全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员圆袁圆远渊远冤院园愿苑怨 耀 园愿愿猿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员员鄄员员鄄员愿摇 接受日期院圆园员圆鄄园缘鄄园愿
基金项目院河南省科技攻关项目渊员员圆员园圆猿员园源源猿冤
作者简介院贾翠英渊员怨苑源鄄冤袁女袁河南三门峡人袁讲师袁博士袁研究方向为微生物资源开发与利用遥 耘鄄皂葬蚤造院 枣则蚤藻灶凿源圆远岳 泽燥澡怎援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员圆冤园远鄄园愿苑怨鄄园缘
紫外诱变与羧甲基半胱氨酸复合筛选高产 蕴 原精氨酸菌株
贾翠英摇 张玉辉摇 吴志洋
渊河南科技学院生命科学学院袁河南 新乡摇 源缘猿园园猿冤
摘摇 要院为获得 蕴 原精氨酸高产菌株袁以实验室初步鉴定为格兰氏阳性细菌袁菌落特征为金黄色的产全氨
基酸菌株为出发菌株袁利用紫外线渊哉灾冤诱变和精氨酸结构类似物羧甲基半胱氨酸渊羧甲司坦冤进行复
合筛选袁得到 员 株 蕴 原精氨酸高产诱变菌株遥 对所筛选到的高产诱变菌株进行 员远园则 辕 皂蚤灶袁 猿园益摇瓶发酵
怨园澡袁测得该菌株 蕴 原精氨酸的产量为 苑愿郾 苑怨滋早 辕 猿皂造袁与出发菌株相比袁蕴 原精氨酸的产量提高约 猿郾 苑员 倍遥
经多批次发酵试验进一步验证袁所筛选的高产 蕴 原精氨酸菌株具有较好的遗传稳定性袁此研究不仅对筛
选 蕴 原精氨酸高产菌株具有一定参考和借鉴意义袁对筛选其他类型氨基酸高产菌株也可提供一定参考遥
关键词院蕴鄄精氨酸曰高产菌株曰紫外线诱变曰复合筛选
杂悦砸耘耘晕陨晕郧 韵云 蕴鄄粤砸郧陨晕陨晕耘 匀陨郧匀 孕砸韵阅哉悦栽陨韵晕 杂栽砸粤陨晕 哉杂陨晕郧
哉灾 陨砸砸粤阅陨粤栽陨韵晕 粤晕阅 悦粤砸月韵载再酝耘栽匀再蕴鄄蕴鄄悦再杂栽耘陨晕耘 悦韵酝孕蕴耘载耘阅 酝耘栽匀韵阅
允陨粤 悦怎蚤鄄赠蚤灶早摇 在匀粤晕郧 再怎鄄澡怎蚤摇 宰哉 在澡蚤鄄赠葬灶早
渊杂糟澡燥燥造 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 匀藻灶葬灶 陨灶泽贼蚤贼怎藻 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 载蚤灶曾蚤葬灶早袁 匀藻灶葬灶摇 源缘猿园园猿冤
粤遭泽贼则葬糟贼院陨灶 燥则凿藻则 贼燥 燥遭贼葬蚤灶 葬 澡蚤早澡藻则 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 泽贼则葬蚤灶 燥枣 蕴鄄葬则早蚤灶蚤灶藻袁 葬 郧则葬皂鄄责燥泽蚤贼蚤增藻 泽贼则葬蚤灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 遭赠 燥怎则 造葬遭 憎葬泽
怎泽藻凿 葬泽 葬灶 蚤灶蚤贼蚤葬造 泽贼则葬蚤灶 蚤灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠援 栽澡藻 蚤灶蚤贼蚤葬造 泽贼则葬蚤灶 澡葬泽 葬 枣造燥则葬 糟燥造燥灶赠 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟袁 葬灶凿 蚤贼 糟葬灶 责则燥凿怎糟藻 贼澡藻 憎澡燥造藻
葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽援 哉造贼则葬增蚤燥造藻贼 蚤则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 葬灶凿 燥灶藻 泽贼则怎糟贼怎则葬造 葬灶葬造燥早 糟葬造造藻凿 悦葬则遭燥曾赠皂藻贼澡赠造鄄蕴鄄悦赠泽贼藻蚤灶藻 燥枣 葬则早蚤灶蚤灶藻 憎藻则藻 怎泽藻凿 贼燥
泽藻造藻糟贼 澡蚤早澡藻则 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 泽贼则葬蚤灶袁 枣蚤灶葬造造赠 葬 责则燥皂蚤泽蚤灶早 澡蚤早澡藻则 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 泽贼则葬蚤灶 憎葬泽 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿袁 灶葬皂藻凿 葬泽 皂怎贼葬灶贼鄄猿援 栽澡藻
枣藻则皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 怎灶凿藻则 贼澡藻 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶 燥枣 员远园则 辕 皂蚤灶 葬灶凿 猿园益 枣燥则 怨园澡袁 贼澡藻 葬皂燥怎灶贼 燥枣 蕴鄄葬则早蚤灶蚤灶藻
憎葬泽 苑愿郾 苑怨滋早 辕 猿皂造袁 憎澡蚤糟澡 憎葬泽 葬遭燥怎贼 猿郾 苑员 贼蚤皂藻泽 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 蚤灶蚤贼蚤葬造 泽贼则葬蚤灶援 酝怎贼葬灶贼鄄猿 憎葬泽 葬责责则燥增藻凿 贼燥 遭藻 葬
责则燥皂蚤泽蚤灶早 泽贼则葬蚤灶 憎蚤贼澡 遭藻贼贼藻则 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 泽贼葬遭蚤造蚤贼赠 遭赠 葬 泽藻则蚤藻泽 燥枣 枣藻则皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽援 栽澡蚤泽 泽贼怎凿赠 糟燥怎造凿 责则燥增蚤凿藻 泽燥皂藻
则藻枣藻则藻灶糟藻泽 枣燥则 泽糟则藻藻灶蚤灶早 葬则早蚤灶蚤灶藻 责则燥凿怎糟藻则 泽贼则葬蚤灶袁 葬灶凿 早蚤增藻 泽燥皂藻 蚤皂责燥则贼葬灶贼 怎泽藻泽 枣燥则 泽藻造藻糟贼蚤灶早 燥贼澡藻则 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 责则燥凿怎糟藻则
泽贼则葬蚤灶援
运藻赠 憎燥则凿泽院蕴鄄葬则早蚤灶蚤灶藻曰 澡蚤早澡藻则 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 泽贼则葬蚤灶曰 哉灾 蚤则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶曰 糟燥皂责造藻曾藻凿 泽糟则藻藻灶蚤灶早
摇 摇 天然精氨酸为 蕴 原型袁从水中结晶的产物含两分
子结晶水袁在乙醇中结晶的则为无水物咱员暂 遥 蕴 原精氨
酸是一种重要的半必需氨基酸咱圆暂 袁是合成蛋白质和肌
酸的重要原料袁也是生物体尿素循环中的重要代谢产
物咱猿暂 遥 蕴 原精氨酸在医药和食品工业中有着广泛的应
用咱圆暂 遥
目前国际上发酵法生产 蕴 原 精氨酸产酸水平较
高袁而国内主要依靠水解蛋白生产袁操作环境差尧收率
低尧成本高袁不适合大规模生产袁并且水解产品品质较
差袁不符合医药用标准袁这也是我国氨基酸生产的野瓶
