全 文 ：书制剂与炮制
收稿日期:2012-02-09; 修订日期:2012-07-18
基金项目:国家自然科学基金(No． 30860374)
作者简介:李 妍(1972-) ，吉林通化人，现为北京仁和医院副主任医师，
硕士学位，在读博士研究生，主要从事分子肿瘤学研究与中药开发工作．
* 通讯作者简介:张学武(1973-) ，吉林大安人，现为延边大学医学院教
授，博士学位，主要从事分子肿瘤学与中药开发研究工作．
珍珠梅黄酮固体脂质纳米粒的制备工艺
李 妍1，2，崔逢德1，张学武1*
(1．延边大学医学院，吉林 延吉 133000; 2．北京仁和医院 102600)
摘要:目的 探讨珍珠梅黄酮固体脂质纳米粒的制备工艺。方法 以硬脂酸为载体，以珍珠梅黄酮为模型药物，采用乳化
蒸发 －低温固化法制备固体脂质纳米粒。采用透射电镜研究载药纳米粒形态，激光粒度分析仪测定其粒径，X 射线衍射
仪进行物相鉴别，并对纳米粒的包封率及体外释药特性等进行了研究。结果 实验制备珍珠梅黄酮固体纳米粒为类球实
体，粒径分布比较均匀，药物以分子或细小粒子分散于脂质骨架中。体外释药研究表明，纳米粒体外释药先快后慢，包封
于降解材料骨架内的药物通过骨架溶蚀缓慢释放。结论 采用乳化 －低温固化法制备 TTF1 可生物降解纳米粒，制备工
艺简单，平均粒径和包封率较为理想，所制备纳米粒具有明显的缓释作用。
关键词:珍珠梅黄酮; 硬脂酸; 固态脂质纳米粒; 生物降解
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 10． 072
中图分类号:R285 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)10-2549-01
长白山珍珠梅(Sorbaria sorbifolia)属蔷薇科植物，有活血化
瘀，消肿止痛，治骨折、跌打损伤等药理作用［1］，是《抗癌中药大
辞典》收录的长白山抗癌药［2］。课题组前期报道:珍珠梅提取物
对人肝癌 HepG － 2 细胞生长有抑制作用［3］;可以抑制小鼠 S180肉
瘤的生长［4］。珍珠梅黄酮(5，2，4 －三羟基 － 6，7，5 －三甲氧
基黄酮，TTF1) ，是从珍珠梅中提取得到新的单体化合物［5］，结构
式如图 1 所示，TTF1 具有明显的抗肿瘤作用［6］，作用机制与线
粒体途径诱导细胞凋亡密切相关［7］。目前制备固态脂质纳米粒
(Solid lipid nanoparticles，SLN)的方法有高压乳匀法、超声分散
法、微乳法和乳化蒸发法等。硬脂酸是一种内源性的生理物质，
熔程为 50 ～ 60 ℃，在体内有固定的降解途径，生物相容性比较
好。为进一步改善 TTF1 溶解和吸收性能，提高疗效，本研究选
择体内可生物降解材料硬脂酸为载体，采用乳化 －低温固化法制
备 TTF1 黄酮可生物降解纳米粒。
图 1 TTF1 的化学结构
1 材料与仪器
硬脂酸(天津市光复精细化工研究所) ;Poloxamer 188(德国
BASF) ;大豆卵磷脂(注射级，上海爱康精心化工有限公司)。乙
醇为色谱纯，水为重蒸水。
90 － 3 型恒温磁力双向搅拌器(上海振荣科学仪器有限公
司)。JEM － 1200EX JE02 透射电子显微镜(日本电子) ;PW1700
X 射线衍射分析仪(荷兰菲利浦) ;LC － 10AT 高效液相色谱仪
(日本岛津) ;SPD － 10A 紫外检测器(日本岛津) ;TGL － 16G 低
温超速离心机(常州诺基仪器有限公司) ;90 － 3 型恒温磁力双向
搅拌器(上海振荣科学仪器有限公司) ;KQ －250D 型数控超声波
清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
2 方法
2． 1 TTF1 固体脂质纳米粒(TTF1 － SLN)的制备 采用乳化蒸发
－低温固化法制备 TTF1 － SLN。称取处方量的 Poloxamer 188 置
于 100 ml具塞锥形瓶中，加入适量的重蒸水，于(74 ± 3)℃水浴
下，磁力搅拌溶解，构成水相;另取处方量 TTF1、硬脂酸和卵磷脂
分别置于 100 ml具塞锥形瓶中，加适量乙醇，于(74 ± 3)℃水浴
下，磁力搅拌使其溶解，形成有机相。用注射器将有机相缓慢注
入搅拌(1 000 r /min)的水相中，恒温搅拌，使有机溶剂蒸发并
浓缩至适当体积，得到半透明纳米乳剂。将纳米乳剂迅速加入至
一定体积的搅拌的水相中(0 ～ 2 )℃，继续搅拌 1 h，即得到 TTF1
－ SLN混悬液。
2． 2 TTF1 － SLN 的表征 室温下，取适量 TTF1 － SLN混悬液，加
