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Effect of Mixed High-energy Particles Field on Corn Seedling Growth and the Activity of Antioxidant Enzymes

高能混合粒子场对玉米幼苗生长及抗氧化系统的影响


为了探讨高能混合粒子场处理玉米种子对其幼苗生长及其抗氧化酶活性的影响,以0、275、315Gy剂量的高能混合粒子场处理昌7-2、郑58、K910改和DH新4种玉米自交干种子,对M1的发芽率、根长、芽长、根数及抗氧化酶活性进行了测定和分析。结果表明,经高能混合粒子场处理后,4种玉米自交系种子的发芽率和芽长没有显著变化,根长和根数变化显著。昌7-2的根长、芽长和根数随着辐照剂量的增加而增加,而其他3种自交系的变化总体上呈现下降趋势。郑58叶片中SOD活性随着辐射剂量的增加而降低,其他3种玉米自交系叶片中的SOD活性则表现为先升高后下降;辐射处理后,4种玉米自交系叶片中的POD和CAT活性变化显著;郑58的POD和CAT活性显著性上升,而其他自交系的POD和CAT活性则下降;MDA含量变化除DH新和K910改表现为上升趋势外,其他2种自交系均表现为下降趋势。因此,不同基因型玉米自交系对混合粒子场诱变的敏感性存在差异,在高能混合粒子场辐射育种中,该结果可为选择最适辐照剂量提供依据。


全 文 :  核 农 学 报  2014,28(12):2133 ~ 2138
Journal of Nuclear Agricultural Sciences
收稿日期:2013⁃12⁃02  接受日期:2014⁃04⁃27
基金项目:“十二五”农村领域国家科技计划(2012AA101202),农业科技成果转化资金项目(2012GB2C600260),山东省玉米育种与栽培技术企
业重点实验室开放课题资助,山东省高等学校青年骨干教师国内访问学者项目
作者简介:赵金涛,男,主要从事玉米遗传育种研究。 E⁃mail: zjt_jintao@ 126. com
通讯作者:宋希云,男,教授,主要从事作物遗传育种和分子生物学的研究。 E⁃mail: songxy@ qau. edu. cn
文章编号:1000⁃8551(2014)12⁃2133⁃06
高能混合粒子场对玉米幼苗生长及抗氧化系统的影响
赵金涛1   郭新梅1,2   裴玉贺1   赵美爱1   孙欣欣1   任  瑛1   刘录祥3   宋希云1
( 1 青岛农业大学农学与植物保护学院 /青岛市主要农作物种质资源创新与应用重点实验室,
山东 青岛  266109;2 山东登海种业股份有限公司 /山东省玉米育种与栽培技术企业重点实验室,
山东 莱州  261448;3 中国农业科学院作物科学研究所 /国家农作物基因资源与基因改良
重大科学工程 /国家农作物航天诱变技术改良中心,北京  100081)
摘  要:为了探讨高能混合粒子场处理玉米种子对其幼苗生长及其抗氧化酶活性的影响,以 0、275、
315Gy剂量的高能混合粒子场处理昌 7 - 2、郑 58、K910 改和 DH新 4 种玉米自交干种子,对 M1 的发芽
率、根长、芽长、根数及抗氧化酶活性进行了测定和分析。 结果表明,经高能混合粒子场处理后,4 种玉
米自交系种子的发芽率和芽长没有显著变化,根长和根数变化显著。 昌 7 - 2 的根长、芽长和根数随着
辐照剂量的增加而增加,而其他 3 种自交系的变化总体上呈现下降趋势。 郑 58 叶片中 SOD 活性随着
辐射剂量的增加而降低,其他 3 种玉米自交系叶片中的 SOD活性则表现为先升高后下降;辐射处理后,
4 种玉米自交系叶片中的 POD和 CAT活性变化显著;郑 58 的 POD和 CAT活性显著性上升,而其他自
交系的 POD和 CAT活性则下降;MDA含量变化除 DH新和 K910 改表现为上升趋势外,其他 2 种自交
系均表现为下降趋势。 因此,不同基因型玉米自交系对混合粒子场诱变的敏感性存在差异,在高能混合
粒子场辐射育种中,该结果可为选择最适辐照剂量提供依据。
关键词:高能混合粒子场;玉米自交系;幼苗生长;抗氧化系统;辐射育种
DOI:10􀆰 11869 / j. issn. 100⁃8551􀆰 2014􀆰 12. 2133
    自 1987 年以来,我国科学家多次利用返回式卫
星、高空气球等搭载植物种子,开展空间技术育种实验
研究,现已育成了 50 多个新品种、新品系,其中包括水
稻、小麦、番茄、青椒和芝麻等,并从中获得一些特异突
变新材料、新种质[1 - 2]。 空间诱变具有变异幅度大,频
率高,稳定性好的特点,作为一种提高突变频率,促进
基因重组,创造新类型的有效手段在当今作物育种中
发挥着重要作用。 空间诱变的重要因素之一是由多种
高能、高传能线密度( linear enersy transfer, LET)的空
间宇宙射线组成混合辐射场[3 - 6]。 由于空间实验技术
要求高,实验机会有限,因此,探索地面模拟空间环境
