全 文 ：
摇 摇 摇 摇 摇 生 态 学 报
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 渊杂匀耘晕郧栽粤陨 载哉耘月粤韵冤
摇 摇 第 猿猿卷 第 圆员期摇 摇 圆园员猿年 员员月摇 渊半月刊冤
目摇 摇 次
前沿理论与学科综述
生态系统生产总值核算院概念尧核算方法与案例研究 欧阳志云袁朱春全袁杨广斌袁等 渊远苑源苑冤噎噎噎噎噎噎噎噎
气候变化对传染病爆发流行的影响研究进展 李国栋袁张俊华袁焦耿军袁等 渊远苑远圆冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
好氧甲烷氧化菌生态学研究进展 贠娟莉袁王艳芬袁张洪勋 渊远苑苑源冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
氮沉降强度和频率对羊草叶绿素含量的影响 张云海袁何念鹏袁张光明袁等 渊远苑愿远冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
世界蜘蛛的分布格局及其多元相似性聚类分析 申效诚袁张保石袁张摇 锋袁等 渊远苑怨缘冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
风向因素对转基因抗虫棉花基因漂移效率的影响 朱家林袁贺摇 娟袁牛建群袁等 渊远愿园猿冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
个体与基础生态
长江口及东海春季底栖硅藻尧原生动物和小型底栖生物的生态特点 孟昭翠袁徐奎栋 渊远愿员猿冤噎噎噎噎噎噎噎
长江口横沙东滩围垦潮滩内外大型底栖动物功能群研究 吕巍巍袁马长安袁余摇 骥袁等 渊远愿圆缘冤噎噎噎噎噎噎噎
沣河沿岸土壤和优势植物重金属富集特征和潜在生态风险 杨摇 阳袁周正朝袁王欢欢袁等 渊远愿猿源冤噎噎噎噎噎噎
盐分和底物对黄河三角洲区土壤有机碳分解与转化的影响 李摇 玲袁仇少君袁檀菲菲袁等 渊远愿源源冤噎噎噎噎噎噎
短期夜间低温胁迫对秋茄幼苗碳氮代谢及其相关酶活性的影响 郑春芳袁刘伟成袁陈少波袁等 渊远愿缘猿冤噎噎噎噎
猿圆个切花菊品种的耐低磷特性 刘摇 鹏袁陈素梅袁房伟民袁等 渊远愿远猿冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
年龄和环境条件对泥蚶富集重金属镉和铜的影响 王召根袁吴洪喜袁陈肖肖袁等 渊远愿远怨冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
角倍蚜虫瘿对盐肤木光合特性和总氮含量的影响 李摇 杨袁杨子祥袁陈晓鸣袁等 渊远愿苑远冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
多噬伯克霍尔德氏菌 宰杂鄄云允怨对草甘膦的降解特性 李冠喜袁吴小芹袁叶建仁 渊远愿愿缘冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
金龟甲对蓖麻叶挥发物的触角电位和行为反应 李为争袁杨摇 雷袁申小卫袁等 渊远愿怨缘冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
种群尧群落和生态系统
白洋淀生态系统健康评价 徐摇 菲袁赵彦伟袁杨志峰袁等 渊远怨园源冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
珠海鹤洲水道沿岸红树林湿地大型底栖动物群落特征 王摇 卉袁钟摇 山袁方展强 渊远怨员猿冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎
典型森林和草地生态系统呼吸各组分间的相互关系 朱先进袁于贵瑞袁王秋凤袁等 渊远怨圆缘冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎
抚育间伐对油松人工林下大型真菌的影响 陈摇 晓袁白淑兰袁刘摇 勇袁等 渊远怨猿缘冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
百山祖自然保护区植物群落 遭藻贼葬多样性 谭珊珊袁叶珍林袁袁留斌袁等 渊远怨源源冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
土霉素对堆肥过程中酶活性和微生物群落代谢的影响 陈智学袁谷摇 洁袁高摇 华袁等 渊远怨缘苑冤噎噎噎噎噎噎噎噎
景观尧区域和全球生态
兴安落叶松针叶解剖结构变化及其光合能力对气候变化的适应性 季子敬袁全先奎袁王传宽 渊远怨远苑冤噎噎噎噎
盐城海滨湿地景观演变关键土壤生态因子与阈值研究 张华兵袁刘红玉袁李玉凤袁等 渊远怨苑缘冤噎噎噎噎噎噎噎噎
半干旱区沙地芦苇对浅水位变化的生理生态响应 马赟花袁张铜会袁刘新平 渊远怨愿源冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
杂宰粤栽模型融雪模块的改进 余文君袁南卓铜袁赵彦博袁等 渊远怨怨圆冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
科尔沁沙地湖泊消涨对气候变化的响应 常学礼袁赵学勇袁王摇 玮袁等 渊苑园园圆冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
贝壳堤岛 猿种植被类型的土壤颗粒分形及水分生态特征 夏江宝袁张淑勇袁王荣荣袁等 渊苑园员猿冤噎噎噎噎噎噎噎
三峡库区古夫河着生藻类叶绿素 葬的时空分布特征及其影响因素 吴述园袁葛继稳袁苗文杰袁等 渊苑园圆猿冤噎噎噎
资源与产业生态
煤炭开发对矿区植被扰动时空效应的图谱分析要要要以大同矿区为例 黄摇 翌袁汪云甲袁李效顺袁等 渊苑园猿缘冤噎噎
学术信息与动态
叶中国当代生态学研究曳新书推介 刘某承 渊苑园源源冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
期刊基本参数院悦晕 员员鄄圆园猿员 辕 匝鄢员怨愿员鄢皂鄢员远鄢猿园园鄢扎澡鄢孕鄢 预 怨园郾 园园鄢员缘员园鄢猿园鄢圆园员猿鄄员员
室室室室室室室室室室室室室室
封面图说院 百山祖保护区森林植物群落要要要百山祖国家级自然保护区位于浙西南闽浙交界处袁由福建武夷山向东北伸展而成袁
主峰海拔 员愿缘远援苑皂袁为浙江省第二高峰遥 其独特的地形和水文地理环境形成了中亚热带气候区中一个特殊的区域袁
保存着十分丰富的植物种质资源以及国家重点保护野生动植物种袁尤其是 员怨愿苑年由国际物种保护委员会列为世界
最濒危的 员圆种植物之一的百山祖冷杉袁是第四纪冰川的孑遗植物袁素有野活化石冶之称遥 随着海拔的升高袁其植被为
常绿阔叶林尧常绿鄄落叶阔叶混交林尧针阔混交林尧针叶林尧山地矮林和山地灌草丛遥
彩图及图说提供院 陈建伟教授摇 北京林业大学摇 耘鄄皂葬蚤造院 糟蚤贼藻泽援糟澡藻灶躁憎岳 员远猿援糟燥皂
第 33 卷第 21 期
2013年 11月
生 态 学 报
ACTA ECOLOGICA SINICA
Vol.33,No.21
Nov.,2013
http: / / www.ecologica.cn
基金项目:国家林业公益性行业科研专项(201004061);江苏省普通高校研究生科研创新计划(CXLX11鄄 0552);江苏高校优势学科建设工程
(PAPD)资助项目
收稿日期:2013鄄02鄄25; 摇 摇 修订日期:2013鄄07鄄08
*通讯作者 Corresponding author.E鄄mail: xqwu@ njfu.edu.cn
DOI: 10.5846 / stxb201302250296
李冠喜,吴小芹,叶建仁.多噬伯克霍尔德氏菌 WS鄄FJ9对草甘膦的降解特性.生态学报,2013,33(21):6885鄄6894.
Li G X, Wu X Q,Ye J R. The characterization of glyphosate degradation by Burkholderia multivorans WS鄄FJ9. Acta Ecologica Sinica,2013,33( 21):
6885鄄6894.
