全 文 ：核 农 学 报　 ２０１５，２９（１）：０２０２ ～ ０２０７
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
收稿日期：２０１４⁃０５⁃１３　 接受日期：２０１４⁃０８⁃０９
基金项目：山西省科技攻关项目“麦田除草剂苯磺隆残留危害的综合治理技术” （２０１１０３１１０２２），山西农业大学博士基金“除草剂残留的安全性
评价及小麦对其响应基因性差异的研究”（４１２５５９），横向委托项目“苯磺隆残留风险评价”（２０１０ＨＸ０２）
作者简介：赵永斌，男，主要从事化学调控与化学除草。 Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｚｈａｏｙｏｎｇｂｉｎ９９９９＠ １６３． ｃｏｍ
通讯作者：杜慧玲，女，教授，主要从事作物化学调控研究。 Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｄｕｈｕｉｌｉｎｇ６６＠ １６３． ｃｏｍ
文章编号：１０００⁃８５５１（２０１５）０１⁃０２０２⁃０６
苯磺隆降解菌的分离鉴定和特性研究
赵永斌１ 　 霍德敏１ 　 张天宝２ 　 杜慧玲２
（ １ 山西农业大学农学院，山西 太谷　 ０３０８０１；２ 山西农业大学文理学院，山西 太谷　 ０３０８０１）
摘　 要：为解决苯磺隆残留问题，本试验利用富集驯化培养分离法，从连续多年使用苯磺隆的田间土壤
中，分离筛出一株能以苯磺隆为唯一碳源、氮源生长的降解菌。 通过形态学、生理生化测定及 １６Ｓ ｒＤＮＡ
序列系统发育分析，鉴定该菌株为产碱杆菌。 抗生素敏感试验和底物敏感试验表明：降解菌株 ＢＨＬ 对
试验浓度范围内的所有供试抗生素都表现为敏感，其中对硫酸阿米卡星最为敏感；菌株 ＢＨＬ 可以很好
的利用试验所用磺酰脲类除草剂和有机磷农药，同时还可以利用部分芳香族化合物。 本研究为功能农
药残留降解菌的研究提供了理论基础。
关键词：苯磺隆；降解菌；富集分离；鉴定
ＤＯＩ：１０􀆰 １１８６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １００⁃８５５１􀆰 ２０１５􀆰 ０１． ０２０２
　 　 随着科技农业的发展，农药在田间的大量使用给
人们带来效益的同时，农药污染的环境问题也日益严
重［１ － ３］。 土壤中农药的降解途径，一般分为物理、化学
与生物过程，微生物降解与化学水解是主要降解方
式［４ － ５］。 近年来，国内外研究者开展生物强化修复农
药的研究，通过富集培养、分离筛选等技术已经筛选出
多种能够降解农药的微生物［６ － ８］。 应用微生物进行生
物修复已成为环境修复的一个主要研究方向［９］。
２０１１ 年田方方［２１］做过苯磺隆、使它隆降解菌的
研究报道，其他对苯磺隆降解菌的研究报道还较
少［１０］。 因此，本研究对连续多年使用苯磺隆的麦田土
壤进行苯磺隆降解菌的分离鉴定。 通过降解菌的驯化
培养，筛选出能够高效降解苯磺隆的微生物，旨在解决
苯磺隆残留药害问题，为该除草剂的生物治理提供有
效途径［１１ － １３］。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 供试土壤和药品
土样为山西农业大学农作站连续多年使用苯磺隆
的麦田土壤。 苯磺隆原药（纯度 ９５％ ）由中国沈阳化
工研究所提供。
１􀆰 ２　 ＢＨＬ菌株的分离和鉴定
１􀆰 ２􀆰 １　 降解菌的分离、纯化及保存　 把 １ ｇ 土样接种
于 ５０ ｍＬ的灭菌三角瓶中，将苯磺隆溶于少量乙腈，并
加入 ２５ ｍＬ 已灭菌无机盐液体培养基，在 ２８℃条件
下，黑暗培养 １ 周后，在新鲜培养基转接吸取 １ ｍＬ 培
养液，连续驯化、富集［１４］。 转接 ７ 次后，用接种环蘸取
少许富集培养液，划线分离。 选择不同形态特征的菌
落，重新转接至含苯磺隆 １００ ｍｇ·Ｌ － １的无机盐液体培
养基中，转接多次直至获得纯种苯磺隆降解菌，命名为
ＢＨＬ，并保存在含苯磺隆的纯化培养基上。
１􀆰 ２􀆰 ２　 形态特征观察　 将 ＢＨＬ在 ＮＡ（琼脂营养培养
基）平板上划线，２８℃下培养并观察。 观察菌落的形
状、颜色、光泽、质地、边缘情况、表面状况（是否隆起
或凹陷；湿润、粘稠或干燥）、以及与培养基结合程度
等。 采用悬滴法进行细菌运动性观察，革兰氏染色，电
镜观察菌体大小和鞭毛着生情况。
１􀆰 ２􀆰 ３　 生理生化测定 　 ＢＨＬ 菌株的接触酶反应，厌
氧性，Ｃ、Ｎ 源利用，水解性以及耐盐性等生理生化指
标的测定参照东秀珠等［２７］编著的《常见细菌系统鉴定
手册》，每处理 ３ 次重复。
１􀆰 ２􀆰 ４　 １６ＳｒＤＮＡ序列分析　 细菌基因组 ＤＮＡ的提取
参照张桂山［２５］和林万明［２６］的方法，以 ＸＪＰｒｉｍｅｒ１：５′⁃Ａ
２０２
　 １ 期 苯磺隆降解菌的分离鉴定和特性研究
ＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ⁃３′ 和 ＸＪＰｒｉｍｅｒ⁃２：５′⁃ ＡＣＧＧ
ＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴ⁃３′ 为引物，以细菌基因组 ＤＮＡ
为模板建立 ＰＣＲ 反应体系，ＰＣＲ 反应总体积为 ５０
μＬ，其中含 ＤＮＡ 模板 ２􀆰 ５ ｎｇ，正反引物（１０ μＭ）各
１􀆰 ０ μＬ，ｄＮＴＰ（２􀆰 ５ ｍＭ）４􀆰 ０ μＬ，１０ × Ｂｕｆｆｅｒ（含 Ｍｇ２ ＋ ）
５􀆰 ０ μＬ，５ Ｕ·μＬ － １ Ｔａｑ 酶 ０􀆰 ２５ μＬ，加 ｄｄＨ２Ｏ使终体积
为 ５０ μＬ。 扩增程序为 ９５℃ 预变性 ４ ｍｉｎ，９４℃ 变性
１ ｍｉｎ，５５℃ 退火 １ ｍｉｎ，７２℃ 延伸 １ ｍｉｎ ３０ ｓ，扩增 ３０
个循环后 ７２℃延伸 ７ ｍｉｎ，４℃保存，０􀆰 ８％琼脂糖凝胶
电泳检测扩增结果。 ＰＣＲ 测序由北京三博远志生物
技术有限责任公司完成。 序列校正后与 ＧｅｎＢａｎｋ 数
据库中相关序列进行同源性比对，并用 ＭＥＧＡ５􀆰 ０ 软
件构建系统发育树。
表 １　 ＢＨＬ菌株部分形态学特征
Ｔａｂｌｅ １　 Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｓｔｒａｉｎｓ ＢＨＬ
菌株
Ｓｔｒａｉｎｓ
颜色
Ｃｏｌｏｕｒ
形状
Ｓｈａｐｅ
边缘
Ｅｄｇｅ
表面
Ｓｕｒｆａｃｅ
透明度
Ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｃ
运动性
Ｍｏｖｅａｂｉｌ
革兰氏染色
Ｇｒａｍ ｓｔａｉｎ
ＢＨＬ 乳白色 杆状 完整 干燥 半透明 无 —
　 　 注：“ － ”染色结果为阴性。
Ｎｏｔｅ： “ － ” ｍｅａｎｓ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔ．
１􀆰 ２􀆰 ５　 抗生素敏感性和底物广谱性试验　 抗生素敏
感性试验采用药物纸片琼脂扩散法（简称纸片法）进
行。 试验用抗生素有先锋ⅴ、丁胺卡那、硫酸阿米卡
星、庆大霉素、红霉素、链霉素、磺胺霉素（上海振谱生
物科技有限公司）。
底物广谱性试验：在 ２０ ｍＬ 无机盐液体培养基中
分别加入 １００ ｍｇ·Ｌ － １苯磺隆和胺苯磺隆以及苯、甲
苯、二甲苯、萘、邻苯二酚、苯酚、毒死蜱、敌百虫、敌敌
畏、乐果、喹硫磷等，接种已活化 ２４ ｈ 的降解菌株
ＢＨＬ，接种浓度为 １０６ 个·ｍＬ － １，３０℃ 上摇床培养（１５０
ｒ·ｍｉｎ － １），观察菌体生长情况，并设置对照。
２　 结果与分析
２􀆰 １　 ＢＨＬ的形态特征
ＢＨＬ菌株的培养性状：ＢＨＬ 在 ＮＡ 培养基菌落为
乳白色、表面干燥且隆起、边缘整齐完整、半透明、质地
致密、与培养基结合牢固（表 １）。 经染色观察，菌株的
革兰氏反应为阴性杆状，无鞭毛，不能运动，其中 ＢＨＬ
菌体营养体大小为（１􀆰 ５ ～ ２􀆰 ０ μｍ × ０􀆰 ３３ ～ ０􀆰 ５５ μｍ）
（图 １）。
２􀆰 ２　 ＢＨＬ菌的生理生化特性
由表 ２ 可知，ＢＨＬ 菌接触酶反应呈阳性、需氧生
图 １　 菌株 ＢＨＬ电镜照片
Ｆｉｇ． １　 Ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓ ｏｆ ｓｔｒａｉｎｓ ＢＨＬ
长，ＭＲ试验呈阴性，ＶＰ 试验为阳性，能水解明胶、淀
粉，利用柠檬酸盐、葡萄糖、甘露醇等为 Ｃ 源，不能利
用乳糖和丙二酸盐。 在浓度分别为 ２％ 、５％ 、７％ 的
ＮａＣｌ 条件下均能生长，说明该菌株具有一定的耐盐
性。 温度试验表明，在小于等于 ５０℃时可以很好生
长，５５℃时不可生长，说明该菌不耐高温。 ＢＨＬ 的生
理生化试验表明该菌为产碱杆菌。
２􀆰 ３　 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列测定及其系统发育树的构建
ＢＨＬ 菌 ＰＣＲ 扩增结果如图 ２ 所示，扩增到的
１６Ｓ ｒＤＮＡ序列长度为 １ ４３３ｂｐ，序列测定及校正后，将
ＢＨＬ菌株的 １６Ｓ ｒＤＮＡ 基因序列输入 ＧｅｎＢａｎｋ 数据
库，进行 ＢＬＡＳＴ比对，结果（图 ３）表明该菌株的 １６Ｓ
ｒＤＮＡ基因序列与数据库中多个菌种的同源性都在
９９％ 以上， 它们是 Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ． （ ＡＪ００２８０２􀆰 １ ）、
Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐＡＴＳＢ２２ （ ＥＦ３９７５８０􀆰 １ ）、 Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ．
