全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊苑冤院园愿愿缘 耀 园愿怨源允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员猿鄄园圆鄄圆圆摇 接受日期院圆园员猿鄄园远鄄员远
基金项目院野怨苑猿冶计划渊圆园园怨悦月员员愿源园园冤袁野怨源愿 项目冶渊圆园员员鄄郧员缘鄄圆冤袁国家自然科学基金渊猿员员苑员缘远远冤
作者简介院苏顺宗袁女袁助理研究员袁主要研究方向院 玉米遗传育种遥 耘鄄皂葬蚤造院 早葬燥泽怎岳 泽蚤糟葬怎援 藻凿怎援 糟灶
通讯作者院高世斌袁男袁教授袁主要研究方向院 玉米遗传育种遥 耘鄄皂葬蚤造院 泽澡蚤遭蚤灶早葬燥岳 员远猿援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园苑鄄园愿愿缘鄄员园
一个玉米 孕澡贼员家族磷转运蛋白基因克隆和功能分析
苏顺宗摇 吴锋锴摇 刘摇 丹摇 吴摇 玲摇 高世斌
渊四川农业大学玉米研究所袁四川 成都摇 远员员员猿园冤
摘摇 要院从耐低磷玉米自交系 员苑愿 中分离和鉴定高亲和力磷转运蛋白质基因袁为开展磷高效分子育种奠
定理论基础遥 本研究以水稻和拟南芥中鉴定的磷转运蛋白基因为基础袁运用生物信息学方法袁对玉米进
行全基因组预测及系统进化分析曰并运用克隆尧实时荧光定量 孕悦砸 和亚细胞定位方法对其家族成员进
行深入研究遥 结果表明袁从玉米自交系 月苑猿 全基因组序列中筛选出 猿苑 个磷转运蛋白候选基因袁并被聚
类为五大家族遥 从耐低磷材料中扩增了一个属于 孕澡贼员 家族成员 在皂孕澡贼员曰怨 的全长 糟阅晕粤袁该基因编码区
长 员远圆园遭责袁编码 缘猿怨 个氨基酸袁含有典型的 酝云杂超家族蛋白的保守结构域和 员圆 个跨膜结构曰荧光定量
孕悦砸分析表明袁在低磷胁迫下袁该基因的相对表达量显著增加袁且叶片中的表达量高于根系袁同时在基
因型之间也存在差异曰原生质体转化的亚细胞定位结果显示袁在皂孕澡贼员曰怨 表达蛋白主要分布于细胞膜上遥
在皂孕澡贼员曰怨 编码位于细胞膜上的高亲和力磷转运蛋白袁对调节磷素的动态平衡起重要作用遥
关键词院玉米曰磷转运蛋白曰进化树曰基因表达曰亚细胞定位
摇 摇 磷是植物生长发育所必需的三大营养元素之一袁
作为核酸与磷脂的关键组成袁以及能量代谢和新陈代
谢的活化中间体与信号级联传导和酶调控的组成成
分袁对植物体整个生理代谢的调控和抗逆性方面发挥
重要作用咱员暂 遥 同时袁磷在糖分代谢尧能量代谢尧酶促反
应及光合作用等过程中袁也起着至关重要的作用袁因此
在很大程度上决定了作物的产量和品质咱圆 原 猿暂 遥 然而袁
由于土壤对磷强烈的吸附导致土壤中可以被植物吸收
的有效无机磷浓度低至 圆滋皂燥造窑蕴 原员 咱源暂 袁土壤中有效磷
缺乏成为限制作物产量的重要非生物胁迫因素之一遥
在植物中袁随着更多磷转运蛋白基因的克隆和鉴
定以及植物基因组序列的测定袁通常将植物基因组磷
转运蛋白基因依据序列和功能的相似性分为五大家族
孕澡贼员尧孕澡贼圆尧孕澡贼猿尧孕澡燥员 和 孕澡燥圆咱缘暂 遥 依据对磷吸收能力
的强弱袁磷转运蛋白被分为低亲和力系统渊 造燥憎鄄葬枣枣蚤灶蚤贼赠袁
运皂值在 皂皂燥造窑蕴 原员数量级冤和高亲和力系统渊 澡蚤早澡鄄
葬枣枣蚤灶蚤贼赠袁 运皂 值为 员郾 愿 耀 怨郾 怨滋皂燥造窑蕴 原员 冤两大类咱远暂 遥 其
中 孕澡贼员 家族是高亲和力磷转运子咱苑 原 愿暂 袁而 孕澡贼圆 家族属
于低亲和力磷转运系统咱怨暂 遥 目前袁各家族的磷转运蛋
