全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊源冤院园猿怨怨 耀 园源园苑允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员圆鄄园源鄄园远摇 接受日期院圆园员猿鄄园员鄄园怨
基金项目院国家自然科学基金渊猿员园苑园缘愿怨冤袁高等学校博士学科点专项科研基金渊圆园园怨猿苑园圆员员园园园怨冤
作者简介院王聪聪 渊员怨愿苑鄄冤袁女袁山东东营人袁硕士研究生袁主要从事林木遗传育种研究和 阅晕粤 甲基化研究遥 栽藻造院园缘猿愿鄄愿圆源猿怨园猿曰 耘鄄皂葬蚤造院
憎葬灶早糟燥灶早员怨愿苑员园园岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院邢世岩渊员怨缘怨鄄冤袁男袁山东龙口人袁教授袁主要从事林木种植资源收集及植物系统发育研究遥 栽藻造院园缘猿愿鄄愿圆源猿怨园猿曰耘鄄皂葬蚤造院 曾蚤灶早泽赠岳 泽凿葬怎援
藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园源鄄园猿怨怨鄄园怨
不同单株叶籽银杏 阅晕粤甲基化水平
与模式的 酝杂粤孕分析
王聪聪摇 邢世岩摇 李际红摇 王东升摇 张摇 倩
渊山东农业大学林学院农业生态与环境重点实验室袁山东 泰安摇 圆苑员园员愿冤
摘摇 要院以叶籽银杏和普通银杏叶片为试材袁利用 耘糟燥砸玉和 匀责葬域辕酝泽责玉双酶切建立适合于叶籽银杏全
基因组的甲基化敏感扩增多态性渊酝杂粤孕冤分析体系袁在全基因组水平对 员员 株叶籽银杏和 员 株正常银杏
的胞嘧啶甲基化水平和模式进行评估遥 结果表明袁从 猿远 对 酝杂粤孕选扩引物中袁选出 员源 对 酝杂粤孕引物组
合袁共扩增产生 圆苑远远 条清晰可辨且可重复的 阅晕粤条带袁产生 猿 种类型的甲基化条带遥 在全部扩增位点
中袁检测到叶籽银杏基因组 悦悦郧郧 序列的甲基化比率为 圆远郾 源圆豫 耀 远缘郾 苑怨豫 袁正常银杏总甲基化率达
猿园郾 苑怨豫 袁不同单株的叶籽银杏平均总甲基化率达 猿愿郾 远员豫 袁叶籽银杏甲基化事件的发生频率为 员员郾 圆苑豫
耀圆苑郾 猿源豫 遥 方差分析显示不同单株间 阅晕粤甲基化水平差异极显著遥 主成分分析绘制的主分量散点图
与聚类分析结果一致袁不同单株的叶籽银杏可分为 猿 大类遥
关键词院叶籽银杏曰阅晕粤甲基化曰 酝杂粤孕分析曰表观遗传学
阅晕粤 酝藻贼澡造葬贼蚤燥灶 蕴藻增藻造泽 葬灶凿 孕葬贼贼藻则灶泽 蚤灶 阅蚤枣枣藻则藻灶贼 郧蚤灶噪早燥 月蚤造燥遭葬
蕴援 增葬则援 耘责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 遭赠 酝藻贼澡造葬贼蚤燥灶鄄杂藻灶泽蚤贼蚤增藻
粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 孕燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂 渊酝杂粤孕冤
宰粤晕郧 悦燥灶早鄄糟燥灶早摇 载陨晕郧 杂澡蚤鄄赠葬灶摇 蕴蚤 允蚤鄄澡燥灶早摇 宰粤晕郧 阅燥灶早鄄泽澡藻灶早摇 在匀粤晕郧 匝蚤葬灶
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 耘糟燥造燥早赠 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼袁悦燥造造藻早藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁
杂澡葬灶凿燥灶早 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁栽葬蚤爷葬灶袁杂澡葬灶凿燥灶早摇 圆苑员园员愿冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽燥 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻 贼澡藻 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 造藻增藻造 葬灶凿 责葬贼贼藻则灶泽 燥枣 员员 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援
葬灶凿 葬 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 葬贼 贼澡藻 早藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻 造藻增藻造袁 酝杂粤孕渊酝藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶鄄泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂冤葬灶葬造赠泽蚤泽 憎葬泽
责藻则枣燥则皂藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤 藻曾贼则葬糟贼藻凿 枣则燥皂 造藻葬增藻泽 遭赠 贼澡藻 凿燥怎遭造藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 燥枣 耘糟燥砸玉葬灶凿 匀责葬域辕酝泽责
玉援 宰蚤贼澡 猿远 责葬蚤则泽 燥枣 酝杂粤孕 泽藻造藻糟贼蚤增藻 责则蚤皂藻则泽袁 员源 责葬蚤则泽 责则燥凿怎糟藻凿 葬 贼燥贼葬造 燥枣 圆苑远远 凿蚤泽糟藻则灶蚤遭造藻 葬灶凿 则藻责藻葬贼葬遭造藻 贼澡则藻藻 贼赠责藻泽 燥枣
葬皂责造蚤枣蚤藻凿 阅晕粤 遭葬灶凿泽援 粤 贼燥贼葬造 燥枣 圆远郾 源圆豫 耀远缘郾 苑怨豫 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 藻增藻灶贼泽 憎藻则藻 凿藻贼藻糟贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 悦悦郧郧 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣
郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 葬皂燥灶早 葬造造 贼澡藻 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 泽蚤贼藻泽援 陨灶 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 早藻灶燥皂藻袁 贼澡藻 则葬贼蚤燥 燥枣 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 憎葬泽 猿园郾 苑怨豫 袁 憎澡蚤造藻
蚤灶 早藻灶燥皂藻泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬袁 贼澡藻 葬增藻则葬早藻 则葬贼蚤燥 憎葬泽 猿愿郾 远员豫 援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻凿 贼澡葬贼
阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 藻增藻灶贼泽 燥糟糟怎则则藻凿 葬贼 葬 责藻则糟藻灶贼葬早藻 燥枣 员员郾 圆苑豫 贼燥 圆苑郾 猿源豫 蚤灶 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 援 阅晕粤
皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 造藻增藻造 增葬则蚤藻凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 葬皂燥灶早 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造葬灶贼泽援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 燥枣 责造燥贼泽 燥枣 贼澡藻 枣蚤则泽贼 贼憎燥 责则蚤灶糟蚤责葬造 枣葬糟贼燥则泽 枣则燥皂
孕则蚤灶糟蚤责葬造 糟燥皂责燥灶藻灶贼 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 员圆 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造葬灶贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造葬灶贼泽 糟燥怎造凿 遭藻 凿蚤增蚤凿藻凿 蚤灶贼燥 贼澡则藻藻 早则燥怎责泽援
怨怨猿
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
悦燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早造赠袁 贼澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责造葬灶贼泽 糟燥怎造凿 葬造泽燥 遭藻 糟造怎泽贼藻则藻凿 蚤灶贼燥 贼澡则藻藻 早则燥怎责泽 遭赠 悦造怎泽贼藻则 粤灶葬造赠泽蚤泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 曰 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶曰 酝杂粤孕 葬灶葬造赠泽蚤泽曰 耘责蚤早藻灶藻贼蚤糟泽
摇 摇 阅晕粤 甲基化是一种表观遗传渊耘责蚤早藻灶藻贼蚤糟冤现象袁
即在 阅晕粤甲基化转移酶催化作用下袁利用 杂 原腺苷基
甲硫氨酸提供的甲基袁将胞嘧啶的第 缘 位碳原子甲基
化袁从而使胞嘧啶转化为 缘 原甲基胞嘧啶遥 近年来表
观遗传学渊耘责蚤早藻灶藻贼蚤糟泽冤研究成为生物学领域的一个新
焦点袁员怨怨园 年 匀燥造蚤凿葬赠咱员暂对表观遗传学作了较为具体
的界定袁即生物在不改变基因组序列的前提下通过
阅晕粤和组蛋白修饰来调控基因表达遥 阅晕粤 甲基化作
为细胞记忆的一种机制袁是表观遗传学研究的 野主
角冶 咱圆暂 遥 阅晕粤甲基化在许多生命科学的基础研究和应
用研究领域都有重要作用袁阅晕粤 甲基化与基因表达尧
胚胎发育尧细胞分化尧基因组印记尧性别表达尧非生物胁
迫等诸多生物学特征密切相关咱猿 原 苑暂 遥
检测 阅晕粤 甲基化的方法有多种咱愿 原 怨暂 袁 酝杂粤孕
渊酝藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂袁甲基化敏
感扩增多态性冤技术袁是一种基于选择性 孕悦砸 的新技
术袁不需要知道被测 阅晕粤 序列信息袁在不同生物上具
有通用性袁可用于 阅晕粤 序列背景知识未知的生物袁可
在全基因组范围内检测 悦悦郧郧 位点的胞嘧啶甲基化袁
操作简单袁在 粤云蕴孕基础上稍作修改即可操作咱员园暂 遥 现
已广泛应用于脐橙尧辐射松尧杉木尧鸭梨尧银杏尧苏铁等
木本植物上袁检测胞嘧啶甲基化的程度和模式咱员员 原 员远暂 遥
阅晕粤甲基化存在于所有植物中袁但不同植物或同种植
物的不同组织尧不同时期甲基化水平差异较大袁高等植
物基因组中袁大约 圆园豫 耀 缘园豫的胞嘧啶处于甲基化状
态袁这对植物维持正常的生长发育是必需的咱员苑 原 员怨暂 遥
云蚤灶灶藻早葬灶等咱圆园暂和 杂葬扎藻 等咱圆员暂发现拟南芥 阅晕粤 甲基化
水平降低导致其多种表型和发育不正常遥 对云兰属植
物渊蕴蚤灶葬则蚤葬 增怎造早葬则蚤泽冤的研究表明袁造糟赠糟 基因甲基化导致
其花型由左右对称变为辐射状咱圆圆暂 遥 这些研究说明
阅晕粤甲基化在植物生长发育过程中起着关键的调控
作用袁甲基化水平太高或太低都会引起生长发育的异
常遥
银杏渊郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 冤是银杏科单种属植物袁是
第四纪冰川之后在中国保存下来的最古老的孑遗植
物袁科学家常把它与恐龙相提并论袁称它为野植物界的
熊猫冶遥 叶籽银杏作为银杏品种中一个极为特殊的类
型袁它不仅有较高的观赏价值袁而且对银杏起源和演化
等方面的研究具有重大的学术意义咱圆猿暂 遥 目前不同学
者对叶籽银杏的形态学尧细胞学及分子生物学等方面
进行了研究咱圆源 原 圆远暂 袁但是全国范围内不同单株间叶籽银