ＤＧ⁃５ （ ＦＪ９１９５９９􀆰 １ ）、 Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ． ＩＳ⁃Ｊ２
（ＥＦ５９９７５７􀆰 １ ）、 Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ． Ｌ⁃１Ｂ （ ＥＦ０５９７１３􀆰 １ ）、
Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ． ＬＢＯ⁃１ （ ＥＦ０３２６０３􀆰 １ ）、 Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ．
ＮｙＺ２１５ （ ＥＦ５４０８７７􀆰 １ ）、 Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ． ＰＮＣＢ１
（ＡＹ０９００２０􀆰 １ ）、 Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ． Ｙｅｎ （ ＡＹ７４４３８４􀆰 １ ）、
Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ． （ ＡＪ００２８０８􀆰 １ ）、 Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ．
（ＥＦ５４０８７７􀆰 １），并用它们构建进化树。 综合生理生化
和 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列分析结果，ＢＨＬ 菌株被鉴定为产碱
杆菌。
２􀆰 ４　 抗生素敏感性和底物广谱性试验
２􀆰 ４􀆰 １　 抗生素敏感性试验　 采用药物纸片琼脂扩散
法进行抗生素敏感试验，抗菌药物由药物纸片在琼脂
３０２
核　 农　 学　 报 ２９ 卷
　 　 　 　 表 ２　 ＢＨＬ菌株主要生理生化特性
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｔｈｅ ｍａｉｎ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｓｔｒａｉｎｓ ＢＨＬ
生理生化特征
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
鉴定结果
Ｒｅｓｕｌｔｓ
生理生化特征
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
鉴定结果
Ｒｅｓｕｌｔｓ
接触酶
Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ＋
Ｖ⁃Ｐ反应
Ｖ⁃Ｐ ｒｅａｃｔｉｏｎ ＋
厌氧生长
Ａｎａｅｒｏｂｉｃｇｒｏｗｔｈ － ＮａＣｌ∶ ２％ ＋
葡萄糖
Ｇｌｕｃｏｓｅ ＋ ＮａＣｌ∶ ５％ ＋
乳糖
Ｌａｃｔｏｓｅ － ＮａＣｌ∶ ７％ ＋
甘露醇
Ｍａｎｎｉｔｏｌ ＋ ＮａＣｌ∶ １０％ －
明胶水解
Ｇｌｕｔｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ＋ 温度：１０℃ ＋
柠檬酸盐利用
Ｃｉｔｒａｔｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ＋ 温度：２０℃ ＋
丙二酸盐利用
Ｄｉｓｏｄｉｕｍ ｍａｌｏｎａｔｅ － 温度：３０℃ ＋
淀粉水解
Ｓｔａｒｃｈ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ＋ 温度：５０℃ ＋
ＭＲ试验
Ｍｅｔｈｙｌ ｒｅｄ － 温度：５５℃ －
　 　 注：“ ＋ ”表示反应呈阳性或者可以生长、利用；“ － ”表示反应呈阴
性或者不可以生长、利用。
Ｎｏｔｅ： “ ＋ ”ｍｅａｎｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｏｒ ｃａｎ ｇｒｏｗ，ｕｓｅ． ‘ － ’ ｍｅａｎｓ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｏｒ
ｃａｎｎｏｔ ｇｒｏｗ，ｕｓｅ．
图 ３　 以 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列为基础的 ＢＨＬ菌株系统进化树
Ｆｉｇ． ３　 Ｔｈｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ＢＨＬ ｂａｓｅｄ ｏｎ １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
图 ２　 １６Ｓ ｒＤＮＡ ＰＣＲ 产物琼脂糖凝胶电泳图
Ｆｉｇ． ２　 Ｔｈｅ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｔ
ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ １６Ｓ ｒＤＮＡ ＰＣＲ
生素浓度比较小未将 ＢＨＬ细菌全部杀死；离滤纸片较
近的培养基抗生素浓度较大，ＢＨＬ 细菌全部被杀死而
清晰透明。
２􀆰 ４􀆰 ２　 底物广谱性试验　 底物降解广谱性试验结果
见表 ４。 菌株 ＢＨＬ能较好的利用苯磺隆、胺苯磺隆二
种磺酰脲类除草剂；能很好的利用邻苯二酚、苯酚、对
４０２
　 １ 期 苯磺隆降解菌的分离鉴定和特性研究
　 　 表 ３　 降解菌株 ＢＨＬ的抗生素敏感性试验结果
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｅｓｔ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＢＨＬ ｔｏ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ
抗生素
ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ
先锋ⅴ
Ｎｏｖａｐｏｒｉｎ
丁胺卡那
Ａｍｉｋａｃｉｎ
硫酸阿米卡星
Ａｍｉｋａｃｉｎ
庆大
Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ
红霉素
Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ
链霉素
ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ
磺胺霉素
Ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓ
乙酰霉素
Ａｃｅｔｙｌｓｐｒａｍｙｃｉｎ
添加浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ／ （ｍｇ·ｍＬ － １）
２５ ３０ １０ ４０ ２５ １０ ２５ ２５
抑菌圈
Ｚｏｎｅ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ／ ｍｍ ８􀆰 ０ ３􀆰 ３ １０ ７􀆰 ３ １１􀆰 ３ ２􀆰 ３ ２􀆰 ８ —
图 ４　 菌株 ＢＨＬ对庆大霉素和先锋霉素的敏感性
Ｆｉｇ． ４　 Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＢＨＬ ｔｏ ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ
ａｎｄ ｃｅｐｈａｌｏｔｈｉｎ
表 ４　 降解菌株 ＢＨＬ的降解底物广谱性
Ｔａｂｌｅ ４　 Ｔｈｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ ｄｅｇｒａｄｅｄ ｂｙ ｓｔｒａｉｎ ＢＨＬ
底物
Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
生长状况
Ｇｒｏｗｉｎｇ ｓｔａｔｅ
底物
Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
生长状况
Ｇｒｏｗｉｎｇ ｓｔａｔｅ
邻苯二酚
Ｃａｔｅｃｈｏｌ ＋ ＋
胺苯磺隆
Ｅｔｈａｍｅｔｓｕｌｆｕｒｏｎ⁃ｍｅｔｈｙｌ ＋ ＋
乙草胺
Ａｃｅｔｏｃｈｌｏｒ ＋
苯磺隆
Ｔｒｉｂｅｎｕｒｏｎ⁃ｍｅｔｈｙｌ ＋ ＋
二甲苯
Ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ ＋
灭草喹
Ｉｍａｚａｑｕｉｎ ａｃｉｄ ＋
苯酚
Ｐｈｅｎｏｌ ＋ ＋
萘
Ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ －
甲苯
Ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ －
草甘膦
Ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ ＋
硝基苯
Ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ＋
对苯二胺
ｐ⁃Ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ ＋
对硫磷
Ｐａｒａｔｈｉｏｎ ＋ ＋
敌百虫
Ｄｉｐｔｅｒｅｘ ＋
毒死蜱
ｃｈｌｏｒｐｙｒｉｆｏｓ ＋
喹硫磷
Ｑｕｉｎａｌｐｈｏｓ ＋
乐果
Ｄｉｍｅｔｈｏａｔｅ ＋ ＋
敌敌畏
Ｄｉｃｈｌｏｒｖｏｓ ＋ ＋
　 　 注：“ ＋ ＋ ”表示可以能很好的生长、利用； “ ＋ ”表示可以生长、利
用；“ － ”表示不可以生长、利用。