多噬伯克霍尔德氏菌 WS鄄FJ9对
草甘膦的降解特性
李冠喜1,2,3,吴小芹1,3,*,叶建仁1,3
(1. 南京林业大学森林资源与环境学院,南京摇 210037; 2. 连云港市农业科学院, 连云港摇 222006;
3. 江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室, 南京摇 210037)
摘要:长期或不当施用草甘膦会对非靶标生物和环境造成破坏作用。 微生物是生物修复的重要生物资源,利用微生物及其产生
的降解酶处理环境中有机磷农药的方法,已显示出良好的应用前景,是近年来研究有机磷农药降解的主要发展方向。 研究分离
松树根际土壤的高效解磷细菌多噬伯克霍尔德氏菌(Burkholderia multivorans)WS鄄FJ9 菌株对草甘膦的降解特性及其降解条件
的优化。 采用添加不同浓度草甘膦 NA平板接种 WS鄄FJ9菌株观察其对草甘膦的耐受性;分别以草甘膦为唯一碳源、氮源或磷
源,探讨 WS鄄FJ9菌株对草甘膦的利用状况;采用低进水量间歇式反应器法(FBR)测定了 WS鄄FJ9菌株降解草甘膦动力学参数;
利用 Plackett鄄Burman(PB)、Central Composite Design(CCD)试验设计及响应面分析法(RSM)筛选与优化影响 WS鄄FJ9 菌株降解
草甘膦的主要因素。 WS鄄FJ9菌株有效降解草甘膦的最大耐受浓度为 0.4%; WS鄄FJ9菌株在以草甘膦为唯一碳源、氮源或磷源
培养基上均能正常生长;WS鄄FJ9 菌株对草甘膦的亲和性常数(Ks值)为 65 滋L / mL,对草甘膦降解的极限浓度(Smin)为 21郾 9
滋L / mL;通过 PB试验,筛选出 3个影响菌株降解草甘膦的关键因素为培养温度、葡萄糖及硫酸铵的加入量,通过 CCD设计及响
应面法优化分析得到影响草甘膦降解率的关键因素的二阶模型,确定了 WS鄄FJ9菌株降解草甘膦的最优实验操作条件为:培养
温度 27.7益,葡萄糖和硫酸铵的加入量分别为 0.67、0.50 g / L。 实验条件下 WS鄄FJ9菌株对草甘膦的降解率最高为 72.83%。
关键词:多噬伯克霍尔德氏菌;降解;草甘膦;优化
The characterization of glyphosate degradation by Burkholderia multivorans
WS鄄FJ9
LI Guanxi1,2,3, WU Xiaoqin1,3,*,YE Jianren1,3
1 College of Forest Resources and Environment Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, China
2 Lianyungang Municipal Academy of Agricultural Sciences, Lianyungang 222006, China
3 Jiangsu Key Laboratory for Prevention and Management of Invasive Species, Nanjing 210037, China
Abstract: Long鄄term or inappropriate use of glyphosate may damage the non鄄target organisms and environment. Microbes
are important biological resources for bioremediation. In recent years, the method of using microbes and its catabolic
enzymes to remediate organophosphorus pesticides in the environment has shown a promising potential in application. It is
the main direction of research on organophosphorus pesticide degradation. This study aimed to investigate the degradation of
glyphosate by an efficient phosphate solubilizing bacterium Burkholderia. multivorans WS鄄FJ9 which was isolated from pine
rhizosphere. Strain WS鄄FJ9 was grown on the plates of nutrient agar (NA) with different concentrations of glyphosate to
determine the tolerance of strain WS鄄F19 to glyphosate. Glyphosate can be used by strain WS鄄FJ9 as the sole sources of
http: / / www.ecologica.cn
carbon, nitrogen and phosphorus, respectively. The degradation dynamical parameters of strain WS鄄FJ9 on glyphosate were
determined using low flooding quantity batch reactor method ( FBR). Plackett鄄Burman ( PB) design, central composite
design (CCD), and Response Surface Methodology (RSM) were employed to screen and optimize the main factors of strain
WS鄄FJ9 degrading glyphosate. The maximum concentration of tolerance to glyphosate for strain WS鄄FJ9 to remain efficiently
degrading glyphosate was 0.4%. The affinity constant (Ks) of strain WS鄄FJ9 to glyphosate was 65 滋L / mL and the minimal
concentration (Smin) of glyphosate degraded by WS鄄FJ9 was 21.9 滋L / mL. Three key factors (cultural temperature,glucose
and ammonium sulfate) for the glyphosate degradation by strain WS鄄FJ9 were selected using PB design. The quadratic
model for the three significant factors was established using CCD design and RSM with glyphosate degradation rate as the
target response. Under the optimal degradation conditions, the incubation temperature was 27. 7益, and the amount of
glucose and ammonium sulfate supplemented were 9.67 g / L and 0.50 g / L, respectively. The degradation rate of glyphosate
by strain WS鄄FJ9 reached 72.83%.
Key Words: Burkholderia multivorans; degradation; glyphosate; optimization
草甘膦(Glyphosate,简称 GPA)又称农达,学名 N鄄(膦酸甲基)甘氨酸(C3H8NO5P),是由美国孟山都公司
(Monsanto)开发的一种有机磷除草剂,具有内吸作用,杀草谱广,主要用于果园、林地、农作物、免耕地等进行
化学除草。 尽管草甘膦具有高效、低毒、低残留等特点,但长期或不当施用对非靶标生物和环境造成的破坏作
用不容忽视[1鄄2]。 近年来对草甘膦安全性的研究已成为焦点。 刘攀[3]研究表明土壤环境中 50%—80%的益
虫死于残留的草甘膦污染。 耿德贵等[4]研究发现草甘膦能明显地诱发黄鳝染色体数目和结构畸变率上升。
邓晓等[5]研究发现草甘膦对土壤微生物的种群数量及土壤中细菌、放线菌和真菌生长速率均具有一定的抑
制作用。 Daruich等[6]、Fujii等[7]、Dallegrave等[8]分别以鼠类进行了草甘膦的毒性试验,结果表明,长期接触
草甘膦可导致妊娠期雌鼠后代的大脑产生多功能性变异,导致胎儿的骨骼无法正常发育。 Poulsen 等[9]研究
表明草甘膦能够穿透人类胎盘障碍进入胎儿室继而对人类胎儿的发育造成伤害。
微生物是生物修复的重要生物资源,利用微生物及其产生的降解酶处理环境中有机磷农药的方法,已显
示出良好的应用前景,是近年来研究有机磷农药降解的主要发展方向。 目前,在我国已有高抗或降解草甘膦
的菌株被分离筛选出来[10鄄12],大多属于假单孢菌属(Pseudomonas)、节杆菌属( Arthrobacter)、肠肝菌科菌
(Enterobacteriaceae)、根瘤菌科(Rhizobiaceae)等。 多噬伯克霍尔德氏菌(Burkholderia multivorans)WS鄄FJ9 菌
株为本实验室在前期研究中从松树根际筛选获得的 1 株高效解磷细菌,前期的研究表明,该菌对哺乳动物安
全可靠,具有促进植物生长和生物防治的功能。 为探讨该菌是否具有生物降解农药残留的功能以及该菌在试
验条件下最大降解率究竟与哪些因素有关以及这些因素的水平对降解率的影响究竟有多大,为今后深入研究
草甘膦降解菌制剂做好前期的准备工作,本研究采用添加草甘膦的 NA平板接种该菌株观察其对草甘膦的耐
受性;分别以草甘膦为唯一碳源、氮源或磷源,探讨其对草甘膦的利用状况;采用低进水量间歇式反应器法
(FBR)测定其降解草甘膦动力学参数;在前期对该菌生长特性研究的基础上,利用 Plackett鄄Burman (PB) 及
Central Composite Design (CCD) 试验设计对影响其降解草甘膦有关的 8 个因素进行筛选优化。 研究结果可
为开发草甘膦降解菌剂实现农药残留的生物修复提供菌种资源和参考依据,对农林业的可持续发展及环境的
保护具有重要意义。
1摇 材料与方法
1.1摇 供试菌株、草甘膦及降解培养基
供试菌株为多噬伯克霍尔德氏菌(Burkholderia multivorans)WS鄄FJ9 菌株由本实验室分离筛选所得,已保
藏于中国典型培养物保藏中心 CCTCC (No. CCTCC M2011435) [13]。 供试草甘膦为四川贝尔化工集团有限公
司生产(含量为 30%)。 供试降解培养基为唯一磷源(改良蒙金娜有机磷培养基)、唯一碳源和唯一氮源培
养基[12]。
6886 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 33卷摇
http: / / www.ecologica.cn
1.2摇 WS鄄FJ9菌株对草甘麟的耐受性检测
将 WS鄄FJ9菌株分别接种于含草甘磷 0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%的 NA 平板上,
28益培养 3 d,观察菌株的生长情况。
1.3摇 WS鄄FJ9菌株的唯一碳源、氮源和磷源试验
将 WS鄄FJ9菌株活化后,用接种环挑取少量菌体接种于装有 50 mL NB 液体培养基的 100 mL 三角瓶中,
28益、200 r / min振荡培养 48 h。 发酵液( 4益,4629伊g) 离心 5 min,无菌生理盐水润洗菌体 3 次后,无菌生理
盐水调节成浓度为 1伊108 cfu / mL的菌悬液。 分别将 1 mL菌悬液接种于 50 mL唯一碳源、唯一氮源和唯一磷