杏 阅晕粤 甲基化水平和模式的研究鲜见报道遥 叶籽银
杏作为银杏中的一种特异种质其变异机制有多种学说
渊环境诱变说尧返祖学说尧嵌合体学说等冤袁但是至今仍
无定论袁本研究采用来自不同地区的 员员 株叶籽银杏和
员 株普通银杏为试材袁从不同单株叶籽银杏 阅晕粤 甲基
化水平和模式的变化入手袁利用甲基化敏感扩增多态
性技术渊酝杂粤孕冤构建不同单株叶籽银杏 阅晕粤 甲基化
的 酝杂粤孕图谱袁对不同单株的叶籽银杏 阅晕粤甲基化水
平进行比较研究袁分析不同单株叶籽银杏与正常银杏
的差异袁并对不同单株叶籽银杏进行主成分分析和聚
类分析袁以期为叶籽银杏的变异机制和系统发育提供
依据遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
员郾 员郾 员摇 试验材料摇 圆园员员 年春袁在山东农业大学叶籽
银杏种质资源库采集来自不同地区的 员员 株 缘 年生叶
籽银杏及 员 株 缘 年生普通银杏的展叶期新鲜嫩叶渊表
员冤遥 采样部位为树冠上尧中尧下各部分混合采样袁经去
离子水冲洗后用吸水纸吸去多余水分袁装入放有硅胶
干燥剂的保鲜袋中袁带回实验室袁置于 源益冰箱中保存
备用遥
员郾 员郾 圆摇 试剂 摇 限制性内切酶购于纽英伦生物技术
渊北京冤有限公司袁栽源 连接酶尧栽葬择 聚合酶尧耘曾 栽葬择 聚合
酶尧凿晕栽孕 酝蚤曾贼怎则藻 购于宝生物工程渊大连冤有限公司
渊栽葬运葬砸葬冤袁员园园遭责 蕴葬凿凿藻则购于康为世纪袁尿素尧丙烯酰
胺等药品购自 泽蚤早皂葬公司遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 阅晕粤提取摇 采用改良的 悦栽粤月 法提取叶片基
因组 阅晕粤 咱圆苑 原 圆愿暂 遥
员郾 圆郾 圆摇 阅晕粤 甲基化敏感扩增多态性分析 摇 分别用
耘糟燥砸陨 辕 匀责葬 陨陨尧耘糟燥砸 陨 辕酝泽责陨组合对基因组 阅晕粤 进行酶
切袁连上接头袁耘糟燥砸陨接头及引物序列以 灾燥泽 等咱圆怨暂序列
为参照袁 匀责葬 陨陨 渊酝泽责陨冤接头及引物序列以 载蚤燥灶早等咱猿园暂
序列为参照袁具体引物参考李际红咱员远暂 袁所用引物序列
由上海生工合成详见表 圆遥 酝杂粤孕 分析流程参照 灾燥泽
等咱圆怨暂的 粤云蕴孕方法并经修改遥 每对引物进行 猿 次独
立重复试验袁进行 远豫的聚丙烯酰胺凝胶电泳尧银染后
对 阅晕粤 片段清晰可辨尧可重复的带型进行拍照袁并对
其位点进行 酝杂粤孕分析遥
园园源
摇 源 期 不同单株叶籽银杏 阅晕粤甲基化水平与模式的 酝杂粤孕分析
表 员摇 试验材料来源
栽葬遭造藻 员摇 栽澡藻 燥则蚤早蚤灶 燥枣 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 皂葬贼藻则蚤葬造泽
编号
悦燥凿藻
学名编号
杂糟蚤藻灶贼蚤枣蚤糟 灶葬皂藻 糟燥凿藻
来源
杂燥怎则糟藻泽
缩写
粤遭遭则藻增蚤葬贼蚤燥灶
员 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 原 员鄢 山东泰安 杂澡葬灶凿燥灶早袁 栽葬蚤爷葬灶 栽粤
圆 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 圆 福建漳平 云怎躁蚤葬灶袁 在澡葬灶早责蚤灶早 在孕
猿 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 猿 福建三明 云怎躁蚤葬灶袁 杂葬灶皂蚤灶早 杂酝
源 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 源 四川旺苍 杂蚤糟澡怎葬灶袁 宰葬灶早糟葬灶早 宰悦
缘 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 缘 山东沂源 杂澡葬灶凿燥灶早袁 再蚤赠怎葬灶 再在苑
远 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 远 日本 允葬灶责葬灶 韵澡葬援
苑 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 苑 广西兴安 郧怎葬灶早曾蚤袁 载蚤灶早爷葬灶 郧载圆
愿 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 愿 陕西白河 杂澡葬葬灶曾蚤袁 月葬蚤澡藻 杂载
怨 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 怨 湖南洞口 匀怎灶葬灶袁 凿燥灶早噪燥怎 阅运员
员园 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 员园 湖北安陆 匀怎遭藻蚤袁 粤灶造怎 匀月
员员 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 员员 河南邓州 匀藻灶葬灶袁 阅藻灶早扎澡燥怎 阅在
员圆 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 原 员圆 山东济南渊淌豆寺冤杂澡葬灶凿燥灶早袁 允蚤灶葬灶 栽阅
摇 摇 注院鄢为普通银杏袁其他为叶籽银杏
摇 摇 晕燥贼藻院鄢 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 袁 燥贼澡藻则泽 葬则藻 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪
表 圆摇 酝杂粤孕分析的接头和引物序列
栽葬遭造藻 圆摇 杂藻择怎藻灶糟藻 燥枣 葬凿葬责贼藻则泽 葬灶凿 责则蚤皂藻则泽 怎泽藻凿 枣燥则 酝杂粤孕 葬灶葬造赠泽蚤泽
接头与引物渊缘 ˊ寅猿 ˊ冤粤凿葬责贼燥则泽 葬灶凿 责则蚤皂藻则泽渊缘 ˊ寅猿 ˊ冤
序列
栽澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽
接头 粤凿葬责贼燥则泽渊缘忆寅猿忆冤
耘糟燥砸 陨 葬凿葬责贼燥则泽渊正向 云燥则憎葬则凿 冤 缘忆鄄悦栽悦郧栽粤郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦鄄猿忆
