全 文 ：核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊缘冤院园怨员远 耀 园怨圆源
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园远鄄圆园 摇 接受日期院圆园员源鄄员员鄄员园
基金项目院国家科技支撑计划课题野食用农产品加工适宜性评价及风险监控技术研究示范冶渊圆园员圆月粤阅圆怨月园猿冤袁中国农业科学院科技创新工程
渊悦粤粤杂鄄粤杂栽陨孕 原 圆园员载鄄陨粤孕孕杂栽冤
作者简介院陈琼玲袁女袁主要从事粮油加工研究遥 耘鄄皂葬蚤造院糟择造赃贼贼曾泽岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院王强袁男袁研究员袁主要从事粮油加工研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 憎葬灶早择蚤葬灶早园远岳 糟葬葬泽援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤园缘鄄园怨员远鄄园怨
高压微射流法制备白藜芦醇纳米脂质体
陈琼玲员袁圆 摇 刘红芝员 摇 刘摇 丽员 摇 王摇 强员
渊员 中国农业科学院农产品加工研究所 辕农业部农产品加工综合性重点实验室袁
北京摇 员园园员怨猿曰 圆山西农业大学信息学院袁 山西 晋中摇 园猿园愿园园冤
摘摇 要院为提高白藜芦醇生物利用率与缓释作用袁采用高压微射流法制备白藜芦醇纳米脂质体袁以纳米脂
质体包封率为评价指标袁在单因素试验的基础上袁通过二次旋转回归试验设计确定最佳制备工艺遥 结果
表明袁最佳制备工艺为卵磷脂 辕 灾耘 越 员园颐 员袁卵磷脂 辕白藜芦醇 越 员员郾 远颐 员袁卵磷脂 辕胆固醇 越 员园郾 缘颐 员袁微射流
压力 员愿 猿远远 孕杂陨袁循环次数 猿 次遥 在此条件下制得白藜芦醇纳米脂质体的包封率为 愿苑郾 苑源豫 依 员郾 园员豫 袁
平均粒径为 苑愿郾 猿员灶皂 依员郾 猿苑灶皂袁在藻贼葬电位为 原缘缘郾 缘 皂灾遥 该方法制得的白藜芦醇纳米脂质体包封率高尧
粒径小尧分布范围窄袁且体系稳定遥 该研究为白藜芦醇新剂型的开发及利用提供理论依据和实际指导遥
关键词院白藜芦醇纳米脂质体曰高压微射流曰包封率
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 园缘援 园怨员远
摇 摇 白藜芦醇是一种天然多酚类物质袁广泛分布于虎
杖尧葡萄尧花生尧藜芦尧桑葚等植物中咱员 原猿暂 袁具有抗癌尧抑
菌尧抗炎症尧抑制血小板凝集尧调节雌激素尧保护神经和
肝脏等生理功能袁且被美国叶抗衰老圣典曳列为野员园园 种
最热门有效的抗衰老物质冶之一咱源 原苑暂 遥 但白藜芦醇化学
性质不稳定且水溶性差袁存在口服吸收性差尧生物利用
率低尧难以持久作用等缺点咱愿暂 遥
纳米脂质体作为一种新型药物载体袁是以卵磷脂尧
胆固醇等为膜材对目的物质进行包封制成的一种具有
类似生物膜结构的双分子层囊泡袁具有稳定性好尧靶向
性强尧可延缓释放尧无免疫毒性等特点咱怨 原 员园暂 袁成为近年
来现代医学和食品功能化学共同关注的焦点遥 将纳米
脂质体用于白藜芦醇的包封与载运袁有利于提高白藜
芦醇生物利用率与缓释作用袁可进一步扩大其在药品尧
食品尧化妆品等行业的应用范围遥
制备纳米脂质体的传统方法有薄膜法尧乙醇注入
法尧逆向蒸发法尧超声法等袁但这些方法均存在有机溶
剂残留尧磷脂成分易氧化尧生产成本高尧周期长尧制备过
程难以控制尧放大为工业化生产存在难度等缺点咱员员暂 遥
高压微射流法作为一种新型纳米脂质体制备技术袁通
过高速撞击尧剪切与空化作用达到均质与细化的目的袁
具有操作简便尧清洁安全尧易于连续化生产等优点袁现
已有用于制备阿糖苷咱员圆暂 尧中链脂肪酸咱员猿暂 尧茶多酚咱员源暂及
维生素 悦咱员缘暂等纳米脂质体的实例遥 本文采用高压微
射流法制备白藜芦醇纳米脂质体袁以期探寻一种环保尧
高效的白藜芦醇纳米脂质体制备工艺袁为白藜芦醇新
剂型的开发及利用提供理论依据和实际指导遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料与试剂
白藜芦醇标准品尧灾耘 摇 渊美国 杂蚤早皂葬 公司冤曰白藜
芦醇样品渊纯度 怨苑郾 园员豫 冤中国农业科学院农产品加工
研究所粮油加工与功能食品实验室自制咱员远 原 员苑暂 曰乙腈尧
冰醋酸渊色谱纯袁美国 云蚤泽澡藻则 公司冤曰胆固醇渊生物试剂
纯袁北京奥博星生物技术有限公司冤曰大豆卵磷脂渊注
射级袁北京市索莱宝科技有限公司冤曰无水乙醇渊分析
纯袁北京市化学试剂公司冤遥
员郾 圆摇 仪器与设备
宰葬贼藻则泽员缘圆缘 型高效液相色谱仪渊配有紫外和示差
远员怨
摇 缘 期 高压微射流法制备白藜芦醇纳米脂质体
检测器袁美国 宰葬贼藻则泽公司冤曰酝载缘 型微量电子天平渊德
国 酝耘栽栽蕴耘砸 栽韵蕴耘阅韵公司冤曰在藻贼葬泽蚤扎藻则 晕葬灶燥 在杂型 在藻贼葬
电位仪渊英国 酝葬造增藻则灶 仪器有限公司冤曰酝蚤灶蚤 阅藻月耘耘 型
高压微射流仪渊美国 月耘耘 公司冤曰砸耘缘圆圆园 型旋转蒸发
仪尧阅蕴杂月型低温冷却液循环泵渊上海振捷试验设备有
限公司冤遥
员郾 猿摇 白藜芦醇纳米脂质体包封率测定
员郾 猿郾 员摇 白藜芦醇含量测定 摇 采用高效液相色谱
渊匀孕蕴悦冤对白藜芦醇含量进行测定袁色谱条件院色谱
柱院悦员愿柱袁员缘园 皂皂 伊 源郾 远 皂皂袁缘 滋皂曰流动相院乙腈 辕水 辕