白基因至少已分别在烟草咱员园暂 尧 大麦咱员员 原 员圆暂 尧 拟南
芥咱员猿 原 员源暂 尧水稻咱员缘 原 员愿暂 尧 玉米咱员怨 原 圆园暂 尧 高粱咱圆员暂 尧 小立碗
藓咱圆圆暂等多种植物中分离得到袁并各自具有不同的表达
模式遥
玉米是全球最重要的粮食尧饲料和能源作物袁在我
国已上升为最大的粮食作物遥 在生产上玉米常面临着
土壤有效磷不足和磷肥利用率不高咱圆猿暂的生产制约因
素袁在低磷胁迫下玉米籽粒的品质会受到不同程度的
影响咱圆源暂 遥 因此袁发掘尧鉴定对磷的吸收和利用有重要
功能的磷转运蛋白基因袁是开展选育磷高效利用品种
的重要理论基础遥 随着玉米模式自交系 月苑猿 全基因
组测序的完成袁为在玉米全基因组水平上开展相关基
因家族的研究提供了很大的便利遥 本研究首先在玉米
全基因组范围预测了磷转运蛋白基因各家族的成员袁
对部分成员进行基因克隆和序列分析袁并通过实时荧
光定量 孕悦砸 的方法分析其在 皂砸晕粤 水平上不同胁迫
时段的表达模式袁以初步探索它们的生理生化特点和
功能袁从而为其在玉米分子育种中的应用进行理论探
讨袁同时提供优良的磷高效候选基因遥
缘愿愿
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料和处理
取玉米渊在藻葬 皂葬赠泽冤自交系 员苑愿渊耐低磷冤和 怨苑愿圆
渊低磷敏感冤的种子咱圆缘暂 渊由四川农业大学玉米研究所
提供冤袁以无菌水浮选去除瘪粒后袁用 猿豫的双氧水浸
泡 猿园皂蚤灶袁蒸馏水冲洗 猿 次后袁浸种催芽培养到露白袁
转播入已灭菌的石英砂袁置于恒温光照培养箱中袁温度
控制在 圆愿益左右袁光照为 员圆 澡窑凿 原员遥 在 猿 叶 员 心期袁选
取长势一致的幼苗袁去除胚乳渊注意避免对其造成机
械损伤冤袁移至全营养液渊供磷水平为 员皂皂燥造窑蕴 原员 冤中
进行适应性水培 圆 凿 后袁分别进行 远尧员圆尧圆源 和 苑圆 澡 的
低磷渊供磷水平为 员滋皂燥造窑蕴 原员 冤胁迫处理袁并在各相应
处理时段以全营养液培养为对照袁其他培养条件不变袁
猿 株混合取样根和叶组织遥 营养液配制参考 匀燥葬早造葬灶凿
营养液配方袁每次胁迫处理和对照的材料用锡箔纸迅
速包好置液氮中速冻袁 原 愿园益冰箱保存备用遥
员郾 圆摇 玉米基因组磷转运蛋白基因的鉴定
玉米 月苑猿 的氨基酸数据库 渊 在皂月苑猿 赃缘葬 赃 云郧杂 赃
贼则葬灶泽造葬贼蚤燥灶泽援 枣葬泽贼葬冤从国际玉米基因组网站 酝葬蚤扎藻郧阅月
渊澡贼贼责院椅憎憎憎援 皂葬蚤扎藻早凿遭援 燥则早 辕 冤下载袁分别以水稻和拟南
芥中已克隆测序的磷转运蛋白基因的氨基酸序列在
月苑猿 的数据库中进行 蕴燥糟葬造 月蕴粤杂栽袁使用 月蕴粤杂栽孕 程序
的 月蕴韵杂哉酝 远圆 模块进行比对袁最小阈值 耘 设定为
员园 原圆园遥 将所检索出的候选基因序列利用在线工具
杂酝粤砸栽 渊澡贼贼责院椅泽皂葬则贼援 藻皂遭造澡藻蚤凿藻造遭藻则早援 凿藻 辕 冤进行结构
域预测袁并用 月蕴粤杂栽晕程序进行二次验证袁筛选出玉米
基因组的磷转运蛋白基因遥
员郾 猿摇 系统进化树构建
利用 悦蕴哉杂栽粤蕴 载咱圆远暂软件对检索得到的磷转运蛋
白序列进行多序列联配分析遥 根据多序列联配结果袁
以酝耘郧粤 缘郾 园咱圆苑暂软件邻接法渊晕藻蚤早澡遭燥则鄄允燥蚤灶蚤灶早 皂藻贼澡燥凿冤
的 孕葬蚤则憎蚤泽藻 阅藻造藻贼蚤燥灶模式袁进行 月燥燥贼泽贼则葬责蚤灶早 检验袁重复
员园园园 次袁选用 砸葬灶凿燥皂 泽藻藻凿构建系统进化树遥
员郾 源摇 基因克隆
根据预测基因的 糟阅晕粤 序列和 悦阅杂 序列袁用