颈冶 咱员暂 袁我国每年仅在进口 蕴 原精氨酸 员 个产品上的费
用就达 源园 耀 缘园 亿元人民币遥 现在国内发酵法生产 蕴
原精氨酸的研究仅限于实验室水平袁与国际技术差距
较大袁因此选育 蕴 原精氨酸高产菌株并优化其发酵工
怨苑愿
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
艺有着重要的意义咱源袁缘暂 遥 以微生物自然变异为基础的
生产选种机率较低袁一个基因的自然突变频率仅 员园 原远
耀 员园 原员园左右袁而人工诱变可大大提高微生物的突变
率袁从而可更加快速地筛选出各种类型的突变株袁用于
生产和研究咱苑暂 遥 迄今为止以诱发突变为基础的育种袁
是国内外提高菌种产量尧性能的主要手段咱远暂 遥 常用的
诱变方法可分为物理诱变和化学因子诱变院物理诱变
如紫外线咱愿暂 尧载 射线咱怨暂 尧酌 射线咱员园暂及快中子咱员员暂等袁其
中使用最方便且十分有效的是紫外线曰化学因子诱变
如烷化剂尧碱基结构类似物尧羟胺尧吖啶色素等遥 结构
类似物是指一些和细菌体内氨基酸尧嘌呤尧维生素等代
谢产物结构相类似的物质咱怨暂 袁把菌种接种在含有一定
浓度结构类似物的培养基上时袁菌体的生长和产精氨
酸就受到抑制袁其原因主要是抑制精氨酸酶的合成袁从
而可以进行突变株的筛选咱员圆 耀 员缘暂 遥
本试验所用的原始出发菌株是实验室采用阿须贝
培养基筛选得到的 员 株产全氨基酸的菌种袁对原始出
发菌株进行紫外线渊哉灾冤诱变袁并用不同浓度精氨酸的
结构类似物羧甲基半胱氨酸渊羧甲司坦冤为筛选条件袁
通过逐级的筛选最终得到 蕴 原精氨酸的高产菌株袁与
原始出发菌株相比袁诱变选育得到的最终突变株产 蕴
原精氨酸的能力显著提高遥 本试验采用紫外线诱变和
精氨酸的结构类似物羧甲基半胱氨酸复合筛选袁以期
获得高产突变株袁并为获得高产氨基酸菌株提供一定
的参考方法和借鉴遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验菌株
试验所用菌株为本实验室分离保藏的 缘 株产全氨
基酸菌袁实验室将其命名为菌株 匝粤 原 员袁菌株 匝粤 原 圆袁
菌株 匝粤 原 猿袁菌株 匝粤 原 源 和菌株 匝粤 原 缘遥 其中菌株
匝粤 原 员 特征为金黄色短杆状袁革兰氏染色阳性曰菌株
匝粤 原圆 特征为粉色球状袁革兰氏染色阳性曰菌株 匝粤 原
猿 特征为乳白色微球状袁革兰氏染色阳性曰菌株 匝粤 原 源
特征为微黄色杆状袁革兰氏染色阳性曰菌株 匝粤 原 缘 特
征为白色球状袁革兰氏染色阳性遥
员郾 圆摇 培养基
斜面种子活化培养基渊早 辕 蕴冤院 葡萄糖 员园袁牛肉膏
员园袁蛋白胨 员园袁琼脂粉 圆园袁晕葬悦员 缘袁责匀 苑郾 园 耀 苑郾 圆遥
阿须贝渊粤泽澡遭赠冤无氮筛选培养基渊 早 辕 蕴冤院 甘露醇
员园袁琼脂 圆园袁运匀圆孕韵源 园郾 圆袁酝早杂韵源窑苑匀圆韵 园郾 圆袁晕葬悦造 园郾 圆袁悦葬杂韵源窑圆匀圆韵 园郾 员袁渊晕匀源冤圆杂韵源 员愿袁责匀 苑郾 园 耀 苑郾 圆遥
羧甲基半胱氨酸筛选培养基渊羧甲司坦冤 渊 早 辕 蕴冤院
葡萄糖 员园袁渊晕匀源冤圆 杂韵源 猿袁运匀圆孕韵源员袁运圆匀孕韵源窑猿匀圆韵 圆袁酝早杂韵源窑苑匀圆 园 园郾 缘袁生物素 园郾 园缘袁琼脂 圆园袁不同浓度渊园郾 缘袁员袁员郾 缘袁圆袁圆郾 缘 和 猿皂早 辕 皂造冤的羧甲基半胱氨酸渊羧
甲司坦冤袁责匀 苑援 韵 耀苑郾 圆遥
基础培养基渊早 辕 蕴冤院参考文献咱远暂遥
液体种子培养基渊早 辕 蕴冤院参考文献咱苑暂遥
