全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员员袁圆缘渊缘冤院园怨猿怨 耀 园怨源源允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员员冤园缘鄄园怨猿怨鄄园远
牡丹 孕泽酝粤阅杂缘基因的克隆尧表达及载体构建
任摇 磊摇 王摇 雁摇 周摇 琳摇 彭镇华
渊中国林业科学研究院林业研究所 辕国家林业局林木培育重点实验室袁北京摇 员园园园怨员冤
摘摇 要院以牡丹品种赵粉渊孕葬藻燥灶蚤葬 泽怎枣枣则怎贼蚤糟燥泽葬 蕴援 糟增援 在澡葬燥 云藻灶冤为试材袁采用 砸栽鄄孕悦砸和 砸粤悦耘法从花瓣中获
得了 员 个牡丹 杂耘孕粤蕴蕴粤栽粤 基因 糟阅晕粤袁命名为 孕泽酝粤阅杂缘袁郧藻灶月葬灶噪 登录号为 匀匝源源怨缘远怨遥 其 糟阅晕粤 全长
员圆圆圆遭责袁包含员怨园遭责的缘忆非编码区尧猿园圆遭责的猿忆非编码区和员个长度为苑猿圆遭责编码圆源猿个氨基酸的开放阅读
框遥 序列比对和系统进化分析表明袁孕泽酝粤阅杂缘与葡萄的亲缘关系最近袁相似性达 愿猿豫以上袁属于 酝粤阅杂 家
族 杂耘孕亚家族遥 相对荧光定量 孕悦砸分析表明袁孕泽酝粤阅杂缘 在花瓣中的表达量最高袁其次是心皮袁再次是萼
片袁在雄蕊中表达量最低遥 成功构建正义和反义表达载体袁为牡丹花型改良和品种创新提供基础遥
关键词院牡丹曰基因克隆曰表达曰载体构建
悦蕴韵晕陨晕郧袁 耘载孕砸耘杂杂陨韵晕 粤晕阅 灾耘悦栽韵砸 悦韵晕杂栽砸哉悦栽陨韵晕 韵云 孕泽酝粤阅杂缘 郧耘晕耘 陨晕 栽砸耘耘 孕耘韵晕再
砸耘晕 蕴藻蚤摇 宰粤晕郧 再葬灶摇 在匀韵哉 蕴蚤灶摇 孕耘晕郧 在澡藻灶鄄澡怎葬
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 栽则藻藻 月则藻藻凿蚤灶早 葬灶凿 悦怎造贼蚤增葬贼蚤燥灶袁 杂贼葬贼藻 云燥则藻泽贼则赠 粤凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶袁 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 悦粤云袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员冤
粤遭泽贼则葬糟贼院陨灶 贼澡蚤泽 憎燥则噪袁 葬 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 杂耘孕粤蕴粤栽粤 早藻灶藻 憎葬泽 燥遭贼葬蚤灶藻凿 枣则燥皂 责藻贼葬造泽 燥枣 贼则藻藻 责藻燥灶赠渊孕葬藻燥灶蚤葬
泽怎枣枣则怎贼蚤糟燥泽葬 蕴援 糟增援 在澡葬燥 云藻灶 冤怎泽蚤灶早 砸栽鄄孕悦砸 葬灶凿 砸粤悦耘袁 灶葬皂藻凿 孕泽酝粤阅杂缘 渊郧藻灶月葬灶噪 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 晕燥援 匀匝源源怨缘远怨冤援 栽澡藻
枣怎造造 造藻灶早贼澡 燥枣 孕泽酝粤阅杂缘 糟阅晕粤 蚤泽 员圆圆圆遭责 蚤灶 造藻灶早贼澡袁 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 葬 缘忆鄄怎灶贼则葬灶泽造葬贼藻凿 则藻早蚤燥灶 渊缘忆鄄哉栽砸冤 燥枣 员怨园遭责袁 葬 猿忆鄄哉栽砸
燥枣 猿园圆遭责袁 葬灶凿 葬灶 燥责藻灶蚤灶早 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻 渊 韵砸云冤 燥枣 苑猿圆遭责 藻灶糟燥凿蚤灶早 葬 圆源猿 责则藻凿蚤糟贼藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽援 杂怎遭泽藻择怎藻灶贼造赠袁
泽藻择怎藻灶糟藻 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 葬灶凿 责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 葬灶葬造赠泽蚤泽 则藻增藻葬造藻凿 贼澡葬贼 孕泽酝粤阅杂缘 泽澡葬则藻凿 皂燥则藻 贼澡葬灶 愿猿豫 澡燥皂燥造燥早赠 憎蚤贼澡 灾蚤贼蚤泽
增蚤灶藻枣藻则葬袁 遭藻造燥灶早藻凿 贼燥 杂耘孕 泽怎遭枣葬皂蚤造赠 燥枣 酝粤阅杂 枣葬皂蚤造赠援 匀燥憎藻增藻则袁 则藻造葬贼蚤增藻 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 孕泽酝粤阅杂缘
泽澡燥憎藻凿 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 贼则葬灶泽糟则蚤责贼 葬遭怎灶凿葬灶糟藻 蚤灶 责藻贼葬造泽袁 皂燥凿藻则葬贼藻 造藻增藻造泽 蚤灶 糟葬则责藻造泽袁 造燥憎 造藻增藻造泽 蚤灶 泽藻责葬造泽 葬灶凿 贼澡藻 造燥憎藻泽贼 造藻增藻造泽
蚤灶 泽贼葬皂藻灶泽援 悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 泽藻灶泽藻 葬灶凿 葬灶贼蚤泽藻灶泽藻 责造葬灶贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 造葬蚤凿 葬 枣燥怎灶凿葬贼蚤燥灶 枣燥则 枣造燥憎藻则 贼赠责藻 皂燥凿蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿
增葬则蚤藻贼赠 蚤灶灶燥增葬贼蚤燥灶援
运藻赠 憎燥则凿泽院贼则藻藻 责藻燥灶赠曰早藻灶藻 糟造燥灶蚤灶早曰藻曾责则藻泽泽蚤燥灶曰糟燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 增藻糟贼燥则
收稿日期院圆园员园鄄员圆鄄员猿摇 接受日期院圆园员员鄄园猿鄄员远
基金项目院国家 愿远猿 项目渊圆园园远粤粤员园园员园怨冤袁国家林业局 怨源愿 项目渊圆园园远鄄源鄄悦园苑冤
作者简介院任摇 磊渊员怨愿圆鄄冤袁男袁青岛人袁博士在读袁主要从事花卉品种改良方面的研究遥 耘鄄皂葬蚤造院赠怎葬灶造蚤灶则藻灶造藻蚤岳 赠葬澡燥燥援 糟燥皂援 糟灶
通讯作者院王摇 雁渊员怨远怨鄄冤袁女袁黑龙江哈尔滨人袁研究员袁博士生导师袁研究方向为花卉品种改良遥 耘鄄皂葬蚤造院憎葬灶早赠葬灶岳 糟葬枣援 葬糟援 糟灶
摇 摇 酝粤阅杂鄄遭燥曾基因是一类广泛存在于植物中序列特
异的同源异型基因遥 它所编码的蛋白质是一种转录因
子袁通过调节其他基因的转录来发挥其调控作用咱员暂 遥
酝粤阅杂鄄遭燥曾基因在植物生长发育过程中起着非常重要
的作用袁不仅能够调控植物的营养生长袁而且参与根尧
茎尧叶尧胚珠及果实发育咱圆袁猿暂 遥 参与花器官形成的基因
大都属于 酝粤阅杂鄄遭燥曾基因遥 前人基于对模式植物拟南
芥渊粤则葬遭蚤凿燥责蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬冤尧矮牵牛渊孕藻贼怎灶蚤葬 澡赠遭则蚤凿葬冤和金
鱼草渊粤灶贼蚤则则澡蚤灶怎皂 皂葬躁怎泽冤花同源异型突变体的研究袁先
后提出花器官发育的 粤月悦 模型尧粤月悦阅 模型尧粤月悦阅耘
模型和四因子模型咱源 耀 员园暂 遥
随着对花发育遗传学研究的不断深入袁发现拟南
芥中的 杂耘孕粤蕴蕴粤栽粤员 辕 圆 辕 猿 辕 源 渊 杂耘孕 员 辕 圆 辕 猿 辕 源袁即以前的
粤郧蕴圆袁 源袁 怨 和 猿冤基因对于花器官的形成不可或缺袁并
称它们为 耘类功能基因遥 该类基因与 月尧悦 组基因一
起形成复合转录因子袁 激活或抑制靶基因的转录和表
怨猿怨
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
达袁 从而达到调控花瓣尧雄蕊尧雌蕊形成的作用咱员员 耀 员源暂 遥
杂耘孕基因作为 耘类重要组成部分袁不仅参与四轮花器
官的发育袁而且可以缩短植物营养生长期袁促使植物早
开花袁类似研究已经在拟南芥渊粤则葬遭蚤凿燥责蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬冤尧辣
椒渊悦葬责泽蚤糟怎皂 葬灶灶怎怎皂冤尧烟草渊晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂冤尧桃
渊孕则怎灶怎泽 责藻则泽蚤糟葬冤等植物上获得成功遥 目前袁已从番茄
渊杂燥造葬灶怎皂 造赠糟燥责藻则泽蚤怎皂冤尧苹果渊酝葬造怎泽 凿燥皂藻泽贼蚤糟葬冤尧大丁草
渊郧藻则遭藻则葬 澡赠遭则蚤凿冤尧加州罂粟渊耘泽糟澡泽糟澡燥造扎蚤葬 糟葬造蚤枣燥则灶蚤糟葬冤尧
板栗渊悦葬泽贼葬灶藻葬 皂燥造造蚤泽泽蚤皂葬冤尧柿渊阅蚤燥泽责赠则燥泽 噪葬噪蚤冤多种植
物中克隆到了 耘 类功能基因咱员缘 耀 圆员暂 遥 但是袁关于牡丹
渊孕葬藻燥灶蚤葬 泽怎枣枣则怎贼蚤糟燥泽葬 蕴援 冤的 杂耘孕基因尚未见报道遥
牡丹是我国的 员园 大名花之一袁具有较高的观赏价
值和象征意义遥 但是袁由于牡丹是多年生木本花卉袁自
然花期相对集中袁不能更好地满足市场需求袁制约了牡
丹产业化的发展遥 牡丹花型丰富袁有单瓣型尧荷花型尧
蔷薇型尧菊花型尧绣球型等 员园 个类型遥 但是袁某些品种
渊如赵粉冤花型很不稳定袁重瓣性忽高忽低咱圆圆暂 遥 虽然与
环境因素和品种自身的特性有一定的关系袁但其真正
的原因尚未清楚遥 牡丹丰富的花型变化为深入花发育
模型研究提供了很好的材料遥 本研究选取牡丹著名品
种赵粉袁通过 砸栽鄄孕悦砸 和 砸粤悦耘 技术获得 杂耘孕 基因全
长袁并且构建正义和反义表达载体袁以明确 杂耘孕 基因
在牡丹发育过程中的作用袁为牡丹花型定向遗传改良
和品种创新提供新的理论依据和基因资源遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
试验材料为种植在中国林业科学研究院北京良乡
牡丹基地 源 年生牡丹品种赵粉渊孕葬藻燥灶蚤葬 泽怎枣枣则怎贼蚤糟燥泽葬 蕴援
糟增援 在澡葬燥 云藻灶冤袁 于盛花期咱圆猿暂分别采收萼片尧花瓣尧雄
蕊和心皮袁锡箔纸包装后袁置于 原 愿园益冰箱保存遥
砸晕粤提取所用药品均购自北京拜尔迪生物公司袁
酝鄄酝蕴灾 反转录酶购自 孕则燥皂藻早葬 公司袁栽葬择 阅晕粤 聚合
酶尧阅晕粤凝胶回收试剂盒尧栽源 阅晕粤 连接酶尧大肠杆菌栽韵孕员园 感受态细胞尧质粒 阅晕粤 提取试剂盒和 阅晕葬泽藻 陨
酶等购自天根生化科技有限公司袁 杂酝粤砸栽栽酝 砸粤悦耘
糟阅晕粤 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 运蚤贼 为 悦造燥灶贼藻糟澡 公司产品袁限制性
内切酶 月葬皂匀 陨 和 云泽藻陨 购自 晕耘月 公司遥 克隆载体
责酝阅鄄员怨 栽 灾藻糟贼燥则 购自 栽葬运葬砸葬 公司袁改造过的植物表