孕则蚤皂藻则缘郾 园 设计引物 员渊表 员冤进行同源序列克隆遥 采用
栽则蚤扎燥造渊陨灶增蚤贼则燥早藻灶冤方法提取各不同处理时段和组织的
总 砸晕粤袁电泳检测其质量袁 原 愿园益 保存备用遥 用
栽葬运葬砸葬公司的反转录试剂盒渊悦燥凿藻院阅砸砸园猿苑粤冤合成
糟阅晕粤第一链袁并以此为模板进行 孕悦砸 扩增袁圆园滋蕴 扩
增体系包含 圆 伊 郧悦 月怎枣枣藻则 陨尧 圆缘园滋皂燥造窑蕴 原员 凿晕栽孕尧
园郾 圆滋皂燥造窑蕴 原员上下游引物尧圆 哉 栽粤运粤砸粤 蕴粤 栽葬择 阅晕粤 聚
合酶尧员滋 蕴 糟阅晕粤 模板曰扩增程序为院 怨缘益 预变性
缘皂蚤灶曰怨源益 猿园 泽袁栽皂 猿园 泽袁苑圆益 员 耀猿皂蚤灶渊根据扩增产物
长度设定冤袁猿缘 个循环曰苑圆益延伸 员园皂蚤灶袁源益保存遥 利
用 员郾 圆豫的琼脂糖凝胶电泳分离尧检测 孕悦砸扩增产物袁
目标片段条带切下后袁用 韵酝耘郧粤 公司 阅晕粤 凝胶回收
试剂盒回收尧纯化袁并连接到 责酝阅员怨 原 栽 载体上袁进行
克隆袁送阳性菌液测序遥
表 员摇 引物名称及序列
栽葬遭造藻 员摇 晕葬皂藻泽 葬灶凿 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 责则蚤皂藻则泽 怎泽藻凿 蚤灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠
引物摇
孕则蚤皂藻则摇
正向引物渊缘忆 原 猿忆冤
云燥则憎葬则凿 责则蚤皂藻则 渊缘忆 原 猿忆冤
反向引物渊缘忆 原 猿忆冤
砸藻增藻则泽藻 责则蚤皂藻则 渊缘忆 原 猿忆冤
功能
云怎灶糟贼蚤燥灶
员 栽粤郧郧栽悦郧栽悦郧悦粤栽悦郧悦粤郧 悦郧栽郧粤栽粤郧悦悦悦粤悦悦粤栽郧栽 基因克隆
圆 郧粤郧悦栽悦粤栽郧郧悦郧悦郧悦郧郧郧郧郧粤郧粤 郧悦栽悦栽粤郧粤悦粤悦悦粤栽悦栽郧郧郧栽悦栽悦悦郧粤悦 融合表达载体的构建
猿 悦粤粤悦悦粤郧郧粤悦粤郧郧粤郧悦粤粤郧粤悦 栽郧粤悦郧郧郧悦栽悦悦栽悦悦栽悦栽郧粤 荧光定量 孕悦砸扩增
员愿杂 悦栽郧粤郧粤粤粤悦郧郧悦栽粤悦悦粤悦粤 悦悦悦粤粤郧郧栽悦悦粤粤悦栽粤悦郧粤郧 荧光定量 孕悦砸扩增
员郾 缘摇 生物信息学分析
根据测序得到的磷转运蛋白基因序列袁用 晕悦月陨
悦燥灶泽藻则增藻凿 阅燥皂葬蚤灶 阅葬贼葬遭葬泽藻 对其编码蛋白功能域进行
预测曰并用 阅晕粤杂贼葬则 软件预测其分子量和等电点曰采用
月蚤燥耘凿蚤贼 增苑郾 园郾 怨 和 月蚤燥载酝 圆郾 远 等生物学软件对其进行
氨基酸推导及推导序列的疏水性和跨膜结构预测曰利
用在线工具 匀酝酝栽韵孕尧杂蚤早灶葬造 孕 灾源郾 园尧杂酝粤砸栽 灾源郾 园咱圆愿暂
和 悦藻造造燥 增援 圆郾 缘咱圆怨暂等分析克隆基因是否含有跨膜区尧信
号肽和功能域预测以及亚细胞定位遥
员郾 远摇 在皂孕澡贼员曰怨 蛋白的亚细胞定位
采用带有酶切位点的引物 圆 渊划线部分依次为
杂葬糟 陨和 载遭葬 陨酶识别位点冤袁从连接有该基因 糟阅晕粤序
列的 责酝阅员怨 原 栽 载体上扩增获得完整的开放阅读框遥
以 栽源 阅晕粤连接酶将该开放阅读框与经 杂葬糟 陨 和 载遭葬 陨
进行双酶切的 责悦匀云猿 原 郧云孕 载体连接袁构建与绿色荧
光蛋白 渊郧云孕冤融合翻译的表达载体 责悦匀云猿 原 郧云孕鄄
远愿愿
摇 苑 期 一个玉米 孕澡贼员 家族磷转运蛋白基因克隆和功能分析
在皂孕澡贼员曰怨袁并进行热激转化大肠杆菌 阅匀缘琢 感受态细
胞遥
孕耘郧介导法转化已提取分离的水稻绿色原生质