冰醋酸 越 圆缘颐 苑缘颐 园郾 园怨渊增 辕 增 辕 增冤袁流速 园郾 苑 皂蕴窑皂蚤灶 原员袁检
测波长 猿园远 灶皂袁进样量 员园 滋蕴袁柱温 猿园 益 咱员愿暂 遥
精密称取 员圆郾 缘 皂早渊精确至 园郾 园园园员 早冤白藜芦醇标
准品袁甲醇溶解并定容至 圆缘园 皂蕴袁得到 缘园 皂早窑蕴 原员白藜
芦醇标准贮备液遥 准确移取 员尧圆尧源尧远尧愿尧员园 皂蕴白藜芦
醇标准贮备液袁用甲醇稀释并定容至 缘园 皂蕴袁得到不同
浓度的标准工作溶液袁以峰面积为纵坐标袁浓度为横坐
标袁绘制标准曲线袁得到回归方程院
再 越员郾 园圆 伊 员园缘载 垣 园郾 怨园源 伊 员园缘渊砸圆 越 园郾 怨怨怨愿冤
摇 摇 式中院再为峰面积袁载为白藜芦醇浓度渊滋早窑皂蕴 原员冤遥
表 员摇 单因素水平
栽葬遭造藻 员摇 蕴藻增藻造泽 燥枣 泽蚤灶早造藻 枣葬糟贼燥则泽
水平
蕴藻增藻造泽
因素 云葬糟贼燥则泽
载员 卵磷脂 辕 灾耘孕澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造糟澡燥造蚤灶藻
贼燥 增蚤贼葬皂蚤灶 耘
载圆 卵磷脂 辕白藜芦醇孕澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造糟澡燥造蚤灶藻
贼燥 则藻泽增藻则葬贼则燥造
载猿 卵磷脂 辕胆固醇孕澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造糟澡燥造蚤灶藻
贼燥 糟澡燥造藻泽贼藻则燥造
磷酸盐缓冲液用量
孕澡燥泽责澡葬贼藻 遭怎枣枣藻则
增燥造怎皂藻 辕 皂蕴
载源 高压微射流压力酝蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶
责则藻泽泽怎则藻 辕 孕杂陨
载缘 循环次数酝蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶
糟赠糟造藻泽
员 圆缘颐 员 圆缘颐 员 圆园颐 员 员缘园 员园 园园园 员
圆 圆园颐 员 圆园颐 员 员缘颐 员 圆园园 员源 园园园 圆
猿 员缘颐 员 员缘颐 员 员园颐 员 圆缘园 员愿 园园园 猿
源 员园颐 员 员园颐 员 缘颐 员 猿园园 圆圆 园园园 源
缘 缘颐 员 缘颐 员 圆颐 员 猿缘园 圆远 园园园 缘
远 圆颐 员 圆颐 员 员颐 员 猿园 园园园 远
员郾 猿郾 圆摇 纳米脂质体包封率测定摇 取 员皂蕴 白藜芦醇纳
米脂质体袁采用 匀孕蕴悦 测定其质量浓度 悦员遥 取 缘 皂蕴
纳米脂质体于分子截留量为 愿 园园园 耀 员源 园园园 阅 的透析
袋中袁置于 圆园园 皂蕴 园郾 园员皂燥造窑蕴 原员磷酸盐缓冲液渊责匀 值
苑郾 源冤中透析 圆源 澡袁每隔 圆 澡更换 员 次透析液咱员怨暂 遥 取出
透析后的纳米脂质体袁采用 匀孕蕴悦 测定其质量浓度
悦圆遥 计算其包封率 耘耘 越 悦圆 辕 悦员 伊 员园园豫 遥
员郾 源摇 粒径与 在藻贼葬电位的测定
将白藜芦醇纳米脂质体用 园郾 园员 皂燥造窑蕴 原员磷酸盐缓
冲液渊责匀值 苑郾 源冤稀释后袁采用 在藻贼葬电位仪测定其粒径
分布与 在藻贼葬电位遥 测试角度为 员苑猿毅袁测试温度为渊圆缘
依 园郾 员冤 益袁测试次数为 猿 次遥
员郾 缘摇 白藜芦醇纳米脂质体的制备
称取处方量的卵磷脂尧胆固醇尧白藜芦醇尧抗氧化
剂 灾耘袁加入 缘园园 皂蕴无水乙醇袁于 源缘 匀在尧圆源园 宰条件下
水浴超声 猿 皂蚤灶 至充分溶解袁源缘 益水浴条件下减压
渊真空度 原 园郾 园怨 酝孕葬冤旋转蒸发除去乙醇袁直至茄形瓶
壁上形成一层均匀的脂质薄膜遥 加入 园郾 园员 皂燥造窑蕴 原员磷
酸盐缓冲液渊责匀 值 苑郾 源冤和适量玻璃珠袁源缘 益水浴条
件下旋转水合 猿园 皂蚤灶袁得到白藜芦醇脂质体粗悬液遥
将其于高压微射流仪器中分散袁即得到白藜芦醇纳米
脂质体遥
员郾 远摇 试验设计
员郾 远郾 员摇 单因素试验摇 单因素基本条件为固定卵磷脂
质量为 员 早尧卵磷脂 辕 灾耘 辕白藜芦醇 辕胆固醇 越 员园 颐 员 颐 员 颐员尧磷酸盐缓冲液用量为 圆缘园 皂蕴尧微射流处理压力 员愿
园园园 孕杂陨尧循环次数 猿 次遥 各因素对白藜芦醇纳米脂质
体包封率的影响见表 员遥
员郾 远郾 圆摇 二次回归旋转组合设计试验摇 在单因素试验
的基础上袁选择卵磷脂 辕 灾耘尧卵磷脂 辕白藜芦醇尧卵磷
脂 辕胆固醇尧微射流处理压力与循环次数 缘 个因素进行
五因素三水平二次回归旋转组合设计试验袁以确定最
佳制备条件遥 利用统计分析软件 杂粤杂 增愿郾 园 专业版进
行试验设计袁并对试验结果进行分析遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 单因素试验
圆郾 员郾 员摇 卵磷脂 辕 灾耘对包封率的影响摇 卵磷脂与 灾耘比
值对白藜芦醇纳米脂质体包封率的影响如图 员 所示袁
随着卵磷脂 辕 灾耘比值的降低袁白藜芦醇纳米脂质体包
封率逐渐增大袁在卵磷脂 辕 灾耘 越 员园 颐 员时达到最大遥 比
苑员怨
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
值继续降低时袁包封率逐渐下降遥 灾耘可抑制脂质体中
磷脂氧化反应袁增强脂质膜稳定性咱圆园暂 袁但是当 灾耘所占
比例过大时袁灾耘在脂质双层膜中占据一定的空间袁干