达载体 责月陨员圆员 由本实验室保存遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 砸晕粤的提取与 糟阅晕粤 第 员 链的合成摇 采用改
良的 悦栽粤月 法分别提取萼片尧花瓣尧雄蕊和心皮总
砸晕粤遥 阅耘孕悦水溶解 砸晕粤袁用分光光度计测定 韵阅圆远园和韵阅圆愿园数值袁根据 韵阅圆远园 辕 韵阅圆愿园值判断 砸晕粤的质量袁用琼
脂糖凝胶电泳检测 砸晕粤 的完整性遥 糟阅晕粤 反转录按
照 孕则燥皂藻早葬 的 酝鄄酝蕴灾 砸藻增藻则泽藻 栽则葬灶泽糟则蚤责贼葬泽藻 说明书进
行遥
员郾 圆郾 圆摇 中间片段的扩增摇 根据 郧藻灶月葬灶噪 核酸数据库
中已经登录的其他物种的 杂耘孕 基因序列保守区域袁设
计引物 孕员渊缘忆鄄粤栽郧郧郧渊粤 辕 郧冤粤郧渊粤 辕 郧冤郧郧渊粤 辕 郧 辕 栽冤粤
渊粤 辕 郧冤渊粤 辕 郧冤郧栽渊悦 辕 栽冤 郧鄄猿忆和 孕圆渊缘忆鄄郧粤郧粤粤郧粤渊悦 辕
栽冤郧粤栽渊悦 辕 郧冤粤渊粤 辕 郧冤渊粤 辕 郧冤郧悦渊粤 辕 栽 辕 郧冤粤悦鄄猿忆冤袁以
盛花期牡丹品种赵粉心皮的 糟阅晕粤第 员 链为模板进行
中间片段的扩增遥 扩增程序为院怨缘益预变性 缘皂蚤灶曰
怨缘益变性 猿园泽袁缘缘益退火 圆园泽袁苑圆益延伸 猿园泽袁猿缘 个循环曰
苑圆益延伸 苑皂蚤灶遥
员郾 圆郾 猿摇 两端序列 砸粤悦耘扩增摇 根据中间片段序列袁设
计 猿忆 和 缘忆 引 物 孕猿 渊 缘忆鄄
郧栽悦悦栽栽栽郧悦郧粤栽郧悦郧郧粤郧郧栽栽郧悦栽鄄猿忆冤 和 孕源 渊 缘忆鄄
悦栽栽栽郧栽粤郧粤悦悦粤郧栽郧粤郧粤郧栽郧栽悦悦粤郧悦粤鄄猿忆冤袁按照试
剂盒 杂酝粤砸栽栽酝 砸粤悦耘 糟阅晕粤 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 运蚤贼 说明书进
行 砸粤悦耘扩增遥 扩增程序为院怨源益变性 猿园泽袁苑圆益延伸
猿皂蚤灶袁缘 个循环曰怨源益变性 猿园泽袁苑园益退火 猿园泽袁苑圆益延伸
猿皂蚤灶袁缘 个循环曰怨源益变性 猿园泽袁远愿益退火 猿园泽袁苑圆益延伸
猿皂蚤灶袁圆缘 个循环遥
员郾 圆郾 源摇 韵砸云扩增摇 应用 阅晕粤皂葬灶 软件对基因的 猿忆端
和 缘忆端序列进行拼接袁并在 晕悦月陨网站上预测其 韵砸云遥
根 据 韵砸云 序 列 设 计 圆 对 特 异 引 物 孕缘 渊 缘忆鄄
悦郧郧郧粤栽悦悦粤栽郧郧郧郧粤郧郧郧郧栽粤郧郧郧栽栽郧鄄猿忆冤和 孕远 渊缘忆鄄
栽栽郧郧悦悦郧郧悦悦郧悦粤栽悦悦粤郧栽栽郧悦粤栽郧粤郧鄄猿忆冤 以 及 孕苑
渊 缘忆鄄栽栽郧郧悦悦郧郧悦悦粤栽郧郧郧郧粤郧郧郧郧栽粤郧郧郧栽栽郧鄄猿忆冤 和
孕愿 渊 缘忆鄄悦郧郧郧粤栽悦悦郧悦粤栽悦悦粤郧栽栽郧悦粤栽郧粤郧鄄猿忆冤 进 行
韵砸云 扩增验证遥 孕悦砸 反应程序为院怨源益变性 缘皂蚤灶曰
怨源益变性 猿园泽袁缘远益退火 猿园泽袁苑圆益延伸 员皂蚤灶袁猿缘 个循
环曰苑圆益延伸 苑皂蚤灶遥
员郾 圆郾 缘摇 生物信息学摇 分析并在瑞士生物信息学研究
所网站渊 澡贼贼责院椅怎泽援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 冤上运用 悦燥皂责怎贼藻 责陨 辕
酝憎软件对目的基因编码蛋白等电点和分子量进行预
测袁利用 晕悦月陨 对编码蛋白结构域进行预测袁并运用
孕则燥贼杂糟葬造藻 软件对其疏水性预测分析遥 运用 孕月陨蕴
蕴再韵晕鄄郧耘砸蕴粤晕阅信息库对蛋白质序列进行二级结构
预测袁通过 杂憎蚤泽泽鄄酝燥凿藻造 宰燥则噪泽责葬糟藻 对其三级结构进行
预测遥 方法参照文献咱圆源 耀 圆远暂遥
员郾 圆郾 远摇 表达载体的构建摇 将 孕缘 和 孕远 以及 孕苑 和 孕愿
的 孕悦砸扩增产物纯化后连接到 责酝阅鄄员怨栽杂蚤皂责造藻灾藻糟贼燥则袁
得到 的 阳 性 克 隆 质 粒 分 别 命 名 为 质 粒 责酝阅鄄
园源怨
摇 缘 期 牡丹 孕泽酝粤阅杂缘 基因的克隆尧表达及载体构建
员怨孕泽酝粤阅杂缘渊杂冤 渊正向插入载体冤和 责酝阅鄄员怨孕泽酝粤阅杂缘
渊粤冤渊反向插入载体冤遥 经限制性内切酶 月葬皂匀 陨 和
云泽藻 陨消化后袁从胶中回收小片段袁与经 月葬皂匀陨 和 云泽藻陨
消化的质粒载体 责月陨员圆员 回收的大片段经 栽源 连接酶连
接遥 连接产物转化 栽韵孕员园 感受态细胞袁在含有卡那霉
素渊运皂冤员园园皂早 辕 蕴的 蕴月平板上筛选阳性菌落袁重组质
粒命名为 责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘 渊 杂冤 渊正义表达载体冤和
责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘渊粤冤 渊反义表达载体冤袁进行碱法提取
质粒及酶切鉴定遥
员郾 圆郾 苑摇 相对荧光定量摇 用 阅晕葬泽藻 陨 酶渊砸晕葬泽藻 枣则藻藻冤消
化牡丹赵粉的萼片尧花瓣尧雄蕊和心皮等器官的总
砸晕粤后袁各取 源园园灶早 为模板按照试剂盒说明进行反转
录遥 根据荧光定量引物设计原则袁设计引物 孕怨 渊缘忆鄄
栽栽郧粤栽郧悦栽悦粤悦粤郧栽郧郧郧郧栽粤鄄猿忆冤 和 孕员园 渊 缘忆鄄
粤粤悦郧栽栽栽粤郧郧悦悦郧悦栽栽栽悦栽栽鄄猿忆冤进行扩增袁使扩增片
段包括编码区末端和 猿忆非编码区袁保证片段的特异性
和可靠性遥 选择牡丹微管蛋白 茁鄄栽怎遭造蚤灶渊耘云远园愿怨源圆冤
为 内 标袁 设 计 引 物 孕员员 渊 缘忆鄄
栽郧粤郧悦粤悦悦粤粤粤郧粤粤郧栽郧郧粤悦郧粤粤悦鄄猿忆冤 和 孕员圆 渊 缘忆鄄
