免费文献传递   相关文献

Biological Effect of Space Carrying in Paecilomyces lilacinus

航天搭载淡紫拟青霉的生物学效应


为探讨航天诱变对淡紫拟青霉的生物学效应的影响,利用淡紫拟青霉山东菌株搭载"神舟八号"宇宙飞船进行诱变处理.对筛选得到的30个淡紫拟青霉航天诱变菌株进行了形态、色素、菌丝及孢子形态、菌落生长速度、菌丝干重和产孢量等生物学检测,并测定了各诱变菌株对南方根结线虫卵和松材线虫卵的寄生率.结果表明,淡紫拟青霉航天诱变菌株各项生物学特性与原始菌株存在分化.航天诱变后的菌株菌落形态、色素和菌丝结构与原始菌株差异明显;菌落生长速度、菌丝干重和产孢量的负突变率均高于正突变率;菌株对松材线虫卵的致病力较低,寄生率最高的菌株Sd-m-20的寄生率仅为18.0%,菌株对根结线虫卵致病力较高,菌株 Sd-m-9,Sd-m-11,Sd-m-16,Sd-m-22和Sd-m-26对根结线虫卵的寄生率分别提高了14.48%、14.90%、12.35%、7.66%和17.45%,显著高于原始菌株的寄生率(78.3%).航天处理对淡紫拟青霉诱变效果显著,其优良突变菌株可能用于淡紫拟青霉对南方根结线虫的生物防治.


全 文 :摇 核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊员员冤院员怨猿猿 耀 员怨源园允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园员鄄员园摇 接受日期院圆园员源鄄园苑鄄园源
基金项目院国家自然科学基金渊猿员圆苑园远愿缘冤袁国家自然科学基金青年基金渊猿员员园园源苑苑冤
作者简介院王源袁女袁主要从事森林病理研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 凿葬皂蚤源源岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院朱天辉袁男袁教授袁主要从事森林病理研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 扎澡怎贼澡员圆圆苑岳 贼燥皂援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤员员鄄员怨猿猿鄄园愿
航天搭载淡紫拟青霉的生物学效应
王摇 源员袁圆 摇 汪来发圆 摇 王曦茁圆 摇 朱天辉员
渊员 四川农业大学林学院袁四川 雅安摇 远圆缘园员源员曰圆 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 辕
国家林业局森林保护学重点实验室袁北京摇 员园园园怨员冤
摘摇 要院为探讨航天诱变对淡紫拟青霉的生物学效应的影响袁利用淡紫拟青霉山东菌株搭载野神舟八号冶
宇宙飞船进行诱变处理遥 对筛选得到的 猿园 个淡紫拟青霉航天诱变菌株进行了形态尧色素尧菌丝及孢子
形态尧菌落生长速度尧菌丝干重和产孢量等生物学检测袁并测定了各诱变菌株对南方根结线虫卵和松材
线虫卵的寄生率遥 结果表明袁淡紫拟青霉航天诱变菌株各项生物学特性与原始菌株存在分化遥 航天诱
变后的菌株菌落形态尧色素和菌丝结构与原始菌株差异明显曰菌落生长速度尧菌丝干重和产孢量的负突
变率均高于正突变率曰菌株对松材线虫卵的致病力较低袁寄生率最高的菌株 杂凿鄄皂鄄圆园 的寄生率仅为
员愿郾 园豫 袁菌株对根结线虫卵致病力较高袁菌株 杂凿鄄皂鄄怨袁杂凿鄄皂鄄员员袁杂凿鄄皂鄄员远袁杂凿鄄皂鄄圆圆 和 杂凿鄄皂鄄圆远 对根结线虫
卵的寄生率分别提高了 员源郾 源愿豫 尧员源郾 怨园豫 尧员圆郾 猿缘豫 尧苑郾 远远豫和 员苑郾 源缘豫 袁显著高于原始菌株的寄生率
渊苑愿郾 猿豫 冤遥 航天处理对淡紫拟青霉诱变效果显著袁其优良突变菌株可能用于淡紫拟青霉对南方根结线
虫的生物防治遥
关键词院航天诱变曰淡紫拟青霉曰生物学特征曰生物防治
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 员员援 员怨猿猿
摇 摇 淡紫拟青霉渊孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽冤是一种常见的
土壤真菌袁同时也是一种重要的植物线虫卵寄生真
菌咱员暂 袁该菌对多种根结线虫渊酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 泽责责援 冤都有较
好的防效咱圆 原 源暂 遥 除寄生根结线虫外袁还能寄生孢囊线
虫渊匀藻贼藻则燥凿藻则葬冤尧小垫刃线虫渊栽赠造藻灶糟澡怎造怎泽冤和珍珠线虫
渊晕葬糟燥遭遭怎泽冤等植物寄生线虫咱缘 原 远暂 遥 近年来袁国内外纷
纷筛选淡紫拟青霉菌优良菌株进行开发尧研究及利
用咱苑 原 怨暂 遥 生产上常用菌株的性状不很理想袁如寄生率
不高尧菌剂防效偏低等袁从而限制了该菌的开发和利
用遥 因此袁需要选育符合生产要求的新菌株袁而诱变技
术是选育新的优良性状菌株的重要手段遥
航天诱变育种是将航天技术与传统的物理化学诱
变及分子技术等相结合的综合育种技术咱员园 原 员员暂 袁其核心
是利用空间环境的综合物理因素对生物的遗传特性产
生诱变袁获得地面常规方法较难得到的甚至是罕见的
突变种质材料和资源袁选育突破性的新品种咱员圆暂 遥 随着
人类对空间资源的开发利用和世界航天工业的发展袁
空间环境对生物体的效应研究受到重视袁国内外也将