重蒸水稀释，而后滴至覆盖碳膜的网上，用 2． 0%磷钨酸钠液负
染，用透射电子显微镜观察形态。另取适量 TTF1 － SLN 样品，用
激光粒度分析仪测定其粒径大小;在 TTF1 － SLN 混悬液中加入
5%甘露醇作为冻干保护剂，在 － 80℃的冰箱中冷冻 24 h，取出，
再放在冷冻干燥机中干燥 48 h，制得冻干粉。采用 X 射线衍射
仪对 TTF1、Poloxamer 188、卵磷脂和硬脂酸混合物及 TTF1 － SLN
冻干粉样品进行分析。衍射条件:Cu 靶，高压强度 40 kV，管流
30 mA。测速扫描速度 1° /min，衍射角 2 ～ 80°。
2． 3 包封率的测定 色谱条件:采用 C18色谱柱(4． 6 mm × 250
mm，5 μm) ;甲醇 －水(体积比为 40∶ 60)为流动相;检测波长为
250 nm，流速为 1． 0 ml /min;柱温为(22 ± 2)℃;进样量为 20 μl。
TTF1 与空白纳米粒分离良好，辅料对 TTF1 测定无干扰。精密称
取干燥至恒重的 TTF1 对照品适量，加适量甲醇溶解，摇匀、定
容。精密量取适量，加甲醇稀释成浓度 0． 1，0． 6，1． 2，2． 4，3． 8，
4． 8 μg /ml的溶液，按色谱条件测定，以峰面积(A)对浓度(C)进
行线性回归，回归方程为 A = 72 584C + 17 675(r = 0． 998，n = 6) ，
在 0． 1 ～ 4． 8 μg /ml内，TTF1 浓度与峰面积呈良好的线性关系。
取 TTF1 － SLN 纳米粒混悬液以 12 000 r /min 离心 30 min。
取上清液，采用 HPLC法测定 TTF1 － SLN，记录峰面积值。每批
样品测定 3 次，按下式计算包封率:
包封率(%)= ［(混悬液中 TTF1 总量 － 上清液 TTF1 总
量)/混悬液中 TTF1 总量］× 100%
2． 4 体外释放度的测定 取 TTF1 － SLN混悬液，以 12 000 r /min
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL ． 23 NO． 10 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 10 期
离心 30 min，过滤，加重蒸水分散后离心过滤，重复 5 次，收集纳
米粒，加重蒸水制成混悬液，精密量取 5 ml 置于具塞试管中，加
入 45 ml pH = 6． 8 磷酸盐缓冲液释放介质，于(37 ± 0． 5)℃水浴
振荡，振荡频率为 60 次 /min。分别在 0． 5，2，4，8，12，24，48 和 72
h取释放介质溶液 1． 0 ml，并及时补充相同温度和体积的释放介
质。所取溶液以 12 000 r /min离心 30 min，精密量取上清液 0． 5
ml置于 10 ml容量瓶中。用甲醇溶解定容。经 0． 45 μm 微孔滤
膜过滤，用 HPLC 法测定滤液中 TTF1 的浓度，计算 TTF1 － SLN
中药物的累积释放率。
3 结果与讨论
3． 1 制备方法及制备材料的选择 在 75℃的温度下，硬脂酸处
于液态。由于 TTF1 在水中的溶解度小，因此药物存在于硬脂酸
所形成的乳滴中，形成药物的硬脂酸溶液。将体系分散到冰水浴
中，初乳的温度急剧下降，微乳凝固成固态硬脂酸纳米粒，药物被
包封在硬脂酸纳米粒中。实验过程发现，降温过程较长时，出现
大量的沉淀，稳定性下降。呈现这种原因可能是低温凝固时，不
能瞬时硬化，保留一定的软黏性，在沉降过程中，乳滴互相碰撞粘
连长大。
3． 2 生物降解纳米粒的表征 本实验以透射电镜对粒子的微观
形态进行观察，纳米粒为类球形，粒径分布比较均匀。粒径在
150 ～ 200 nm，3 批样品的平均粒径为(195． 2 ± 35． 2)nm。实验
结果发现，当固定其它条件时，随着卵磷脂用量的增加，TTF1 的
粒径随之逐渐减小。经过 X射线衍射，证实是形成纳米粒，TTF1
黄酮以分子或细小粒子分散于骨架中。体外释放先快后慢的研
究结果表明，大部分 TTF1 黄酮类脂在骨架材料内。
3． 3 包封率测定 本实验采用低温超速离心法，此方法可很好地
分离纳米粒与游离药物，且用时较短，操作简单。测定 3 个批号
TTF1 黄酮固体脂质纳米粒的包封率，平均包封率分别为
64． 57%，64． 49%及 64． 66%。
3． 4 体外释放度 TTF1 固体脂质纳米粒体外释药先快后慢。
SLN是药物与脂质的骨架结构，由于纳米粒的比表面很大，药物
分子可能吸附或沉淀在纳米粒的表面，或者富集在纳米粒的外