扰了脂质囊泡的形成袁导致包封率下降咱圆员暂 遥
圆郾 员郾 圆摇 卵磷脂 辕白藜芦醇对包封率的影响摇 由图 圆 可
知袁随着白藜芦醇含量增加袁白藜芦醇纳米脂质体包封
率逐渐增大袁在卵磷脂 辕白藜芦醇 越 员园颐 员时达到饱和遥
当白藜芦醇含量继续增大时袁脂质囊材没有足够的比
表面积来包封大量的药物袁脂质体的包封率降低咱圆圆暂 遥
图 员摇 卵磷脂 辕 灾耘对包封率的影响
云蚤早援 员摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 则葬贼蚤燥 燥枣 孕澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造糟澡燥造蚤灶藻
贼燥 灾耘 燥灶 藻灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠
图 圆摇 卵磷脂 辕白藜芦醇对包封率的影响
云蚤早援 圆摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 则葬贼蚤燥 燥枣 孕澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造糟澡燥造蚤灶藻
贼燥 则藻泽增藻则葬贼则燥造 燥灶 藻灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠
圆郾 员郾 猿摇 卵磷脂胆固醇对包封率的影响摇 卵磷脂与胆
固醇比值对白藜芦醇纳米脂质体包封率的影响如图 猿
所示袁随着胆固醇含量的增加袁白藜芦醇包封率逐渐增
大袁在卵磷脂 辕胆固醇 越 员园颐 员时达到最大值愿苑郾 圆缘豫 遥随
着胆固醇含量的继续增加袁包封率逐渐减小遥 这是由
于胆固醇对脂质膜的流动性具有调节作用袁可增加脂
质体的包封率袁但是胆固醇含量过高时袁会占据有限的
脂质双分子层的空间位置袁使包封率降低咱怨暂 遥
图 猿摇 卵磷脂 辕胆固醇对包封率的影响
云蚤早援 猿摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 则葬贼蚤燥 燥枣 孕澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造糟澡燥造蚤灶藻
贼燥 糟澡燥造藻泽贼藻则燥造 燥灶 藻灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠
圆郾 员郾 源摇 磷酸盐缓冲液用量对包封率的影响 摇 由图 源
可知袁磷酸盐缓冲液用量越大袁水合越充分袁白藜芦醇
纳米脂质体的包封率越高遥 在磷酸盐缓冲液体积为
圆缘园 皂蕴渊即白藜芦醇 辕磷酸盐缓冲液 越 园郾 源 早窑蕴 原员 冤时袁
制得纳米脂质体包封率为 愿愿郾 缘缘 依 园郾 苑园豫 袁与 猿园园皂蕴
时的包封率 愿怨郾 怨源 依 园郾 愿猿豫无显著差异袁因此确定水
合介质体积为 圆缘园 皂蕴遥
图 源摇 磷酸盐缓冲液用量对包封率的影响
云蚤早援 源摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 责澡燥泽责澡葬贼藻 遭怎枣枣藻则 增燥造怎皂藻
燥灶 藻灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠
圆郾 员郾 缘摇 高压微射流压力对包封率的影响摇 由图 缘 可
知袁随着高压微射流处理压力的增加袁白藜芦醇纳米脂
愿员怨
摇 缘 期 高压微射流法制备白藜芦醇纳米脂质体
质体包封率逐渐增加袁在 员愿 园园园 孕杂陨 时达到最大遥 当
压力在 员愿 园园园 耀 猿园 园园园 孕杂陨 范围内袁包封率随着压力
的增加而降低遥 这是由于脂溶性的白藜芦醇主要是包
裹或穿插于磷脂双分子层内袁高压微射流处理压力的
增加导致脂质体的比表面积增大袁使白藜芦醇包裹量
相应增加曰当处理压力过大时袁脂质体结构被机械力破
坏袁导致部分白藜芦醇漏泄袁包封率降低咱员猿暂 遥
图 缘摇 高压微射流压力对包封率的影响
云蚤早援 缘摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 皂蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶 责则藻泽泽怎则藻
燥灶 藻灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠
圆郾 员郾 远摇 微射流循环次数对包封率的影响摇 微射流循
环次数对白藜芦醇纳米脂质体包封率的影响如图 远 所
示袁随着高压微射流循环次数的增加袁白藜芦醇纳米脂
质体包封率迅速增加袁在 猿 次循环时达到最大值
愿苑郾 圆缘豫 遥 循环次数继续增加时袁纳米脂质体结构受到
机械破坏袁包封率逐渐降低遥
表 圆摇 二次回归旋转组合设计因素水平
栽葬遭造藻 圆摇 云葬糟贼燥则泽 葬灶凿 造藻增藻造泽 燥枣 择怎葬凿则葬贼蚤糟 则藻早则藻泽泽蚤燥灶 则燥贼葬贼蚤燥灶 糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶 凿藻泽蚤早灶
水平
蕴藻增藻造泽
因素 云葬糟贼燥则泽
载员 卵磷脂 辕 灾耘孕澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造糟澡燥造蚤灶藻
贼燥 增蚤贼葬皂蚤灶 耘