研究重点放在空间微生物的诱变育种上咱员猿暂 遥 陈继红
等咱员源暂证明空间搭载诱变更能使刺糖多孢菌的产素能
力得到较大的提高袁是选育多杀菌素高产菌株的有效
方法遥 已有研究表明袁航天诱变的变异率高袁变异类型
丰富袁有益变异增多袁选择机会增加 咱员缘暂 遥 还有研究显
示袁一些农作物和微生物经过航天诱变袁正向突变率和
变异幅度大大高于常规诱变咱员猿袁 员远暂 遥 航天诱变育种技
术作为一种有效的诱变育种新技术已经在有效创造特
异突变基因资源和培育作物新品种方面显示出重要的
作用袁成为空间科学研究的重要组成部分咱员苑暂 遥
本研究以植物线虫生防菌淡紫拟青霉山东菌株为
材料进行航天搭载袁通过比较诱变菌株在生长尧产孢和
致病性等生物特性上的变异袁探讨航天诱变对淡紫拟
青霉的生物学效应及其对生防效果的影响遥
猿猿怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
员摇 材料和方法
员郾 员摇 材料
供试菌株淡紫拟青霉渊孕援 造蚤造葬糟蚤灶怎泽冤山东菌株袁是
山东寿光用于防治根结线虫的生产菌株遥 航天诱变返
地后袁于本实验室 源益保存袁备用遥 供试的南方根结线
虫 渊 酝援 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 冤 和 松 材 线 虫 渊 月怎则泽葬责澡藻造藻灶糟澡怎泽
曾赠造燥责澡蚤造怎泽冤由中国林业科学研究院森林生态环境与保
护研究所提供遥
员郾 圆摇 航天搭载
将用马铃薯葡萄糖脂培养基渊孕阅粤冤培养活化 苑凿
的菌丝块转移至无菌的 耘孕 管渊员郾 缘皂蕴冤袁封口后进行
航天搭载袁对照材料保存在 源益冰箱中遥
将淡紫拟青霉菌株分为两份袁一份留在地面常规
保存在 源益冰箱用作对照渊悦运冤曰另一份于 圆园员员 年 员员
月 员 日搭载野神舟八号冶宇宙飞船袁历时 远凿 圆园澡遥 返回
地面后袁及时取出材料低温保存遥
员郾 猿摇 突变体筛选
将经航天诱变处理后的淡紫拟青霉菌株和原始菌
株渊悦运冤分别制成孢子悬浮液袁稀释至 员园猿糟枣怎窑皂蕴 原员袁涂
布到直径为 怨糟皂 的 孕阅粤 平板上渊每皿加 园郾 员皂蕴 孢子
液冤袁圆缘 益恒温培养 源 耀 远凿 后袁观察单菌落大小尧形态
和正反面颜色袁挑选出与原始菌株渊悦运冤差别较明显的
菌株遥 编号为菌株来源地山东的简称野杂凿冶袁诱变的英
文首字母野皂冶袁之后加自然序列号遥
员郾 源摇 航天诱变效应的检测
以未搭载的淡紫拟青霉原始菌株作为对照渊悦运冤袁
比较航天诱变菌株在菌落形态尧色素变化尧生长速度尧
产孢量和致病力等方面的变异性遥
员郾 源郾 员摇 菌落的形态和色素变化观察摇 从已生长好的
孕阅粤平板上袁用直径为 远皂皂 的打孔器切菌落 猿 块于
缘皂蕴含 园郾 缘译吐温的溶液中袁充分震荡袁制成孢子悬浮
液遥 用灭好菌的直径为 远皂皂 的滤纸片蘸满孢子液放
在培养皿中央袁置于 圆缘益温箱中培养袁每个菌株重复 猿
次袁观察菌落的形态尧颜色遥
员郾 源郾 圆摇 菌丝及孢子形态观察 摇 将灭菌盖玻片以 源缘毅
角斜插在刚接过菌的培养基上袁圆缘 益恒温培养 猿 凿 后
将盖玻片拔出袁显微观察并拍照咱员愿暂 遥
员郾 源郾 猿摇 菌落生长速度测定摇 用灭菌的直径为 远皂皂 的
滤纸片蘸满孢子液放在培养皿中央袁置于 圆缘益温箱中
培养袁以十字交叉法每 猿凿 测菌落直径袁至有菌株长满
整皿时渊约 员缘凿冤停止测定遥 原始菌株为对照袁重复 猿
次遥
员郾 源郾 源摇 菌丝干重测定 摇 圆缘园皂蕴 锥形瓶装 缘园皂蕴 马铃
薯葡萄糖培养液培养基袁吸取 园郾 圆皂蕴渊孢子浓度为 员 伊
员园远 糟枣怎窑皂蕴 原员冤孢子悬浮液于每瓶培养基中袁恒温摇床
温度为 圆缘益袁转速为 员圆园则窑皂蚤灶 原员遥 培养 源凿 后袁从三角
瓶中倒出所有菌液袁离心倒上清袁将沉淀倒在滤纸上袁
远园益烘箱烘干至恒重袁称重遥
员郾 源郾 缘摇 产孢量测定摇 参照李绍锋等咱员愿暂的方法稍作改
动袁用打孔器在菌落中央到边缘的中点打取直径为
远皂皂 的菌饼 猿 块袁放入 缘皂蕴含 园郾 缘译吐温的溶液中袁充
分震荡袁用血球计数板测定孢子含量袁设 猿 次重复遥
员郾 源郾 远摇 致病力测定 摇 根结线虫卵的收集院将病根洗
净袁剪成 园郾 缘 糟皂的小段袁放入 缘园园 皂蕴 三角瓶内袁倒入
圆园园 皂蕴 员豫次氯酸钠溶液袁用力猛摇 猿 皂蚤灶袁将卵悬液
先过 圆园园 目筛袁再过 缘园园 目筛袁通过第一个筛子的卵留
在第二个筛子上袁用灭菌水调节袁使悬浮液中卵粒为
员园猿 个窑皂蕴 原员 咱员怨暂 遥 松材线虫卵的收集院将松材线虫培
养于灰葡萄孢上 缘 耀 苑 凿袁采用贝尔曼漏斗法分离线虫
并收集于无菌的离心管中袁离心袁去上清曰再用无菌水
清洗袁离心袁重复 猿 耀 缘 次袁最终保留 圆 耀 猿 皂蕴 线虫悬
浮液遥 将线虫悬浮液置于无菌的盖玻片及小培养皿
渊直径 圆郾 缘 耀 猿郾 园 糟皂冤 中袁于 圆缘 益 下产卵遥 源 耀 远 澡 后袁
将线虫彻底清洗干净袁获得纯净的松材线虫卵袁备
用咱圆园暂 遥
用无菌水配制 员园猿 个窑皂蕴 原员根结线虫卵粒悬浮
液袁在 远糟皂 的小培养皿中加入 园郾 缘皂蕴 该卵悬浮液袁
缘园滋蕴孢子液袁源郾 缘皂蕴无菌水遥 以未加孢液的小培养皿
作为对照遥 每个突变菌株各重复 猿 次遥 圆缘益培养 缘凿遥
镜检袁每皿随机计数 员园园 粒卵袁统计被寄生的卵数袁计
算各菌株的卵寄生率遥 卵寄生率 越 渊该菌株 猿 次重复