体袁经 园郾 圆豫的荧光染料碘化丙啶渊孕陨冤染色后袁用荧光
显微镜 渊韵造赠皂责怎泽 月载远员冤进行镜检观察袁采用 酝藻凿蚤葬
悦赠遭藻则灶藻贼蚤糟泽 悦悦阅 苑园园 照相装置和 陨皂葬早藻 孕则燥 孕造怎泽 远郾 园 软
件拍摄并合成照片遥
员郾 苑摇 基因表达分析
将不同胁迫处理样品总 砸晕粤 反转录合成的
糟阅晕粤稀释 员园 倍后作为 择砸栽鄄孕悦砸 的模板遥 依据克隆
基因的测序结果袁用 孕则蚤皂藻则 缘郾 园 在其非保守区设计引
物 猿渊表 员冤袁并以玉米基因 员愿杂 作为内参对照袁对不同
处理的样品进行 择砸栽鄄孕悦砸遥 按照 杂泽燥云葬泽贼栽酝 耘增葬郧则藻藻灶襃
杂怎责藻则皂蚤曾试剂盒渊购自 月陨韵鄄砸粤阅 公司冤说明配制反应
体系袁 在 月蚤燥鄄砸葬凿 悦云载怨远栽酝 孕悦砸仪上进行操作袁每个样
品设 猿 个重复遥 反应体系含 圆 伊 耘增葬郧则藻藻灶 杂怎责藻则皂蚤曾
缘滋蕴袁糟阅晕粤 模板 员滋蕴袁正尧反引物各 园郾 猿滋蕴袁 凿凿 匀圆韵猿郾 源滋蕴袁总体积为 员园滋蕴遥 反应程序设定为院怨愿益预变
性 圆皂蚤灶曰怨愿益 圆 泽袁栽皂 员园泽袁并在此温度收集荧光袁读板
渊孕造葬贼藻 砸藻葬凿冤共 源缘 个循环遥 之后从 远缘益开始袁以每步
园郾 缘益的温度梯度升高至 怨缘益袁每步温度保持 员 泽并读
板袁绘制溶解曲线袁采用 孕枣葬枣枣造咱猿园暂算法分析实验结果遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 玉米磷转运蛋白基因成员的确定
根据拟南芥渊晕酝员园员怨猿怨袁晕酝员园远圆怨猿袁晕酝员员缘猿圆苑袁
晕酝员圆猿苑园园 耀 晕酝员圆猿苑园猿袁晕酝员圆愿愿源猿 和 晕酝员圆怨源缘圆曰晕酝赃
员愿园猿园圆曰 晕酝 赃 员圆员源园苑袁 晕酝 赃 员员源苑源源曰 粤云源苑源园苑远曰 晕酝 赃
员苑怨愿愿苑 冤尧 水 稻 渊 粤云缘猿远怨远员郾 员 耀 粤云缘猿远怨苑猿郾 员曰
韵泽园圆早猿愿园圆园曰 粤月园员远园远缘郾 员 曰 韵泽园圆早缘远缘员园郾 员 曰
韵泽园缘早源愿猿愿园郾 员袁韵泽园缘早源愿猿怨园冤中磷转运蛋白基因的序列
信息袁在 月苑猿 的氨基酸数据库中鉴定出玉米基因组范
围的磷转运蛋白基因共 猿苑 个袁按照保守结构域的功能
和染色体中的分布依次进行了命名渊表 圆尧图 员冤遥 孕澡贼员
和 孕澡燥圆 家族各有 员猿 个成员袁孕澡贼猿 和 孕澡燥员 家族分别有
缘 个成员袁而 孕澡贼圆 家族只有一个磷转运蛋白候选基因遥
摇 摇 利用在线工具 耘曾孕葬杂赠 渊澡贼贼责院椅憎憎憎援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕 冤
对鉴定出的磷转运蛋白序列进行分析袁得到它们的分
子量和理论等电点遥 孕澡贼员 家族的氨基酸长度大多集
中在 缘圆园 耀 远园园葬葬袁分子量集中在 缘愿园噪阅 左右袁等电点
在 苑郾 缘 耀 怨郾 缘 之间袁与报道的其他物种 孕澡贼员 家族基因
信息基本相符遥 猿苑 个磷转运蛋白候选基因分布在玉
米基因组的 员园 条染色体上渊图 员冤袁其中位于 缘 号染色
表 圆摇 玉米磷转运蛋白基因成员
栽葬遭造藻 圆摇 酝藻皂遭藻则泽 燥枣 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则
早藻灶藻泽 蚤灶 皂葬蚤扎藻 早藻灶燥皂藻
基因名称
郧藻灶藻 灶葬皂藻
蛋白编号
孕则燥贼藻蚤灶 藻灶贼则赠
糟燥凿藻
氨基酸
长度
粤皂蚤灶燥
葬糟蚤凿 辕 葬葬
分子量
酝燥造藻糟怎造葬则