载圆 卵磷脂 辕白藜芦醇孕澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造糟澡燥造蚤灶藻
贼燥 则藻泽增藻则葬贼则燥造
载猿 卵磷脂 辕胆固醇孕澡燥泽责澡葬贼蚤凿赠造糟澡燥造蚤灶藻
贼燥 糟澡燥造藻泽贼藻则燥造
载源 高压微射流压力酝蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶
责则藻泽泽怎则藻 辕 孕杂陨
载缘 循环次数酝蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶
糟赠糟造藻泽
原 员 缘颐 员 缘颐 员 缘颐 员 员源 园园园 圆
园 员园颐 员 员园颐 员 员园颐 员 员愿 园园园 猿
员 员缘颐 员 员缘颐 员 员缘颐 员 圆圆 园园园 源
圆郾 圆摇 二次回归旋转组合设计试验
在单因素试验基础上袁选择卵磷脂 辕 灾耘渊载员冤尧卵磷
脂 辕白藜芦醇渊载圆冤尧卵磷脂 辕胆固醇渊载猿冤尧高压微射流
压力渊载源冤和循环次数渊载缘冤进行五因素三水平二次回
归旋转组合设计试验渊表 圆冤袁试验结果见表 猿遥
圆郾 圆郾 员摇 回归方程的建立及检验摇 运用 杂粤杂 软件进行
图 远摇 高压微射流循环次数对包封率的影响
云蚤早援 远摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 皂蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶 糟赠糟造藻泽
燥灶 藻灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠
数据分析袁以白藜芦醇包封率为响应值袁在 琢 越园郾 园员 水
平剔除不显著项袁得到多元二次回归方程为院
再 越 愿苑郾 圆缘猿猿猿 垣 源郾 圆源远圆缘载圆 垣 缘郾 缘猿缘远圆缘载源 原
缘郾 源怨猿员圆缘载员圆 原 猿郾 缘愿圆缘载员载猿 原 苑郾 员圆源苑怨圆载圆圆 垣 猿郾 圆远
载圆载猿 原 远郾 圆远愿员圆缘载猿圆 原 员苑郾 源怨苑圆怨载源圆 原 圆郾 愿缘缘载源载缘 原
远郾 源园园远圆缘载缘圆
由方差分析可知袁回归模型失拟性检验 孕 越
园郾 园远苑缘远远 跃 园郾 园缘袁差异不显著渊表 源冤袁说明所选用的二
次回归模型合适袁所得方程能对响应值进行很好地预
测曰回归方程的显著性检验 孕 越 园郾 园园园员 约 园郾 园员袁差异极
显著袁说明模型成立且可靠遥
圆郾 圆郾 圆摇 各因素影响程度分析摇 各因素的 云 值可反映
出其对试验指标的重要性袁云值越大袁表明对试验指标
的影响越大遥 由表 猿 可知袁云载员 越 园郾 园猿员园怨远袁云载圆 越源圆郾 猿怨缘苑缘袁云载猿 越 员郾 源源源猿圆怨袁 云载源 越 苑圆郾 园缘员苑源袁 云载缘 越猿郾 圆缘远远缘远袁即各因素对白藜芦醇提取率的影响程度大
小顺序为院高压微射流压力 跃卵磷脂 辕白藜芦醇 跃卵磷
脂 辕胆固醇 跃循环次数 跃卵磷脂 辕 灾耘遥圆郾 圆郾 猿摇 双因素交互作用分析摇 由表 猿 可知袁试验所建
怨员怨
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
表 猿摇 试验设计及结果
栽葬遭造藻 猿摇 耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 凿藻泽蚤早灶 葬灶凿 则藻泽怎造贼泽
序号
耘曾责藻则蚤皂藻灶贼
灶怎皂遭藻则
载员 载圆 载猿 载源 载缘
包封率
耘灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶
藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 辕 豫
序号
耘曾责藻则蚤皂藻灶贼
灶怎皂遭藻则
载员 载圆 载猿 载源 载缘
包封率
耘灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶
藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 辕 豫
员 原 员 原 员 园 园 园 苑员郾 缘远 依 园郾 园员 圆源 员 园 园 员 园 苑园郾 源愿 依 园郾 远愿
圆 原 员 员 园 园 园 苑缘郾 愿远 依 园郾 园猿 圆缘 园 原 员 原 员 园 园 苑猿郾 愿圆 依 园郾 园缘
猿 员 原 员 园 园 园 苑源郾 源苑 依 园郾 园圆 圆远 园 原 员 员 园 园 远远郾 员愿 依 园郾 愿缘
源 员 员 园 园 园 苑愿郾 猿怨 依 员郾 缘苑 圆苑 园 员 原 员 园 园 苑远郾 员愿 依 猿郾 园圆
缘 园 园 原 员 原 员 园 缘愿郾 圆远 依 员郾 猿圆 圆愿 园 员 员 园 园 愿员郾 缘愿 依 园郾 园员
远 园 园 原 员 员 园 远愿郾 怨园 依 园郾 怨远 圆怨 园 园 原 员 园 原 员 愿圆郾 猿源 依 园郾 源愿
苑 园 园 员 原 员 园 缘苑郾 猿员 依 园郾 猿源 猿园 园 园 原 员 园 员 苑源郾 员苑 依 园郾 园苑
愿 园 园 员 员 园 远苑郾 苑愿 依 园郾 员猿 猿员 园 园 员 园 原 员 苑园郾 园愿 依 员郾 苑愿
怨 园 原 员 园 园 原 员 远愿郾 缘远 依 员郾 圆源 猿圆 园 园 员 园 员 苑员郾 圆苑 依 园郾 猿苑