层，可迅速溶解扩散而出现释药初期的突释现象，但突释现象不
明显，而后随着时间增加纳米颗粒释药缓慢。实验结果表明，绝
大多数药物包封于可生物降解材料骨架内。
综上所述，本文采用乳化 －低温固化法制备 TTF1 可生物降
解纳米粒，制备工艺简单，平均粒径和包封率较为理想，所制备纳
米粒具有明显的缓释作用。
参考文献:
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内抑瘤作用的研究［J］．中药材，2004，27(1) :36．
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津药学，2003，15(5) :1．
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genesis by TTF1 from extract of herbal medicine［J］． World Journal of
Gastroenterology，2011，17(44) :4875．
［7］ Yan Li，Lei Bian，Fengde CUI，et al． TTF1 － induced apoptosis of HepG
－ 2 cells through a mitochondrial pathway［J］． Oncology Reports，
2011，26:651．
收稿日期:2012-05-23; 修订日期:2012-07-23
基金项目:国家自然科学基金(No． 81001645)
作者简介:舒乐新(1983-) ，女(汉族) ，湖北咸宁人，现任天津中医药大学实验教学部助理实验师，硕士学位，主要从事缓控释制剂的研究工作．
* 通讯作者简介:刘志东(1978-) ，男(汉族) ，天津人，现任天津中医药大学中医药研究院副研究员，博士学位，主要从事缓控释制剂的研究工作．
PEG修饰黄芩苷固体脂质纳米粒的制备
舒乐新1，2，孙精通1，刘志东1* ，赵启铎3
(1．天津中医药大学现代中药发现与制剂技术教育部工程研究中心 300193;
2．天津中医药大学实验教学部 300193; 3．天津中医药大学中药学院 300193)
摘要:目的 制备几种不同 PEG修饰的黄芩苷固体脂质纳米粒。方法 采用乳化固化法制备黄芩苷固体脂质纳米粒，分
别用 PEG1500，PEG2000，PEG4000，PEG6000 对其修饰，以包封率，粒径，状态及其稳定性为指标得出最优修饰。结果
PEG2000 修饰的黄芩苷固体脂质纳米粒最优。透射电镜照片显示其外形圆整成球形，包封率为 35． 51 %，载药量为
1． 42%，平均粒径 27． 75nm，zeta电位为 － 15． 47 mV 。结论 PEG2000 修饰的黄芩苷固体脂质纳米粒质量评价效果较好，
为进一步制备脑靶向纳米粒奠定了基础。
关键词:黄芩苷; 固体脂质纳米粒; PEG修饰
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 10． 073
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2012)10-2550-03
Preparation of Baicalin － loaded PEG －modified Solid Lipid Nanoparticles
SHU Le-xin1，2，SUN Jing-tong1，LIU Zhi-dong1* ，ZHAO Qi-duo3
(1． Engineering Research Center of Modern Chinese Medicine Discovery and Preparation Technique 300193，Chi-
na;2． Department of Experimental Education，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，300193，Chi-
na;3． School of Pharmacology，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China)
Abstract:Objective To prepare baicalin － loaded polyethylene glycol (PEG) － modified solid lipid nanoparticles．
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 10