试验中被寄生卵数的平均值 辕 员园园冤 伊 员园园豫 遥 松材线
虫卵的致病力测定方法同上遥
员郾 源郾 苑摇 数据处理与分析摇 采用酝蚤糟则燥泽燥枣贼 耘曾糟藻造软件对
数据进行处理遥 应用 杂孕杂杂 员怨郾 园 处理数据袁采用单因
素分析检验不同菌株之间的差异遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 航天诱变对菌落形态和色素变化的影响
通过 缘 耀 远 代继代培养得到性状稳定菌株后袁观察
发现航天诱变菌株的菌落有明显的形态分化渊图 员尧图
圆冤袁可根据菌落形态和颜色变化将分化菌株分为 陨 耀
吁型 缘 种类型院陨 型菌落形态与原始菌株相比变化最
大袁菌落正面呈白色至淡粉色袁边缘紫红色曰菌落背部
色素生长初期为墨绿色袁怨凿后逐渐由墨绿色变为颜色
源猿怨员
摇 员员 期 航天搭载淡紫拟青霉的生物学效应
图 员摇 航天诱变淡紫拟青霉菌株的菌落正面形态类型
云蚤早援 员摇 栽澡藻 糟燥造燥灶赠 枣则燥灶贼 贼赠责藻泽 燥枣 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 泽责葬糟藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽
图 圆摇 航天诱变淡紫拟青霉菌株的菌落背面形态类型
云蚤早援 圆摇 栽澡藻 糟燥造燥灶赠 则藻增藻则泽藻 贼赠责藻泽 燥枣 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 泽责葬糟藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽
由内到外为黑 原棕红 原白色袁陨 型菌落共 愿 株袁占航天
诱变菌株的 圆远郾 苑豫 曰域型菌株色素较深为深紫色袁菌
落中心呈白色凸起状袁轮纹明显袁背部呈米黄色袁共 愿
株袁占航天诱变菌株的 圆远郾 苑豫 曰芋型菌株的菌落扁平袁
中部无凸起并出现辐射状分支袁背部白色袁边缘呈辐射
状分支袁共 源 株袁占航天诱变菌株的 员猿郾 猿豫 曰另外 怨 个
缘猿怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
菌株菌落的大小均与原始菌株相近袁但菌体较厚袁无同
心圆轮纹袁背部淡黄色袁为郁型袁占航天突变体菌落数
的 猿园豫 曰特别是袁菌株 杂凿鄄皂鄄猿 边缘不呈淡紫拟青霉菌
株圆形的形态特征袁而是呈现出类似花朵状边缘袁背部
淡黄色袁为吁型袁占航天诱变菌株的 猿郾 猿豫 遥
图 猿摇 航天诱变菌株 陨型菌落的环状菌丝结构
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 糟赠糟造蚤糟 皂赠糟藻造蚤怎皂 泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 贼赠责藻 陨 糟燥造燥灶赠 燥枣 泽责葬糟藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽
图 源摇 航天诱变淡紫拟青霉菌株的菌落生长速度
云蚤早援 源摇 灾葬则蚤藻贼蚤藻泽 燥枣 悦燥造燥灶赠 早则燥憎贼澡 则葬贼藻 燥枣 泽责葬糟藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽
圆郾 圆 菌丝及孢子形态观察
与原始菌株相比袁陨 型菌落的菌丝形态变化较大袁
出现菌丝缠绕形成的环状菌丝结构渊图 猿冤袁域型尧芋
型尧郁型和吁型的菌丝结构与原始菌株差异不明显曰缘
种类型的孢子形态与原始菌株差异不明显袁说明航天
诱变对孢子形态的改变作用较小或没有作用遥
圆郾 猿摇 航天诱变对菌落生长速度的影响
航天诱变菌株的生长速度出现了正负双向变异袁
变异幅度较大渊缘郾 愿缘 耀 愿郾 猿猿糟皂冤遥 培养 员缘凿 的菌落直
径大于或等于原始菌株的菌株有 愿 株袁占突变菌株的
圆远郾 苑豫 袁小于原始菌株的占 苑猿郾 猿豫 曰生长速度最快的
菌株为 杂凿鄄皂鄄猿袁培养 员缘凿 后菌落直径为 愿郾 猿猿糟皂袁生长
速度最慢的为菌株 杂凿鄄皂鄄猿园袁培养 员缘凿 后菌落直径仅
为 缘郾 愿缘糟皂遥 生长速度普遍较慢的菌株一般为菌落表
型变化大袁尤其是色素变化较大的菌株遥 方差分析显
示袁杂凿鄄皂鄄苑尧杂凿鄄皂鄄员猿尧杂凿鄄皂鄄员源尧杂凿鄄皂鄄员远尧杂凿鄄皂鄄员苑尧杂凿鄄皂鄄
圆圆 和 杂凿鄄皂鄄猿园 菌落直径在第 远 天尧第 怨 天尧第 员圆 天尧第
员缘 天与原始菌株之间差异显著渊孕 约 园郾 园缘冤袁其它菌株
均与原始菌株差异不显著渊孕 跃园郾 园缘冤遥
圆郾 源摇 航天诱变对菌丝干重的影响
航天诱变菌株培养过程中菌丝干重变化幅度较
大袁菌丝干重的负突变率大于正突变率渊图 缘冤遥 与原
始菌株相比袁菌丝干重提高的有 怨 株袁其正突变率为航
天诱变菌株的 猿园豫 袁负突变率为 苑园豫 遥 培养 源凿 的诱
变菌株菌丝干重均小于 园郾 猿早袁杂凿鄄皂鄄猿 的菌丝干重最
远猿怨员
摇 员员 期 航天搭载淡紫拟青霉的生物学效应
重袁为 园郾 圆远猿缘早袁其次为 杂凿鄄皂鄄员怨袁菌丝干重为 园郾 圆缘猿愿早袁
干重最小的诱变菌株 杂凿鄄皂鄄员苑袁其干重为园郾 园源源苑早遥方差
分析显示袁 杂凿鄄皂鄄源尧 杂凿鄄皂鄄员猿尧 杂凿鄄皂鄄员源尧 杂凿鄄皂鄄员缘尧 杂凿鄄皂鄄
员苑尧杂凿鄄皂鄄圆园尧杂凿鄄皂鄄圆源尧杂凿鄄皂鄄圆愿尧杂凿鄄皂鄄圆怨 和 杂凿鄄皂鄄猿园 的