悦粤悦粤悦郧悦悦栽郧粤粤悦粤栽悦栽悦悦栽郧粤粤鄄猿忆冤 进行荧光定量
孕悦砸咱圆苑暂 遥 反应在 粤月陨苑缘园园 实时定量 孕悦砸仪上进行袁方
法参照叶美国应用生物系统公司 苑猿园园 辕 苑缘园园 实时定量
孕悦砸仪相对定量实验入门指南曳和荧光定量试剂盒
杂再月砸 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼栽酝 砸栽鄄孕悦砸 运蚤贼渊栽葬运葬砸葬冤说明书遥 反
转录的反应体系为院总 砸晕粤 圆滋造袁 缘 伊 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼栽酝
月怎枣枣藻则 源滋造袁孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼栽酝砸栽 耘灶扎赠皂藻 酝蚤曾 陨 员滋造袁砸葬灶凿燥皂
责则蚤皂藻则渊员园园滋皂燥造 辕 蕴冤和 韵造蚤早燥 凿栽 责则蚤皂藻则渊缘园滋皂燥造 辕 蕴冤各
员滋造袁加水渊砸晕葬泽藻 枣则藻藻冤补足 圆园滋造遥 荧光定量 孕悦砸扩增
的反应体系为院糟阅晕粤 模板 圆滋造袁圆 伊 杂再月砸 孕则藻皂蚤曾 耘曾
栽葬择栽酝 员园滋造袁特异引物 渊员园滋皂燥造 辕 蕴冤 园郾 源滋造袁缘园 伊 砸韵载
砸藻枣藻则藻灶糟藻 阅赠藻 陨陨 园郾 源滋造袁用水补足 圆园滋造遥 采用两步法
标准程序院怨缘益 预变性 猿园泽袁怨缘益 变性 缘泽袁远园益 复性
猿源泽袁共 源缘 个循环遥 每个试验设 猿 次重复袁利用
粤月陨苑缘园园孕悦砸 仪 杂藻择怎藻灶糟藻 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 泽燥枣贼憎葬则藻 软 件
渊圆 原 驻驻悦贼法冤进行数据分析遥
员郾 圆郾 愿摇 测序摇 所有 孕悦砸产物凝胶电泳后回收目的片
段袁与 责酝阅鄄员怨栽杂蚤皂责造藻灾藻糟贼燥则 连接并转化 栽韵孕员园 感受
态细胞袁重组质粒鉴定后委托北京华大基因公司进行
测序遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 基因全长的克隆
以牡丹赵粉心皮 砸晕粤逆转录的 糟阅晕粤为模板袁以
特异引物 孕员 和 孕圆 为引物袁进行中间片段的 孕悦砸 扩
增袁经测序其核苷酸序列为 员源远遭责渊图 员鄄粤冤遥 根据该
保守区片段袁设计特异引物 孕猿 和 孕源 分别进行 猿忆与 缘忆
端的扩增袁测序结果表明 猿忆与 缘忆端分别为 怨圆缘 和
远缘怨遭责渊图 员鄄月 和图 员鄄悦冤遥 序列拼接后袁设计 孕缘 和 孕远
与 孕苑 和 孕愿 两对引物进行 韵砸云验证袁经测序其核苷酸
序列大小均为 愿怨员遭责渊图 员鄄阅冤遥
图 员摇 孕泽酝粤阅杂缘 基因扩增电泳图
云蚤早援 员摇 粤早则燥泽藻 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 葬灶葬造赠泽蚤泽
燥枣 孕泽酝粤阅杂缘 早藻灶藻 枣则葬早皂藻灶贼泽
粤院中间片段扩增曰月院猿忆 砸粤悦耘扩增曰悦院缘忆 砸粤悦耘 扩增曰阅院开放读
码框扩增遥 酝院 阅蕴圆园园园 酝葬则噪藻则曰员院中间片段曰 圆院猿忆 砸粤悦耘 产物曰
猿院缘忆 砸粤悦耘产物曰 源院孕缘 和 孕远 扩增产物曰缘院孕苑 和 孕愿 扩增产物
粤院 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 枣则葬早皂藻灶贼曰 月院 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 猿忆 砸粤悦耘曰 悦院
葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 缘忆 砸粤悦耘曰 阅院 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 韵砸云援 酝院 阅蕴圆园园园
酝葬则噪藻则曰员院葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼 燥枣 枣则葬早皂藻灶贼曰圆院葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼
燥枣 猿忆 砸粤悦耘曰猿院葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼 燥枣 缘忆 砸粤悦耘曰源院 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
责则燥凿怎糟贼 燥枣 孕缘 葬灶凿 孕远曰缘院葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼 燥枣 孕苑 葬灶凿 孕愿
对牡丹 杂耘孕 基因的全长 糟阅晕粤 序列进行分析表
明袁该基因全长 员圆圆圆遭责袁包含 员 个 苑猿圆遭责编码 圆源猿 个氨
基酸的开放阅读框和 员 个 责燥造赠渊粤冤结构袁 猿忆哉栽砸 和 缘忆
哉栽砸 分 别 为 猿园圆 和 员怨园遭责遥 郧藻灶月葬灶噪 登 录 号 为
匀匝源源怨缘远怨袁命名为 孕泽酝粤阅杂缘遥 孕泽酝粤阅杂缘 基因编码的
蛋白质具有典型的 酝粤阅杂区和 运区袁而且具有 杂耘孕 特
征序列渊图 圆冤袁属于 酝粤阅杂鄄遭燥曾家族 杂耘孕亚家族咱员缘暂 遥
圆郾 圆摇 基因全长的生物信息学分析