员园 园 原 员 园 园 员 远苑郾 员苑 依 园郾 员苑 猿猿 原 员 园 园 园 原 员 苑源郾 远苑 依 园郾 园源
员员 园 员 园 园 原 员 愿园郾 远圆 依 园郾 缘愿 猿源 原 员 园 园 园 员 苑圆郾 源员 依 园郾 源圆
员圆 园 员 园 园 员 苑缘郾 猿员 依 园郾 源圆 猿缘 员 园 园 园 原 员 苑远郾 圆猿 依 园郾 猿怨
员猿 原 员 园 原 员 园 园 苑圆郾 苑员 依 园郾 远源 猿远 员 园 园 园 员 苑苑郾 怨源 依 园郾 员苑
员源 原 员 园 员 园 园 愿猿郾 猿源 依 员郾 圆圆 猿苑 园 原 员 园 原 员 园 缘源郾 远愿 依 园郾 缘园
员缘 员 园 原 员 园 园 苑源郾 苑源 依 园郾 园猿 猿愿 园 原 员 园 员 园 缘怨郾 猿园 依 园郾 员远
员远 员 园 员 园 园 苑员郾 园源 依 园郾 园怨 猿怨 园 员 园 原 员 园 远园郾 圆缘 依 园郾 远猿
员苑 园 园 园 原 员 原 员 缘远郾 源缘 依 园郾 缘缘 源园 园 员 园 员 园 苑缘郾 源怨 依 园郾 源缘
员愿 园 园 园 原 员 员 缘怨郾 愿远 依 员郾 员怨 源员 园 园 园 园 园 愿源郾 怨苑
员怨 园 园 园 员 原 员 苑源郾 缘圆 依 园郾 员缘 源圆 园 园 园 园 园 愿苑郾 怨缘
圆园 园 园 园 员 员 远远郾 缘员 依 员郾 怨缘 源猿 园 园 园 园 园 愿苑郾 园怨
圆员 原 员 园 园 原 员 园 远员郾 园怨 依 园郾 苑苑 源源 园 园 园 园 园 愿怨郾 猿园
圆圆 原 员 园 园 员 园 远愿郾 苑愿 依 园郾 员缘 源缘 园 园 园 园 园 愿苑郾 源源
圆猿 员 园 园 原 员 园 缘缘郾 圆怨 依 猿郾 园源 源远 园 园 园 园 园 愿远郾 苑苑
立的数学模型中 载员载猿尧载圆载猿尧载源载缘 交互作用显著遥 根
据分析结果分别绘制双因素交互作用的曲面图和等高
线渊图 苑 原图 怨冤遥 结果表明袁猿 个交互作用响应面均为
开口向下的凸性曲面袁即在试验范围内存在响应值的
极高值遥 其中袁高压微射流压力渊载源 冤响应曲面最陡
峭袁椭圆形等高线排列最密集袁对白藜芦醇纳米脂质体
包封率影响最大袁与 云值分析相符遥
由图 苑 可知袁卵磷脂 辕白藜芦醇 越 员园颐 员尧微射流压
力为员愿 园园园 孕杂陨尧循环次数 猿 次时袁载员载猿 交互作用中影
响包封率的主要因素是卵磷脂 辕胆固醇渊载猿冤袁图中曲
面呈现陡峭地先增高后降低的趋势遥 卵磷脂 辕 灾耘渊载员冤
接近中心点时提取率最大袁偏离中心点越远袁提取率越
低遥 其等高线接近圆形袁且分布稀疏袁表明其交互作用
较弱遥
由图 愿 可知袁卵磷脂 辕 灾耘 越 员园颐 员尧微射流压力为 员愿
园园园 孕杂陨尧循环次数 猿 次时袁载圆载猿 交互作用中二者均对
响应值起着二次影响作用遥 图中曲面呈先升高后降低
的趋势袁即随着卵磷脂 辕白藜芦醇渊载圆冤与卵磷脂 辕胆固
醇渊载猿冤的增加袁包封率先增加后减小袁在接近中心点
时达到最大遥
由图 怨 可知袁卵磷脂 辕 灾耘 辕白藜芦醇 辕胆固醇 越 员园颐员颐 员颐 员时袁载源载缘 交互作用中影响包封率的主要因素是
压力渊载源冤袁随着微射流压力的增加袁包封率急剧增加
后减小遥 随着循环次数渊载缘冤的增加袁包封率先增加后
减小袁接近中心点时达到最大袁但变化较缓慢遥 由等高
线呈椭圆形密集排列可知袁二者交互作用较显著遥
圆郾 圆郾 源摇 提取条件优化及验证摇 对回归方程进行分析袁
取一阶导数等于 园袁解方程组得到提取白藜芦醇的最
佳理论工艺参数为院卵磷脂 辕 灾耘 越 员园 颐 员尧卵磷脂 辕白藜
芦醇 越员员郾 远颐 员尧卵磷脂 辕胆固醇 越 员园郾 缘颐 员尧微射流压力
园圆怨
摇 缘 期 高压微射流法制备白藜芦醇纳米脂质体
摇 摇 摇 摇 表 源摇 试验结果方差分析表
栽葬遭造藻 源摇 灾葬则蚤葬灶糟藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼藻泽贼 则藻泽怎造贼泽
变异来源
灾葬则蚤葬贼蚤燥灶 泽燥怎则糟藻泽
自由度
凿枣 方差 杂杂 均方 酝杂 云值 云 增葬造怎藻
孕值
孕则 跃 云
显著性
杂蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶糟藻
载员 员 园郾 圆员员远 园郾 圆员员远 园郾 园猿员员 园郾 愿远员源
载圆 员 圆愿愿郾 源怨园圆 圆愿远郾 苑怨源圆 源圆郾 猿怨缘愿 园郾 园园园员 鄢鄢
载猿 员 怨郾 愿圆愿圆 怨郾 愿圆愿圆 员郾 源源源猿 园郾 圆源园苑
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载缘 员 圆圆郾 员远园员 圆圆郾 员远园远 猿郾 圆缘远苑 园郾 园愿猿圆
载员鄢载员 员 圆远猿郾 园猿源园 圆远圆郾 怨源员员 猿愿郾 远怨怨愿 园郾 园园园员 鄢鄢
载员鄢载圆 员 园郾 园猿远员 园郾 园猿远员 园郾 园园缘猿 园郾 怨源圆缘
载员鄢载猿 员 缘员郾 猿猿苑圆 缘员郾 猿猿苑圆 苑郾 缘源源源 园郾 园员员园 鄢
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载员鄢载缘 员 猿郾 怨源园圆 猿郾 怨源园圆 园郾 缘苑怨园 园郾 源缘猿愿
载圆鄢载圆 员 源源猿郾 园员怨缘 源源源郾 缘苑缘源 远缘郾 员园缘园 园郾 园园园员 鄢鄢