源培养基,以不加碳源、氮源、或磷源的培养基为各自空白对照。 28益、200 r / min摇床振荡培养 3 d,离心后上
清液采用 HW姿IOS酌型分光光度计测定 600 nm处的吸光度。
1.4摇 草甘膦降解率的测定
将 1 mL菌悬液接种于含 50 mL以草甘膦为唯一磷源培养基的 100 mL三角瓶中(部分三角瓶中的装液量
按试验要求进行),28益、200 r / min摇床振荡培养 3 d 后,降解发酵液转移至 50mL离心管中,加入 0.5 g 无磷
活性炭,采用 SM鄄650D型超声波细胞破碎仪进行细胞破碎 20 min后离心 (4益,4629伊g) 10 min,取上清液测
定无机磷含量;取 5 mL草甘膦降解发酵液置于凯氏瓶中,加入 9 mL的浓硫酸和 1 mL高氯酸,用电炉消煮,至
消煮液呈现透明,冷却后调节 pH 值至 7.0,再定容至 50mL,测定总磷含量。 磷含量的测定采用钼锑抗比色
法[14]。 草甘膦降解率=(M1-M2) / M1伊100%(M1:培养前有机磷含量;M2:培养后有机磷含量;有机磷含量 =
总磷含量-无机磷含量)。
1.5摇 WS鄄FJ9菌株降解草甘膦动力学参数的测定
将 WS鄄FJ9菌株的菌悬液按 1%接种量接种到 NB液体培养基上 28益、200 r / min振荡培养 3 d后,取 2 L
发酵液( 4益,4629伊g) 离心 5 min后,菌体用无菌生理盐水润洗 3 次后加入含 2 L灭菌的唯一磷源基础培养
基的容器内制成生化反应器,置于 28益恒温培养箱中。 动力学参数测定参照周军等[15]的方法,采用 FBR(低
进水量间歇式反应器)法,草甘膦含量的测定按 1.4的方法进行,将测定的动力学参数用下式计算极限浓度:
Smin =Ks伊
b
ymaxqmax-b
式中,Smin为极限浓度(滋L / mL);Ks为细菌对基质的亲和性常数(滋L / mL);ymax为细菌最大产率系数(mg / mg);
qmax为最大比基质利用速率(d
-1);b为细菌衰减系数(d-1)。
1.6摇 WS鄄FJ9菌株降解草甘麟 PB试验设计
选取影响 WS鄄FJ9菌株降解草甘膦的 8 个因素,采用 Plackett鄄Burman(PB)设计方案进行关键变量的筛
选。 试验设计如表 2所示,8个变量分别通过 12次实验进行评价分析,每个变量通过两个水平(低水平-1 和
高水平+1)来检测。 响应值通过降解率来衡量。 每个变量的显著性通过 P值和显著水平确定。
1.7摇 WS鄄FJ9菌株降解草甘麟中心复合试验及验证
采用中心复合试验设计(Central Composite Design,CCD)法对由 Plackett鄄Burman 筛选出的关键因素进行
试验设计,同时固定其他非关键因素。 中心复合试验包括含 3个关键变量的 20组实验,每个变量包含 5 个水
平(表 4)。 当确定一个关键变量的最优水平,可以得到其它两个变量的等高线图和三维立体图,而确定这两
个关键变量的最优值。 回归模型的可信度由决定系数(R2)进行评估。 以 PB试验、CCD试验确定的最佳降解
因素,进行 WS鄄FJ9菌株降解草甘膦试验,验证优化方案。
1.8摇 数据分析与处理
采用 Office 2003和 Design Expert 8.07(Stat鄄Ease Inc., Minneapolis, USA)软件进行 PB、CCD试验设计、数
据差异显著性检验(P<0.05)、回归分析及图表绘制。
2摇 结果与分析
2.1摇 WS鄄FJ9菌株对草甘膦的耐受性
摇 摇 NA平板上草甘膦含量从 0.1%增加到 0.4%的过程中,菌株的生长状况没有明显的变化,均表现为旺盛生
7886摇 21期 摇 摇 摇 李冠喜摇 等:多噬伯克霍尔德氏菌 WS鄄FJ9对草甘膦的降解特性 摇
http: / / www.ecologica.cn
长;草甘膦含量继续增加,菌株的长势逐渐减弱;当草甘膦达到 0.8%时,菌株不能生长(表 1)。 表明多噬伯克
霍尔德氏菌(Burkholderia multivorans)WS鄄FJ9菌株对草甘麟有一定的耐受能力,当草甘膦含量为 0.4%时,菌
株长势不减弱,说明菌株对草甘膦耐受的最大浓度为 0.4%。
表 1摇 多噬伯克霍尔德氏菌WS鄄FJ9菌株对草甘麟的耐受性
Table 1摇 The endurable ability of strain B.multivorans WS鄄FJ9 to GPA
草甘麟含量 Content of GPA / %
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8
菌株生长状况
Growth status of strains
++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++ + -
摇 摇 ++++:生长旺盛;+++:生长较好;++:生长;+:生长很少;-:不生长
2.2摇 WS鄄FJ9菌株在唯一碳源、氮源和磷源培养基上的生长状况
摇 图 1摇 多噬伯克霍尔德氏菌 WS鄄FJ9 菌株在以草甘膦为唯一碳
源、氮源和磷源培养基上的生长状况
Fig.1摇 The growth status of strain B.multivorans WS鄄FJ9 on the
medium by glyphosate as the only carbon source, the only
nitrogen source and the only phosphorus source
WS鄄FJ9 菌株在以草甘膦为唯一碳源、氮源和磷源
培养基上均能正常生长。 由图 1可知,菌株在以草甘膦
为唯一磷源的培养基上生长最好,唯一碳源培养基次
之,唯一氮源培养基最差。 因此,在后续试验中均采用
以草甘膦为唯一磷源的培养基。
2.3摇 WS鄄FJ9菌株降解草甘膦的动力学参数
反应器中草甘膦的浓度始终维持在较低的水平,有
利于探明微量有机物污染生物修复的机制。 测定结果
如下:Ks = 65 滋L / mL;ymax = 0.31 mg / mg;qmax = 1.625 d
-1;
b= 0.127 d-1。 把测定结果代入 1.5的公式,经计算得到 B.
multivorans WS鄄FJ9降解草甘膦的极限浓度(Smin)的值为
21.9 滋L / mL。 表明该菌可应用于微量有机物生物高度净
化技术,对痕量农药的污染治理具有很好的应用潜力。
2.4摇 WS鄄FJ9菌株降解草甘麟关键影响因素的筛选
Plackett鄄Burman 试验设计及结果见表 2。 采用
Design Expert 8.07软件对表 3 中的降解率数据进行回
归分析,得到各影响因素的偏回归系数(表 3)。 由表 3可看出,X2(初始 pH)、X5(葡萄糖)、X6((NH4) 2SO4)表
现为负效应,而其它因素表现为正效应。 因素 X1(温度)、X5(葡萄糖)、X6((NH4) 2SO4)为主要影响因子,其贡
献值分别为 18.85%、39.09%和 29.01%,而其他因素对响应值降解率为低值影响。 经影响因素筛选,得到以降
解率为响应值的线性回归方程:Y= 35.24+3.54X1-4.07X5-35.07X6,方程中 Y 为预测的降解率,X i为变量。 方
差分析模型的 P 值为 0. 0007,决定系数(R2 )为 0郾 8705,调整系数( adj R2 )为 0. 8220,变化系数(CV )为
14郾 30%,精密度为 12.570,表明该数学模型能较好的表征实验的实际情况。
2.5摇 WS鄄FJ9菌株降解草甘麟关键影响因素 CCD试验结果及效应分析
中心组合设计及结果见表 4。 通过对 X1(温度)、X5(葡萄糖)、X6((NH4) 2SO4)进行中心组合设计,得到
相应的二次方程模型:Y = -284.45 + 24.50X1 + 3.82X5 + 53.16X6 + 0.25X1X5 -0.17X1X6 -0.40X5X6 -0.47X21 -
0郾 54X25-44.49X26,不同变量对回归模型中响应值影响的显著性通过 F检验来确定。 如表 5 所示,因素 X5对降
解效果的线性效应显著,而因素 X1和 X6不显著;因素 X21、X25、X26对降解效果的曲面效应极显著;X1X5对絮凝效
果的交互影响显著,而 X1X6和 X5X6不显著。 模型 P 值为 0.0001,决定系数(R2)为 0.9363,调整系数(adj R2)
为 0.8790,变化系数(CV)为 1.78%,精密度为 11.442,表明该模型拥有较高的可靠度,能较好的反应实际情
况。 因此,该模型能对降解率进行合理的预测。
8886 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 33卷摇
http: / / www.ecologica.cn
表 2摇 Plackett鄄Burman试验设计及结果
Table 2摇 Plackett鄄Burman experiment design and response value
试验组合
Experimental group
X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11
降解率 / %
Degradation rate
1 1 1 -1 1 1 1 -1 -1 -1 1 -1 27.04
2 -1 1 1 -1 1 1 1 -1 -1 -1 1 25.4
3 1 -1 1 1 -1 1 1 1 -1 -1 -1 63.38
4 -1 1 -1 1 1 -1 1 1 1 -1 -1 40.27
5 -1 -1 1 -1 1 1 -1 1 1 1 -1 23.59
6 -1 -1 -1 1 -1 1 1 -1 1 1 1 49.43
7 1 -1 -1 -1 1 -1 1 1 -1 1 1 63.09
8 1 1 -1 -1 -1 1 -1 1 1 -1 1 59.54
9 1 1 1 -1 -1 -1 1 -1 1 1 -1 69.92
10 -1 1 1 1 -1 -1 -1 1 -1 1 1 67.32
11 1 -1 1 1 1 -1 -1 -1 1 -1 1 60.53
12 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 52.46
摇 摇 X1:温度,-1为 24益,1为 28益;X2:初始 pH值,-1为 6.0,1为 7.0;X3:接种量,-1为 1%,1为 5%;X4:100 mL三角瓶装液量,-1为 50 mL,1
为 75 mL;X5:葡萄糖加入量,-1为 10 g / L,1为 15 g / L;X6:(NH4) 2SO4加入量,-1 为 0.5g / L,1 为 1 g / L;X7:转速,-1 为 160 r / min,1 为 200 r /
min;X8:GPA加入量,-1为 0.1%,1为 0.4%;X9、X10、X11:虚拟因素
表 3摇 偏回归系数及影响因子的显著性分析
Table 3摇 Partial regression coeficients and analysesof their significance
因素
Factor
回归系数
Regression coefficient
效应值
Effect size
平方和
Sum of squares
贡献值 / %
Contribution value
截距 50.16
X1 7.09 14.17 602.51 18.95
X2 -1.92 -3.83 44.05 1.39
X3 1.53 3.05 27.94 0.88
X4 1.16 2.33 16.26 0.51
X5 -10.18 -20.36 1242.98 39.09
X6 -8.77 -17.53 922.43 29.01
X7 1.75 3.50 36.79 1.16
X8 2.70 5.40 87.53 2.75
X9 0.38 0.76 1.76 0.055
X10 -0.099 -0.20 0.12 0.004
X11 4.05 8.11 197.24 6.60
表 4摇 中心组合设计及结果
Table 4摇 CCD design and response values
实验组合号
Number of
experimental group
编码值 /实际值 Coding / actual value
X1 / 益 X5 / (g / L) X6 / (g / L)