预测 孕泽酝粤阅杂缘 基因编码蛋白的分子量是 圆苑郾 远缘
噪阅袁理论等电点为 愿郾 怨苑遥 其编码蛋白的疏水性分析表
明袁疏水性最大值为 圆郾 员圆圆袁最小值为鄄圆郾 远员袁总体看来
大部分区域为亲水区渊图 猿鄄月冤遥 二级结构预测表明袁
孕泽酝粤阅杂缘 蛋白由 员员怨 个 倩螺旋袁员远 个延伸链和 员园愿 个
随意卷曲构成袁它们分别占到 源愿郾 怨苑豫 尧远郾 缘愿豫 和
源源郾 源源豫 渊图 猿鄄悦冤遥 三级结构预测袁其模型相似度与
员灶远躁粤 模型达到 源怨郾 猿圆豫 渊图 猿鄄阅冤遥
圆郾 猿摇 同源性比较与系统进化分析
牡丹 孕泽酝粤阅杂缘 氨基酸序列提交 晕悦月陨 在线比对
渊澡贼贼责院椅遭造葬泽贼援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕 月造葬泽贼援 糟早蚤冤袁选择与其
员源怨
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
图 圆摇 孕泽酝粤阅杂缘 基因 糟阅晕粤 全长及推导的氨基酸序列
云蚤早援 圆摇 晕怎糟造藻燥贼蚤凿藻 葬灶凿 凿藻凿怎糟藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 贼澡藻 糟燥皂责造藻贼藻 糟阅晕粤 燥枣 孕泽酝粤阅杂缘
下划线部分为 酝粤阅杂区曰带箭头下划线部分为 运区曰方框部分为 杂耘孕特征序列
酝粤阅杂鄄凿燥皂葬蚤灶 葬则藻 怎灶凿藻则造蚤灶藻凿曰 运 则藻早蚤燥灶 葬则藻 怎灶凿藻则造蚤灶藻凿 憎蚤贼澡 葬则则燥憎曰
贼澡藻 杂耘孕 皂燥贼蚤枣 渊云再匀孕蕴阅悦耘孕栽蕴匝陨郧杂再冤 葬灶凿 渊孕杂灾晕晕再酝郧郧宰蕴孕冤 葬则藻 枣则葬皂藻凿
图 猿摇 孕泽酝粤阅杂缘 基因的生物信息学分析
云蚤早援 猿摇 月蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟泽 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 孕泽酝粤阅杂缘 早藻灶藻
粤院疏水性分析曰月院二级结构预测曰悦院结构域分析曰阅院三级结构
预测
粤院澡赠凿则燥责澡燥遭蚤糟蚤贼赠 葬灶葬造赠泽蚤泽曰 月院 泽藻糟燥灶凿葬则赠 泽贼则怎糟贼怎则藻 责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶曰 悦院
糟燥灶泽藻则增藻凿 凿燥皂葬蚤灶 葬灶葬造赠泽蚤泽院 阅院 贼澡则藻藻鄄凿蚤皂藻灶泽蚤燥灶葬造 泽贼则怎糟贼怎则藻
责则藻凿蚤糟贼蚤燥灶
同源性较高的 员猿 个物种的 杂耘孕 氨基酸袁分别为毛白
杨渊孕燥责怎造怎泽 贼燥皂藻灶贼燥泽葬 粤月耘园圆圆员圆郾 员冤尧毛果杨渊孕燥责怎造怎泽
贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬 载孕 赃 园园圆猿园猿苑愿猿郾 员 冤尧 白 梨 渊 孕赠则怎泽
遭则藻贼泽糟澡灶藻蚤凿藻则蚤 月粤云源源员园员郾 员 冤尧草莓 渊 云则葬早葬则蚤葬 糟澡蚤造燥藻灶泽蚤泽
粤粤韵源怨猿愿园郾 员冤尧苹果渊酝葬造怎泽 凿燥皂藻泽贼蚤糟葬 粤阅蕴猿远苑源园郾 员冤尧
太行花渊栽葬蚤澡葬灶早蚤葬 则怎责藻泽贼则蚤泽 粤月阅员怨苑员怨援 员冤尧欧洲颤杨
渊孕燥责怎造怎泽 贼则藻皂怎造燥蚤凿藻泽 粤粤韵源怨愿员员郾 员 冤尧 百脉根 渊 蕴燥贼怎泽
躁葬责燥灶蚤糟怎泽 粤粤载员猿圆怨愿郾 员 冤尧 葡 萄 渊 灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬
载孕园园圆圆苑缘苑园缘郾 员 冤尧 林 生 烟 草 渊 晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 泽赠造增藻泽贼则蚤泽
粤粤阅猿怨园猿源郾 员 冤尧 领 春 木 渊 耘怎责贼藻造藻葬 责造藻蚤燥泽责藻则皂葬
粤阅悦苑怨苑园远郾 员冤尧番红花渊悦则燥糟怎泽 泽葬贼蚤增怎泽 粤悦月远怨缘园怨郾 员冤尧
油棕渊耘造葬藻蚤泽 早怎蚤灶藻藻灶泽蚤泽 粤粤匝园猿圆圆源郾 员冤遥 使用 阅晕粤皂葬灶
软件将这些序列进行比对发现袁不同植物的氨基酸序
列同源性较高袁其中牡丹与葡萄的同源性最高袁达到
愿猿豫 遥
在多重比对的基础上袁为更好地了解 孕泽酝粤阅杂缘 与
其他植物 杂耘孕 之间的进化关系袁用上述 员猿 个氨基酸
序列构建系统进化树袁结果表明渊图 源冤院孕泽酝粤阅杂缘 的
进化基本符合 粤孕郧 分类系统袁呈现出一定的种属特
性遥 例如袁杨柳科的毛白杨 孕燥责怎造怎泽 贼燥皂藻灶贼燥泽葬尧欧洲颤
杨 孕燥责怎造怎泽 贼则藻皂怎造燥凿蚤藻泽 和毛果杨 孕燥责怎造怎泽 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬 聚
为一束袁蔷薇科的苹果 酝葬造怎泽 凿燥皂藻泽贼蚤糟葬 和白梨 孕赠则怎泽
遭则藻贼泽糟澡灶藻蚤凿藻则蚤聚为一束袁草莓 云则葬早葬则蚤葬 糟澡蚤造燥藻灶泽蚤泽 和太行
花 栽葬蚤澡葬灶早蚤葬 则怎责藻泽贼则蚤泽聚为一束袁然后它们四者再聚为
一束遥
圆郾 源摇 正义和反义表达载体酶切鉴定
圆源怨
摇 缘 期 牡丹 孕泽酝粤阅杂缘 基因的克隆尧表达及载体构建
图 源摇 孕泽酝粤阅杂缘 与其他物种氨基酸序
列的系统进化树分析
云蚤早援 源摇 粤 责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 燥枣 贼澡藻 孕泽酝粤阅杂缘 蚤灶