菌丝干重与原始菌株之间差异显著渊孕 约 园郾 园缘冤袁其它
菌株均与原始菌株差异不显著渊孕 跃园郾 园缘冤遥
图 缘摇 航天诱变淡紫拟青霉菌株菌丝干重
云蚤早援 缘摇 阅则赠 憎藻蚤早澡贼 燥枣 皂赠糟藻造蚤怎皂 燥枣 泽责葬糟藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽
图 远摇 航天诱变淡紫拟青霉菌株的产孢量
云蚤早援 远摇 杂责燥则怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 泽责葬糟藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽
圆郾 缘摇 航天诱变对产孢量的影响
经航天诱变后的菌株出现了不同趋向尧不同幅度
的变异 渊图 远 冤遥 其中 杂凿鄄皂鄄员员 的产孢量最多袁为
缘郾 远愿 伊员园苑糟枣怎窑皂蕴 原员遥 产孢量较少的有 愿 个菌株袁其产
孢量均小于 员郾 园园 伊 员园苑 糟枣怎窑皂蕴 原员遥 总体上看袁突变菌
株产孢量的正突变率为 圆远郾 苑豫 袁负突变率为 苑猿郾 猿豫 袁
负向变异程度较正向变异大遥 方差分析显示袁杂凿鄄皂鄄员尧
杂凿鄄皂鄄源尧杂凿鄄皂鄄员员尧杂凿鄄皂鄄员猿尧杂凿鄄皂鄄员源尧杂凿鄄皂鄄员远尧杂凿鄄皂鄄员苑尧
杂凿鄄皂鄄圆园尧杂凿鄄皂鄄圆苑 和 杂凿鄄皂鄄猿园 的产孢量与原始菌株之
间差异显著渊孕 约 园郾 园缘冤袁其它菌株均与原始菌株差异
不显著渊孕 跃园郾 园缘冤遥
圆郾 远摇 航天诱变对致病力的影响
淡紫拟青霉航天诱变菌株对南方根结线虫和松材
线虫的致病力产生了明显的变异渊表 员尧表 圆冤遥
对南方根结线虫卵的寄生率降低的菌株多于寄生
率提高的菌株袁致病力提高菌株占突变菌株的
源猿郾 猿猿豫 渊表 员冤袁其中 缘 个菌株 杂凿鄄皂鄄怨袁杂凿鄄皂鄄员员袁杂凿鄄皂鄄
员远袁杂凿鄄皂鄄圆圆 和 杂凿鄄皂鄄圆远 致病力显著提高袁平均比原始
菌株提高了 员园郾 源苑豫 遥 其中寄生率最高的菌株为 杂凿鄄
皂鄄圆远袁寄生率为 怨圆郾 园园豫 曰致病力最低的菌株为 杂凿鄄皂鄄
员苑袁其寄生率仅为 员远郾 远苑豫 遥 寄生率正变异率最高为
员苑郾 源缘豫 袁负变异率最高为 原 苑愿郾 苑圆豫 袁变异幅度在
苑猿怨员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
摇 摇 摇 摇 表 员摇 航天诱变淡紫拟青霉对南方根结线虫卵的寄生率
栽葬遭造藻 员摇 孕葬则葬泽蚤贼蚤糟 则葬贼藻 燥枣 泽责葬糟藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 葬早葬蚤灶泽贼 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 藻早早泽 辕 豫
菌株编号
杂贼则葬蚤灶 晕燥援
寄生率
责葬则葬泽蚤贼蚤糟 则葬贼藻
突变率
灾葬则蚤葬灶贼
菌株编号
杂贼则葬蚤灶 晕燥援
寄生率
责葬则葬泽蚤贼蚤糟 则葬贼藻
突变率
灾葬则蚤葬灶贼
悦运 苑愿郾 猿猿 依 圆郾 员怨葬 杂凿鄄皂鄄员远 愿愿郾 园园 依 员郾 员缘葬 员圆郾 猿缘
杂凿鄄皂鄄员 远源郾 远苑 依 源郾 怨员遭 原 员苑郾 园园 杂凿鄄皂鄄员苑 员远郾 远苑 依 员郾 苑远遭 原 苑愿郾 苑圆
杂凿鄄皂鄄圆 苑愿郾 园园 依 圆郾 远缘葬 原 园郾 源圆 杂凿鄄皂鄄员愿 愿员郾 远苑 依 猿郾 愿源葬 源郾 圆远
杂凿鄄皂鄄猿 愿圆郾 园园 依 圆郾 园园葬 源郾 远怨 杂凿鄄皂鄄员怨 愿圆郾 猿猿 依 源郾 员远葬 缘郾 员员
杂凿鄄皂鄄源 苑猿郾 远苑 依 猿郾 圆愿葬 原 缘郾 怨缘 杂凿鄄皂鄄圆园 远缘郾 远苑 依 员园郾 怨猿遭 原 员远郾 员远
杂凿鄄皂鄄缘 苑源郾 园园 依 圆郾 远缘葬 原 缘郾 缘猿 杂凿鄄皂鄄圆员 苑苑郾 园园 依 远郾 园猿葬 原 员郾 苑园
杂凿鄄皂鄄远 愿员郾 远苑 依 园郾 愿愿葬 源郾 圆远 杂凿鄄皂鄄圆圆 愿源郾 猿猿 依 圆郾 猿员葬 苑郾 远远
杂凿鄄皂鄄苑 愿圆郾 远苑 依 圆郾 怨远葬 缘郾 缘源 杂凿鄄皂鄄圆猿 苑苑郾 园园 依 愿郾 苑源葬 原 员郾 苑园
杂凿鄄皂鄄愿 苑怨郾 园园 依 源郾 猿远葬 园郾 愿远 杂凿鄄皂鄄圆源 苑猿郾 远苑 依 猿郾 圆怨葬 原 缘郾 怨缘
杂凿鄄皂鄄怨 愿怨郾 远苑 依 园郾 愿愿葬 员源郾 源愿 杂凿鄄皂鄄圆缘 缘圆郾 猿猿 依 园郾 缘愿遭 原 猿猿郾 员怨
杂凿鄄皂鄄员园 苑远郾 猿猿 依 圆郾 园园葬 原 圆郾 缘缘 杂凿鄄皂鄄圆远 怨圆郾 园园 依 员郾 缘猿遭 员苑郾 源缘
杂凿鄄皂鄄员员 怨园郾 园园 依 员郾 员缘葬 员源郾 怨园 杂凿鄄皂鄄圆苑 缘员郾 猿猿 依 员郾 苑猿遭 原 猿源郾 源苑
杂凿鄄皂鄄员圆 愿员郾 园园 依 缘郾 远怨葬 猿郾 源员 杂凿鄄皂鄄圆愿 远猿郾 园园 依 员郾 苑猿遭 原 员怨郾 缘苑
杂凿鄄皂鄄员猿 远园郾 猿猿 依 源郾 员远遭 原 圆圆郾 怨愿 杂凿鄄皂鄄圆怨 远猿郾 远苑 依 远郾 园员遭 原 员愿郾 苑圆
杂凿鄄皂鄄员源 猿远郾 远苑 依 源郾 猿苑遭 原 缘猿郾 员怨 杂凿鄄皂鄄猿园 猿缘郾 园园 依 苑郾 圆员遭 原 缘缘郾 猿圆
杂凿鄄皂鄄员缘 愿园郾 猿猿 依 苑郾 缘缘葬 圆郾 缘缘
摇 摇 注院表中数据为平均值 依标准误袁数据后相同字母代表差异不显著渊孕 跃 园郾 园缘冤遥 下同遥