耘糟燥砸 陨 葬凿葬责贼燥则泽渊反向 砸藻增藻则泽藻冤 缘忆鄄粤粤栽栽郧郧栽粤悦郧悦粤郧栽悦栽粤悦鄄猿忆
匀责葬域鄄酝泽责陨 葬凿葬责贼燥则泽渊正向 云燥则憎葬则凿冤 缘忆鄄郧粤悦郧粤栽郧粤郧栽悦栽粤郧粤粤鄄猿忆
匀责葬域鄄酝泽责陨 葬凿葬责贼燥则泽渊反向 砸藻增藻则泽藻冤 缘忆鄄悦郧栽栽悦栽粤郧粤悦栽悦粤栽悦鄄猿忆
预扩增引物 孕则藻泽藻造藻糟贼蚤增藻 责则蚤皂藻则泽渊缘忆寅猿忆冤
耘粤园园 垣 粤 缘忆鄄郧栽粤郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤鄄猿忆
匀责葬域鄄酝泽责陨 垣 栽 缘忆鄄郧粤栽郧粤郧栽悦栽粤郧粤粤悦郧郧栽鄄猿忆
选扩增引物组合 杂藻造藻糟贼蚤增藻 责则蚤皂藻则泽 糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶泽渊缘忆寅猿忆冤
耘粤园员鄄月 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽悦
耘粤园圆鄄粤 郧栽粤郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤郧粤
耘粤园圆鄄月 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤郧粤
耘粤园猿鄄粤 郧栽粤郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤悦郧
耘粤园猿鄄月 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤悦郧
耘粤园源鄄粤 郧栽粤郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽郧
耘粤园源鄄月 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤栽郧
耘园园 垣 郧 郧粤悦栽郧悦郧栽粤悦悦粤粤栽栽悦粤郧
匀酝 垣 栽粤郧 郧粤栽郧粤郧栽悦栽粤郧粤粤悦郧郧栽粤郧
匀酝 垣 栽栽悦 郧粤栽郧粤郧栽悦栽粤郧粤粤悦郧郧栽栽悦
匀酝 垣 栽悦郧 郧粤栽郧粤郧栽悦栽粤郧粤粤悦郧郧栽悦郧
员园源
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
摇 摇 酶切反应体系总体积为 圆缘滋蕴袁包括 圆郾 缘滋蕴 员园 伊
晕耘月 月怎枣枣藻则袁园郾 缘滋蕴 耘糟燥砸陨 渊圆园 哉窑滋蕴 原员冤袁员郾 园滋蕴 匀责葬域
渊员园 哉窑滋蕴 原员冤或 园郾 缘滋蕴 酝泽责陨 渊圆园 哉窑滋蕴 原员 冤袁缘滋蕴 模板
阅晕粤袁灭菌双蒸水补充至 圆缘滋蕴遥 混匀后于低温恒温水
浴锅 猿苑益酶切 员圆澡袁远缘益保温 圆园皂蚤灶袁源益保存遥 连接
反应体系总体积为 圆园滋蕴袁包括 圆郾 园滋蕴员园 伊 月怎枣枣藻则
蕴蚤早葬贼蚤燥灶袁耘糟燥砸陨 葬凿葬责贼藻则 渊缘滋皂燥造窑蕴 原员 冤和 匀责葬域 原 酝泽责陨
葬凿葬责贼藻则 渊 缘园滋皂燥造窑蕴 原员 冤 各 源滋蕴袁 愿郾 缘滋蕴 模板 阅晕粤袁
园郾 缘滋蕴 栽源 阅晕粤 蕴蚤早葬贼蚤燥灶渊愿园 哉窑滋蕴 原员 冤灭菌双蒸水补充
至 圆园滋蕴遥 混匀后于低温恒温水浴锅 员远益连接过夜袁
苑园益保温 员园皂蚤灶袁 原 圆园益保存用于预扩增遥
预扩增反应体系总体积为 圆缘滋蕴袁包括 圆郾 缘滋蕴员园 伊
耘载 栽葬择 孕悦砸 月怎枣枣藻则袁圆郾 园滋蕴 酝早圆 垣 渊圆缘 皂皂燥造窑蕴 原员 冤袁园郾
员圆缘滋蕴 耘载 栽葬择 阅晕粤聚合酶渊缘 哉窑滋蕴 原员冤袁员郾 缘滋蕴引物渊
员源滋皂燥造窑蕴 原员 冤袁圆郾 园滋蕴 凿晕栽孕泽 渊圆郾 缘皂皂燥造窑蕴 原员 冤袁圆滋蕴 模
板 阅晕粤袁双蒸水补足至 圆缘滋蕴遥 扩增程序为院怨源益预变
性 缘皂蚤灶曰扩增 猿园 个循环渊怨源益变性 猿园 泽袁 缘远益退火
员皂蚤灶袁苑圆益延伸 员皂蚤灶冤曰最后于 苑圆益延伸 员园皂蚤灶遥 预扩
增产物保存到 原圆园益用于选择性扩增遥 选择性扩增用
筛选到的 员源 对引物进行 孕悦砸扩增遥 预扩产物稀释至
员灶早窑滋蕴 原员进行选择性扩增遥 选择性扩增体系除酶不
同外与预扩增体系相同遥 选扩程序为 怨源益预变性
缘皂蚤灶袁第 员 轮扩增为 员猿 个循环渊 怨源益袁猿园泽曰远缘益袁猿园 泽曰
苑圆益袁员皂蚤灶冤袁退火温度每个循环降低 园郾 苑益袁降低到
缘远益为止曰 第 圆 轮扩增为 圆猿 个循环渊 怨源益袁猿园泽曰缘远益袁
猿园泽曰苑圆益袁员皂蚤灶冤袁苑圆益 延伸 员园皂蚤灶扩增结束后将反应
产物置于 源益保存遥
选扩增产物加上样缓冲液 怨缘益变性后的产物用
远豫的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测袁银染法显色袁分
子量标记为 员园园遭责阅晕粤 造葬凿凿藻则遥
员郾 圆郾 猿摇 数据分析摇 酝杂粤孕 技术采用双酶切袁因此每个
样品同时拥有两条泳道袁 其中第 员 条泳带采用 耘糟燥砸
玉辕 匀责葬 陨陨进行酶切袁 第 圆 条泳带采用 耘糟燥砸玉辕 酝泽责玉
酶切遥 根据泳道内条带的有无袁 将电泳图谱上清晰且
可重复出现的条带记为野员冶袁同一位置没有条带记为
野园冶遥 统计每个引物扩增出的总条带数和其中的甲基
化条带数遥 用 耘曾糟藻造 计算甲基化比例袁阅孕杂苑郾 园缘 软件
进行统计分析袁阅怎灶糟葬灶 检验法进行多重比较袁并进行
主成分分析遥 通过 杂粤杂愿郾 园 分析软件对不同甲基化水
平的单株进行聚类分析袁获得树状结构图遥
圆摇 结果分析
圆郾 员摇 不同单株叶籽银杏酝杂粤孕扩增图谱构建
酝杂粤孕中 匀责葬 陨陨和 酝泽责玉两种酶的酶切位点均为
渊悦悦郧郧 辕 郧郧悦悦冤袁但二者对酶切位点甲基化修饰敏感
性不同袁匀责葬 陨陨对全甲基化位点渊双链甲基化冤不敏感袁
但能识别并切割非甲基化位点和半甲基化位点渊单链
甲基化冤曰酝泽责玉对半甲基化位点不敏感渊单链甲基
化冤袁但能识别并切割非甲基化和全甲基化位点袁因此
样品 阅晕粤经 耘糟燥砸 陨 辕 匀责葬 陨陨渊匀冤 和 耘糟燥砸 陨 辕酝泽责 陨渊酝冤
酶切后的产物在 孕粤郧耘胶上会出现如下 猿 种甲基化类
型院粤型院耘 垣 匀和 耘 垣 酝都有带袁表明 悦悦郧郧位点未发