载圆鄢载猿 员 源圆援 援 缘员园源 源圆郾 缘圆园源 远郾 圆源苑圆 园郾 园员怨源 鄢
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载猿鄢载源 员 园郾 园园苑圆 园郾 园园苑圆 园郾 园园员员 园郾 怨苑源猿
载猿鄢载缘 员 圆员郾 怨园圆源 圆员郾 怨园圆源 猿郾 圆员愿苑 园郾 园愿源怨
载源鄢载源 员 圆 远苑员郾 怨园园园 圆 远苑缘郾 苑员怨园 猿怨圆郾 远缘缘圆 园郾 园园园员 鄢鄢
载源鄢载缘 员 猿圆郾 远园源员 猿圆郾 远园源员 源郾 苑怨员源 园郾 园猿愿圆 鄢
载缘鄢载缘 员 猿缘苑郾 缘猿愿怨 猿缘苑郾 园苑猿远 缘圆郾 缘源猿园 园郾 园园园员 鄢鄢
模型
酝燥凿藻造 圆园 猿 苑缘圆郾 缘猿远园 员愿苑郾 远圆远愿 圆苑郾 缘苑猿员 园郾 园园园员 鄢鄢
线性
蕴蚤灶藻葬则 缘 愿员园郾 怨愿园怨 员远圆郾 员怨远圆 圆猿郾 愿猿缘怨 园郾 园园园员
二次
匝怎葬凿则葬贼蚤糟 缘 圆 苑源猿郾 员员苑园 缘源愿郾 远圆猿缘 愿园郾 远圆源圆 园郾 园园园员
交互作用
悦则燥泽泽 孕则燥凿怎糟贼 员园 员怨愿郾 源猿苑怨 员怨郾 愿源猿愿 圆郾 怨员远圆 园郾 园员源缘
误差
耘则则燥则 圆缘 员苑园郾 员员苑源 远郾 愿园源苑
失拟
蕴葬糟噪 燥枣 枣蚤贼 圆园 员缘怨郾 怨猿源缘 苑郾 怨怨远苑 猿郾 怨圆远缘 园郾 园远苑远
纯误差
孕怎则藻 耘则则燥则 缘 员园郾 员愿圆怨 圆郾 园猿远远
总和
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摇 摇 注院鄢代表差异显著渊孕 约 园郾 园缘冤袁鄢鄢代表差异极显著渊孕 约 园郾 园员冤遥
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员愿 猿远远 孕杂陨尧循环次数 猿 次袁在此条件下白藜芦醇纳米
脂质体理论预测包封率为 愿苑郾 远园豫 遥 为检验响应面法
所得结果的可靠性袁在上述条件下进行 猿 次重复验证
试验袁得白藜芦醇纳米脂质体包封率为 愿苑郾 苑源豫 依
员郾 园员豫 袁与预测理论值相符遥
圆郾 猿摇 粒径与 在藻贼葬电位测定
采用 在藻贼葬电位仪测定最佳工艺制得白藜芦醇纳
米脂质体袁其平均粒径为 苑愿郾 猿员 依 员郾 猿苑灶皂袁且分布范围
员圆怨
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
图 苑摇 卵磷脂 辕 灾耘和卵磷脂 辕胆固醇对包封率的交互作用分析
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图 愿摇 卵磷脂 辕白藜芦醇和卵磷脂 辕胆固醇对包封率的交互作用分析
云蚤早援 愿摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 则葬贼蚤燥 燥枣 造藻糟贼蚤灶藻 贼燥 则藻泽增藻则葬贼则燥造葬灶凿 造藻糟贼蚤灶藻 贼燥 糟澡燥造藻泽贼藻则燥造 燥灶 藻灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠
较窄渊图 员园冤遥 在藻贼葬 电位为 原 缘缘郾 缘 皂灾袁绝对值大于
猿园皂灾小于 远园皂灾袁表明白藜芦醇纳米脂质体具有物理
稳定性咱圆猿暂 遥
猿摇 讨论
白藜芦醇被喻为继紫杉醇之后的又一新的绿色抗
癌药物袁自然资源十分丰富袁且具有较高的安全性袁因此
在医药尧食品尧化妆品等行业中具有广阔的应用前景遥
因此袁探寻与研究清洁安全尧可工业化生产的白藜芦醇
纳米脂质体制备工艺具有重要意义咱圆源 原 圆缘暂 遥 乐文慧
等咱圆远暂采用乙醇注入法制备白藜芦醇纳米脂质体袁包封
率为 愿源郾 远愿豫袁但该法乙醇注入速度不易控制袁且生产周
期较长遥 许汉林等咱圆苑暂采用薄膜分散法制备白藜芦醇纳
米脂质体袁包封率为 怨猿郾 缘圆豫遥 王新春等咱圆愿暂比较白藜芦
醇纳米脂质体尧固体脂质纳米粒和小麦醇溶蛋白纳米粒
的物理性质与作用效果袁发现白藜芦醇纳米脂质体的粒
径最小袁包封率最高袁大鼠体内的绝对生物利用度最大遥
上述研究存在有机试剂残留和磷脂成分易氧化等问题袁
且制备方法生产成本高尧周期长袁制备过程难以控制袁放
大为工业化生产存在难度遥 本研究以乙醇作为溶剂袁添
加抗氧化剂 灾耘袁采用高压微射流法制备白藜芦醇纳米
脂质体袁粒径小渊苑愿郾 猿员灶皂冤且包封率较高 愿苑郾 苑源豫袁物理
性质稳定袁同时工艺上较上述研究具有操作方便袁清洁
圆圆怨
摇 缘 期 高压微射流法制备白藜芦醇纳米脂质体
图 怨摇 微射流压力和循环次数对包封率的交互作用分析
云蚤早援 怨摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 皂蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶 责则藻泽泽怎则藻 葬灶凿 糟赠糟造藻泽 燥灶 藻灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠
注院粤院粒经分布图曰 月院在藻贼葬电位图遥
晕燥贼藻院 粤院 杂蚤扎藻 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 遭赠 蚤灶贼藻灶泽蚤贼赠援 月院 在藻贼葬 责燥贼藻灶贼蚤葬造
图 员园摇 白藜芦醇纳米脂质体粒径分布与 扎藻贼葬电位