因素的试验研究对于有效利用航天技术开展作物诱变
改良具有重要意义。
植物在逆境胁迫处理时,通常会积累大量的活性
氧,从而对植物造成氧化伤害。 因此,在逆境条件下迅
速去除过量的活性氧对植物的生存具有重要的意义。
超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化
氢酶(CAT)能够清除细胞内过多的 H2O2,以维持细胞
内 H2O2 在正常水平内,从而保护膜结构;丙二醛
(MDA)是膜脂过氧化最重要的产物之一,植物在逆境
下遭受伤害与活性氧积累诱发的膜脂过氧化密切相
关[7 - 8]。 目前,利用磁场、60Co⁃γ射线辐射、UV⁃B 辐射
和激光诱变等技术对种子生物效应的影响已有大量的
报道,但高能混合粒子场作为一种新兴的诱变源,除在
小麦诱变上应用较多外,在其他植物尤其是玉米诱变
的研究上较鲜见。 本试验利用高能混合粒子场处理不
同玉米自交系种子,研究其对不同玉米自交系的种子
萌发及玉米幼苗抗氧化系统的影响,探究高能粒子场
处理对玉米的辐射效应,为揭示空间高能粒子场诱变
玉米的作用机理和开拓作物诱变育种新途径提供理论
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核  农  学  报 28 卷
依据。
1  材料和方法
1􀆰 1  材料
供试材料为中国农业科学院作物科学研究所航天
育种中心刘录祥研究员提供的 4 种玉米自交系:昌 7
- 2、郑 58、K910 改和 DH新。
1􀆰 2  辐照处理
利用由北京正负电子对撞机直线加速器(DEPC
Ⅱ,中国科学院高能物理研究所)E2 束流打靶产生的
混合粒子场辐照处理试验材料,每个处理 90 粒种子,
辐照剂量分别为 275、315Gy,剂量率为:0􀆰 78 ~ 1􀆰 36
Gy·min - 1,以未进行处理的种子为对照。
1􀆰 3  方法
1􀆰 3􀆰 1  玉米幼苗的培养  各处理选取 90 粒种子,每
个处理选取 30 粒于 25℃恒温培养箱内发芽,设置 3
个重复。 测定发芽率、根长、芽长和根数。 选取健壮的
幼苗种植于青岛农业大学试验田,行距 60 cm,株距 15
cm。 30d后取植株的幼叶,用于生理生化指标的测定。
1􀆰 3􀆰 2  试验指标的测定   SOD 活性测定参照张蜀
秋[9]的方法;POD 活性测定采用愈创木酚法[10];CAT
活性测定采用紫外吸收法[11];MDA(丙二醛)含量测
定采用双组分分光光度法[12]。
1􀆰 3􀆰 3  数据分析  采用 Excel 2012 软件进行数据整
理和作图,DPS 9􀆰 50 进行数据统计和方差分析。
2  结果与分析
2􀆰 1  混合粒子场对玉米种子萌发的影响
2􀆰 1􀆰 1  混合粒子场对发芽率的影响  经混合粒子场
处理后,不同基因型材料的种子萌发率在不同辐照剂
量的表现存在一定的差异(图 1 - A),但不同剂量间
和玉米自交系间差异均不显著(表 1)。 郑 58 和昌 7 -
2 表现为辐照处理促进种子发芽,发芽率升高,但与对
照间的差异不显著;DH 新和 K910 改的变化趋势一
致,表现为辐照处理抑制种子的发芽。
2􀆰 1􀆰 1  混合粒子场对芽长的影响  经混合粒子场处
理后,不同基因型的芽长变化趋势也存在一定的差异
(图 1 - B、表 1),但差异不显著。 辐照处理后,昌 7 - 2
的幼芽变长,且随着辐照剂量的增大而增长。 而郑
58、DH新和 K910 改 3 种材料的芽长变化表现为芽长
变短,且芽长随辐射剂量的增加而减小。
2􀆰 1􀆰 2  混合粒子场对根长的影响  经混合粒子场处
理后,玉米根长在基因型间和辐射剂量间存在极显著
差异(表 1)。 DH 新和 K910 改经混合粒子场辐照处
理后根长较对照显著变短,且辐射剂量越大,根长越
短,表明辐射对其根的生长具有抑制作用,辐射剂量越
大抑制作用越强,但 2 个辐射剂量之间差异不显著
(图 1 - C)。 混合粒子场辐照后,昌 7 - 2 根长比对照
组有所增加,郑 58 的根长变化受辐照剂量的影响较
小,各处理间的差异不明显。 根长受混合粒子场辐照
的影响大,随着辐照剂量的增大,根长显著减小,辐照
剂量越大,根长越短。 这可能是混合粒子场能通过影
响根的长度进而影响玉米对水分及养分的吸收,抑制
玉米的正常生长发育。
2􀆰 1􀆰 3  混合粒子场对根数的影响  经混合粒子场处理
后,不同剂量间及自交系间的根数存在显著或极显著的
差异(表 1)。 K910 改辐照组根数与对照组根数相比,
根数显著减少;DH 新辐照根数的变化趋势与 K910 改
相似,但其与对照组根数的差异性不显著;经混合粒子
场处理后,昌 7 -2的根数比对照组有明显增加,随着辐
照剂量的增大,根数变化不显著;而郑 58 辐照组根数低
于对照组根数,且差异也不显著(图 1 - D)。
表 1  发芽率、芽长、根长及根数的 F值表
Table 1  F value of germination rate, shoot length, root length and the number of roots