生甲基化或单链内发生甲基化曰月 型院耘 垣 匀 有带袁耘 垣
酝无带袁表明 悦悦郧郧位点发生单链 阅晕粤 外甲基化渊半
甲基化位点冤曰悦 型院耘 垣 匀 无带袁耘 垣 酝 有带袁表明
悦悦郧郧位点发生双链 阅晕粤内甲基化渊全甲基化位点冤曰
经 酝杂粤孕 分析袁获得了谱带清晰尧重复性好尧甲基化修
饰位点丰富的叶籽银杏 酝杂粤孕 扩增图谱袁葬尧遭 分别代
表不同引物的扩增图谱渊图 员冤遥
圆郾 圆摇 叶籽银杏甲基化修饰水平的分析
耘糟燥砸 陨选扩增引物分别与 匀责葬域尧酝泽责 陨 选扩增引
物配对袁从 猿远 对 酝杂粤孕选扩增引物中按照扩增所得图
谱清晰尧多态性丰富尧重复性好的标准袁选出 员源 对引物
组合袁共扩增产生 圆苑远远 条清晰可辨且可重复的 阅晕粤
条带袁平均每个样品每对引物扩增获得 员远郾 缘 渊圆苑远远 辕
员圆 辕 员源 越 员远郾 缘冤条带遥 在全部扩增位点中袁检测到甲基
化位点 员园源愿 个袁甲基化比率为 猿苑郾 愿怨豫 遥 其中袁全甲
基化位点为 苑源圆 个袁占全部扩增位点的 圆远郾 愿猿豫 曰半甲
基化位点为 猿园远 个袁占全部扩增位点的 员员郾 园远豫 遥 叶
籽银杏甲基化事件的发生频率为 员员郾 圆苑豫 耀 圆苑郾 猿源豫
即 月 辕 渊粤 垣 月 垣 悦冤 越 圆愿猿 辕 圆缘员圆郾 源 越 员员郾 圆苑豫 袁悦 辕 渊粤 垣 月
垣 悦冤 越 远愿苑 辕 圆缘员圆 越 圆苑郾 猿源豫 袁总甲基化率 越 员员郾 圆苑豫 垣
圆苑郾 猿源豫 越猿愿郾 远员豫 渊表 猿冤遥 从表 猿 可以看出袁与山东
泰安正常银杏总甲基化率渊猿园郾 苑怨豫 冤相比福建漳平
渊圆远郾 源圆豫 冤尧福建三明渊圆苑郾 怨员豫 冤两个单株甲基化比率
略低袁其他单株 阅晕粤甲基化比率均高于山东泰安的正
常银杏渊猿园郾 苑怨豫 冤袁以湖南洞口渊远员郾 园远豫 冤和湖北安陆
渊远缘郾 苑怨豫 冤两个单株的甲基化比率最高袁且湖北安陆
的单株全甲基化率是半甲基化率的 员园 倍遥 总体表现
为叶籽银杏 阅晕粤甲基化比率高于正常银杏袁但是不同
单株间 阅晕粤甲基化程度不同袁河南邓州尧山东济南淌
摇 摇 摇 摇 摇
圆园源
摇 源 期 不同单株叶籽银杏 阅晕粤甲基化水平与模式的 酝杂粤孕分析
图 员摇 员 株正常银杏和 员员 株叶籽银杏的基因组 阅晕粤的 酝杂粤孕扩增图谱
云蚤早援 员摇 酝杂粤孕 枣蚤灶早藻则责则蚤灶贼泽 燥枣 燥灶藻 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 责造葬灶贼 葬灶凿 员员 凿蚤枣枣藻则藻灶贼
郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 责造葬灶贼泽 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤
粤院非甲基化位点袁月院半甲基化位点袁悦院全甲基化位点袁匀院耘糟燥砸玉 垣 匀责葬域双酶切袁酝院耘糟燥砸玉 垣酝泽责玉双酶切袁
酝噪院员缘园园 的 阅晕粤分子量标准袁葬院引物为 耘粤园圆月 原 栽栽悦 遭院引物为 耘粤园源月 原 栽粤郧
粤院晕燥灶鄄皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻泽袁 月院匀藻皂蚤鄄皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻泽袁 悦院云怎造造鄄皂藻贼澡造葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻泽袁 匀院耘糟燥砸玉 垣 匀责葬域 凿燥怎遭造藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶袁
酝院耘糟燥砸玉 垣酝泽责玉凿燥怎遭造藻 凿蚤早藻泽贼蚤燥灶袁 酝噪院员缘园园 贼澡藻 阅晕粤 皂燥造藻糟怎造葬则鄄憎藻蚤早澡贼 皂葬则噪藻则袁 葬院泽贼葬灶凿 枣燥则 责则蚤皂藻 耘粤园圆月鄄栽栽悦袁 遭院 泽贼葬灶凿 枣燥则 责则蚤皂藻 耘粤园源月鄄栽粤郧
表 猿摇 不同单株叶籽银杏的 阅晕粤甲基化修饰水平分析及 阅怎灶糟葬灶检验
栽葬遭造藻 猿摇 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂泽 葬灶凿 阅怎灶糟葬灶 贼藻泽贼 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 孕造葬灶贼
样品
杂葬皂责造藻
条带类型
月葬灶凿 贼赠责藻
粤 月 悦
总扩增
条带数
栽燥贼葬造
葬皂责造蚤枣蚤藻凿
遭葬灶凿泽
甲基化总
带数
栽燥贼葬造
皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶
遭葬灶凿泽
总甲基
化率
栽燥贼葬造
皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶
则葬贼藻渊豫 冤
半甲基
化率
匀藻皂蚤皂藻贼赠造葬贼藻凿
则葬贼藻渊豫 冤
全甲基
化率
云怎造造
皂藻贼赠造葬贼蚤燥灶
则葬贼藻渊豫 冤
栽粤鄢 员苑缘援 缘 依 猿援 员月悦 圆圆援 愿 依 园援 圆阅 缘缘援 猿 依 员援 猿郧 圆缘猿援 远 苑愿援 员 猿园援 苑怨 愿援 怨苑 圆员援 愿圆
在孕 员远猿援 远 依 员悦阅 圆怨援 源 依 园援 源悦 圆怨援 猿 依 园援 猿运 圆圆圆援 猿 缘愿援 愿 圆远援 源圆 员猿援 圆猿 员猿援 员怨
杂酝 员源怨援 源 依 愿援 怨耘 员猿援 苑 依 员云郧 源源援 圆 依 园援 圆陨 圆园苑援 猿 缘苑援 愿 圆苑援 怨员 远援 缘怨 圆员援 猿员
宰悦 员圆怨援 愿 依 苑援 圆云 员员援 愿 依 园援 愿郧匀 愿源援 愿 依 园援 悦 圆圆远援 源 怨远援 远 源圆援 远远 缘援 圆猿 猿苑援 源猿
再在苑 圆园园援 远 依 缘援 源粤 猿怨 依 员粤 远圆援 缘 依 园援 缘耘 猿园圆援 员 员园员援 缘 猿猿援 远 员圆援 怨员 圆园援 远怨
韵澡葬援 员愿员援 圆 依 苑援 苑月 猿圆援 愿 依 园援 愿月 远缘援 猿 依 园援 猿阅 圆苑怨援 猿 怨愿援 员 猿缘援 员圆 员员援 苑猿 圆猿援 源