云蚤早援 员园摇 栽澡藻 泽蚤扎藻 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 葬灶凿 扎藻贼葬 责燥贼藻灶贼蚤葬造 燥枣 则藻泽增藻则葬贼则燥造 灶葬灶燥造蚤责燥泽燥皂藻泽
安全袁可工业化生产等优点遥
源摇 结论
通过单因素试验和响应面分析研究袁确立高压微
射流法制备白藜芦醇纳米脂质体最佳工艺条件为院卵
磷脂 辕 灾耘 越 员园颐 员尧卵磷脂 辕白藜芦醇 越 员员郾 远颐 员尧卵磷脂 辕
胆固醇 越 员园郾 缘颐 员尧磷酸盐缓冲液用量为 圆缘园 皂蕴尧微射
流压力 员愿 猿远远 孕杂陨尧循环次数 猿 次袁在此条件下白藜芦
醇纳米脂质体包封率为 愿苑郾 苑源豫 依 员郾 园员豫 遥 各因素对
白藜芦醇提取率的影响顺序为院微射流压力 跃卵磷脂 辕
白藜芦醇 跃卵磷脂 辕胆固醇 跃循环次数 跃卵磷脂 辕 灾耘遥
制得的白藜芦醇纳米脂质体在不同给药方式下如
何与体内细胞膜尧线粒体等之间作用袁其在体内结合位
点与作用通道有待进一步探讨曰白藜芦醇纳米脂质体
在体内的缓释时间及规律尧抗肿瘤效果及其他生物活
性的变化还有待深入研究遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 砸葬遭藻泽蚤葬噪葬 酝袁 砸葬噪燥贼燥灶凿则葬皂葬泽赠鄄砸葬遭藻泽蚤葬噪葬 蕴袁 酝葬遭蚤造造藻 陨袁 孕燥则贼藻 悦袁
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咱 猿 暂 摇 陈琼玲援 花生根白藜芦醇提纯尧纳米脂质体制备及抗肿瘤活性
咱阅暂援 北京院中国农业科学院袁 圆园员猿
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咱 缘 暂 摇 毕海丹援 酿酒葡萄皮渣中反式白藜芦醇的提取纯化及其抗氧化
性的研究咱阅暂援 哈尔滨院 东北农业大学袁 圆园园远
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月蚤燥责澡赠泽蚤糟葬 粤糟贼葬袁 员怨愿源袁 苑苑缘渊圆冤院 员远怨 原 员苑源
咱员猿暂 摇 刘伟袁 刘玮琳袁 刘成梅袁 杨水兵袁 郑会娟袁 刘建华袁 王建红援 高
压微射流制备纳米中链脂肪酸脂质体的研究咱 允暂 援 高压物理学
报袁 圆园员园袁 圆源渊源冤院 圆怨猿 原 圆怨怨
咱员缘暂 摇 再葬灶早 杂 月袁 蕴蚤怎 宰袁 蕴蚤怎 悦 酝袁 蕴蚤怎 宰 蕴袁 栽燥灶早 郧 匀袁 在澡藻灶早 匀 允袁
在澡燥怎 宰援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 葬灶凿 遭蚤燥葬增葬蚤造葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 增蚤贼葬皂蚤灶 悦
灶葬灶燥造蚤责燥泽燥皂藻泽 责则藻责葬则藻凿 遭赠 枣蚤造皂 藻增葬责燥则葬贼蚤燥灶鄄凿赠灶葬皂蚤糟 澡蚤早澡 责则藻泽泽怎则藻
皂蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶 咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 阅蚤泽责藻则泽蚤燥灶 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿
栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园员圆袁 猿猿渊员员冤院员远园愿 原 员远员源
咱员远暂摇 陈琼玲袁 刘红芝袁 刘丽袁 何轩辉袁 王强援 高压 原微波法提取花生
根中白藜芦醇咱允暂 援 食品科学袁 圆园员猿袁 猿源渊圆园冤院 源猿 原 源远
咱员苑暂摇 陈琼玲袁 刘红芝袁 刘丽袁 何轩辉袁 王强袁 胡晖援 大孔树脂 原硅胶
柱层析法纯化花生根中白藜芦醇咱 允暂 援 中国食品学报袁 圆园员源袁
渊远冤院 员圆苑 原 员猿圆
咱员愿暂摇 国家粮食局援 郧月 辕 栽 圆源怨园猿 原 圆园员园 花生中白藜芦醇的测定高效液
相色谱法咱杂暂援 北京院中国标准出版社袁 圆园员园
咱员怨暂摇 陈洪轩袁 陈倩倩袁 刘万路袁 史荣袁 徐志杰援 白藜芦醇乳脂体的制
备和工艺考察咱允暂 援 河南大学学报院医学版袁 圆园员园袁 圆怨渊源冤院 圆远远
原 圆远怨
咱圆园暂摇 悦则燥皂皂藻造蚤灶 阅 允 粤袁 郧则蚤贼 酝袁 栽葬造泽皂葬 匀袁 在怎蚤凿葬皂 晕 允援 蕴蚤责燥泽燥皂藻泽 葬泽
糟葬则则蚤藻则泽 枣燥则 凿则怎早泽 葬灶凿 葬灶贼蚤早藻灶泽院 葬责责则燥葬糟澡藻泽 贼燥 责则藻泽藻则增藻 贼澡藻蚤则 造燥灶早
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员怨怨源袁 圆园渊源冤院 缘源苑 原 缘缘远
咱圆员暂摇 旷英姿援 茶多酚脂质体制备与表征咱阅暂援 南京院 东南大学袁 圆园园远
咱圆圆暂摇 阴婷婷袁 杨水兵袁 刘成梅袁 刘伟袁 刘伟琳袁 童桂鸿袁 章瑜袁 郑会
娟援 中链脂肪酸 原 灾悦复合脂质体制备及初步稳定性咱 允暂 援 食品
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糟澡藻皂蚤糟葬造 泽贼葬遭蚤造蚤贼赠 燥枣 糟燥造造燥蚤凿葬造 造蚤责蚤凿 责葬则贼蚤糟造藻泽 咱 允 暂 援 月蚤燥皂葬贼藻则蚤葬造泽袁