实际值 / %
Actual value
预测值 / %
Predicted value
1 -1 / 26 -1 / 8 -1 / 0.3 68.36 68.66
2 1 / 30 -1 / 8 -1 / 0.3 64.94 66.04
3 -1 / 26 摇 1 / 12 -1 / 0.3 64.55 65.86
4 1 / 30 摇 1 / 12 -1 / 0.3 68.02 67.21
5 -1 / 26 -1 / 8 1 / 0.7 67.25 69.11
6 1 / 30 -1 / 8 1 / 0.7 66.48 66.23
7 -1 / 26 摇 1 / 12 1 / 0.7 65.71 65.66
8 1 / 30 摇 1 / 12 1 / 0.7 66.00 66.76
9886摇 21期 摇 摇 摇 李冠喜摇 等:多噬伯克霍尔德氏菌 WS鄄FJ9对草甘膦的降解特性 摇
http: / / www.ecologica.cn
续表
实验组合号
Number of
experimental group
编码值 /实际值 Coding / actual value
X1 / 益 X5 / (g / L) X6 / (g / L)
实际值 / %
Actual value
预测值 / %
Predicted value
9 -2 / 24 摇 0 / 10 0 / 0.5 67.25 66.07
10 2 / 32 摇 0 / 10 0 / 0.5 64.41 64.54
11 0 / 28 -2 / 6 0 / 0.5 66.19 65.21
12 0 / 28 摇 2 / 14 0 / 0.5 63.01 62.93
13 0 / 28 摇 0 / 10 -2 / 0.1 66.06 65.64
14 0 / 28 摇 0 / 10 2 / 0.9 66.27 65.64
15 0 / 28 摇 0 / 10 0 / 0.5 73.81 72.76
16 0 / 28 摇 0 / 10 0 / 0.5 73.62 72.76
17 0 / 28 摇 0 / 10 0 / 0.5 71.39 72.76
18 0 / 28 摇 0 / 10 0 / 0.5 72.64 72.76
19 0 / 28 摇 0 / 10 0 / 0.5 72.87 72.76
20 0 / 28 摇 0 / 10 0 / 0.5 73.26 72.76
表 5摇 降解率优化的模型适配和方差分析结果
Table 5摇 Model鄄fitting and variance analysis results of degradation rate
方差来源
Sources of variance
平方和
Sum of squares
自由
df
均方
Mean square F P (F>F琢)
模型 Model 216.69 9 24.08 16.34 < 0.0001
X1 2.33 1 2.33 1.58 0.2369
X5 5.19 1 5.19 3.52 0.0901
X6 6.250E-006 1 6.250E-006 4.241E-006 0.9984
X1X5 7.90 1 7.90 5.36 0.0431
X1X6 0.035 1 0.035 0.024 0.8804
X5X6 0.21 1 0.21 0.14 0.7150
X21 87.30 1 87.30 59.24 < 0.0001
X25 118.49 1 118.49 80.40 < 0.0001
X26 79.63 1 79.63 54.03 < 0.0001
残差 Residual 14.74 10 1.47
失拟项 Lack of fit 10.92 5 2.18 2.86 0.1368
纯误差 Pure error 3.82 5 0.76
总离差 Cor total 231.42 19
2.6摇 WS鄄FJ9菌株降解草甘麟的响应面分析及验证
为进一步优化多噬伯克霍尔德氏菌(B.multivorans)WS鄄FJ9菌株对草甘麟的降解率,等高线图和三维立体
图被用于对实验数据进行分析。 它们能更直观的显示不同变量以及它们的交互作用对响应值的影响。 等高
线的形状能够反应交互作用是否显著。 椭圆表示交互作用显著,而非椭圆则相反。 等高线图(图 2,图 3,图
4)清晰的表明,温度和葡萄糖加入量的交互作用显著,而温度和硫酸铵加入量,以及葡萄糖和硫酸铵加入量
之间交互作用不显著。 该结果和表 7中的分析结果一致,表明这些结果真实反应了不同变量之间的相互作
用。 图 2显示硫酸铵加入量在最佳值为 0.50 g / L条件下,温度和葡萄糖加入量对降解率的交互影响;图 3 显
示葡萄糖加入量在最佳值为 9郾 67 g / L条件下,温度和硫酸铵加入量对降解率的交互影响;图 4 显示温度在最
佳值为 27.7 益条件下,硫酸铵和葡萄糖加入量对降解率的交互影响。 由设计软件得到 WS鄄FJ9菌株降解草甘
麟最优条件为:固定其他因素,关键因素蒙金娜基础培养基中葡萄糖和硫酸铵的加入量分别为 9.67、0.50 g /
L,温度控制在 27.7 益,理论计算草甘麟降解率达 72.83%。 按照优化后的条件,蒙金娜基础培养基中葡萄糖
0986 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 33卷摇
http: / / www.ecologica.cn
和硫酸铵的加入量分别为 9.67、0.50 g / L,其他成分按基础配方,草甘麟加入量 0.4%,100 mL三角瓶装液量 50
mL,接种量 1%,初始 pH7.0,转速 200 r / min,温度控制在 27.7 益。 3 d后实测草甘膦降解率为 71.98%,与预测
值 72.83%较接近,证明了 WS鄄FJ9菌株降解草甘麟优化处理时 PB和 CCD方法联用的可行性和准确性。
3摇 结论和讨论
近年来,利用微生物的降解功能处理环境中的草甘膦污染越来越受到人们的重视,将草甘膦降解菌制成
生物菌剂用于草甘膦环境污染的生物修复已成为国内外研究热点。 目前国内外已开发出的一系列处理草甘
膦废水的工业方法[16鄄18]的应用都存在一定的局限性,主要是施工量大、设备成本高、而且处理结果不理想易
造成二次污染等。 利用高效降解微生物来降解工业废水中的草甘膦具有处理方便、快捷、迅速,成本相对低廉
等优点。
图 2摇 温度和葡萄糖加入量对草甘膦降解率交互影响的三维曲面图和等高线图
Fig.2摇 Surface and contour plots of mutual effect for temperature and glucose quantity on the degradation rate of glyphosate
图 3摇 温度和硫酸铵加入量对草甘膦降解率交互影响的三维曲面图和等高线图
Fig.3摇 Surface and contour plots of mutual effect for temperature and ammonium sulfate quantity on the degradation rate of glyphosate
本研究采用添加草甘膦的 NA 平板接种多噬伯克霍尔德氏菌(Burkholderia multivorans)WS鄄FJ9 菌株,结
果表明该菌对草甘膦具有较高耐受性(耐受浓度达 0.4%),可以应用于高含量草甘膦污染的治理。 据报道,
1986摇 21期 摇 摇 摇 李冠喜摇 等:多噬伯克霍尔德氏菌 WS鄄FJ9对草甘膦的降解特性 摇
http: / / www.ecologica.cn
图 4摇 葡萄糖和硫酸铵加入量对草甘膦降解率交互影响的三维曲面图和等高线图
Fig.4摇 Surface and contour plots of mutual effect for glucose and ammonium sulfate quantity on the degradation rate of glyphosate
草甘膦在其生产废水池中的含量在 0.1%—1%之间,在长期使用草甘膦地区的地表水中的含量在 0.009%—
0郾 86%之间,不同地区草甘膦的含量不同是因其还与雨水径流及水流路径有关[19鄄21]。 因此,该菌可用于草甘
膦生产废水的治理,同时由于该菌在以草甘膦为唯一碳源、唯一氮源或唯一磷源的培养基上均能正常生长,这
将有利于在草甘膦污染的治理过程中进一步降低成本。
近年研究发现,许多化学物质即使在很低的浓度下对人体和生态环境仍然产生很大的危害,生物高度净
化技术成为新的研究热点。 该技术的理论关键点在于生物降解极限浓度(Smin)和基质亲和性常数(Ks) [22鄄23],
认为在低基质浓度情况下,降解速率同基质的浓度成正比关系,当基质浓度降至某一值时,微生物的生长速率
与死亡速率达到了动态平衡,此时的浓度即为极限浓度(Smin);在微量化学物质高度净化过程中,净化速率主
要取决于微生物对基质的亲和性,Ks越低亲和性就越好,净化速率也就越高,而常量化学物质的一般净化主要
取决于微生物的增殖量[24]。 周军等[15]经过试验测定了苯胺的各降解动力学参数,其 Smin和 Ks值分别为 0.025
mg / L和 0.077 mg / L。 本研究所测定的 Smin和 Ks值分别为 65 滋L / mL 和 21.9 滋L / mL,因此,WS鄄FJ9 菌株可应
用于痕量污染(农田及各种低草甘膦含量污染的水体)的治理,是生物高度净化技术中极有应用潜力的菌株。
本研究通过 PB试验,筛选出 3个影响 WS鄄FJ9 菌株降解草甘膦过程中影响降解率的关键因素为培养温
度、葡萄糖及硫酸铵的加入量,通过 CCD 设计及响应面法优化分析得到影响草甘膦降解率的二阶模型:Y =
-284.45 + 24.50X1 + 3.82X5 + 53.16X6 + 0.25X1X5 -0.17X1X6 -0.40X5X6 -0.47X21 -0.54X25 -44.49X26;确定了
B.multivorans WS鄄FJ9降解草甘膦实验的最优操作条件为培养温度为 27.7益,葡萄糖和硫酸铵的加入量分别
为 0.67、0.50 g / L。 在试验条件下该菌株对草甘膦的降解率最高可达 72.83%。 该结果高于王聪[11]筛选的蜡
样芽孢杆菌(Bacillus cereus)CW鄄1(降解率为 65.3%)和康纪婷[12]筛选的恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)
BR13(降解率为 60.20%)及肠肝菌科菌(Enterobacteriaceae)BR57(降解率为 57.67%)。 综上可以看出,WS鄄
FJ9菌株不论应用于天然土壤环境中低残留的草甘膦降解还是应用于高含量草甘膦污染如生产废水等的治
理,都是极有潜力的菌株。
微生物通过驯化筛选可以增强某一特定功能。 汤鸣强等[10]采用培养基中添加不同浓度梯度的草甘膦对
从耕作土壤中分离到草甘膦降解菌进行驯化培养与筛选,获得一株对草甘膦具有高耐受性、高降解能力的菌
株胶红酵母 Rhodotorula mucilaginosa ZM鄄1 (降解率为 85.38%)。 本研究所采用的 B.multivorans WS鄄FJ9 适应
能力强,耐受力已达 0.4%草甘膦含量的浓度。 如果进行定向驯化筛选,相信其对草甘膦的耐受性及降解能力
会有较大的提高,这有待于进一步研究。 另外,本研究采用 PB和 CCD试验设计连用及 RSM分析法进行了实
2986 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 33卷摇
http: / / www.ecologica.cn
验条件优化,相对于传统的单因素实验和正交实验,具有试验次数少、周期短,求得的回归方程精度高等优点,
并能通过图形分析较直观地寻求最优考察因素值、确定试验因素及其交互作用在试验过程中对指标响应值的
影响[25]。
References:
[ 1 ]摇 Busse M D, Ratcliff A W, Shestak C J, Powers R F. Glyphosate toxicity and the effects of long鄄term vegetation control on soil microbial
communities. Soil Biology & Biochemistry, 2001, 33(12 / 13): 1777鄄1789.