晕燥贼藻院阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻 蚤泽 皂藻葬灶 依 杂耘袁 杂葬皂藻 造藻贼贼藻则泽 则藻责则藻泽藻灶贼 灶燥 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻渊孕 跃 园郾 园缘冤 援 栽澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早援
表 圆摇 航天诱变菌株对松材线虫卵的寄生率
栽葬遭造藻 圆摇 孕葬则葬泽蚤贼蚤糟 则葬贼藻 燥枣 泽责葬糟藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 葬早葬蚤灶泽贼 月怎则泽葬责澡藻造藻灶糟澡怎泽 曾赠造燥责澡蚤造怎泽 藻早早泽 辕 豫
菌株编号
杂贼则葬蚤灶 晕燥援
寄生率
责葬则葬泽蚤贼蚤糟 则葬贼藻
突变率
灾葬则蚤葬灶贼
菌株编号
杂贼则葬蚤灶 晕燥援
寄生率
责葬则葬泽蚤贼蚤糟 则葬贼藻
突变率
灾葬则蚤葬灶贼
悦运 员员郾 远苑 依 园郾 愿愿葬 杂凿鄄皂鄄员远 员员郾 远苑 依 园郾 愿愿葬 园郾 园园
杂凿鄄皂鄄员 员圆郾 猿猿 依 员郾 圆园葬 缘郾 远远 杂凿鄄皂鄄员苑 员苑郾 园园 依 园郾 缘愿遭 源缘郾 远苑
杂凿鄄皂鄄圆 员猿郾 猿猿 依 园郾 愿愿葬 员源郾 圆圆 杂凿鄄皂鄄员愿 员源郾 园园 依 园郾 缘愿葬 员怨郾 怨苑
杂凿鄄皂鄄猿 员苑郾 猿猿 依 园郾 愿愿遭 源愿郾 缘园 杂凿鄄皂鄄员怨 员源郾 远愿 依 园郾 愿愿遭 圆缘郾 苑怨
杂凿鄄皂鄄源 员圆郾 远苑 依 园郾 愿愿葬 愿郾 缘苑 杂凿鄄皂鄄圆园 员愿郾 园园 依 园郾 缘愿遭 缘源郾 圆源
杂凿鄄皂鄄缘 员缘郾 远苑 依 员郾 愿远遭 猿源郾 圆愿 杂凿鄄皂鄄圆员 员缘郾 园园 依 园郾 缘愿遭 圆愿郾 缘猿
杂凿鄄皂鄄远 员苑郾 园园 依 员郾 缘猿遭 源缘郾 远苑 杂凿鄄皂鄄圆圆 员员郾 远苑 依 园郾 猿猿葬 园郾 园园
杂凿鄄皂鄄苑 员猿郾 园园 依 园郾 缘愿葬 员员郾 源园 杂凿鄄皂鄄圆猿 员猿郾 远苑 依 园郾 愿愿葬 员苑郾 员源
杂凿鄄皂鄄愿 员缘郾 园园 依 园郾 缘愿遭 圆愿郾 缘猿 杂凿鄄皂鄄圆源 员远郾 园园 依 园郾 缘愿遭 猿苑郾 员园
杂凿鄄皂鄄怨 员缘郾 猿猿 依 园郾 愿愿遭 猿员郾 猿远 杂凿鄄皂鄄圆缘 员猿郾 猿猿 依 园郾 猿猿葬 员源郾 圆圆
杂凿鄄皂鄄员园 员圆郾 园园 依 园郾 缘愿葬 圆郾 愿猿 杂凿鄄皂鄄圆远 员员郾 园园 依 园郾 缘愿葬 原 缘郾 苑源
杂凿鄄皂鄄员员 员源郾 远苑 依 园郾 愿愿遭 圆缘郾 苑员 杂凿鄄皂鄄圆苑 员猿郾 园园 依 园郾 缘愿葬 员员郾 源园
杂凿鄄皂鄄员圆 员圆郾 远苑 依 员郾 圆园葬 愿郾 缘苑 杂凿鄄皂鄄圆愿 员员郾 猿猿 依 员郾 源缘葬 原 圆郾 怨员
杂凿鄄皂鄄员猿 员园郾 园园 依 园郾 园园葬 原 员源郾 猿员 杂凿鄄皂鄄圆怨 员员郾 园园 依 园郾 缘愿葬 原 缘郾 苑源
杂凿鄄皂鄄员源 员圆郾 园园 依 园郾 缘愿葬 圆郾 愿猿 杂凿鄄皂鄄猿园 员园郾 远苑 依 员郾 圆园葬 原 愿郾 缘苑
杂凿鄄皂鄄员缘 员圆郾 猿猿 依 园郾 猿猿葬 缘郾 远远
愿猿怨员
摇 员员 期 航天搭载淡紫拟青霉的生物学效应
原 苑愿郾 苑圆豫 耀 员苑郾 源缘豫 之间遥 方差分析显示袁杂凿鄄皂鄄员尧
杂凿鄄皂鄄员猿尧 杂凿鄄皂鄄员源尧 杂凿鄄皂鄄员苑尧 杂凿鄄皂鄄圆园尧 杂凿鄄皂鄄圆缘尧 杂凿鄄皂鄄
圆远尧杂凿鄄皂鄄圆苑尧杂凿鄄皂鄄圆愿尧杂凿鄄皂鄄圆怨尧杂凿鄄皂鄄猿园 对根结线虫卵
的寄生率与原始菌株之间差异显著渊孕 约 园郾 园缘冤袁其它
菌株均与原始菌株差异不显著渊孕 跃园郾 园缘冤遥
摇 摇 淡紫拟青霉航天诱变菌株对松材线虫卵进行致病
力的影响见表 圆遥 处理 源凿的松材线虫卵袁寄生率最高
的航天诱变菌株 杂凿鄄皂鄄圆园 仅为 员愿郾 园园豫 袁对松材线虫卵
寄生偏低袁卵粒大部分均已孵化袁孢子液对孵化后的幼
虫及成虫也无影响遥 寄生率正变异率最高为
缘源郾 圆源豫 袁负变异率最高为 原 员源郾 猿员豫 袁变异幅度在 原
员源郾 猿员豫 耀缘源郾 圆源豫之间遥 虽然航天诱变菌株对松材线
虫卵寄生率的正变异菌株数明显多于负变异菌株数袁
但正变异菌株整体变异幅度不大遥 方差分析显示袁航
天诱变对松材线虫卵的寄生率与原始菌株相比差异不
显著渊孕 跃园郾 园缘冤袁说明航天诱变淡紫拟青霉菌株对松
材线虫卵的致病作用不明显遥
猿摇 讨论
太空环境具有较好的诱变作用袁可以产生改善菌
种的有利性状尧创造新品种等有利变异袁还可诱发与产
量有关的数量性状变异袁但很多变异具有一定的随机
性遥 搭载微生物的主要目的就是筛选那些产量高尧价
值大的变异生产菌株咱员猿暂 袁而为了选择得到性状稳定的
新品种或品系袁需要进行大量繁重的筛选和检测试
验咱圆员暂 遥
像其它诱变育种一样袁航天诱变处理后必需通过
各种性状的检测袁以判断航天诱变的效应和筛选得到
特定变异的目标品种咱圆圆暂 遥 在本研究中袁淡紫拟青霉山
东菌株经航天诱变后袁产生了大量的性状变异遥 试验
结果表明袁杂凿鄄皂鄄猿 菌株产生的花朵状边缘未见报道
渊图 员冤袁可能是一种特殊的菌落局变现象咱圆猿暂 遥 航天诱
变菌株 陨型菌落的环状菌丝结构也未见报道渊图 猿冤袁
其二者生长的原因和意义需要进一步研究和探讨遥 从
总体上看袁航天诱变的负效应大于正效应袁对生长速
度尧产孢量和致病力等很多性状都表现出不同程度的