憎藻蚤早澡贼 辕 噪阅
等电点
陨泽燥藻造藻糟贼蚤糟
责燥蚤灶贼 辕 孕陨
在皂孕澡贼员曰员 郧砸酝在酝圆郧园苑园园愿苑 缘圆源 缘苑郾 源缘 愿郾 猿苑
在皂孕澡贼员曰圆 郧砸酝在酝圆郧园苑缘愿苑园 缘愿苑 远猿郾 员缘 愿郾 猿源
在皂孕澡贼员曰猿 郧砸酝在酝圆郧员员圆猿苑苑 缘源猿 缘苑郾 怨园 愿郾 员员
在皂孕澡贼员曰源 郧砸酝在酝圆郧员缘源园怨园 缘源员 缘愿郾 苑缘 苑郾 远猿
在皂孕澡贼员曰缘 郧砸酝在酝圆郧园园怨苑苑怨 缘员苑 缘苑郾 缘源 怨郾 员愿
在皂孕澡贼员曰远 郧砸酝在酝圆郧园园怨愿园园 源苑远 缘猿郾 远园 怨郾 苑怨
在皂孕澡贼员曰苑 郧砸酝在酝圆郧园源缘源苑猿 缘猿缘 缘愿郾 苑远 苑郾 缘愿
在皂孕澡贼员曰愿 郧砸酝在酝圆郧员苑园圆园愿 缘员远 缘苑郾 员缘 怨郾 员猿
在皂孕澡贼员曰怨 郧砸酝在酝圆郧猿圆远苑园苑 缘猿怨 缘愿郾 源怨 苑郾 远缘
在皂孕澡贼员曰员园 郧砸酝在酝圆郧园源员缘怨缘 缘园怨 缘远郾 圆圆 愿郾 怨猿
在皂孕澡贼员曰员员 郧砸酝在酝圆郧员猿怨远猿怨 缘猿苑 缘愿郾 远远 苑郾 怨愿
在皂孕澡贼员曰员圆 郧砸酝在酝缘郧愿愿员园愿愿 缘缘源 远园郾 缘愿 愿郾 员缘
在皂孕澡贼员曰员猿 郧砸酝在酝圆郧员缘怨园苑缘 缘怨苑 远缘郾 圆源 怨郾 员员
在皂孕澡贼圆曰员 郧砸酝在酝圆郧园怨圆苑愿园 缘苑苑 缘怨郾 猿源 怨郾 缘猿
在皂孕澡贼猿曰员 郧砸酝在酝圆郧员员愿圆园愿 猿愿圆 源员郾 员缘 怨郾 园远
在皂孕澡贼猿曰圆 郧砸酝在酝圆郧园远园远猿园 猿远远 猿愿郾 远苑 怨郾 圆怨
在皂孕澡贼猿曰猿 郧砸酝在酝圆郧园员缘源园员 猿远远 猿愿郾 远园 怨郾 圆怨
在皂孕澡贼猿曰源 郧砸酝在酝圆郧员缘圆愿圆苑 猿远远 猿愿郾 远远 怨郾 圆怨
在皂孕澡贼猿曰缘 郧砸酝在酝圆郧园园怨园源缘 猿缘园 猿苑郾 员员 怨郾 圆员
在皂孕澡燥员曰员 郧砸酝在酝圆郧员源圆远远园 源圆圆 源怨郾 怨园 怨郾 园员
在皂孕澡燥员曰圆 郧砸酝在酝圆郧员苑远圆愿圆 源圆圆 源怨郾 愿愿 怨郾 园员
在皂孕澡燥员曰猿 郧砸酝在酝缘郧愿怨员怨源源 圆圆缘 圆源郾 怨圆 缘郾 远远
在皂孕澡燥员曰源 郧砸酝在酝圆郧源远远缘源缘 苑怨园 愿愿郾 源源 怨郾 远缘
在皂孕澡燥员曰缘 郧砸酝在酝圆郧园远源远缘苑 苑怨园 愿怨郾 怨猿 怨郾 圆猿
在皂孕澡燥圆曰员 郧砸酝在酝圆郧园员园源远园 猿苑猿 源员郾 怨猿 愿郾 猿怨
在皂孕澡燥圆曰圆 郧砸酝在酝圆郧园愿远缘愿猿 圆远苑 猿园郾 圆怨 远郾 苑员
在皂孕澡燥圆曰猿 郧砸酝在酝圆郧员圆猿缘员怨 猿愿源 源猿郾 缘员 源郾 怨员
在皂孕澡燥圆曰源 郧砸酝在酝圆郧园园猿怨缘猿 源猿猿 源愿郾 缘圆 怨郾 圆苑
在皂孕澡燥圆曰缘 郧砸酝在酝圆郧源远远圆远缘 猿愿员 源猿郾 猿猿 怨郾 员员
在皂孕澡燥圆曰远 郧砸酝在酝圆郧园愿缘愿源怨 源源苑 缘园郾 缘远 缘郾 愿园
在皂孕澡燥圆曰苑 郧砸酝在酝圆郧猿愿员苑园怨 愿苑员 怨远郾 猿苑 源郾 苑苑
在皂孕澡燥圆曰愿 郧砸酝在酝圆郧园圆苑缘源远 缘圆园 缘愿郾 猿苑 缘郾 源圆
在皂孕澡燥圆曰怨 郧砸酝在酝圆郧园苑愿猿远园 员员园圆 员圆员郾 怨愿 源郾 缘缘
在皂孕澡燥圆曰员园 郧砸酝在酝圆郧员圆圆园园猿 源猿愿 源怨郾 远猿 缘郾 员源
在皂孕澡燥圆曰员员 郧砸酝在酝圆郧源源园怨员愿 猿员愿 猿缘郾 猿苑 怨郾 园猿
在皂孕澡燥圆曰员圆 郧砸酝在酝圆郧源远源缘苑圆 愿苑员 怨远郾 猿苑 源郾 苑源
在皂孕澡燥圆曰员猿 郧砸酝在酝缘郧愿愿苑猿源缘 圆圆源 圆缘郾 员怨 源郾 远猿