[ 2 ] 摇 Koger C H, Shaner D L, Krutz L J, Walker T W, Buehring N, Henry W B, Thomas W E, Wilcut J W. Rice (Oryza sativa) response to drift rates
of glyphosate. Pest Management Science, 2005, 61(12): 1161鄄1167.
[ 3 ] 摇 Liu P. Effects of Glyphosate on the Soil Microecosystem and Research of Glyphosate鄄degradation and Glyphosate鄄resistance Fungi [D]. Changchun:
Jilin University, 2009.
[ 4 ] 摇 Geng D G, Chen G, Han Y, Pan S Y, Zhao R J. The studies on the mutagenesis of the herbicide glyphosate in cells of Monopterus albus. Journal of
Xuzhou Normal University: Natural Sconces, 2000, 18(2): 59鄄61.
[ 5 ] 摇 Deng X, Li Y Q. Effect of glyphosate on soil microorganisms. Chinese Journal of Pesticides, 2005, 44(2): 59鄄62.
[ 6 ] 摇 Daruich J, Zirulnik F, Gimenez M S. Effect of the herbicide glyphosate on enzymatic activity in pregnant rats and their fetuses. Environmental
Research, 2001, 85(3): 226鄄231.
[ 7 ] 摇 Fujii T. Transgenerational effects of maternal exposure to chemicals on the functional development of the brain in the offspring. Cancer Causes and
Control, 1997, 8(3): 524鄄528.
[ 8 ] 摇 Dallegrave E, Mantese F D G, Coelho R S, Pereira J D, Dalsenter P R, Langeloh A. The teratogenic potential of the herbicide glyphosate鄄Roundup
in Wistar rats. Toxicology Letters, 2003, 142(1 / 2): 45鄄52.
[ 9 ] 摇 Poulsen M S, Rytting E, Mose T, Knudsen L E. Modeling placental transport: Correlation of in vitro BeWo cell permeability and ex vivo human
placental perfusion. Toxicology in Vitro, 2009, 23(7): 1380鄄1386.
[10] 摇 Tang M Q, You M S. Isolation and identification of a glyphosate鄄resistant yeasty strain ( ZM鄄1) and its optimal growth and degradation traits.
Microbiology China, 2010, 37(9): 1402鄄1409.
[11] 摇 Wang C. Preliminary Studies on Glyphosate鄄degradation by Bacillus cereus [D]. Baoding: Agricultural University of Hebei, 2012.
[12] 摇 Kang J T. Study on Screening, Isolation and Identification of the Glyphosate Methlparathion鄄Degrading Bacterium [D]. Ya忆an: Sichuan Agricultural
University, 2010.
[13] 摇 Hou L. Studies on Screening of Efficient Phosphate鄄solubilizing Bacteria in the Rhizosphere of Pine Trees and on Their Characteristics [ D].
Nanjing: Nanjing Forestry University, 2012.
[14] 摇 Zhang X S. Analysis of the factors affecting the available P content in the fermentation liquid of P bacteria determined by Mo鄄Sb colorimetry. Journal
of Anhui Agricultural Sciences, 2008, 36(12): 4822鄄4823.
[15] 摇 Zhou J, Zhao Q X, Jin X B. Threshold of aniline biodegradation. Environmental Pollution & Control, 2004, 26(6): 401鄄403, 414鄄414, 395鄄395.
[16] 摇 Peng B, Wang L, Li Y R. Research on adsorption of glyphosate from wastewater by active aluminum oxide. Journal of Chemical Industry &
Engineering, 2007, 28(1): 44鄄48.
[17] 摇 Huang J, Hu X, Li Y, Wei J. Treatment of high salinity organic wastewater by iron鄄carbon microelectrolysis process. Environmental Protection of
Chemical Industry, 2007, 27(3): 250鄄252.
[18] 摇 Huang Y M, Li Q H, Zhou X B, Yu Z H, Huang Q L. Treatment of glyphosate wastewater by Fenton reagent oxidation鄄magnesium salt precipitation
process. Environmental Protection of Chemical Industry, 2007, 27(2): 156鄄159.
[19] 摇 Hua X M, Jiang X L. Characteristics and control countermeasures of pesticide pollution and its damage on environment in China. Research of
Environmental Sciences, 2000, 13(3): 40鄄43.
[20] 摇 Chang F C, Simcik M F, Capel P D. Occurrence and fate of the herbicide glyphosate and its degradate aminomethylphosphonic acid in the
atmosphere. Environmental Toxicology and Chemistry, 2011, 30(3): 548鄄555.
[21] 摇 Coupe R H, Kalkhof S J, Capel P D, Gregoire C. Fate and transport of glyphosate and aminomethylphosphonic acid in surface waters of agricultural
basins. Pest Management Science, 2011, 68(1): 16鄄30.
[22] 摇 Ribes J, Keesman K, Spanjers H. Modelling anaerobic biomass growth kinetics with a substrate threshold concentration. Water Research, 2004, 38
(20): 4502鄄4510.
[23] 摇 Schmidt S K, Scow K M, Alexander S M. Kinetics of P鄄nitrophenol mineralization by a Pseudomonas sp.: effects of second substrates. Applied and
Environmental Microbiology, 1987, 53(11): 2617鄄2623.
3986摇 21期 摇 摇 摇 李冠喜摇 等:多噬伯克霍尔德氏菌 WS鄄FJ9对草甘膦的降解特性 摇
http: / / www.ecologica.cn
[24]摇 Li J Y, Zhao Q X, Sun X B, Li D. Factors affecting kinetic threshold concentration of biodegradation. Journal of East China University of Science
and Technology: Natural Science Edition, 2006, 32(3): 309鄄312.
[25] 摇 Wang F H, Liu L, Wang Y H, Yang B. Optimization of protease activity from Bacillus subtilis GS鄄1 and potential applications in protein hydrolysis.
Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni, 2012, 51(4): 79鄄86.
参考文献:
[ 3 ]摇 刘攀. 草甘膦对土壤微生态的影响及其抗性和降解真菌的研究 [D]. 长春: 吉林大学, 2009.
[ 4 ] 摇 耿德贵, 陈刚, 韩燕, 潘沈元, 赵荣军. 除草剂农达对黄鳝致突变性研究. 徐州师范大学学报: 自然科学版, 2000, 18(2): 59鄄61.
[ 5 ] 摇 邓晓, 李雅琦. 草甘膦对土壤微生物影响的研究. 农药, 2005, 44(2): 59鄄62.
[10] 摇 汤鸣强, 尤民生. 抗草甘膦酵母菌 ZM鄄1的分离鉴定及其生长降解特性. 微生物学通报, 2010, 37(9): 1402鄄1409.
[11] 摇 王聪. 蜡样芽孢杆菌 (Bacillus cereus) 对草甘膦降解作用的初步研究 [D]. 保定: 河北农业大学, 2012.
[12] 摇 康纪婷. 有机磷农药草甘膦降解菌的筛选、分离及其鉴定 [D]. 雅安: 四川农业大学, 2010.
[13] 摇 侯亮. 松树根际高效解磷细菌的筛选及其解磷特性的研究 [D]. 南京: 南京林业大学, 2012.