郧载圆 员缘远援 源 依 远援 员阅耘 猿怨援 怨 依 园援 怨粤 缘圆援 员 依 园援 员阅匀 圆源愿援 源 怨圆 猿苑援 园猿 员远援 园苑 圆园援 怨苑
杂载 员源源援 员 依 猿援 缘缘园员耘 员源援 依 园援 愿耘云 缘愿援 怨 依 园援 怨云 圆员苑援 愿 苑猿援 苑 猿猿援 愿猿 远援 苑苑 圆苑援 园远
阅运员 苑愿援 苑 依 员援 愿匀 猿圆援 缘 依 园援 缘月 怨园援 愿 依 园援 愿月 圆园圆 员圆猿援 猿 远员援 园远 员远援 园怨 源源援 怨苑
匀月 苑缘援 愿 依 苑援 猿匀 员圆援 苑 依 园援 苑郧匀 员猿猿援 圆 依 园援 圆粤 圆圆员援 苑 员源缘援 愿 远缘援 苑怨 缘援 苑员 远园援 园愿
阅在 怨远援 苑 依 员援 远郧 员远援 缘 依 园援 缘耘 圆苑援 圆 依 园援 圆蕴 员源园援 猿 源猿援 苑 猿员援 员圆 员员援 苑远 员怨援 猿远
栽阅 员远远援 圆 依 猿援 苑悦阅 源园援 员 依 员援 员粤 猿愿援 苑 依 园援 苑允 圆源源援 怨 苑愿援 愿 猿圆援 员缘 员远援 猿苑 员缘援 苑怨
叶籽总和
栽燥贼葬造蚤贼赠
燥枣 野赠藻扎蚤冶
员缘源圆援 源 圆愿猿援 员 远愿远援 怨 圆缘员圆援 源 怨苑园
叶籽均值
粤增藻则葬早藻
燥枣 野赠藻扎蚤冶
员源园援 圆 圆缘援 苑 远圆援 源 圆圆愿援 源 愿愿援 圆 猿愿援 远员 员员援 圆苑 圆苑援 猿源
样品总和
栽燥贼葬造蚤贼赠
燥枣 泽葬皂责造藻泽
员苑员苑援 怨 猿园缘援 怨 苑源圆援 圆 圆苑远远 员园源愿援 员
样品均值
粤增藻则葬早藻
燥枣 泽葬皂责造藻泽
员源猿援 圆 圆缘援 缘 远员援 怨 圆猿园援 缘 愿苑援 猿 猿苑援 愿怨 员员援 园远 圆远援 愿猿
摇 摇 注院粤尧月尧悦带型数据为平均数 依标准差袁同列中 粤袁月噎表示差异达 员豫极显著水平曰野赠藻扎蚤冶代表叶籽银杏
晕燥贼藻院阅葬贼葬 燥枣 粤袁月 葬灶凿 悦 贼赠责藻泽 葬则藻 酝藻葬灶 增葬造怎藻 依 泽贼葬灶凿葬则凿 凿藻增蚤葬贼蚤燥灶袁贼澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟葬责蚤贼葬造 造藻贼贼藻则泽 蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 糟燥造怎皂灶 憎藻则藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 葬贼 员豫 援
野赠藻扎蚤冶 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪
猿园源
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
豆寺的单株总 阅晕粤 甲基化比率较山东泰安正常银杏
变化不大遥 由 阅怎灶糟葬灶 多重比较发现 员圆 个单株间的非
甲基化尧全甲基化尧半甲基化条带数均有极显著差异袁
不同单株间叶籽银杏甲基化水平的差异充分体现了相
同物种不同单株间 阅晕粤甲基化水平的差异性遥
圆郾 猿摇 不同叶籽银杏单株间的主成分分析及聚类分析
对叶籽银杏总扩增条带数尧甲基化总条带数尧总甲
基化率尧半甲基化率尧全甲基化率 缘 个指标进行主成分
分析发现袁以 愿园豫的阈值选择主分量时袁可得到前两个
主成分遥 第一分量渊赠员冤与反映 阅晕粤甲基化水平的甲基
化总条带数尧总甲基化率尧全甲基化率密切相关曰第二分
量渊赠圆冤与反映 阅晕粤甲基化水平的总扩增条带数尧甲基
化总条带数尧半甲基化率密切相关遥 据 允藻枣枣藻则泽 的观点袁
任一主分量的特征根若小于 员袁则可以忽略遥 赠员尧赠圆 的特
征根均大于 员袁累计贡献率在 愿园豫以上袁这说明可以用
这两个主分量来反应 阅晕粤 甲基化水平 愿园豫以上的信
息遥 由主成分方程渊表 源冤可以看出 曾员 原 曾缘渊除 曾源冤与 赠员
成正相关袁而 赠圆 与 曾员尧曾圆尧曾源 成正相关遥
表 源摇 阅晕粤甲基化相关矩阵尧贡献率尧特征值及主成分方程
栽葬遭造藻 源摇 悦燥则则藻造葬贼蚤燥灶 皂葬贼则蚤曾袁 糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 则葬贼蚤燥袁 藻蚤早藻灶增葬造怎藻泽 葬灶凿 贼澡藻 责则蚤灶糟蚤责葬造 糟燥皂责燥灶藻灶贼 藻择怎葬贼蚤燥灶 燥枣 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援
藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶
相关系数
悦燥则则藻造葬贼蚤燥灶 糟燥枣枣蚤糟蚤藻灶贼
总扩增条带数
栽燥贼葬造 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 遭葬灶凿泽
甲基化总条带数
栽燥贼葬造 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 遭葬灶凿泽
总甲基化率
栽燥贼葬造 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 则葬贼藻
半甲基化率
匀藻皂蚤皂藻贼赠造葬贼藻凿 则葬贼藻
全甲基化率
云怎造造 皂藻贼赠造葬贼蚤燥灶 则葬贼藻
总扩增条带数
栽燥贼葬造 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 遭葬灶凿泽
员郾 园园园园 园郾 怨怨缘愿 园郾 缘源源员 原 园郾 缘源愿猿 原 园郾 缘源愿苑
甲基化总条带数
栽燥贼葬造 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 遭葬灶凿泽
园郾 猿远远怨 员郾 园园园园 原 园郾 缘苑远远 园郾 缘愿园苑 园郾 缘愿员园
总甲基化率
栽燥贼葬造 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 则葬贼藻
原 园郾 员员猿缘 园郾 愿愿员员 员郾 园园园园 员郾 园园园园 员郾 园园园园
半甲基化率
匀藻皂蚤皂藻贼赠造葬贼藻凿 则葬贼藻
园郾 员缘圆怨 原 园郾 园源猿员 原 园郾 园怨怨猿 员郾 园园园园 原 员郾 园园园园
全甲基化率
云怎造造 皂藻贼赠造葬贼蚤燥灶 则葬贼藻