苑愿愿
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
体上的 在皂孕澡贼圆曰员 作为 孕澡贼圆 家族唯一成员袁编码 缘苑苑
个氨基酸袁分子量达 缘怨郾 猿源噪阅袁等电点为 怨郾 缘猿遥 孕澡贼猿
家族的理化特点较为一致袁氨基酸长度集中于 猿远远葬葬袁
分子量约 猿怨噪阅袁等电点变化甚小袁范围在 怨郾 园远 耀 怨郾 圆怨
之间遥 而 孕澡燥员 和 孕澡燥圆 家族在染色体上的分布较为分
散袁编码的氨基酸长度差异明显袁分子量大小悬殊袁等
电点也高低不一遥
图 员摇 猿苑 个磷转运蛋白候选基因在
玉米基因组上的分布
云蚤早援 员摇 栽澡藻 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 燥枣 猿苑 责澡燥泽责澡葬贼藻
贼则葬灶泽责燥则贼藻则 糟葬灶凿蚤凿葬贼藻 早藻灶藻泽 蚤灶 早藻灶燥皂藻 燥枣 皂葬蚤扎藻
表 猿摇 克隆基因 在皂孕澡贼员曰怨 的生物信息学预测
栽葬遭造藻 猿摇 月蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟泽 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 在皂孕澡贼员曰怨
悦阅杂 辕氨基酸 辕 渊遭责 辕 葬葬冤
悦阅杂 辕 粤皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 辕 渊遭责 辕 葬葬冤
保守结构域
悦燥灶泽藻则增藻凿 阅燥皂葬蚤灶
跨膜结构
栽则葬灶泽皂藻皂遭则葬灶藻 澡藻造蚤糟藻泽
信号肽
杂蚤早灶葬造 孕
亚细胞定位
杂怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶
员远员苑 辕 缘猿怨 酝云杂渊孕云园苑远怨园冤 员圆 要 质膜 孕造葬泽皂葬酝藻皂遭则葬灶藻
圆郾 圆摇 系统进化树构建
为了探究玉米中磷转运蛋白的进化关系袁基于玉
米基因组范围鉴定出蛋白序列的多重比对结果袁利用
酝耘郧粤 缘郾 园 软件构建了拟南芥尧水稻和玉米磷转运蛋
白家族的系统发育树渊图 圆冤遥 由图 圆 可知袁玉米磷转
运蛋白基因家族具有与拟南芥和水稻相似的类群划
分遥 猿苑 个成员被分为多个不同的亚组袁并分别聚类到
孕澡贼员尧孕澡贼圆尧孕澡贼猿尧孕澡燥员 和 孕澡燥圆 五个家族中袁其中 孕澡贼圆
和 孕澡贼猿 的遗传关系最近遥 这可能与它们都是在胞质
内的质体膜上行使转运功能有关遥
根据构建的系统进化树结果渊图 圆冤袁在玉米中可
以找到 远 对直系同源基因和 员园 对旁系同源基因袁在拟
南芥和水稻中也分别存在 圆 对和 猿 对旁系同源基因遥
并且玉米中所有的直系同源基因均只与水稻配对袁其
他基因大多数和水稻有更高的相似性袁然后再与拟南
芥聚在一起遥
圆郾 猿摇 基因克隆与序列分析
从耐低磷玉米自交系 员苑愿 中获得一个长约 员郾 苑
运遭的基因袁经分析发现袁其 韵砸云 为 员远圆园遭责袁编码 缘猿怨
个氨基酸残基袁分子量为 缘愿郾 缘圆噪阅葬袁其中疏水氨基酸
有 圆猿源 个袁亲水氨基酸占 员圆缘 个袁含有 员圆 个跨膜结构
域渊表 猿 和图 猿冤袁这可能与其行使跨膜转运功能有关遥
圆郾 源摇 组织表达特异性分析
为了进一步分析玉米磷转运蛋白基因在玉米中的
表达模式袁选用了 圆 个对低磷胁迫具有极端反应的材
料 员苑愿 和 怨苑愿圆 为研究对象袁经 择砸栽鄄孕悦砸 技术检测了