贼则藻藻 责藻燥灶赠 葬灶凿 杂耘孕 责则燥贼藻蚤灶泽 枣则燥皂 燥贼澡藻则 泽责藻糟蚤藻泽
如图 缘 所示袁把图 缘鄄粤鄄员 切下的大片段分别与图
缘鄄月鄄圆 和图 缘鄄月鄄猿 中的小片段相连袁构建成新的正义表
达载体 责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘 渊 杂冤 和反义植物表达载体
责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘渊粤冤袁酶切鉴定 渊图 缘鄄悦鄄源 和 缘鄄悦鄄缘冤
后袁经过测序检测序列正确袁说明成功构建正反义表达
载体遥
圆郾 缘摇 相对荧光定量 孕悦砸表达分析
以牡丹 茁鄄栽怎遭怎造蚤灶基因为内参袁采用荧光定量 孕悦砸
的方法对牡丹不同花器官中 孕泽酝粤阅杂缘 的表达进行检
测袁结果表明渊图 远冤袁孕泽酝粤阅杂缘 的表达量由高到低依次
为花瓣尧心皮尧萼片尧雄蕊遥 从相对表达量上来看袁花瓣
中的表达水平为雄蕊中的 源郾 员 倍袁心皮和萼片中的表
达量分别为雄蕊中的 猿郾 源 倍和 圆郾 缘 倍遥
猿摇 讨论
本研究通过同源克隆的方法袁运用 砸栽鄄孕悦砸 和
砸粤悦耘技术袁成功克隆获得牡丹的 孕杂酝粤阅杂缘 基因遥 该
基因具有保守的 酝粤阅杂 区袁较为保守的 陨 区以及 杂耘孕
特征结构域袁属于 酝粤阅杂家族 杂耘孕 亚家族遥 同源性比
较和系统进化分析表明袁牡丹与葡萄同源性最高袁杂耘孕
的进化具有一定的种属特性遥
加州罂粟渊耘泽糟澡泽糟澡燥造扎蚤葬 糟葬造蚤枣燥则灶蚤糟葬冤中 耘杂糟葬粤郧蕴怨 基
因在主要集中在花瓣尧雄蕊和心皮原基中袁并且在花的
发育过程中一直表达遥 广玉兰渊酝葬早灶燥造蚤葬 早则葬灶凿蚤枣造燥则葬冤
中 酝葬援 早则援 粤郧蕴怨 基因在所有 源 轮花器官中都表达曰酝葬援
早则援 粤郧蕴圆 除了在花器官中表达外袁还在苞片中表
达咱圆愿暂 遥 刘涛等从板栗渊悦葬泽贼葬灶藻葬 皂燥造造蚤泽泽蚤皂葬冤中分离出
图 缘摇 牡丹 孕泽酝粤阅杂缘 基因表达载体的酶切鉴定
云蚤早援 缘摇 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则泽 燥枣 孕泽酝粤阅杂缘 蚤灶 贼则藻藻 责藻燥灶赠
粤院 责月陨员圆员 载 体 酶 切曰 月院 责酝阅鄄员怨孕泽酝粤阅杂缘 渊 杂 冤 和 责酝阅鄄
员怨孕泽酝粤阅杂缘渊粤冤载体酶切电泳图 曰悦院责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘 渊 杂冤和
责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘渊 粤冤 酶切电泳图遥 酝院 阅蕴圆园园园 酝葬则噪藻则 曰 员院
责月陨员圆员 载体酶切电泳图曰圆院责酝阅鄄员怨孕泽酝粤阅杂缘渊杂冤酶切电泳图 曰
猿院责酝阅鄄员怨孕泽酝粤阅杂缘渊粤冤酶切电泳图曰源院责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘渊 杂冤酶
切电泳图曰 缘院责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘渊粤冤酶切电泳图
粤院贼藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 责月陨员圆员曰 月院 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶
藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 责酝阅鄄员怨孕泽酝粤阅杂缘 渊 杂 冤 葬灶凿 责酝阅鄄
员怨孕泽酝粤阅杂缘 渊 粤 冤曰 悦院 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣
责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘渊杂冤 葬灶凿 责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘渊粤冤援 酝院阅晕粤 皂葬则噪藻则
阅蕴圆园园园曰员院 则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 责月陨员圆员曰 圆院
则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 责酝阅鄄员怨孕泽酝粤阅杂缘 渊 杂冤曰猿院
则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 责酝阅鄄员怨孕泽酝粤阅杂缘渊粤冤曰源院
则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘 渊 杂冤曰 缘院
则藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 藻灶扎赠皂藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 责月陨员圆员孕泽酝粤阅杂缘渊粤冤
图 远摇 牡丹不同花器官中 孕泽酝粤阅杂缘 基因的相对表达量
云蚤早援 远摇 砸藻造葬贼蚤增藻 择怎葬灶贼蚤贼赠 燥枣 孕泽酝粤阅杂缘