抑制作用袁少数呈现促进作用袁表现出了不同的变异趋
向和幅度遥 生长速度尧产孢量和致病力是筛选生物防
治菌株的重要指标袁航天诱变使这些特性表现出不同
变异趋向和幅度袁证明了航天诱变是非定点的尧广泛性
的尧正负双向性的袁且诱变位点多尧诱变率高袁所导致的
生物体变异有生理性变异也可能有遗传性变异咱圆圆暂 遥
本试验结果证明淡紫拟青霉航天诱变菌株对根结线虫
卵致病力显著提高袁航天诱变菌株 杂凿鄄皂鄄怨袁杂凿鄄皂鄄员员袁
杂凿鄄皂鄄员远袁杂凿鄄皂鄄圆圆 和 杂凿鄄皂鄄圆远 对根结线虫卵的寄生率
分别提高了 员源郾 源愿豫 尧 员源郾 怨园豫 尧 员圆郾 猿缘豫 尧 苑郾 远远豫 和
员苑郾 源缘豫 袁显著高于原始菌株的寄生率渊苑愿郾 猿豫 冤遥 而
对松材线虫卵寄生率偏低袁其原因可能是假单胞菌属
菌株能够加速松材线虫卵的孵化咱圆源 原 圆缘暂 袁有效减少菌丝
体侵入松材线虫卵的时间袁从而降低了淡紫拟青霉对
松材线虫卵的寄生率遥
源摇 结论
本试验的检测初步认为航天诱变菌株对松材线虫
卵无明显作用袁验证了航天诱变淡紫拟青霉山东菌株
作为松材线虫生防菌的可能性较小袁但航天诱变菌株
杂凿鄄皂鄄怨袁杂凿鄄皂鄄员员袁杂凿鄄皂鄄员远袁杂凿鄄皂鄄圆圆 和 杂凿鄄皂鄄圆远 对南方
根结线虫的生防作用显著提高袁并且在生长特性和致
病力方面发生了较大幅度的正向变异袁其寄生能力在
田间生防实践中可能具有重要意义袁可进一步测定筛
选以获得优良菌株袁供生产和研究使用遥
参考文献院
咱 员 暂摇 肖炎农袁王明祖袁付艳平援 淡紫拟青霉 猿远 原 员 液体产孢和发酵液
的杀线虫活性咱允暂 援云南农业大学学报袁员怨怨怨袁杂渊员冤院员员缘
咱 圆 暂摇 运澡葬灶 粤袁 宰蚤造造蚤葬皂泽 运 蕴袁 晕藻增葬造葬蚤灶藻灶 匀 运 酝援 悦燥灶贼则燥造 燥枣 责造葬灶贼鄄
责葬则葬泽蚤贼蚤糟 灶藻皂葬贼燥凿藻泽 遭赠 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 葬灶凿 酝燥灶葬糟则燥泽责燥则蚤怎皂
造赠泽蚤责葬早怎皂 蚤灶 责燥贼 贼则蚤葬造泽咱允暂 援 月蚤燥糟燥灶贼则燥造袁圆园园远袁缘员渊缘冤院远源猿 原 远缘愿
咱 猿 暂摇 运蚤藻憎灶蚤糟噪 杂袁 晕藻怎皂葬灶灶 杂袁 杂蚤噪燥则葬 砸 粤袁 云则藻赠 允 耘援 耘枣枣藻糟贼 燥枣
酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 蚤灶燥糟怎造怎皂 凿藻灶泽蚤贼赠 葬灶凿 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 则葬贼藻 燥枣
孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 泽贼则葬蚤灶 圆缘员 燥灶 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造 藻枣枣蚤糟葬糟赠 葬灶凿
糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 藻早早 皂葬泽泽藻泽 葬灶葬造赠扎藻凿 遭赠 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸
咱允暂 援 孕澡赠贼燥责葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园员员袁 员园员渊员冤院 员园缘 原 员员圆
咱 源 暂 摇 马建伟袁王曦茁袁汪来发袁王源袁苟大平袁王艳菊援 淡紫拟青霉 栽鄄
阅晕粤插入突变体的表型分析咱允暂 援 林业科学研究袁圆园员源袁圆苑渊圆冤院
圆员怨 原 圆圆源
咱 缘 暂摇 许天委袁郝慧华袁林春光袁秦奋人援淡紫拟青霉对海南白木香根结
线虫的寄生及防治效果咱允暂 援 河南农业科学袁圆园员圆袁源员渊猿冤院员园员 原
员园猿
咱 远 暂摇 允葬贼葬造葬 孕援 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟燥灶贼则燥造 燥枣 责造葬灶贼鄄责葬则葬泽蚤贼蚤糟 灶藻皂葬贼燥凿藻泽咱允暂 援 粤灶灶怎葬造
砸藻增蚤藻憎 燥枣 孕澡赠贼燥责葬贼澡燥造早赠袁员怨愿远袁 圆源渊员冤院 源缘猿 原 愿怨
咱 苑 暂摇 粤皂燥灶糟澡燥 粤袁 杂葬泽泽藻则允 晕援 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟燥灶贼则燥造 燥枣 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬
憎蚤贼澡 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽咱允暂 援 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦燥灶贼则燥造袁 员怨怨缘袁 怨渊员冤院缘员
原 远员
咱 愿 暂摇 张克勤袁杂援高恩袁栽援巴巴拉援 根结线虫天敌真菌及其高效菌株筛
选咱允暂 援真菌学报袁员怨怨猿袁员圆渊猿冤院圆源园 原 圆源缘
咱 怨 暂摇 肖顺袁张绍升袁刘国坤援淡紫拟青霉对根结线虫的防治作用咱 允暂 援
福建农林大学学报袁圆园园远袁猿缘渊缘冤院源远猿 原 源远缘
咱员园暂摇 田兴山袁张玲华袁郭勇袁潘木水袁周风珍袁邝哲师袁黄小光袁李国立袁
孙晓刚援空间诱变在微生物菌种选育上的研究进展咱 允暂 援 生物技