在皂孕澡贼员曰怨 分别在根和叶中表达特性渊图 源冤遥 结果表
明袁在耐低磷材料 员苑愿 的叶片中袁在皂孕澡贼员曰怨 的相对表
达量在处理后均有不同程度的诱导增强表达袁且在胁
迫后期的 圆源 澡和 苑圆 澡时间点显著高于对照曰但该基因
在根部的相对表达量基本稳定袁在胁迫处理至 苑圆 澡
时袁相对表达量显著高于对照遥 在低磷敏感性材料
怨苑愿圆 的叶片中袁与其在 员苑愿 叶片中的表达模式类似袁
但在根中没有诱导增强表达现象袁甚至在处理至 员圆 澡
时袁相对表达量最低袁这可能与该材料对低磷环境的敏
感程度有关遥
圆郾 缘摇 在皂孕澡贼员曰怨 的亚细胞定位
为进一步探索该基因在线预测渊悦藻造造燥 增援 圆郾 缘冤定位
于质膜的结果袁构建了融合表达载体 责悦匀云猿鄄郧云孕鄄
在皂孕澡贼员曰怨遥 通过 孕耘郧 介导转化新鲜水稻绿色原生质
体袁经 园郾 圆豫的 孕陨染色袁用荧光显微镜进行镜检观察尧
成像遥 结果显示载体 责悦匀云猿鄄郧云孕 转化原生质体后绿
色荧光分布于整个细胞 渊图 源冤袁而重组质粒 责悦匀云猿鄄
郧云孕鄄在皂孕澡贼员曰怨 的绿色荧光基本均匀分布于整个细胞
膜上袁初步证实 在皂孕澡贼员曰怨 定位于细胞膜遥
猿摇 讨论
以序列相似性为基础的比较基因组学在研究物种
间的进化关系尧发现未知基因及其功能预测等方面袁发
挥着重要作用遥 本研究采用比较基因组学的研究手
段袁根据其他植物中不同家族的磷转运蛋白基因信息袁
愿愿愿
摇 苑 期 一个玉米 孕澡贼员 家族磷转运蛋白基因克隆和功能分析
图 圆摇 玉米磷转运蛋白渊孕匀栽冤基因与其他植物同源基因的系统发生树
云蚤早援 圆摇 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 燥枣 孕匀栽 早藻灶藻 枣葬皂蚤造蚤藻泽 遭葬泽藻凿 燥灶 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻 葬皂燥灶早
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬袁 韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 葬灶凿 在藻葬 皂葬赠泽
在玉米全基因组序列数据库中搜索袁得到了玉米中 猿苑
个候选磷转运蛋白基因袁这些磷转运蛋白基因在每条
染色体上呈不均匀分布袁其中 员 号染色体上多达 远 个遥
依据磷转运蛋白基因的氨基酸序列进行多重比对袁根
据结构组成和保守功能域的相似性分别被聚类到各个
家族袁为进一步的验证和分析奠定了相关基础遥
不同磷转运蛋白家族对磷的吸收和利用方面袁具
有相对特殊的功能遥 孕澡贼员 家族主要负责根系对土壤
中无机磷的吸收袁成为研究的重要对象袁也是研究比较
深入的磷转运子袁其中属于溶质转运蛋白 酝云杂 家族是
怨愿愿
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
注院划线部分为 员圆 个跨膜区袁星号标注的是 孕澡贼员 家族特征序列袁加框部分是糖基化位点袁双划线部分是磷酸化位点遥
晕燥贼藻院栽澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻 怎灶凿藻则造蚤灶藻凿 蚤泽 贼澡藻 糟燥灶泽藻则增藻凿 则藻早蚤燥灶 燥枣 贼则葬灶泽皂藻皂遭则葬灶藻泽 蚤灶糟造怎凿蚤灶早 孕澡贼员 泽蚤早灶葬贼怎则藻 憎澡蚤糟澡 蚤泽 皂葬则噪藻凿 遭赠 葬泽贼藻则蚤泽噪援