原 园郾 员缘员源 园郾 愿圆缘远 园郾 怨缘圆猿 原 园郾 猿怨愿圆 员郾 园园园园
第一主成分 赠员云蚤则泽贼 责则蚤灶糟蚤责葬造 糟燥皂责燥灶藻灶贼 赠员
第二主成分 赠圆杂藻糟燥灶凿 责则蚤灶糟蚤责葬造 糟燥皂责燥灶藻灶贼 赠圆
特征值
耘蚤早藻灶增葬造怎藻泽
圆郾 愿圆愿源 员郾 猿员员怨
贡献率
悦燥灶贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 则葬贼蚤燥
缘远郾 缘远愿苑 圆远郾 圆猿苑猿
总贡献率
栽燥贼葬造 糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 则葬贼蚤燥
缘远郾 缘远愿苑 愿圆郾 愿园远园
摇 摇 注院主成分方程摇 赠员 越 园郾 园员员缘曾员 垣 园郾 缘源苑员曾圆 垣 园郾 缘苑缘怨曾猿 原 园郾 员苑园圆曾源 垣 园郾 缘愿猿员曾缘 摇 赠圆 越 园郾 苑缘园圆缘曾员 垣 园郾 猿源园圆曾圆 原 园郾 园园缘远曾猿 垣 园郾 缘源园远曾源 原 园郾 员苑园愿曾缘
摇 摇 根据因子得分函数计算出各样本的因子得分袁赠员
和 赠圆 的二维排序表明院员圆 个不同单株的叶籽银杏可
以分为 猿 类渊图 圆冤院第玉类包括福建漳平尧广西兴安尧
山东济南尧山东沂源尧山东泰安尧日本尧陕西白河尧福建
三明尧四川旺苍的单株遥 甲基化事件发生的频率在
缘郾 圆猿豫 耀 猿苑郾 源猿豫 之间袁总甲基化水平在 圆远郾 源圆豫 耀
源圆郾 远远豫之间袁说明 愿 个单株间具有较近的亲缘关系遥
第域类包括自河南邓州的单株遥 河南邓州的 阅晕粤 半
甲基化率为 员员郾 苑远豫 袁全甲基化比率为 员怨郾 猿远豫 袁半甲
基化水平与全甲基化水平相近遥 第芋类为湖南洞口和
湖北安陆的单株遥 甲基化事件发生的频率为 缘郾 苑员豫
耀远园郾 园愿豫 袁总甲基化水平在 远员郾 园远豫 耀 远缘郾 苑怨豫之间遥
湖南湖北的两个单株具有较近的亲缘关系遥
摇 摇 员员 个不同单株的叶籽银杏进行聚类分析袁结果表
明当距离为 员郾 园 时袁员员 个叶籽银杏单株聚为 猿 类渊图
猿尧表 猿冤袁与主成分分析一致遥 其中第玉类中各单株间
存在一定的差异袁当距离为 园郾 愿 时又形成 猿 个小类袁分
别是福建漳平尧广西兴安尧济南淌豆寺的单株为一小
类曰山东沂源尧日本的单株聚为第二小类曰福建三明尧陕
西白河尧四川旺苍的单株聚为第三小类曰第域类为河南
源园源
摇 源 期 不同单株叶籽银杏 阅晕粤甲基化水平与模式的 酝杂粤孕分析
图 圆摇 叶籽银杏主成分分析中前两个主成分的散点图
云蚤早援 圆摇 孕造燥贼泽 燥枣 贼澡藻 枣蚤则泽贼 贼憎燥 责则蚤灶糟蚤责葬造 枣葬糟贼燥则泽 枣则燥皂 孕则蚤灶糟蚤责葬造 糟燥皂责燥灶藻灶贼 葬灶葬造赠泽藻泽 燥枣
郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪
图 猿摇 不同单株的叶籽银杏聚类图
云蚤早 援 猿摇 悦造怎泽贼藻则 凿蚤葬早则葬皂 燥枣 员员 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 蕴援 增葬则援 藻责蚤责澡赠造造葬 酝葬噪援 孕造葬灶贼泽
邓州的单株曰第芋类包括湖南洞口和湖北安陆的单株遥
分析表明不同单株间 阅晕粤甲基化存在显著的差异袁甲
基化水平一致的聚为一类袁且 阅晕粤甲基化与地理来源
关系不密切遥
猿摇 讨论
本研究通过 猿远 对引物组合筛选获得了 员源 对有效
的引物组合袁检测到不同单株叶籽银杏 阅晕粤甲基化条
带存在极显著差异袁正常银杏 阅晕粤甲基化水平低于叶
籽银杏 阅晕粤 甲基化水平袁结果与李际红咱员远暂结论相一
致遥 检测到甲基化修饰位点 员园源愿郾 员 个袁叶籽银杏甲基
化修饰比例为 猿愿郾 远员豫 渊全甲基化 圆苑郾 猿源豫 尧半甲基化
员员郾 圆苑豫 冤袁正常银杏甲基化修饰比例为 猿园郾 苑怨豫 渊全甲
基化 圆员郾 愿圆豫 尧半甲基化 愿郾 怨苑豫 冤与李际红叶籽银杏基
因组中 阅晕粤 甲基化比例至少有 源愿郾 苑豫 渊全甲基化
猿源豫 尧半甲基化 员源郾 苑豫 冤尧银杏 源源郾 园豫 渊全甲基化
猿圆郾 愿豫 尧半甲基化 员员郾 圆豫 冤相比袁甲基化比例略低袁可
缘园源
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
能与试验材料年龄有一定的关系遥 由表 圆 中可以看出
福建漳平和福建三明两个单株的 阅晕粤 甲基化水平略
低于正常银杏 阅晕粤 甲基化水平袁其他叶籽银杏 阅晕粤
甲基化水平均高于正常银杏 阅晕粤甲基化水平袁其原因
有待于进一步研究遥 不同物种或同一物种的不同生长
时期 阅粤晕 甲基化有很大的差异袁在澡葬灶早 等咱员愿暂报道袁
酝杂粤孕技术在植物研究中对于基因组 阅晕粤 甲基化的
检出率在 源郾 苑豫 耀源缘豫之间袁本研究结果与脐橙 源郾 苑豫
耀员缘郾 园豫 咱员员暂 袁辐射松 猿园豫 耀 猿缘豫 咱员圆暂 袁杉木 圆园郾 远远豫 耀
圆缘郾 源园豫 咱员猿暂 袁苏铁 猿远郾 园缘豫 耀 缘苑郾 源源豫 咱员缘暂相比 阅晕粤 甲
基化比率较高袁充分反映了物种间 阅晕粤甲基化的差异
性遥
通过主成分分析绘制的散点图和聚类分析的树状
图分类结果一致遥 全甲基化高于半甲基化水平符合一
般植物中 阅晕粤甲基化的规律咱员员 原 员远暂 袁四川旺苍和湖北
安陆的单株全甲基化率是半甲基化率的 苑 耀 员园 倍袁其
他单株间半甲基化和全甲基化水平差距稍小遥 由系统
聚类分析知 阅晕粤甲基化的差异与地理位置关系不密
切袁叶籽银杏不同单株间 阅晕粤 甲基化具有极显著差
异袁在一定程度上说明叶籽银杏具有丰富的遗传多样
性袁同时 运藻赠贼藻等咱猿员暂报道棉花 阅晕粤甲基化多样性确实
反映的是遗传多样性遥
阅晕粤甲基化修饰在调节基因表达尧细胞分化及系
统发育等过程中起着重要生物学功能咱员苑暂 遥 真核生物
阅晕粤甲基化还参与调控基因的时空表达袁与植物的生
长尧发育尧分化和形态建成密切相关袁如果 阅晕粤甲基化
水平降低将直接导致植物发育异常咱圆园袁猿圆暂 遥 允葬糟燥遭泽藻灶
等咱猿猿暂及王炳良等咱猿源暂用 缘 原氮杂胞苷渊缘 原 葬扎葬悦冤处理拟
南芥尧水稻尧萝卜等实验中发现袁阅晕粤 甲基化水平降
低袁生长发育表现出许多异常袁如植株矮化尧叶片变小尧
植株成丛状尧开花时间缩短等袁而且许多特征可以遗传