发酵培养基渊早 辕 蕴冤院葡萄糖 员圆园袁渊晕匀源冤 扎杂韵源 源缘袁玉
米浆 圆园袁运匀圆孕韵源员园袁酝早杂韵源窑苑匀圆韵 缘袁碳酸钙 猿园袁责匀 苑郾 园耀 苑郾 圆遥
员郾 猿摇 诱变与筛选
员郾 猿郾 员摇 出发菌株的筛选摇 在无菌条件下袁将实验室保
藏于培养皿中的 缘 株产全氨基酸菌落袁分别转接入斜
面种子活化培养基中袁猿园益恒温培养 圆园澡袁再分别接入
阿须贝无氮筛选培养基中袁猿园益下培养 猿园澡后袁挑取能
够在阿须贝无氮筛选培养基中生长的菌落袁转接到基
础培养基中袁猿园益恒温培养 圆源澡袁得到 缘 个出发菌株袁
并编号为菌落 员 耀 缘遥
将所得的出发菌株分别接入内盛 猿园皂造 液体种子
培养基的 圆缘园皂造三角瓶中袁员远园则 辕 皂蚤灶 猿园益恒温振荡培
养 圆园澡制备液体种子遥 然后袁以 员园豫的接种量接入内
盛 缘园皂造发酵培养基的 圆缘园皂造三角瓶中袁员远园则 辕 皂蚤灶 猿园益
恒温振荡培养 怨园澡袁测定各出发菌株的精氨酸产量袁每
个出发菌株发酵试验设置 猿 个平行试验袁取平均值计
算精氨酸含量遥 最后以精氨酸产量最高者作为最终的
出发菌株遥
员郾 猿郾 圆摇 紫外线诱变摇 将获得的最终出发菌株接种于
斜面种子活化培养基中进行 猿园益恒温培养 圆园澡 活化袁
挑取活化好的菌种袁接种于内盛 猿园皂造液体种子培养基
的 圆缘园皂造 三角瓶中袁员远园则 辕 皂蚤灶 猿园益恒温振荡培养 员圆澡
后袁取 员皂造菌悬液按照梯度稀释法稀释为 员园 原猿袁员园 原源袁
员园 原 缘和 员园 原远 源 个浓度袁吸取不同稀释梯度的菌悬液
园郾 圆皂造分别涂布在基础培养基上袁立即于 员愿宰 紫外灯
下诱变 源缘泽袁后涂布在基础培养基中袁猿园益恒温培养
圆源澡计算菌落数袁以未经紫外线诱变菌株的涂布培养
结果为对照袁统计菌落数袁计算紫外诱变后的致死率袁
确定最佳的诱变菌悬液浓度遥
将确定的最佳诱变浓度菌悬液涂布在基础培养基
上袁员愿宰紫外灯下诱变 员缘袁猿园袁源缘袁远园袁苑缘 和 怨园泽袁诱变
结束后涂布培养计算菌落数袁求致死率遥 试验以不进
行紫外诱变的平板为对照袁并以致死率在 远园豫 耀 怨园豫
之间确定最佳诱变时间遥
员郾 猿郾 猿摇 羧甲基半胱氨酸浓度梯度筛选摇 将紫外线诱
变后的菌落用接种针无菌操作挑起后接入 员园皂造 无菌
水中按照梯度稀释法进行梯度稀释袁取稀释梯度为
园愿愿
摇 远 期 紫外诱变与羧甲基半胱氨酸复合筛选高产 蕴 原精氨酸菌株
员园 原缘菌悬液 园郾 圆皂造涂布在含有不同浓度渊园郾 缘袁员袁员郾 缘袁
圆袁圆郾 缘 和 猿皂早 辕 皂造冤羧甲基半胱氨酸渊羧甲司坦冤筛选培
养基上袁以未加入羧甲基半胱氨酸渊羧甲司坦冤的平板
为对照袁猿园益恒温培养 源愿澡袁每个浓度设 猿 个平行试
验袁最后根据培养皿中菌落数目求平均值袁确定羧甲基
半胱氨酸渊羧甲司坦冤的最适浓度遥
员郾 猿郾 源摇 诱变菌株发酵试验与高产突变株的筛选摇 将
复合诱变筛选所得菌株进行发酵试验袁试验条件为接
种量 愿豫 袁发酵温度 猿园益袁摇床转速 员远园则 辕 皂蚤灶袁装液体
积 缘园皂造袁发酵时间 怨园澡遥 每个诱变菌株发酵试验均设
置 猿 次平行袁最后取平均值计算精氨酸含量袁同时以未
诱变的原始出发菌株为对照袁根据精氨酸产量确定高
产突变菌株遥
员郾 源摇 高产突变株稳定性考察
将所得的高产突变株进行多批次重复发酵试验袁
试验条件为接种量 愿豫 耀员园豫 袁发酵温度 猿园益 耀 猿缘益袁
摇床转速 员圆园 耀 员远园则 辕 皂蚤灶袁装液体积 缘园 耀 苑园皂造袁发酵时
间 猿 耀 缘凿遥 每批次发酵试验均设置 猿 次平行袁最后取