变异来源
Source of variation
发芽率
Germination rate
芽长
Shoot length
根长
Root length
根数
Root number
自交系间
Inbred lines
2􀆰 41 0􀆰 73 6􀆰 45∗∗ 4􀆰 51∗∗
剂量间
Dose
0􀆰 31 0􀆰 14 9􀆰 06∗∗ 4􀆰 94∗
自交系 ×剂量
Between dose and inbred lines
2􀆰 06 0􀆰 72 7􀆰 83∗∗ 5􀆰 19∗∗
    注:∗ 表示差异显著(P < 0􀆰 05),∗∗差异极显著(P < 0􀆰 01)。 下同。
Note: ∗ showed significance at the 0􀆰 05 level, ∗∗showed significance at 0􀆰 01 level. The same as flollowing.
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  12 期 高能混合粒子场对玉米幼苗生长及抗氧化系统的影响
图 1  高能混合粒子场对玉米种子萌发情况的影响
Fig. 1  The effect of mixed particle field irradiation on the germination in maize
2􀆰 2  混合粒子场对玉米幼苗抗氧化系统的影响
将处理后玉米幼苗的 SOD、POD、CAT 的活性及
MDA含量进行方差分析。 如表 2 所示,供试自交系间
及处理剂量间均具有极显著差异,且自交系与剂量间
存在极显著互作。
表 2  抗氧化酶活性及MDA含量的 F值
Table 2  F value of antioxidant enzyme activities and MDA content
分组
Group
SOD活性
SOD activity
POD活性
POD activity
CAT活性
CAT activity
MDA含量
MDA content
品种间
Lines
25􀆰 66∗∗ 889􀆰 47∗∗ 23􀆰 82∗∗ 211􀆰 02∗∗
剂量间
Dose
94􀆰 61∗∗ 90􀆰 56∗∗ 26􀆰 59∗∗ 15􀆰 41∗∗
品种与剂量间
Between dose and lines
8􀆰 55∗∗ 50􀆰 55∗∗ 42􀆰 97∗∗ 122􀆰 40∗∗
2􀆰 2􀆰 1  混合粒子场对 SOD活性的影响  经混合粒子
场处理后,玉米叶片中的 SOD活性与对照间存在极显
著差异(图 2 - A)。 辐照处理后,郑 58 叶片中的 SOD
活性呈下降趋势各处理间叶片中的 SOD 活性无显著
差异;275Gy 混合粒子场处理后,DH 新、K910 改和昌
7 - 2 叶片中的 SOD 活性略有增加,而 315Gy 的混合
粒子场处理后叶片中 SOD 活性极显著低于对照。 表
明 275Gy剂量的辐照激发了 SOD 的活性,315Gy 剂量
的辐照抑制了 SOD活性,促进与抑制的程度又与玉米
自交系的基因型显著相关。
2􀆰 2􀆰 2  混合粒子场对 POD活性的影响  经混合粒子
场处理后,玉米自交系的 POD 活性变化差异极显著
(图 2 - B)。 辐照处理后,郑 58 的 POD活性极显著高
于对照叶片中 POD 活性;而 DH 新和 K910 改叶片中
的 POD活性先极显著增加后随剂量的增加极显著地
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核  农  学  报 28 卷
降低,昌 7 - 2 的 POD 活性在 315Gy 剂量的处理下极
显著地降低,表明低剂量辐射促进其叶片中 SOD 活
性,高剂量抑制其叶片中 POD活性。
2􀆰 2􀆰 3  混合粒子场对 CAT活性的影响  经混合粒子
场处理后,4 种玉米自交系叶片中的 CAT 活性变化差
异极显著(图 2 - C)。 随着辐射剂量的增加,郑 58 叶
片中的 CAT活性升高,对照与各个处理间的酶活性差
异达极显著水平,但 275Gy 和 315Gy 处理间的酶活性
变化差异不显著;处理抑制了 DH 新的 CAT 活性,其
中对照与 275Gy 处理间的差异不显著,与 315Gy 的差
异极显著,处理间的差异不显著;K910 改中酶活性的
变化趋势与 DH新相同,但对照与 2 个处理间的差异
极显著,两个处理间的差异亦不显著;辐照后,昌 7 - 2
的 POD活性先极显著地增加后随剂量的增加极显著
地降低。
图 2  高能混合粒子场对玉米抗氧化酶活性 / MDA含量的影响
Fig. 2  The effect of mixed particle field irradiation on the antioxidant enzyme activities and MDA content in maize
2􀆰 2􀆰 4  混合粒子场对 MDA含量的影响  经混合粒子
场处理后,4 种玉米自交系叶片中的 MDA 含量差异极