给后代遥 本研究检测到叶籽银杏甲基化事件的发生频
率为 员员郾 圆苑豫 耀圆苑郾 猿源豫 袁总甲基化率为 猿愿郾 远员豫 袁正常
银杏甲基化修饰比例为 猿园郾 苑怨豫 遥 从甲基化水平看叶
籽银杏甲基化比例高于正常银杏甲基化比例袁符合李
际红咱员远暂推测的叶籽银杏的 阅晕粤甲基化修饰机理支持
叶籽银杏形成的返祖学说袁因此叶籽银杏这一特异种
质的变异可能与 阅晕粤甲基化有关袁后续研究中还需要
进行甲基化差异位点和修饰位点的分离尧克隆和基因
功能分析袁才能更深入的探讨 阅晕粤甲基化和叶籽银杏
的变异机制遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 匀燥造造蚤凿葬赠 砸援 酝藻糟澡葬灶蚤泽皂 枣燥则 贼澡藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 早藻灶藻 糟燥灶贼则燥造 凿怎则蚤灶早
凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 咱允暂 援 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 砸藻增蚤藻憎泽袁 员怨怨园袁 远缘院 源猿员 原 源苑员
咱 圆 暂摇 杂葬灶贼燥泽 运 云袁 酝葬扎扎燥造葬 栽 晕袁 悦葬则增葬造澡燥匀 云援 栽澡藻 责则蚤皂葬 凿燥灶灶葬 燥枣
藻责蚤早藻灶藻贼蚤糟泽院 贼澡藻 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 遭赠 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶
咱允暂 援 月则葬扎蚤造蚤葬灶 允燥怎则灶葬造 燥枣 酝藻凿蚤糟葬造 葬灶凿 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 砸藻泽藻葬则糟澡袁 圆园园缘袁
猿愿院 员缘猿员 原 员缘源员
咱 猿 暂摇 杂葬泽葬噪蚤 匀袁 酝葬贼泽怎蚤 再援 耘责蚤早藻灶藻贼蚤糟 藻增藻灶贼泽 蚤灶 皂葬皂皂葬造蚤葬灶 早藻则皂鄄糟藻造造
凿藻增藻造燥责皂藻灶贼院 则藻责则燥早则葬皂皂蚤灶早 葬灶凿 遭藻赠燥灶凿 咱 允 暂 援 晕葬贼怎则藻 砸藻增蚤藻憎泽
酝燥造藻糟怎造葬则 悦藻造造 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园愿袁怨院 员圆怨 原 员源园援
咱 源 暂 摇 杂躁葬噪泽贼藻 晕 陨袁 杂躁葬噪泽贼藻 栽 郧援 孕燥泽泽蚤遭造藻 蚤灶增燥造增藻皂藻灶贼 燥枣 阅晕粤 遭则藻葬噪泽袁 蚤灶
藻责蚤早藻灶藻贼蚤糟 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 糟藻造造 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 咱 允暂 援 砸怎泽泽蚤葬灶 允燥怎则灶葬造 燥枣
郧藻灶藻贼蚤糟泽袁圆园园苑袁源猿
咱 缘 暂摇 栽葬噪藻凿葬 杂袁 孕葬泽扎噪燥憎泽噪蚤 允援 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 藻责蚤早藻灶藻贼蚤糟
蚤灶澡藻则蚤贼葬灶糟藻 凿怎则蚤灶早 责造葬灶贼 早葬皂藻贼燥早藻灶藻泽蚤泽 咱 允暂 援 悦澡则燥皂燥泽燥皂葬袁 圆园园远袁
员员缘院 圆苑 原 猿缘援
咱 远 暂 摇 樊宏泓袁李廷春袁李正鹏袁林 毅袁蔡永萍袁金 青援 孕耘郧 模拟干旱胁
迫对石斛 阅晕粤 表观遗传变化的 酝杂粤孕 分析咱 允暂 援 核农学报袁
圆园员员袁 圆缘渊圆冤 院猿远猿 原 猿远愿
咱 苑 暂摇 再葬灶早 悦 再袁 匀怎葬灶早 再 月袁 栽葬灶早 在 载袁 蕴怎 蕴 酝袁 蕴蚤怎 蕴援 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣
阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 蚤灶 泽蚤遭造蚤灶早 贼燥遭葬糟糟燥 渊晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂冤
糟怎造贼蚤增葬则泽 咱允暂 援 粤枣则蚤糟葬灶 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园员员袁 员园 渊远冤院 愿苑源
原 愿愿员
咱 愿 暂摇 刘福平袁陈淳袁张文惠援 蝴蝶兰类原球茎 阅晕粤总甲基化水平测
定方法的研究咱允暂 援核农学报袁圆园员园袁圆源渊源冤院苑缘员 原 苑缘远
咱 怨 暂摇 吴 炯袁 郭 玮援 阅晕粤甲基化检测方法的进展咱允暂 援检验医学袁圆园员园袁
员园渊圆缘冤院 愿圆圆 原 愿圆缘
咱员园暂摇 王子成袁李忠爱袁 李锁平援 酝杂粤孕技术及其在植物上的应用咱允暂 援
生物技术通报袁 圆园园远袁员怨缘 原 员怨远
咱员员暂摇 洪 柳袁邓秀新援 应用酝杂粤孕技术对脐橙品种进行 阅晕粤甲基化分
析咱允暂 援中国农业科学袁 圆园园缘袁 猿愿 渊员员冤院 圆猿园员 原 圆猿园苑
咱员圆暂摇 云则葬早葬 酝 云袁 悦葬灶葬造 酝 允袁 砸燥凿则蚤早怎藻扎 砸援 孕澡葬泽藻鄄糟澡葬灶早藻 则藻造葬贼藻凿
藻责蚤早藻灶藻贼蚤糟 葬灶凿 责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬灶早藻泽 蚤灶 孕蚤灶怎泽 则葬凿蚤葬贼葬 阅援 阅燥灶援 咱允暂 援
孕造葬灶贼葬袁 圆园园圆袁 圆员缘 渊源冤院 远苑圆 原 远苑愿
咱员猿暂摇 洪 舟袁施季森袁郑仁华袁杨立伟袁陈孝丑袁翁玉榛袁黄金华援 杉木亲
本自交系及其杂交种 阅晕粤甲基化和表观遗传变异咱 允暂 援 分子植
物育种袁 圆园园怨袁 苑 渊猿冤 院 缘怨员 – 缘怨愿
咱员源暂摇 胡宝全袁王春国袁方成泉袁宋文芹袁林盛华援不同倍性渊圆 伊 尧猿 伊 尧源
伊 冤鸭梨基因组 阅晕粤 甲基化水平与模式分析咱 允暂 援 南开大学学
报院自然科学版援 圆园员员袁 源源 渊圆冤院 猿员 原 猿苑
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