[14] 摇 张祥胜. 钼锑抗比色法测定磷细菌发酵液中有效磷含量测定值的影响因素分析. 安徽农业科学, 2008, 36(12): 4822鄄4823.
[15] 摇 周军, 赵庆祥, 金雪标. 苯胺生物降解极限的研究. 环境污染与防治, 2004, 26(6): 401鄄403.
[16] 摇 彭波, 王黎, 李艳荣. 活性氧化铝吸附法处理草甘膦生产废水的研究. 化学工业与工程技术, 2007, 28(1): 44鄄48.
[17] 摇 黄瑾, 胡翔, 李毅, 魏杰. 铁碳微电解法处理高盐度有机废水. 化工环保, 2007, 27(3): 250鄄252.
[18] 摇 黄燕梅, 李启辉, 周锡波, 余在华, 黄庆莉. Fenton 氧化鄄镁盐沉淀法处理草甘膦废水. 化工环保, 2008, 27(2): 156鄄159.
[19] 摇 华小梅, 江希流. 我国农药环境污染与危害的特点及控制对策. 环境科学研究, 2000, 13(3): 40鄄43.
[24] 摇 李娟英, 赵庆祥, 孙贤波, 李丹. 有机物生物降解动力学极限浓度的影响因素. 华东理工大学学报: 自然科学版, 2006, 32(3): 309鄄312.
[25] 摇 王方华, 刘亮, 王永华, 杨博. 产蛋白酶菌株 Bacillus subtilis GS鄄1发酵条件优化及蛋白酶水解应用初步研究. 中山大学学报: 自然科学
版, 2012, 51(4): 79鄄86.
4986 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 33卷摇
粤悦栽粤 耘悦韵蕴韵郧陨悦粤 杂陨晕陨悦粤 灾燥造援猿猿袁晕燥援圆员 晕燥增援袁圆园员猿渊杂藻皂蚤皂燥灶贼澡造赠冤
悦韵晕栽耘晕栽杂
云则燥灶贼蚤藻则泽 葬灶凿 悦燥皂责则藻澡藻灶泽蚤增藻 砸藻增蚤藻憎
郧则燥泽泽 藻糟燥泽赠泽贼藻皂 责则燥凿怎糟贼院 贼澡藻燥则赠 枣则葬皂藻憎燥则噪 葬灶凿 糟葬泽藻 泽贼怎凿赠 韵哉再粤晕郧 在澡蚤赠怎灶袁在匀哉 悦澡怎灶择怎葬灶袁再粤晕郧 郧怎葬灶早遭蚤灶袁藻贼 葬造 渊远苑源苑冤噎噎噎
粤凿增葬灶糟藻泽 蚤灶 蚤皂责葬糟贼泽 燥枣 糟造蚤皂葬贼藻 糟澡葬灶早藻 燥灶 蚤灶枣藻糟贼蚤燥怎泽 凿蚤泽藻葬泽藻泽 燥怎贼遭则藻葬噪 蕴陨 郧怎燥凿燥灶早袁在匀粤晕郧 允怎灶澡怎葬袁允陨粤韵 郧藻灶早躁怎灶袁藻贼 葬造 渊远苑远圆冤噎噎
耘糟燥造燥早赠 燥枣 葬藻则燥遭蚤糟 皂藻贼澡葬灶藻 燥曾蚤凿蚤扎蚤灶早 遭葬糟贼藻则蚤葬 渊皂藻贼澡葬灶燥贼则燥责澡泽冤 再哉晕 允怎葬灶造蚤袁宰粤晕郧 再葬灶枣藻灶袁 在匀粤晕郧 匀燥灶早曾怎灶 渊远苑苑源冤噎噎噎噎噎
晕蚤贼则燥早藻灶 凿藻责燥泽蚤贼蚤燥灶 葬灶凿 蕴藻赠皂怎泽 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 造藻葬枣 糟澡造燥则燥责澡赠造造 糟燥灶贼藻灶贼 蚤灶 陨灶灶藻则 酝燥灶早燥造蚤葬灶 早则葬泽泽造葬灶凿
在匀粤晕郧 再怎灶澡葬蚤袁 匀耘 晕蚤葬灶责藻灶早袁 在匀粤晕郧 郧怎葬灶早皂蚤灶早袁藻贼 葬造 渊远苑愿远冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
宰燥则造凿憎蚤凿藻 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 葬灶凿 皂怎造贼蚤增葬则蚤葬贼藻 泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠 糟造怎泽贼藻则蚤灶早 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 泽责蚤凿藻则泽
杂匀耘晕 载蚤葬燥糟澡藻灶早袁在匀粤晕郧 月葬燥泽澡蚤袁 在匀粤晕郧 云藻灶早袁 藻贼 葬造 渊远苑怨缘冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
栽澡藻 蚤灶枣造怎藻灶糟藻 燥枣 憎蚤灶凿 凿蚤则藻糟贼蚤燥灶 燥灶 责燥造造藻灶鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿 早藻灶藻 枣造燥憎 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 蚤灶泽藻糟贼鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼 糟燥贼贼燥灶
在匀哉 允蚤葬造蚤灶袁 匀耘 允怎葬灶袁 晕陨哉 允蚤葬灶择怎灶袁 藻贼 葬造 渊远愿园猿冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
粤怎贼藻糟燥造燥早赠 驭 云怎灶凿葬皂藻灶贼葬造泽
耘糟燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 遭藻灶贼澡蚤糟 凿蚤葬贼燥皂泽袁 责则燥贼燥扎燥葬 葬灶凿 皂藻蚤燥遭藻灶贼澡燥泽 蚤灶 贼澡藻 泽藻凿蚤皂藻灶贼泽 燥枣 贼澡藻 悦澡葬灶早躁蚤葬灶早 耘泽贼怎葬则赠 葬灶凿 耘葬泽贼 悦澡蚤灶葬
杂藻葬 蚤灶 泽责则蚤灶早 酝耘晕郧 在澡葬燥糟怎蚤袁 载哉 运怎蚤凿燥灶早 渊远愿员猿冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
酝葬糟则燥遭藻灶贼澡蚤糟 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 早则燥怎责泽 葬贼 贼澡藻 则藻糟造葬皂葬贼蚤燥灶 葬灶凿 灶葬贼怎则葬造 贼蚤凿葬造 枣造葬贼泽 燥枣 匀藻灶早泽澡葬 耘葬泽贼 杂澡燥葬造袁 贼澡藻 耘泽贼怎葬则赠 燥枣 悦澡葬灶早躁蚤葬灶早 砸蚤增藻则
蕴灾 宰藻蚤憎藻蚤袁 酝粤 悦澡葬灶早忆葬灶袁 再哉 允蚤袁 藻贼 葬造 渊远愿圆缘冤
噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
耘灶则蚤糟澡皂藻灶贼 葬灶凿 藻糟燥造燥早蚤糟葬造 则蚤泽噪 燥枣 澡藻葬增赠 皂藻贼葬造 蚤灶 泽燥蚤造泽 葬灶凿 凿燥皂蚤灶葬灶贼 责造葬灶贼泽 蚤灶 贼澡藻 则蚤责葬则蚤葬灶 燥枣 贼澡藻 云藻灶早澡藻 砸蚤增藻则
再粤晕郧 再葬灶早袁 在匀韵哉 在澡藻灶早糟澡葬燥袁 宰粤晕郧 匀怎葬灶澡怎葬灶袁 藻贼 葬造 渊远愿猿源冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 泽葬造蚤灶蚤贼赠 葬灶凿 藻曾燥早藻灶燥怎泽 泽怎遭泽贼则葬贼藻泽 燥灶 贼澡藻 凿藻糟燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶 葬灶凿 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 燥枣 泽燥蚤造 燥则早葬灶蚤糟 糟葬则遭燥灶 蚤灶 贼澡藻 再藻造造燥憎 砸蚤增藻则
阅藻造贼葬 蕴陨 蕴蚤灶早袁 匝陨哉 杂澡葬燥躁怎灶袁 栽粤晕 云藻蚤枣藻蚤袁 藻贼 葬造 渊远愿源源冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 泽澡燥则贼鄄贼藻则皂 凿葬则噪 糟澡蚤造造蚤灶早 燥灶 造藻葬增藻泽 糟葬则遭燥灶 葬灶凿 灶蚤贼则燥早藻灶 皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂 葬灶凿 蚤灶增燥造增藻凿 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 燥枣 藻灶扎赠皂藻泽 蚤灶 皂葬灶早则燥增藻 运葬灶凿藻造蚤葬
燥遭燥增葬贼葬 泽藻藻凿造蚤灶早 在匀耘晕郧 悦澡怎灶枣葬灶早袁 蕴陨哉 宰藻蚤糟澡藻灶早袁 悦匀耘晕 杂澡葬燥遭燥袁 藻贼 葬造 渊远愿缘猿冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