平均值计算精氨酸含量袁以未诱变的原始出发菌株为
对照遥
员郾 缘摇 精氨酸含量测定
将发酵液 猿缘园园则 辕 皂蚤灶 离心 员缘皂蚤灶袁稀释 员缘 倍后取
猿皂造放入试管中袁依次加入 员源豫 晕葬韵匀 员皂造袁正丙醇
员皂造袁标准显色液 员郾 缘皂造袁振荡混匀袁猿园益水浴 员缘皂蚤灶袁波
长 缘猿园灶皂下测定吸光值袁依照标准曲线计算 蕴 原精氨
酸产量遥 精氨酸标准曲线参考文献咱员远 耀 员愿暂中的方
法进行绘制遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 出发菌株的确定
经阿须贝无氮筛选培养基共筛选出 缘 个菌落具有
产全氨基酸的能力袁经初步精氨酸发酵试验袁结果如图
员 所示遥 由图 员 可知袁菌落 员 精氨酸产量最高袁其值为
苑郾 员员滋早 辕 皂造袁因此袁选择菌落 员 作为本试验的出发菌
株遥
圆郾 圆摇 紫外线诱变条件的确定
圆郾 圆郾 员摇 紫外诱变最适菌体浓度的确定摇 以菌落 员 为
出发菌株袁对其不同浓度的菌悬液进行 员愿宰紫外灯下
源缘泽诱变袁诱变结果如表 员 所示遥 由表 员 可知袁随着菌
悬液浓度的降低袁致死率逐渐升高袁由于高剂量可能造
成更多负突变株袁所以选择致死率为 远园豫 耀 怨园豫的剂
量诱变袁即本试验确定最适的诱变菌悬液浓度为
员园 原缘遥
图 员摇 不同出发菌株的 蕴 原精氨酸产量
云蚤早援 员摇 再蚤藻造凿 燥枣 蕴鄄粤则早蚤灶蚤灶藻 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 蚤灶蚤贼蚤葬造 泽贼则葬蚤灶泽
表 员摇 紫外诱变最适菌悬液浓度的确定
栽葬遭造藻 员摇 阅藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 遭葬糟贼藻则蚤葬造 泽怎泽责藻灶泽蚤燥灶
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 枣燥则 哉灾 蚤则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶
浓度梯度
早则葬凿蚤藻灶贼
菌落数
糟燥造燥灶赠渊晕冤
致死率
造藻贼澡葬造蚤贼赠 渊豫 冤
不稀释
灶燥 凿蚤造怎贼蚤燥灶 远愿 园
员园 原 猿 缘远 员远郾 远源
员园 原 源 源猿 猿远郾 苑远
员园 原 缘 员苑 苑缘
员园 原 远 愿 愿愿郾 愿圆
圆郾 圆郾 圆摇 紫外诱变最适诱变时间的确定摇 以菌悬液浓
度 员园 原缘为最适诱变浓度袁进行 员愿宰紫外灯下不同时间
诱变袁诱变时间与菌落数变化关系如图 圆 所示遥 由图
圆 可知袁随着诱变时间的延长袁存活菌落数逐渐减少袁
致死率逐渐增加袁依据致死率为 远园豫 耀 怨园豫 袁确定最
适诱变时间为 远园泽袁此时致死率为 苑圆郾 苑豫 遥
圆郾 猿摇 羧甲基半胱氨酸筛选浓度的确定
将经紫外线诱变的菌落稀释至 员园 原缘制备菌悬液袁
取 园郾 圆皂造菌悬液涂布在含不同浓度羧甲基半胱氨酸
渊羧甲司坦冤的筛选培养基上袁以不加羧甲基半胱氨酸
为对照袁猿园益恒温培养 源愿澡袁统计菌落数袁确定羧甲基
半胱氨酸的浓度袁结果如图 猿 所示遥
由图 猿 可知袁随着羧甲基半胱氨酸渊羧甲司坦冤浓
度的增加袁存活菌落数逐渐减少遥 培养基中羧甲基半
胱氨酸浓度高于 圆郾 园皂早 辕 皂造 时袁菌落几乎全部死亡袁浓
度低于 圆郾 园皂早 辕 皂造 时袁菌落数较多遥 为更好地筛选出
结构类似物抗性突变株袁试验确定羧甲基半胱氨酸