Ｎｏｔｅ： “ ＋ ”ｍｅａｎｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｏｒ ｃａｎ ｇｒｏｗ，ｕｓｅ； “ － ” ｍｅａｎｓ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｏｒ
ｃａｎ ｎｏｔ ｇｒｏｗ，ｕｓｅ．
内向外扩散，试验发现在纸片周围一定距离内的 ＢＨＬ
细菌受到抑制，形成一个抑菌圈。 菌株 ＢＨＬ抗性谱见
表 ３，ＢＨＬ菌株对硫酸阿米卡星最为敏感，除乙酰霉素
外，均产生透明晕圈。 这是因为抗生素对菌株 ＢＨＬ具
有一定的最小抑菌浓度。 晕圈外比较模糊，是由于抗
硫磷、敌敌畏、乐果，可以利用二甲苯、乙草胺、毒死蜱、
敌百虫、草甘膦、喹硫磷、灭草喹、对苯二胺、硝基苯；不
能利用甲苯、萘。
３　 讨论
磺酰脲类除草剂的微生物降解是非常重要一种降
解途径。 大多数的除草剂可以作为某些微生物的能量
来源被微生物直接利用而使除草剂降解。 杨亚军
等［１５］分离得到一个烟嘧磺隆的降解菌，经鉴定为枯草
芽孢杆菌；朱连丹［１６］鉴定了氯嘧磺隆的降解菌为杂色
曲霉，黑曲霉，链霉菌属，而李丽［１７］分离得到氯嘧磺隆
的降解菌为巨大芽孢杆菌；林晓燕等［１９］筛选出高效降
解苄嘧磺隆的菌株，经鉴定为芽孢杆菌。 Ｊｏｓｈｉ 等［２０］
研究表明，对绿磺隆降解起重要作用的微生物主要是
放线菌浅灰链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏｌｕｓ）、真菌黑曲霉
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）和青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ． ） ３ 种。 本试
验从形态、分子水平以及降解菌的生理生化等方面对
分离纯化的苯磺隆降解菌进行鉴定，表明该菌为产碱
杆菌，与田方方［２１］提取的磺酰脲类除草剂降解菌其中
的 １ 株菌株相一致。 本试验研究表明降解菌株 ＢＨＬ
的降解底物广谱性良好，可以为多功能菌（菌群）的研
究提供一定的应用价值［２２ － ２４］。
本试验分别选取 １０ ～ ５５℃阶段内不同温度对
ＢＨＬ菌株生长进行测试，当温度小于 ５０℃时都能很好
的生长，然而产碱杆菌的最适生长温度是 ３０℃，菌株
不耐受高温；耐盐性测试表明，盐浓度应该控制在
１０％以内；其他各项生理指标均对后续苯磺隆的降解
特性研究的实验条件提供了依据。
在微生物修复的研究报道中，菌株的筛选对试验
至关重要，它是影响试验成败的关键因素。 本研究分
离降解菌的土壤取自连续多年使用苯磺隆的麦田土
５０２
核　 农　 学　 报 ２９ 卷
壤，土壤菌落的结构本身经过自然的筛选，具有更强的
目的性和针对性，而 ＢＨＬ对苯磺隆的降解规律还有待
进一步研究。
４　 结论
本试验从连续多年施用苯磺隆的田间土壤中，分
离筛出 １ 株能降解苯磺隆的菌株 ＢＨＬ，对其进行了鉴
定以及较为系统详细的抗菌谱和底物广谱性研究。 菌
株 ＢＨＬ可以利用苯磺隆作为唯一碳源和氮源进行生
长。 经 Ｂｌａｓｔ比对，菌株 ＢＨＬ １６Ｓ ｒＤＮＡ 与数据库中多
个 Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅ ｓｐ．同源性都在 ９９％以上。 生理生化特性
研究和 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列分析表明该菌株为产碱杆菌。
菌株抗敏性的检测结果表明，菌株 ＢＨＬ对试验浓度范
围内的所有供试抗生素都敏感，其中硫酸阿米卡星最
为敏感。 广谱性试验表明降解菌株 ＢＨＬ 能较好的利
用苯磺隆、胺苯磺隆二种磺酰脲类除草剂，也可以很好
的利用部分有机磷农药生长，同时菌株 ＢＨＬ还可以利
用部分芳香族化合物。
苯磺隆降解菌的分离鉴定及生理生化特性研究，
为解决苯磺隆药物残留问题提供了理论基础和技术支
持。
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６０２
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
２０１５，２９（１）：０２０２ ～ ０２０７
Ｔｈｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｔｈｅ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ
Ｄｅｇｒａｄｉｎｇ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｆ Ｔｒｉｂｅｎｕｒｏｎ⁃ｍｅｔｈｙｌ⁃ｍｅｔｈｙｌ
ＺＨＡＯ Ｙｏｎｇｂｉｎ１ 　 ＨＵＯ Ｄｅｍｉｎ１ 　 ＺＨＡＮＧ Ｔｉａｎｂａｏ２ 　 ＤＵ Ｈｕｉｌｉｎｇ２