孕则藻造蚤皂蚤灶葬则赠 藻增葬造怎葬贼蚤燥灶 燥灶 贼燥造藻则葬灶糟藻 贼燥 责澡燥泽责澡燥则燥怎泽 凿藻枣蚤糟蚤藻灶糟赠 燥枣 猿圆 糟怎造贼蚤增葬则泽 燥枣 糟怎贼 糟澡则赠泽葬灶贼澡藻皂怎皂
蕴陨哉 孕藻灶早袁 悦匀耘晕 杂怎皂藻蚤袁 云粤晕郧 宰藻蚤皂蚤灶袁 藻贼 葬造 渊远愿远猿冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 葬早藻 葬灶凿 藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 燥灶 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 澡藻葬增赠鄄皂藻贼葬造泽 悦凿 葬灶凿 悦怎 蚤灶 栽藻早蚤造造葬则糟葬 早则葬灶燥泽葬
宰粤晕郧 在澡葬燥早藻灶袁宰哉 匀燥灶早曾蚤袁悦匀耘晕 载蚤葬燥曾蚤葬燥袁藻贼 葬造 渊远愿远怨冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 悦澡蚤灶藻泽藻 早葬造造灶怎贼 燥灶 责澡燥贼燥泽赠灶贼澡藻贼蚤糟 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 葬灶凿 贼燥贼葬造 灶蚤贼则燥早藻灶 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣 砸澡怎泽 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽
蕴陨 再葬灶早袁 再粤晕郧 在蚤曾蚤葬灶早袁 悦匀耘晕 载蚤葬燥皂蚤灶早袁藻贼 葬造 渊远愿苑远冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
栽澡藻 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 早造赠责澡燥泽葬贼藻 凿藻早则葬凿葬贼蚤燥灶 遭赠 月怎则噪澡燥造凿藻则蚤葬 皂怎造贼蚤增燥则葬灶泽 宰杂鄄云允怨 蕴陨 郧怎葬灶曾蚤袁 宰哉 载蚤葬燥择蚤灶袁再耘 允蚤葬灶则藻灶 渊远愿愿缘冤噎噎
耘造藻糟贼则燥葬灶贼藻灶灶燥早则葬责澡蚤糟 葬灶凿 遭藻澡葬增蚤燥怎则葬造 则藻泽责燥灶泽藻泽 燥枣 泽糟葬则葬遭 遭藻藻贼造藻泽 贼燥 砸蚤糟蚤灶怎泽 糟燥皂皂怎灶蚤泽 造藻葬枣 增燥造葬贼蚤造藻泽
蕴陨 宰藻蚤扎澡藻灶早袁 再粤晕郧 蕴藻蚤袁 杂匀耘晕 载蚤葬燥憎藻蚤袁 藻贼 葬造 渊远愿怨缘冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
孕燥责怎造葬贼蚤燥灶袁 悦燥皂皂怎灶蚤贼赠 葬灶凿 耘糟燥泽赠泽贼藻皂
耘糟燥泽赠泽贼藻皂 澡藻葬造贼澡 葬泽泽藻泽泽皂藻灶贼 蚤灶 月葬蚤赠葬灶早凿蚤葬灶 蕴葬噪藻 载哉 云藻蚤袁 在匀粤韵 再葬灶憎藻蚤袁 再粤晕郧 在澡蚤枣藻灶早袁 藻贼 葬造 渊远怨园源冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
悦澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 皂葬糟则燥遭藻灶贼澡蚤糟 糟燥皂皂怎灶蚤贼蚤藻泽 蚤灶 皂葬灶早则燥增藻 憎藻贼造葬灶凿泽 葬造燥灶早 贼澡藻 憎葬贼藻则憎葬赠泽 燥枣 晕燥则贼澡 匀藻扎澡燥怎袁 在澡怎澡葬蚤袁 杂燥怎贼澡 悦澡蚤灶葬
宰粤晕郧 匀怎蚤袁 在匀韵晕郧 杂澡葬灶袁 云粤晕郧 在澡葬灶择蚤葬灶早 渊远怨员猿冤
噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
栽澡藻 蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶 遭藻贼憎藻藻灶 糟燥皂责燥灶藻灶贼泽 燥枣 藻糟燥泽赠泽贼藻皂 则藻泽责蚤则葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼赠责蚤糟葬造 枣燥则藻泽贼 葬灶凿 早则葬泽泽造葬灶凿 藻糟燥泽赠泽贼藻皂泽
在匀哉 载蚤葬灶躁蚤灶袁 再哉 郧怎蚤则怎蚤袁 宰粤晕郧 匝蚤怎枣藻灶早袁 藻贼 葬造 渊远怨圆缘冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 贼澡蚤灶灶蚤灶早 燥灶 皂葬糟则燥 枣怎灶早蚤 葬灶凿 贼澡藻蚤则 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 憎蚤贼澡 造蚤贼贼藻则 凿藻糟燥皂责燥泽蚤贼蚤燥灶 蚤灶 孕蚤灶怎泽 贼葬遭怎造葬藻枣燥则皂蚤泽 责造葬灶贼葬贼蚤燥灶泽
悦匀耘晕 载蚤葬燥袁 月粤陨 杂澡怎造葬灶袁 蕴陨哉 再燥灶早袁 藻贼 葬造 渊远怨猿缘冤
噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
月藻贼葬 凿蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 责造葬灶贼 糟燥皂皂怎灶蚤贼蚤藻泽 蚤灶 月葬蚤泽澡葬灶扎怎 晕葬贼怎则藻 砸藻泽藻则增藻 栽粤晕 杂澡葬灶泽澡葬灶袁 再耘 在澡藻灶造蚤灶袁 再哉粤晕 蕴蚤怎遭蚤灶袁 藻贼 葬造 渊远怨源源冤噎噎噎噎
耘枣枣藻糟贼 燥枣 韵曾赠贼藻贼则葬藻赠藻造蚤灶藻 渊韵栽悦冤 燥灶 贼澡藻 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 燥枣 藻灶扎赠皂藻 葬灶凿 皂蚤糟则燥遭蚤葬造 糟燥皂皂怎灶蚤贼赠 皂藻贼葬遭燥造蚤糟 责则燥枣蚤造藻泽 蚤灶 糟燥皂责燥泽贼蚤灶早
悦匀耘晕 在澡蚤曾怎藻袁 郧哉 允蚤藻袁 郧粤韵 匀怎葬袁 藻贼 葬造 渊远怨缘苑冤
噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
蕴葬灶凿泽糟葬责藻袁 砸藻早蚤燥灶葬造 葬灶凿 郧造燥遭葬造 耘糟燥造燥早赠
灾葬则蚤葬贼蚤燥灶泽 蚤灶 造藻葬枣 葬灶葬贼燥皂赠 燥枣 蕴葬则蚤曾 早皂藻造蚤灶蚤蚤 则藻枣造藻糟贼 葬凿葬责贼葬贼蚤燥灶 燥枣 蚤贼泽 责澡燥贼燥泽赠灶贼澡藻贼蚤糟 糟葬责葬糟蚤贼赠 贼燥 糟造蚤皂葬贼藻 糟澡葬灶早藻泽
允陨 在蚤躁蚤灶早袁 匝哉粤晕 载蚤葬灶噪怎蚤袁 宰粤晕郧 悦澡怎葬灶噪怎葬灶 渊远怨远苑冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
栽澡藻 泽贼怎凿赠蚤灶早 燥枣 噪藻赠 藻糟燥造燥早蚤糟葬造 枣葬糟贼燥则泽 葬灶凿 贼澡则藻泽澡燥造凿 燥枣 造葬灶凿泽糟葬责藻 藻增燥造怎贼蚤燥灶 蚤灶 再葬灶糟澡藻灶早 悦燥葬泽贼葬造 憎藻贼造葬灶凿
在匀粤晕郧 匀怎葬遭蚤灶早袁 蕴陨哉 匀燥灶早赠怎袁 蕴陨 再怎枣藻灶早袁藻贼 葬造 渊远怨苑缘冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
耘糟燥鄄责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造 则藻泽责燥灶泽藻 燥枣 孕澡则葬早皂蚤贼藻泽 糟燥皂皂怎灶蚤泽 贼燥 憎葬贼藻则 贼葬遭造藻 糟澡葬灶早藻泽 蚤灶 贼澡藻 匀燥则择蚤灶 杂葬灶凿 蕴葬灶凿
酝粤 再怎灶澡怎葬袁在匀粤晕郧 栽燥灶早澡怎蚤袁 蕴陨哉 载蚤灶责蚤灶早 渊远怨愿源冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
陨皂责则燥增藻皂藻灶贼 燥枣 泽灶燥憎皂藻造贼 蚤皂责造藻皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 杂宰粤栽 澡赠凿则燥造燥早蚤糟 皂燥凿藻造 再哉 宰藻灶躁怎灶袁晕粤晕 在澡怎燥贼燥灶早袁在匀粤韵 再葬灶遭燥袁藻贼 葬造 渊远怨怨圆冤噎
砸藻泽责燥灶泽藻泽 燥枣 造葬噪藻 枣造怎糟贼怎葬贼蚤燥灶 贼燥 糟造蚤皂葬贼藻 糟澡葬灶早藻 蚤灶 匀燥则择蚤灶 杂葬灶凿赠 蕴葬灶凿