渊羧甲司坦冤的最适添加浓度为 圆郾 园皂早 辕 皂造袁此条件下
获得 猿 个菌落袁分别命名为诱变株 原 员袁 诱变株 原 圆 和
员愿愿
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
图 圆摇 最适紫外诱变时间的确定
云蚤早援 圆摇 阅藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 哉灾 蚤则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 贼蚤皂藻
诱变株 原猿遥
图 猿摇 最适羧甲基半胱氨酸浓度的确定
云蚤早援 猿摇 阅藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 燥责贼蚤皂葬造 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
枣燥则 悦葬则遭燥曾赠皂藻贼澡赠造鄄蕴鄄悦赠泽贼藻蚤灶藻
圆郾 源摇 诱变菌株发酵试验与高产突变株的获得
将筛选出的 猿 株诱变菌分别进行发酵试验袁结果
如图 源 所示遥 由图 源 可知袁所筛选的 猿 株突变株 蕴 原
精氨酸产量均明显高于原始出发菌株袁其中诱变株 原 猿
蕴 原精氨酸产量最高袁为 圆远郾 圆远滋早 辕 皂造袁 与出发菌株相
比产量提高了 猿郾 苑员 倍袁因此确定诱变株 原 猿 为高产 蕴
原精氨酸菌株遥
图 源摇 出发菌株与诱变菌株 蕴 原精氨酸产量比较
云蚤早援 源摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 蕴鄄粤则早蚤灶蚤灶藻 赠蚤藻造凿
枣则燥皂 蚤灶蚤贼蚤葬造 葬灶凿 皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶
圆郾 缘摇 高产突变株稳定性试验
对诱变株 原 猿 进行多批次重复发酵试验袁选取其
中的 远 批试验结果进行分析袁结果如表 圆 所示遥 由表
圆 可知袁诱变株 原 猿 具有较好的遗传稳定性袁其 蕴 原精
氨酸产量明显高于出发菌株袁提高倍数也基本维持在
猿郾 远 以上遥 另外不同操作条件下袁变异菌株与出发菌
株产 蕴 原精氨酸的量有所差异袁且提高倍数不等遥
表 圆摇 诱变株 原猿 产 蕴 原精氨酸稳定性试验结果
栽葬遭造藻 圆摇 砸藻泽怎造贼泽 燥枣 蕴鄄粤则早蚤灶蚤灶藻 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 泽贼葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 皂怎贼葬灶贼鄄猿
批次
泽藻则蚤藻泽
出发菌株
蚤灶蚤贼蚤葬造 泽贼则葬蚤灶
渊滋早 辕 皂造冤
诱变株 原 猿
皂怎贼葬灶贼鄄猿
渊滋早 辕 皂造冤
提高倍数
蚤灶糟则藻葬泽藻 贼蚤皂藻泽
试验参数和条件
藻曾责藻则蚤皂藻灶贼 责葬则葬皂藻贼藻则泽 葬灶凿 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶
员 苑郾 员圆 圆远郾 圆源 猿郾 远愿 接种量 愿豫 袁温度 猿园益袁摇床转速 员圆园则 辕 皂蚤灶袁装液体积 缘园皂造袁发酵时间 猿凿
圆 苑郾 猿怨 圆苑郾 苑员 猿郾 苑源 接种量 愿豫 袁温度 猿园益袁摇床转速 员源园则 辕 皂蚤灶袁装液体积 缘园皂造袁发酵时间 猿凿