圆园园猿袁 圆源渊圆猿冤院源圆愿猿 原 源猿园园
咱圆源暂摇 李万忠袁 田景振援 白藜芦醇新剂型研究进展咱允暂 援 中国医药生物
技术袁 圆园员源袁 远渊圆冤院 员猿愿 原 员源园
咱圆缘暂摇 陈琼玲袁 刘红芝袁 刘丽袁 何轩辉袁 王强援 白藜芦醇纳米脂质体研
究进展咱允暂 援 核农学报袁 圆园员猿袁 圆苑渊苑冤院 怨远圆 原 怨远苑
咱圆远暂摇 乐文慧袁 黄早成袁肖苏尧袁 曹庸援 白藜芦醇固体脂质体制备工艺
研究咱允暂 援 食品科学袁 圆园员园袁 猿员渊员愿冤院缘怨 原 远圆
咱圆苑暂摇 徐汉林袁 张念袁 刘浩袁 程光明袁 黄晶援 白藜芦醇脂质体的制备工
艺研究咱允暂 援 湖北中医杂志袁 圆园园怨袁 猿员渊圆冤院缘缘 原 缘远
咱圆愿暂摇 王新春袁 侯世祥袁 李文袁 李小英袁 周亚伟援 白藜芦醇纳米脂质体
体外释药和大鼠小肠吸收特性的研究 咱 允暂 援 中国中药杂志袁
圆园园苑袁 猿圆渊员员冤院 员园愿源 原 员园愿苑
孕则藻责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣 砸藻泽增藻则葬贼则燥造 晕葬灶燥造蚤责燥泽燥皂藻泽 遭赠 匀蚤早澡
孕则藻泽泽怎则藻 酝蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶
悦匀耘晕 匝蚤燥灶早造蚤灶早员袁圆摇 蕴陨哉 匀燥灶早扎澡蚤员 摇 蕴陨哉 蕴蚤员 摇 宰粤晕郧 匝蚤葬灶早员
渊员 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 粤早则燥鄄孕则燥凿怎糟贼泽 孕则燥糟藻泽泽蚤灶早 葬灶凿 择怎葬造蚤贼赠 糟燥灶贼则燥造袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 辕 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣
粤早则燥鄄责则燥凿怎糟贼泽 责则燥糟藻泽泽蚤灶早 泽糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁
月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园员怨猿曰 圆悦燥造造藻早藻 燥枣 蚤灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶袁 杂澡葬灶曾蚤 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 允蚤灶扎澡燥灶早袁 杂澡葬灶曾蚤摇 园猿园愿园园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽澡藻 贼藻糟澡灶燥造燥早赠 燥枣 责则藻责葬则蚤灶早 则藻泽增藻则葬贼则燥造 灶葬灶燥造蚤责燥泽燥皂藻泽 遭赠 澡蚤早澡 责则藻泽泽怎则藻 皂蚤糟则燥枣造怎蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿 憎葬泽
蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻凿 贼燥 蚤皂责则燥增藻 贼澡藻 遭蚤燥葬增葬蚤造葬遭蚤造蚤贼赠 葬灶凿 泽造燥憎鄄则藻造藻葬泽藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 则藻泽增藻则葬贼则燥造援 韵灶 贼澡藻 遭葬泽蚤泽 燥枣 泽蚤灶早造藻 枣葬糟贼燥则
藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽袁 贼澡藻 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 憎藻则藻 燥责贼蚤皂蚤扎藻凿 遭赠 择怎葬凿则葬贼蚤糟 则藻早则藻泽泽蚤燥灶 则燥贼葬贼蚤燥灶 凿藻泽蚤早灶 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼袁 贼葬噪蚤灶早 贼澡藻
藻灶糟葬责泽怎造葬贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 葬泽 藻增葬造怎葬贼蚤燥灶 蚤灶凿藻曾援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 燥责贼蚤皂怎皂 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 憎藻则藻 葬泽 枣燥造造燥憎泽院
贼澡藻 皂葬泽泽 则葬贼蚤燥 燥枣 造藻糟贼蚤灶藻 贼燥 增蚤贼葬皂蚤灶 耘 员园 颐 员袁 造藻糟蚤贼澡蚤灶 贼燥 则藻泽增藻则葬贼则燥造 员员郾 远 颐 员袁 造藻糟蚤贼澡蚤灶 贼燥 糟澡燥造藻泽贼藻则燥造 员园郾 缘 颐 员袁
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责燥贼藻灶贼蚤葬造 憎葬泽 原 缘缘郾 缘 皂灾援 栽澡藻 燥责贼蚤皂蚤扎藻凿 燥责藻则葬贼蚤燥灶 蚤泽 则藻葬泽燥灶葬遭造藻 葬灶凿 责则葬糟贼蚤糟葬遭造藻 贼燥 责则藻责葬则藻 则藻泽增藻则葬贼则燥造 灶葬灶燥造蚤责燥泽燥皂藻泽
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源圆怨