显著(图 2 - D)。 处理后的郑 58 叶片中 MDA 含量均
略低于对照,且差异不显著;DH 新经 275Gy 混合粒子
场处理后,叶片中 MDA 含量略有下降,而 315Gy 辐照
处理后,叶片中的 MDA含量极显著高于对照;K910 改
经混合粒子场处理的叶片中 MDA 含量均极显著高于
对照;与对照相比,经混合粒子场处理,昌 7 - 2 叶片中
的 MDA含量均极显著下降。
3  讨论
3􀆰 1  高能混合粒子场处理对玉米种子萌发的影响
近年来,探索太空环境对种子当代发芽势、发芽
率、生物产量和经济产量等生物效应的研究报道较
多[13 - 15]。 丘冠英等[16]研究结果表明,磁场处理种子
可产生磁致生长效应和遗传效应,提高种子萌发率,促
进根系生长,增加吸水肥能力,缩短生育期及增加穗粒
数和千粒重。 磁化等离子体处理种子能够提高种子当
代的活力,促进种子发芽和幼苗生长[17]。 本研究发
现,不同玉米自交系对高能混合粒子场辐照的敏感性
不同,这与李奇等[19]和周柱华等[20]用不同自交系对
60Co⁃γ辐照敏感性的研究结果相一致。 经高能混合粒
子场处理后,4 种玉米自交系种子的发芽率和芽长变
化不显著,表明高能混合粒子场处理对玉米种子的发
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  12 期 高能混合粒子场对玉米幼苗生长及抗氧化系统的影响
芽率和芽长影响较小,这一结果与刘录祥等[18]在冬小
麦中的研究结果相一致;而玉米幼苗的根长和根数与
对照组存在显著差异,表明高能混合粒子场辐照主要
影响玉米幼苗的根长和根数,从而促进或抑制植株的
生长。 在 4 种玉米自交系中,昌 7 - 2 处理组的芽长、
根长和根数显著高于对照组,这可能是由于昌 7 - 2 辐
照后发生基因突变或自身修复机制将辐照损伤修复,
从而促进其芽长、根长和根数的增长。
3􀆰 2  高能混合粒子场处理对玉米叶片中抗氧化系统
及MDA含量的影响
超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过
氧化氢酶(CAT)是植物抗氧化系统中 3 种重要的酶,
在维持植物体内活性氧动态平衡等方面发挥重要的作
用[21,22]。 井大炜[23]在对杨树苗叶片光合特性和抗氧
化酶对干旱胁迫的响应的研究中发现,随着干旱胁迫
强度的增加,杨树叶片中的 SOD 和 POD 活性先增强
后降低。 晏斌等[24]在对水稻叶片增强 UV⁃B 的研究
中发现,UV⁃B 处理初期,活性氧清除系统的水平增
高。 本研究发现,经不同剂量混合粒子场辐照,玉米叶
片中的抗氧化酶活性有明显的不同。 在 275Gy 处理
时,只有郑 58 叶片中的 SOD活性低于对照 SOD活性,
可能是该辐射剂量时 SOD 酶活性被钝化,活性降低;
郑 58 和昌 7 - 2 在 275Gy 辐照处理时叶片中的 CAT
活性高于对照组,且差异极显著,275Gy 辐照促进了郑
58 和昌 7 - 2 叶片中的 CAT 活性,有利于活性氧的消
除,减轻辐照对植物的伤害。 混合粒子场处理后,DH
新和 K910 改叶片的 MDA 含量升高,表明在 275 ~
315Gy范围内,细胞内活性氧的积累已经引发了膜脂
过氧化,对植物的膜系统造成了伤害;而郑 58 和昌 7
- 2 叶片中的 MDA含量下降,表明植物体内产生的活
性氧通过抗氧化酶系统的清除,膜系统伤害不大。
4  结论
本研究利用高能混合粒子场 275、315Gy辐照剂量
对 4 种玉米自交系种子进行处理,结果表明不同自交
系种子处理后的响应效果与基因型相关。 4 种玉米自
交系种子的发芽率和芽长没有显著变化,根长和根数
变化显著,且各个自交系之间的变化趋势不同;抗氧化
酶活性及 MDA 含量的变化也不尽相同,表明不同材
料对高能混合离子场处理的敏感性存在差异性。 本研
究的结果可为后期利用高能混合粒子场辐射育种中最
适辐照剂量的选择提供理论基础。
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Effect of Mixed High⁃energy Particles Field on Corn Seedling
Growth and the Activity of Antioxidant Enzymes
ZHAO Jin⁃tao1   GUO Xin⁃mei1, 2   PEI Yu⁃he1   ZHAO Mei⁃ai1   SUN Xin⁃xin1
REN Ying1   LIU Lu⁃xiang3  SONG Xi⁃yun1
( 1Qingdao Key Lab of Germplasm Innovation and Application of Major Crops / College of Agronomy and
Plant Protection, Qingdao Agricultural University, Qingdao, Shandong  266109;2Shandong
