和液料比的交互作用
对红枣多糖提取率的响应面
Fig􀆰 5  The response surface and contour of extraction yield
of polysaccharide from Jujube on interaction
between extracting times and material
ratio of liquid to solid
率是先增加再减少的,而且在一定程度上增加提取次
数,红枣多糖的提取率会不断增加,但超过一定范围,
提取率则变化不大,二者交互作用显著。 由图 6 可
知:液料比增加,红枣多糖的提取率是先增加再减少
的,而随着提取时间的增加,出糖率是先逐渐增加,而
54  第 5期 赖  颖等:响应面法优化超声波法提取红枣多糖工艺
图 6  提取时间和液料比的交互作用对
红枣多糖提取率的影响
Fig􀆰 6  The response surface and contour of extraction yield
of polysaccharide from Jujube on interaction
between extracting time and material ratio
of liquid to solid
后逐渐趋于平缓甚至有些下降趋势的。
为了进一步确认最佳的提取红枣多糖的工艺
条件,进一步对回归方程取一阶的偏导数等于零,
整理可得式(2) ~ (4)。
0􀆰 56-1􀆰 24A+0􀆰 017B+0􀆰 20C= 0 (2)
0􀆰 28-1􀆰 24B+0􀆰 017A-0􀆰 03C= 0 (3)
0􀆰 36+1􀆰 68C-0􀆰 20A+0􀆰 03B= 0 (4)
将式(2)~(4)联立成方程组,求得当 A=0􀆰 482 3、
B= 0􀆰 235 8、C= 0􀆰 170 3时,提取次数= A+2、提取时
间= 10B+35、液料比= (10C+14) ∶ 1,从而得到提取
次数为 2􀆰 40 次、提取时间为 37􀆰 40 min、液料比为
15􀆰 70 ∶ 1 mL / g时,获得的红枣多糖提取率最高,但
是为了实际操作的过程中更加便利,红枣多糖的最
佳提取工艺条件修正为提取次数 2 次、时间 38 min
和液料比 16 ∶ 1 mL / g,此条件下红枣多糖的提取率
最高。 此最优工艺条件下,红枣多糖的提取率理论
值为 7􀆰 32%。 而实际条件下所测得的红枣多糖提
取率为 7􀆰 25%,这与理论的预测值 7􀆰 32%相比,相
对误差比较小。 因此采用超声波辅助响应面分析
法优化萃取红枣中的多糖所获得的工艺条件的参
数准确可靠,具有一定的实用价值。
3  结论
通过超声波法提取红枣多糖,根据单因素实验
的结果,可知提取次数、提取时间、材料的液料比对
红枣多糖的提取率都有显著影响,但不同的单因素
对红枣多糖的提取率的影响主次不同,从大到小依
次为提取次数、液料比、提取时间。 利用响应面法
优化了红枣多糖的超声波提取工艺过程,得到影响
红枣多糖提取率各因素之间的回归方程:Y = 7􀆰 23+
0􀆰 56A+ 0􀆰 28B - 0􀆰 36C - 0􀆰 62A2 - 0􀆰 62B2 - 0􀆰 84C2 +
0􀆰 017AB+0􀆰 20AC-0􀆰 030BC。 通过单因素试验、中
心组合试验以及响应面分析,研究了超声波提取
红枣多糖的工艺,确定了超声波提取红枣多糖的
最佳工艺条件:提取次数 2 次,提取时间为 38
min,液料比 16 ∶ 1 mL / g,此最优工艺条件下红枣中
多糖的理论提取率为 7􀆰 32%,实测红枣多糖提取
率为 7􀆰 25%,提取效率比较高,说明超声波法在提
取植物多糖方面有着一定的技术优势和广泛的应
用前景。
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(责任编辑  管  珺)
64 生  物  加  工  过  程    第 13卷