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 枣造燥则葬造 燥则早葬灶泽
的花特异表达基因 悦皂酝粤阅杂猿 在板栗的花和幼果中表
达丰度高咱员远暂 遥 雌花型柿渊阅蚤燥泽责赠则燥泽 噪葬噪蚤冤阅噪酝粤阅杂员 基
因在品种阳丰花的萼片尧花瓣尧子房和雄蕊中均有表
达咱员苑暂 遥 山红艳研究表明院三叶木通 粤噪贼杂耘孕猿 除了在雄
蕊和心皮中表达外袁也在发育的萼片中表达咱圆怨暂 遥
猿源怨
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员员袁圆缘渊缘冤院园怨猿怨 耀 园怨源源
传统的半定量 孕悦砸技术袁大都通过改变模板的量
或者调节循环次数袁通过内参的变化袁肉眼判断各个模
板的表达情况袁具有一定的局限性遥 本试验采用的相
对荧光定量技术袁比传统的半定量 孕悦砸 技术更科学袁
也更准确遥 本研究发现袁牡丹 孕泽酝粤阅杂缘 基因在 源 轮花
器官中均有表达袁与前人研究基本一致袁说明 杂耘孕 基
因参与牡丹 源 轮花器官的发育袁也符合 粤月悦阅耘 模型遥
至于牡丹中是否含有 杂耘孕家族其他成员袁它们的作用
是否冗余袁尚需要试验验证遥
本研究已成功构建正义和反义植物表达载体袁此
后将通过转基因技术袁进一步探讨 孕泽酝粤阅杂缘 在调控牡
丹花发育以及开花时间过程中的作用袁为创造出更多
观赏价值更高的早花品种提供基础遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 曾摇 英袁胡金勇袁李志坚援 植物 酝粤阅杂 盒基因与花器官的进化发
育咱允暂 援植物生理学通讯袁 圆园园员袁猿苑渊源冤院圆愿员 原 圆愿远
咱 圆 暂摇 张则婷袁李学宝援 酝粤阅杂鄄遭燥曾基因在植物发育中的功能咱 允暂 援 植物
生理学通讯袁 圆园园苑袁 源猿渊圆冤院圆员愿 原 圆圆圆
咱 猿 暂 摇 崔荣峰袁孟摇 征援花同源异型 酝粤阅杂鄄遭燥曾 基因在被子植物中的功
能保守性和多样性咱允暂 援植物学通报袁 圆园园苑袁 圆源渊员冤院猿员 原 源员
咱 源 暂 摇 栽澡藻蚤泽泽藻灶 郧袁 杂葬藻凿造藻则 匀援 云造燥则葬造 择怎葬则贼藻贼泽 咱 允暂 援 晕葬贼怎则藻袁 圆园园员袁 源园怨院
源远怨 原 源苑员
咱 缘 暂 摇 栽澡藻蚤泽泽藻灶 郧援 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 枣造燥则葬造 燥则早葬灶 蚤凿藻灶贼蚤贼赠院 泽贼燥则蚤藻泽 枣则燥皂 贼澡藻
酝粤阅杂 澡燥怎泽藻 咱允暂 援 悦怎则则 韵责蚤灶 孕造葬灶贼 月蚤燥造袁 圆园园员袁 源院 苑缘 原 愿缘
咱 远 暂摇 李贵生袁孟摇 征袁孔宏智袁陈之端袁路安民援 粤月悦 模型与花进化研
究咱允暂 援科学通报袁圆园园猿袁 源愿渊圆猿冤院圆源员缘 原 圆源圆员
咱 苑 暂摇 刘建武袁孙成华袁刘摇 宁援花器官决定的 粤月悦 模型和四因子模型
咱允暂 援植物学通报袁圆园园源袁 圆员渊猿冤院猿源远 原 猿缘员
咱 愿 暂 摇 悦燥藻灶 耘 杂袁 酝藻赠藻则燥憎蚤贼扎 耘 酝援 栽澡藻 憎葬则 燥枣 贼澡藻 憎澡燥则造泽院 早藻灶藻贼蚤糟
蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽 糟燥灶贼则燥造造蚤灶早 枣造燥憎藻则 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 咱 允 暂 援 晕葬贼怎则藻袁 员怨怨员袁
猿缘猿院猿员 原 猿苑
咱 怨 暂 摇 栽澡藻蚤泽泽藻灶 郧袁 杂葬藻凿造藻则 匀援 云造燥则葬造 择怎葬则贼藻贼泽 咱 允暂 援 晕葬贼怎则藻袁 圆园园员袁 源园怨院
源远怨 原 源苑员
咱员园暂摇 栽澡藻蚤泽泽藻灶 郧援 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 枣造燥则葬造 燥则早葬灶 蚤凿藻灶贼蚤贼赠院 泽贼燥则蚤藻泽 枣则燥皂 贼澡藻
酝粤阅杂 澡燥怎泽藻 咱允暂 援 悦怎则则 韵责蚤灶 孕造葬灶贼 月蚤燥造袁 圆园园员袁 源院 苑缘 原 愿缘
咱员员暂 摇 阅蚤贼贼葬 郧袁 孕蚤灶赠燥责蚤糟澡 粤袁 砸燥遭造藻泽 孕袁 孕藻造葬扎 杂袁 再葬灶燥枣泽噪赠 酝 云援 栽澡藻
杂耘孕源 早藻灶藻 燥枣 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 枣怎灶糟贼蚤燥灶泽 蚤灶 枣造燥则葬造 燥则早葬灶 葬灶凿
皂藻则蚤泽贼藻皂 蚤凿藻灶贼蚤贼赠 咱允暂 援 悦怎则则 月蚤燥造袁 圆园园源袁 员源院 员怨猿缘 原 员怨源园
咱员圆暂摇 匀燥灶皂葬 栽袁 郧燥贼燥 运援 悦燥皂责造藻曾藻泽 燥枣 酝粤阅杂鄄遭燥曾 责则燥贼藻蚤灶泽 葬则藻 泽怎枣枣蚤糟蚤藻灶贼
贼燥 糟燥灶增藻则贼 造藻葬增藻泽 蚤灶贼燥 枣造燥则葬造 燥则早葬灶泽 咱允暂 援 晕葬贼怎则藻袁 圆园园员袁 源园怨院 缘圆缘 原
缘圆怨
咱员猿暂 摇 匀怎葬灶早 匀袁 栽怎凿燥则 酝袁 宰藻蚤泽泽 悦 粤袁 酝葬 匀援 栽澡藻 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 酝粤阅杂鄄遭燥曾
早藻灶藻 粤郧蕴猿 蚤泽 憎蚤凿藻造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 葬灶凿 藻灶糟燥凿藻泽 葬 泽藻择怎藻灶糟藻鄄泽责藻糟蚤枣蚤糟