猿 苑郾 愿员 圆愿郾 愿源 猿郾 远怨 接种量 愿豫 袁温度 猿园益袁摇床转速 员远园则 辕 皂蚤灶袁装液体积 缘园皂造袁发酵时间 猿凿
源 苑郾 源远 圆愿郾 圆源 猿郾 远圆 接种量 员园豫 袁温度 猿缘益袁摇床转速 员圆园则 辕 皂蚤灶袁装液体积 苑园皂造袁发酵时间 缘凿
缘 愿郾 园员 圆怨郾 缘怨 猿郾 苑源 接种量 员园豫 袁温度 猿缘益袁摇床转速 员源园则 辕 皂蚤灶袁装液体积 苑园皂造袁发酵时间 缘凿
远 愿郾 圆猿 猿园郾 远愿 猿郾 苑猿 接种量 员园豫 袁温度 猿缘益袁摇床转速 员远园则 辕 皂蚤灶袁装液体积 苑园皂造袁发酵时间 缘凿
圆愿愿
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员圆袁圆远渊远冤院园愿苑怨 耀 园愿愿猿
猿摇 讨论
精氨酸属于非支路代谢途径的终产物袁其合成途
径中第一尧第二步酶袁即乙酰谷氨酸合成酶和乙酰谷氨
酸激酶受到精氨酸的反馈抑制袁选育结构类似物抗性
突变株以解除 蕴 原精氨酸自身的反馈调节可使 蕴 原精
氨酸得以积累遥 羧甲基半胱氨酸的结构与 蕴 原精氨酸
结构基本一致袁因此袁羧甲基半胱氨酸可作为 蕴 原精氨
酸的结构类似物袁选育已经解除代谢途径中精氨酸反
馈调节的突变株遥
工业微生物的菌种选育在发酵工业中占有重要地
位袁是决定该发酵产品能否具有工业化生产价值及发
酵过程成败的关键遥 因此对工业微生物菌种生产具有
一定的要求院如在遗传上必须是稳定的曰易繁殖袁是纯
种袁不带杂菌及噬菌体曰种子生长旺盛尧迅速等等袁本试
验筛选到的高产株基本满足工业菌种生产要求遥 但由
于精氨酸生产菌株类型较多且各自的生长代谢条件不
同袁因此袁还需进一步对筛选的高产菌株发酵条件进行
深入研究袁以便最大限度地发挥高产菌株产 蕴 原精氨
酸的能力遥 此外袁由于精氨酸发酵为好氧发酵过程袁因
此溶氧对 蕴 原精氨酸产量有较大影响袁为更好地发挥
高产菌株的优势袁后续试验需要对其发酵条件进行深
入考察遥
源摇 结论
本文以实验室保藏的 员 株产全氨基酸菌株为出发
菌株袁经紫外线诱变和 蕴 原精氨酸的一种结构类似物
羧甲基半胱氨酸复合筛选袁获得 员 株产 蕴 原精氨酸能
力有较大提高的变异株袁通过初步多批次发酵试验袁表
明该变异株具有较好的遗传稳定性遥 在选育方法上袁
本文采用物理与化学诱变相结合的方法对菌种进行诱
变处理袁具有一定的新颖性袁可为其他类氨基酸高产株
的筛选提供一定参考和借鉴遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 李同华袁麻名文袁李福昌援 精氨酸及其研究进展咱 允暂 援 山东畜牧
兽医袁圆园园怨袁猿园渊员源愿冤院缘缘 原 缘远
咱 圆 暂摇 宰怎 郧援 粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽院 皂藻贼葬遭燥造蚤泽皂袁 枣怎灶糟贼蚤燥灶泽袁 葬灶凿 灶怎贼则蚤贼蚤燥灶 咱 允暂 援
粤皂蚤灶燥 粤糟蚤凿泽袁 圆园园怨袁 猿苑院员 原 员苑
咱 猿 暂摇 朱进伟袁张伟国援 蕴 原精氨酸发酵代谢调控的初步研究咱 允暂 援 食
品工业科技袁圆园园愿袁渊圆怨冤院员猿员 原 员猿远
咱 源 暂摇 郝 刚袁钱 和援发酵液中 蕴 原精氨酸定量检测的方法咱 允暂 援分析检
测袁 圆园园缘袁圆渊圆远冤院员愿源 原 员愿远
咱 缘 暂摇 黄继红袁王新春袁王华南袁赵俊平援 蕴 原 精氨酸高产菌株的选育
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