（ １ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ， Ｓｈａｎｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｔａｉｇｕ， Ｓｈａｎｘｉ　 ０３０８０１；
２ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｒｔｓ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｓｈａｎｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｔａｉｇｕ， Ｓｈａｎｘｉ　 ０３０８０１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｏｌｏｖｅ ｔｈｅ ｐｒｏｂｌｅｍ ｏｆ ｔｒｉｂｅｎｕｒｏｎ⁃ｍｅｔｈｙｌ⁃ｍｅｔｈｙｌ ｒｅｓｉｄｕｅｓ， Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ，
ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｉｏｎ， ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｐａｒｔｉｔｉｏｎ， ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｏｉｌ， ｗｈｉｃｈ ｈａｄ ｕｓｅｄ ｔｒｉｂｅｎｕｒｏｎ⁃ｍｅｔｈｙｌ⁃
ｍｅｔｈｙｌ ａｓ ｔｈｅ ｏｎｌｙ ｃａｒｂｏｎ ｒｅｓｏｕｒｃｅ ａｎｄ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｒｅｓｏｕｒｃｅ ｆｏｒ ｍａｎｙ ｙｅａｒｓ． Ｔｈｉｓ ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ
ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ， ｂｙ ｔｈｅ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｙ ｔｈｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ １６Ｓ ｒＤＮＡ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓｙｓｔｅｍ． Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｅｓｔｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ａｎｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ＢＨＬ ｗａｓ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｏ
ａｌｌ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｇｉｖｅｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅｓ， ａｎｄ ‘ＢＨＬ’ ｗａｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｏ ＡＭＫ． Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，
‘ＢＨＬ’ ｃｏｕｌｄ ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ ｄｅｇｒａｄｅ ｔｈｅ ｓｕｌｆｏｎｙｌｕｒｅａ ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ ａｎｄ ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ ａｎｄ ｐａｒｔｌｙ ｄｅｇｒａｄｅ
ａｒｏｍａｔｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｅｓｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｔｒｉｂｅｎｕｒｏｎ⁃ｍｅｔｈｙｌ⁃ｍｅｔｈｙｌ， ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ， ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
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