悦匀粤晕郧 载怎藻造蚤袁 在匀粤韵 载怎藻赠燥灶早袁 宰粤晕郧 宰藻蚤袁 藻贼 葬造 渊苑园园圆冤
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
宰葬贼藻则 藻糟燥造燥早赠 葬灶凿 枣则葬糟贼葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 泽燥蚤造 责葬则贼蚤糟造藻 泽蚤扎藻 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 燥枣 贼澡则藻藻 贼赠责蚤糟葬造 增藻早藻贼葬贼蚤燥灶泽 蚤灶 杂澡藻造造 陨泽造葬灶凿
载陨粤 允蚤葬灶早遭葬燥袁 在匀粤晕郧 杂澡怎赠燥灶早袁 宰粤晕郧 砸燥灶早则燥灶早袁 藻贼 葬造 渊苑园员猿冤
噎噎噎噎噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
杂责葬贼蚤燥鄄贼藻皂责燥则葬造 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 燥枣 藻责蚤造蚤贼澡蚤糟 葬造早葬造 糟澡造燥则燥责澡赠造造 葬 蚤灶 则藻造葬贼蚤燥灶 贼燥 贼澡藻 责澡赠泽蚤糟燥鄄糟澡藻皂蚤糟葬造 枣葬糟贼燥则泽 燥枣 郧怎枣怎 砸蚤增藻则 蚤灶 栽澡则藻藻 郧燥则鄄
早藻泽 砸藻泽藻则增燥蚤则 宰哉 杂澡怎赠怎葬灶袁 郧耘 允蚤憎藻灶袁 酝陨粤韵 宰藻灶躁蚤藻袁 藻贼 葬造 渊苑园圆猿冤噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
砸藻泽燥怎则糟藻 葬灶凿 陨灶凿怎泽贼则蚤葬造 耘糟燥造燥早赠
郧则葬责澡蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 泽责葬贼蚤燥鄄贼藻皂责燥则葬造 藻枣枣藻糟贼 枣燥则 增藻早藻贼葬贼蚤燥灶 凿蚤泽贼怎则遭葬灶糟藻 糟葬怎泽藻凿 遭赠 糟燥葬造 皂蚤灶蚤灶早院 葬 糟葬泽藻 燥枣 阅葬贼燥灶早 悦燥葬造 酝蚤灶藻 粤则藻葬
匀哉粤晕郧 再蚤袁 宰粤晕郧 再怎灶躁蚤葬袁 蕴陨 载蚤葬燥泽澡怎灶袁 藻贼 葬造 渊苑园猿缘冤
噎噎噎
噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎噎
远源园苑 摇 生摇 态摇 学摇 报摇 摇 摇 猿猿卷摇
叶生态学报曳圆园员源年征订启事
叶生态学报曳是由中国科学技术协会主管袁中国生态学学会尧中国科学院生态环境研究中心主办的生态学
高级专业学术期刊袁创刊于 员怨愿员年袁报道生态学领域前沿理论和原始创新性研究成果遥 坚持野百花齐放袁百家
争鸣冶的方针袁依靠和团结广大生态学科研工作者袁探索生态学奥秘袁为生态学基础理论研究搭建交流平台袁
促进生态学研究深入发展袁为我国培养和造就生态学科研人才和知识创新服务尧为国民经济建设和发展服务遥
叶生态学报曳主要报道生态学及各分支学科的重要基础理论和应用研究的原始创新性科研成果遥 特别欢
迎能反映现代生态学发展方向的优秀综述性文章曰研究简报曰生态学新理论尧新方法尧新技术介绍曰新书评价和
学术尧科研动态及开放实验室介绍等遥
叶生态学报曳为半月刊袁大 员远开本袁圆愿园页袁国内定价 怨园元 辕册袁全年定价 圆员远园元遥
国内邮发代号院愿圆鄄苑袁国外邮发代号院酝远苑园
标准刊号院陨杂杂晕 员园园园鄄园怨猿猿摇 摇 悦晕 员员鄄圆园猿员 辕 匝
全国各地邮局均可订阅袁也可直接与编辑部联系购买遥 欢迎广大科技工作者尧科研单位尧高等院校尧图书
馆等订阅遥
通讯地址院 员园园园愿缘 北京海淀区双清路 员愿号摇 电摇 摇 话院 渊园员园冤远圆怨源员园怨怨曰 远圆愿源猿猿远圆
耘鄄皂葬蚤造院 泽澡藻灶早贼葬蚤曾怎藻遭葬燥岳 则糟藻藻泽援葬糟援糟灶摇 网摇 摇 址院 憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
本期责任副主编摇 余新晓摇 摇 摇 编辑部主任摇 孔红梅摇 摇 摇 执行编辑摇 刘天星摇 段摇 靖
生摇 态摇 学摇 报渊杂匀耘晕郧栽粤陨摇 载哉耘月粤韵冤渊半月刊摇 员怨愿员年 猿月创刊冤
第 猿猿卷摇 第 圆员期摇 渊圆园员猿年 员员月冤
粤悦栽粤 耘悦韵蕴韵郧陨悦粤 杂陨晕陨悦粤摇渊杂藻皂蚤皂燥灶贼澡造赠袁杂贼葬则贼藻凿 蚤灶 员怨愿员冤摇灾燥造郾 猿猿摇 晕燥郾 圆员 渊晕燥增藻皂遭藻则袁 圆园员猿冤
编摇 摇 辑摇 叶生态学报曳编辑部
地址院北京海淀区双清路 员愿号
邮政编码院员园园园愿缘
电话院渊园员园冤远圆怨源员园怨怨憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶泽澡藻灶早贼葬蚤曾怎藻遭葬燥岳 则糟藻藻泽援葬糟援糟灶
主摇 摇 编摇 王如松
主摇 摇 管摇 中国科学技术协会
主摇 摇 办摇 中国生态学学会
中国科学院生态环境研究中心
地址院北京海淀区双清路 员愿号
邮政编码院员园园园愿缘
出摇 摇 版摇
摇 摇 摇 摇 摇 地址院北京东黄城根北街 员远号
邮政编码院员园园苑员苑
印摇 摇 刷摇 北京北林印刷厂
发 行摇
地址院东黄城根北街 员远号
邮政编码院员园园苑员苑
电话院渊园员园冤远源园猿源缘远猿耘鄄皂葬蚤造院躁燥怎则灶葬造岳 糟泽责早援灶藻贼
订摇 摇 购摇 全国各地邮局
国外发行摇 中国国际图书贸易总公司
地址院北京 猿怨怨信箱
邮政编码院员园园园源源
广告经营
许 可 证摇 京海工商广字第 愿园员猿号
耘凿蚤贼藻凿 遭赠摇 耘凿蚤贼燥则蚤葬造 遭燥葬则凿 燥枣
粤悦栽粤 耘悦韵蕴韵郧陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
粤凿凿院员愿袁杂澡怎葬灶早择蚤灶早 杂贼则藻藻贼袁匀葬蚤凿蚤葬灶袁月藻蚤躁蚤灶早 员园园园愿缘袁悦澡蚤灶葬
栽藻造院渊园员园冤远圆怨源员园怨怨
憎憎憎援藻糟燥造燥早蚤糟葬援糟灶
泽澡藻灶早贼葬蚤曾怎藻遭葬燥岳 则糟藻藻泽援葬糟援糟灶
耘凿蚤贼燥则鄄蚤灶鄄糟澡蚤藻枣摇 宰粤晕郧 砸怎泽燥灶早
杂怎责藻则增蚤泽藻凿 遭赠摇 悦澡蚤灶葬 粤泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶 枣燥则 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠
杂责燥灶泽燥则藻凿 遭赠摇 耘糟燥造燥早蚤糟葬造 杂燥糟蚤藻贼赠 燥枣 悦澡蚤灶葬
砸藻泽藻葬则糟澡 悦藻灶贼藻则 枣燥则 耘糟燥鄄藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 悦粤杂
粤凿凿院员愿袁杂澡怎葬灶早择蚤灶早 杂贼则藻藻贼袁匀葬蚤凿蚤葬灶袁月藻蚤躁蚤灶早 员园园园愿缘袁悦澡蚤灶葬
孕怎遭造蚤泽澡藻凿 遭赠摇 杂糟蚤藻灶糟藻 孕则藻泽泽
粤凿凿院员远 阅燥灶早澡怎葬灶早糟澡藻灶早早藻灶 晕燥则贼澡 杂贼则藻藻贼袁
月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园苑员苑袁悦澡蚤灶葬
孕则蚤灶贼藻凿 遭赠摇 月藻蚤躁蚤灶早 月藻蚤 蕴蚤灶 孕则蚤灶贼蚤灶早 匀燥怎泽藻袁
月藻蚤躁蚤灶早 员园园园愿猿袁悦澡蚤灶葬
阅蚤泽贼则蚤遭怎贼藻凿 遭赠摇 杂糟蚤藻灶糟藻 孕则藻泽泽
粤凿凿院员远 阅燥灶早澡怎葬灶早糟澡藻灶早早藻灶 晕燥则贼澡
杂贼则藻藻贼袁月藻蚤躁蚤灶早 员园园苑员苑袁悦澡蚤灶葬
栽藻造院渊园员园冤远源园猿源缘远猿
耘鄄皂葬蚤造院躁燥怎则灶葬造岳 糟泽责早援灶藻贼
阅燥皂藻泽贼蚤糟 摇 摇 粤造造 蕴燥糟葬造 孕燥泽贼 韵枣枣蚤糟藻泽 蚤灶 悦澡蚤灶葬
云燥则藻蚤早灶 摇 摇 悦澡蚤灶葬 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 月燥燥噪 栽则葬凿蚤灶早
悦燥则责燥则葬贼蚤燥灶
粤凿凿院孕援韵援月燥曾 猿怨怨 月藻蚤躁蚤灶早 员园园园源源袁悦澡蚤灶葬
摇 陨杂杂晕 员园园园鄄园怨猿猿悦晕 员员鄄圆园猿员 辕 匝 国内外公开发行 国内邮发代号 愿圆鄄苑 国外发行代号 酝远苑园 定价 怨园郾 园园元摇