怨猿怨员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员源袁圆愿渊员员冤院员怨猿猿 耀 员怨源园
术通讯袁圆园园缘袁员远渊员冤院员园缘 原 员园愿
咱员员暂摇 姜静袁姜莹袁杨传平袁郭敏袁李开隆袁刘桂丰袁李慧玉援 白桦航天诱
变育种研究初报咱允暂 援核农学报袁圆园园远袁圆园渊员冤院圆苑 原 猿员
咱员圆暂摇 温贤芳袁张龙袁戴维序援 天地结合开展我国空间诱变育种研究
咱允暂 援核农学报袁圆园园源袁员愿渊源冤院圆愿远 原 圆愿愿
咱员猿暂摇 张玲华袁田兴山援 微生物空间诱变育种的研究进展咱 允暂 援 核农学
报袁圆园园源袁员愿渊源冤 院圆怨源 原 圆怨远
咱员源暂摇 陈继红袁张利平袁郭立格袁石楠援多杀菌素产生菌株航天育种效果
研究咱允暂 援安徽农业科学袁圆园园愿袁猿远渊员圆冤院源怨缘员 原 源怨缘圆袁源怨缘苑
咱员缘暂摇 崔彬彬袁张宇涵袁李云援木本植物航天诱变育种研究进展咱 允暂 援 核
农学报袁圆园员猿袁圆苑渊员圆冤院员愿缘猿 原 员愿缘苑
咱员远暂摇 宋满刚袁张满贵袁缪美锁袁红晓祥袁梁虹袁罗宝君援我国太空育种成
果显著咱允暂 援种子世界袁圆园园源袁员渊苑冤院缘苑
咱员苑暂摇 刘录祥援空间技术与空间产业 原前景与未来咱酝暂援中国科学院编
高技术发展报告援北京院科学出版社袁圆园园猿院圆源源 原 圆缘员
咱员愿暂摇 李绍锋袁杨民和援一株茶树内生淡紫拟青霉的鉴定及抗真菌活性
研究咱允暂 援生物灾害科学袁圆园员圆袁猿缘渊员冤院源缘 原 源怨
咱员怨暂摇 汪来发袁王艳娜袁朴春根袁田国忠袁张路平援 淡紫拟青霉不同菌株
对南方根结线虫卵寄生率三种处理方法的比较咱允暂 援林业科学研
究袁圆园园源袁员苑渊远冤院苑苑苑 原 苑愿员
咱圆园暂摇 朱丽华袁季锦衣袁吴小芹袁王张丽袁叶建仁援 一种制备无菌松材线
虫的方法咱允暂 援东北林业大学学报袁圆园员员袁猿怨渊远冤院远缘 原 远苑
咱圆员暂摇 王明祖援根结线虫卵寄生真菌的研究域援淡紫拟青霉菌生长和产
孢条件咱允暂 援华中农业大学学报袁员怨怨圆袁员员渊员冤院缘圆 原 缘远
咱圆圆暂摇 农向群袁张泽华袁胡攀袁高松袁张礼生援 航天诱变对昆虫病原真菌
的生物学效应咱允暂 援菌物学报袁圆园园远袁圆缘渊源冤院远苑源 原 远愿员
咱圆猿暂摇 唐晓庆袁樊美珍袁李增智援 球孢白僵菌继代培养中菌落局变现象
及环境影响因素的研究咱允暂 援真菌学报袁员怨怨远袁员缘渊猿冤院员愿愿 原 员怨远
咱圆源暂摇 林峰袁赵博光援细菌对松材线虫繁殖的影响咱允暂 援北京林业大学学
报袁圆园园远袁圆愿渊源冤院员猿缘 原 员猿愿
咱圆缘暂摇 林峰袁赵博光援松材线虫对其携带的细菌繁殖的影响咱允暂 援应用生
态学报袁圆园园缘袁员远渊员圆冤院圆源苑远 原 圆源苑愿
月蚤燥造燥早蚤糟葬造 耘枣枣藻糟贼 燥枣 杂责葬糟藻 悦葬则则赠蚤灶早 蚤灶 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽
宰粤晕郧 再怎葬灶员袁圆 摇 宰粤晕郧 蕴葬蚤鄄枣葬圆 摇 宰粤晕郧 载蚤鄄扎澡怎燥圆 摇 在匀哉 栽蚤葬灶鄄澡怎蚤员
渊员悦燥造造藻早藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 杂蚤糟澡怎葬灶 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 再葬爷葬灶袁 杂蚤糟澡怎葬灶摇 远圆缘园员源曰 圆栽澡藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣
云燥则藻泽贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁杂贼葬贼藻 云燥则藻泽贼则赠 粤凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶 辕 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼 耘糟燥造燥早赠袁 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼 葬灶凿 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 悦粤云袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽澡藻 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 藻枣枣藻糟贼 燥枣 泽责葬糟藻 皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽 燥灶 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 憎葬泽 泽贼怎凿蚤藻凿 憎蚤贼澡 葬 孕援 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 泽贼则葬蚤灶
杂澡葬灶凿燥灶早 糟葬则则蚤藻凿 遭赠 贼澡藻 耶 杂澡藻灶扎澡燥怎愿爷 泽责葬糟藻糟则葬枣贼援 猿园 泽贼则葬蚤灶泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 糟燥造燥灶蚤藻泽 燥枣 泽怎则增蚤增葬造 葬藻则燥泽责葬糟藻 皂怎贼葬灶贼