阅晕粤鄄遭蚤灶凿蚤灶早 责则燥贼藻蚤灶 咱允暂 援 孕造葬灶贼 酝燥造 月蚤燥造袁 员怨怨缘袁 圆愿院 缘源怨 原 缘远苑
咱员源暂摇 孕藻造葬扎 杂袁 阅蚤贼贼葬 郧 杂袁 月葬怎皂葬灶灶 耘袁 宰蚤泽皂葬灶 耘袁 再葬灶燥枣泽噪赠 酝 云援 月 葬灶凿
悦 枣造燥则葬造 燥则早葬灶 蚤凿藻灶贼蚤贼赠 枣怎灶糟贼蚤燥灶泽 则藻择怎蚤则藻 杂耘孕粤蕴蕴粤栽粤 酝粤阅杂鄄遭燥曾
早藻灶藻泽 咱允暂 援 晕葬贼怎则藻袁 圆园园园袁 源园缘院 圆园园 原 圆园猿
咱员缘暂摇 在葬澡灶 蕴 酝袁 运燥灶早 匀袁 蕴藻藻遭藻灶泽鄄酝葬糟噪 允 匀袁 运蚤皂 杂袁 杂燥造贼蚤泽 孕 杂袁
蕴葬灶凿澡藻则则 蕴 蕴袁 杂燥造贼蚤泽 阅 耘袁 阅藻责葬皂责澡蚤造蚤泽 悦 宰袁 酝葬 匀援 栽澡藻 藻增燥造怎贼蚤燥灶
燥枣 贼澡藻 杂耘孕粤蕴蕴粤栽粤 泽怎遭枣葬皂蚤造赠 燥枣 酝粤阅杂鄄遭燥曾 早藻灶藻泽院 葬 责则藻葬灶早蚤燥泽责藻则皂
燥则蚤早蚤灶 憎蚤贼澡 皂怎造贼蚤责造藻 凿怎责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽 贼澡则燥怎早澡燥怎贼 葬灶早蚤燥泽责藻则皂 澡蚤泽贼燥则赠 咱允暂 援
郧藻灶藻贼蚤糟泽袁 圆园园缘袁 员远怨院 圆圆园怨 原 圆圆圆猿
咱员远暂摇 刘摇 涛袁李晓贤袁徐平珍袁周浙昆袁胡运乾援 板栗 酝粤阅杂鄄遭燥曾 蛋白
基因渊悦皂酝粤阅杂冤的克隆和表达分析咱 允暂 援 云南植物研究袁 圆园园远袁
圆愿渊猿冤院圆怨缘 原 圆怨怨
咱员苑暂摇 丁摇 燕袁韩振海袁许雪峰袁李天忠援 柿花发育相关的 酝粤阅杂鄄遭燥曾基
因克隆与表达咱允暂 援 园艺学报袁 圆园园苑袁 猿源渊员冤院猿怨 原 源圆
咱员愿暂摇 孕藻造葬扎 杂袁 郧怎泽贼葬枣泽燥灶鄄月则燥憎灶 悦袁 运燥澡葬造皂蚤 杂 耘袁 悦则燥泽遭赠 宰 蕴袁 再葬灶燥枣泽噪赠
酝 云援 粤孕耘栽粤蕴粤员 葬灶凿 杂耘孕粤蕴蕴粤栽粤猿 蚤灶贼藻则葬糟贼 贼燥 责则燥皂燥贼藻 枣造燥憎藻则
凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 咱允暂 援 孕造葬灶贼 允袁 圆园园员袁 圆远院 猿愿缘 原 猿怨源
咱员愿暂 摇 杂怎灶早 杂 运袁 酝燥燥灶 再 匀袁 悦澡怎灶早 允 耘袁 蕴藻藻 杂 再袁 孕葬则噪 匀 郧援
悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 酝粤阅杂 遭燥曾 早藻灶藻泽 枣则燥皂 澡燥贼 责藻责责藻则咱允暂 援 酝燥造 悦藻造造泽袁
圆园园员袁 员员渊猿冤院猿缘圆 原 猿缘怨
咱圆园暂摇 允葬灶早 杂袁 粤灶 运袁 蕴藻藻 杂袁 粤灶 郧援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼燥遭葬糟糟燥 酝粤阅杂鄄遭燥曾
早藻灶藻泽 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 枣造燥则葬造 蚤灶蚤贼蚤葬贼蚤燥灶 咱允暂 援 孕造葬灶贼 悦藻造造 孕澡赠泽蚤燥造袁 圆园园圆袁 源猿
渊员冤院 圆猿园 原 圆猿愿
咱圆员暂摇 徐摇 勇援 桃花发育相关 酝粤阅杂鄄遭燥曾 基因研究咱阅暂援 北京院首都师
范大学博士论文袁 圆园园苑
咱圆圆暂摇 王莲英援 中国牡丹品种图志 咱酝暂援 北京院中国林业出版社袁
员怨怨苑院圆猿 原 圆缘
咱圆猿暂摇 袁摇 涛袁赵孝之袁李丰刚袁赵摇 卫援牡丹咱酝暂援北京院中国林业出版
社袁 圆园园源院员圆苑 原 员猿圆
咱圆源暂摇 魏摇 跃袁王永平袁王全智袁史红林袁薄凯亮袁陈劲枫援甜瓜属野生种
铝胁迫基因 悦澡粤陨 的克隆及序列分析咱 允暂 援 核农学报袁圆园员园袁圆源
渊远冤院员圆愿远 原 员圆怨园
咱圆缘暂摇 庄摇 静袁在澡葬灶早 允蚤葬灶袁熊爱生袁周熙荣袁孙超才援甘蓝型油菜沪油 员缘
中 月灶葬砸粤灾鄄圆鄄匀再员缘 转录因子的克隆及表达分析咱 允暂 援 核农学
报袁圆园员园袁 圆源渊缘冤院怨源员 原 怨源苑
咱圆远暂摇 方结红袁张明周袁刘摇 军袁王雪艳袁孙传信援 水稻 杂哉杂陨月粤圆鄄造蚤噪藻 基
因的克隆和分析咱允暂 援 核农学报袁圆园员园袁圆源渊猿冤院源源圆 原 源源远
咱圆苑暂摇 周摇 琳袁王摇 雁袁彭镇华援牡丹查耳酮合酶基因 孕泽鄄悦匀杂员 的克隆
及其组织特异性表达咱允暂 援园艺学报袁 圆园员园袁 猿苑渊愿冤院员圆怨缘 原 员猿园圆
咱圆愿暂摇 运蚤皂 杂袁 运燥澡 允袁 酝葬 匀袁 匀怎 再袁 耘灶凿则藻泽泽 孕 运袁 匀葬怎泽藻则 月 粤袁 月怎扎早燥 酝袁
杂燥造贼蚤泽 孕 杂袁 杂燥造贼蚤泽 阅 耘援 杂藻择怎藻灶糟藻 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 泽贼怎凿蚤藻泽 燥枣 粤鄄袁 月鄄袁
葬灶凿 耘鄄糟造葬泽泽 酝粤阅杂鄄遭燥曾 澡燥皂燥造燥早怎藻泽 蚤灶 耘怎责燥皂葬贼蚤葬 渊耘怎责燥皂葬贼蚤葬糟藻葬藻冤院
泽怎责责燥则贼 枣燥则 贼澡藻 遭则葬糟贼藻葬贼藻 燥则蚤早蚤灶 燥枣 贼澡藻 糟葬造赠责贼则葬咱 允暂 援 陨灶贼 允 孕造葬灶贼 杂糟蚤袁
圆园园缘袁 员远远院 员愿缘 原 员怨愿
咱圆怨暂摇 山红艳援 三叶木通花发育相关基因的结构尧功能和进化研究
咱阅暂援北京院中国科学院博士论文袁 圆园园远
渊责任编辑摇 王媛媛冤
源源怨