Provincial Key Laboratory of Corn Breeding and Cultivation Technology / Shandong Denghai Seeds
Co. Ltd, Laizhou, Shandong  261448;3National Key Facility for Crop Gene Resources
and Genetic Improvement / Institute of Crop Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences /
National Center of Space Mutagenesis for Crop Improvement, Beijing  100081)
Abstract:In order to investigate the effect of mixed high⁃energy particle field on seeding growth and antioxidant enzyme
activities of corn seeds, dry seeds of ‘Chang 7 - 2’, ‘Zheng 58’, ‘K910 gai’ and ‘DH xin’ were irradiated with
0Gy, 275Gy, 315Gy. Germination rate, root length, shoot length, the number of roots, antioxidant enzyme activities
and MDA content of M1 generation seeds were measured and analyzed. The results showed that maize inbred lines with
different genotype have different sensitivity by mixed particles field irradiation. Maize germination ratio and shoot length
did not significantly change compared with control after irradiated by the high⁃energy particle field, while root length and
root number changed significantly. Root length, shoot length and root number of ‘Chang 7 - 2’ increased with the
increasing of irradiation dosage, the others showed a downward trend. The changes of antioxidant enzyme activity were
different. SOD activity of ‘Zheng 58’ reduced with radiation doses increasing, while SOD activity of the others first
increased and then decreased; POD and CAT activity of ‘Zheng 58’ significantly increase after radiation, while POD
and CAT activity of the others decreased; MDA content of ‘DH xin’ and ‘K910 gai’ showed an upward trend, while
the other inbred lines showed a downward trend. Therefore, the sensibility of different maize genotypes to the mixed
particles mutagenesis should be different, and the proper radiation doses should be selected according to the different
sensibility of corn seeds during the mixed high⁃energy particle radiation breeding.
Key words: Mixed high⁃energy particle field; Maize inbred line; Seedling growth; Antioxidant system; Radiation
breeding
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