泽贼则葬蚤灶泽 憎藻则藻 贼藻泽贼藻凿 枣燥则 贼澡藻蚤则 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 葬藻则燥泽责葬糟藻
皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 孕援 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 憎藻则藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 憎蚤贼澡 贼澡藻 燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶援 栽澡藻 皂燥则责澡燥造燥早赠袁 糟燥造燥灶赠 早则燥憎蚤灶早 则葬贼藻袁
泽责燥则藻 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶袁 凿则赠 憎藻蚤早澡贼 燥枣 皂赠糟藻造蚤怎皂 葬灶凿 责葬贼澡燥早藻灶蚤糟蚤贼赠 燥枣 泽责葬糟藻 皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽 泽贼则葬蚤灶泽 憎藻则藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 憎蚤贼澡
贼澡葬贼 燥枣 贼澡藻 燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶曰 早则燥憎贼澡 则葬贼藻袁 凿则赠 憎藻蚤早澡贼 葬灶凿 泽责燥则怎造葬则 择怎葬灶贼蚤贼赠 泽澡燥憎藻凿 澡蚤早澡藻则 灶藻早葬贼蚤增藻 皂怎贼葬贼蚤燥灶 则葬贼藻泽曰 贼澡藻
责葬贼澡燥早藻灶蚤糟蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 泽责葬糟藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼则葬蚤灶泽 葬早葬蚤灶泽贼 月援 曾赠造燥责澡蚤造怎泽 藻早早泽 憎葬泽 造燥憎藻则袁 憎蚤贼澡 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 责葬则葬泽蚤贼蚤糟 则葬贼藻 燥灶造赠
员愿郾 园豫 枣燥则 杂凿鄄皂鄄圆园袁 贼澡藻 泽责葬糟藻鄄蚤灶凿怎糟藻凿 泽贼则葬蚤灶泽 贼燥 贼澡藻 藻早早泽 燥枣 酝援 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 泽澡燥憎藻凿 葬 澡蚤早澡藻则 责葬贼澡燥早藻灶蚤糟蚤贼赠 燥枣袁 憎蚤贼澡 贼澡藻
蚤皂责则燥增藻凿 责葬则葬泽蚤贼蚤糟 则葬贼藻泽 燥枣 杂凿鄄皂鄄怨袁 杂凿鄄皂鄄员员袁 杂凿鄄皂鄄员远袁 杂凿鄄皂鄄圆圆 葬灶凿 杂凿鄄皂鄄圆远 员源郾 源愿豫 尧员源郾 怨园豫 袁员圆郾 猿缘豫 袁苑郾 远远豫
葬灶凿 员苑郾 源缘豫 袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠袁 葬灶凿 憎藻则藻 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡藻 责葬则葬泽蚤贼蚤糟 则葬贼藻 燥枣 燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶 渊苑愿郾 猿豫 冤援 栽澡藻 蚤灶枣造怎藻灶糟藻 燥枣 泽责葬糟藻
皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽 燥枣 孕援 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 憎葬泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼袁 葬灶凿 贼澡藻 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 糟燥怎造凿 责则燥增蚤凿藻 藻曾糟藻造造藻灶贼 则藻枣藻则藻灶糟藻泽 葬灶凿 葬
灶藻憎 憎葬赠 蚤灶 遭则藻藻凿蚤灶早 燥枣 孕援 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 泽怎责藻则蚤燥则 泽贼则葬蚤灶援 杂责葬糟藻 皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽 糟燥怎造凿 遭藻 怎泽藻凿 葬泽 贼燥 燥遭贼葬蚤灶 灶藻憎 灶藻皂葬贼燥责澡葬早燥怎泽
枣怎灶早葬造 泽贼则葬蚤灶泽 枣燥则 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟燥灶贼则燥造 燥枣 酝援 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬援
运藻赠 憎燥则凿泽院杂责葬糟藻 皂怎贼葬早藻灶藻泽蚤泽曰孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽曰月蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽曰月蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟燥灶贼则燥造
园源怨员