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作 者 ：罗海峰,齐鸿雁,薛凯,王晓谊,王川,张洪勋

期 刊 ：生态学报 2003年 23卷 10期 页码：2170~2175

关键词：PCR-DGGE；微生物多样性；GC发卡结构；

Keywords:PCR DGGE, microbial diversity, GC clamp,

摘 要 ：应用普通细胞裂解法提取 3株实验菌株 (Escherichia coli DH5α,Staphylococcus aureus SA- 1和 A-grobacterium tumerfaciens 1 31 2 9)的基因组 DNA和应用基于高盐和长时高热的细胞裂解法提取 7种不同土壤样品中的微生物的基因组 DNA,两组不同结构的引物 F3 57GC,R51 8(在正向引物的 5′端有 GC发卡结构 )和 F3 57,R51 8,分别对实验菌株和土壤样品中微生物的 1 6Sr RNA基因 V3区进行扩增 ,均得到了目的片段。比较了不同引物扩增的 1 6S r DNA片段在 DGGE中的不同电泳行为 ,结果表明 ,含 GC发卡结构的PCR扩增产物在 DGGE中能够得到很好的分离 ,而无 GC发卡结构的 PCR产物则不能在 DGGE中获得满意分离。引入 GC发卡结构 ,使得对不同微生物的定性和分类更深入细致。

Abstract:As a new DNA fingerprinting technique, denaturing g radient gel electrophoresis (DGGE) was used to analyze the microbial diversity i n different environmental samples, which has given people new ideas of studying the microbial community in soil. This technique is based on the direct extractio n of genomic DNA from soil samples, the amplification of 16S rRNA genes (V3 regi on) by using the specific primers and the separation of the PCR products by DGGE . Three strains (Escherichia coli DH 5α, Staphylococcus ...

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