栽澡藻 糟燥灶泽藻灶泽怎泽 泽蚤贼藻泽 枣燥则 责澡燥泽责澡燥则赠造葬贼蚤燥灶 遭赠 责则燥贼藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻 悦 葬灶凿 糟葬泽藻蚤灶 噪蚤灶葬泽藻 陨陨 憎藻则藻 泽澡燥憎灶 遭赠 凿燥怎遭造藻 造蚤灶藻泽 葬灶凿 贼澡藻
糟燥灶泽藻则增藻凿 晕鄄早造赠糟燥泽赠造葬贼蚤燥灶 泽蚤贼藻 蚤泽 遭燥曾藻凿援
图 猿摇 在皂孕澡贼员曰怨 的全长 糟阅晕粤序列及其推导的氨基酸序列
云蚤早援 猿摇 晕怎糟造藻燥贼蚤凿藻 葬灶凿 凿藻凿怎糟藻凿 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻 燥枣 在皂孕澡贼员曰怨 糟阅晕粤
匀圆孕韵源 原 辕 灶匀 垣共运体咱猿员暂 袁主要位于根系细胞膜上袁负
责从土壤溶液中吸收可溶性磷及体内转运的基本过
程遥 孕澡贼圆 位于质体内膜上袁负责叶绿体磷的交换咱猿圆暂 遥
归属于线粒体转运家族渊酝悦云冤的 孕澡贼猿 位于线粒体膜
上袁负责将细胞质中无机磷转入质体咱愿暂 袁前者既能行
使 孕蚤 辕 匀 垣的同向转运咱猿猿暂 袁又能行使 孕蚤 辕 韵匀 原的反向运
输功能咱猿源暂 遥 孕澡贼员 与 孕澡贼圆 和 孕澡贼猿 的进化关系与其在其
他物种中的聚类结果较为一致咱猿缘暂 遥 孕澡燥员 主要将磷由
根系薄壁细胞载入木质部维管束运向地上部分咱员愿袁 圆圆暂 袁
与其同为低亲和力磷转运蛋白的 孕澡燥圆咱猿远暂 袁则负责磷
进入韧皮部向根系运输咱员苑暂 袁对维持植株体内磷素代谢
的动态平衡不可或缺遥 系统进化树分析结果显示袁玉
米和水稻磷转运蛋白序列的相似性更高袁这可能与它
们同属于单子叶植物有关袁并且 远 对直系同源基因均
只与水稻配对袁推测这可能是单子叶植物与双子叶植
物不同的进化方向所积累的遗传差异袁这与传统的植
物学分类结果一致遥
根据克隆 在皂孕澡贼员曰怨 的测序结果推导氨基酸序列
园怨愿
摇 苑 期 一个玉米 孕澡贼员 家族磷转运蛋白基因克隆和功能分析
注院鄢袁 孕 约 园郾 园缘曰 鄢鄢袁 孕 约 园郾 园员曰蕴和 砸分别表示材料的叶和根遥
晕燥贼藻院蕴 葬灶凿 砸 则藻责则藻泽藻灶贼 贼澡藻 造藻葬增藻泽 葬灶凿 则燥燥贼泽 燥枣 责造葬灶贼袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援
图 源摇 在皂孕澡贼员曰怨 在 员苑愿 与 怨苑愿圆 根和叶中的表达模式
云蚤早援 源摇 砸藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 则藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 在皂孕澡贼员曰怨 蚤灶 员苑愿 葬灶凿 怨苑愿圆 怎灶凿藻则 责澡燥泽责澡葬贼藻 泽贼葬则增葬贼蚤燥灶
注院粤尧月尧悦院空载体 责悦匀云猿鄄郧云孕的对照曰阅袁耘袁云院载体 责悦匀云猿鄄郧云孕鄄在皂孕澡贼员曰怨援融合表达蛋白曰
粤袁阅院原生质体被 孕陨染色的照片曰月袁耘院融合蛋白在绿光激发下产生的荧光曰悦袁云院叠加的照片遥
晕燥贼藻院粤袁 月袁 悦院 责悦匀云猿鄄郧云孕 葬泽 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造曰 阅袁 耘袁 云院 责悦匀云猿鄄郧云孕鄄在皂孕澡贼员曰怨 枣怎泽蚤燥灶 责则燥贼藻蚤灶援 粤袁 阅院 贼澡藻 责澡燥贼燥早则葬责澡泽 憎藻则藻 皂葬凿藻 遭赠
孕陨 泽贼葬蚤灶蚤灶早曰 月袁 耘院 蚤灶 贼澡藻 凿葬则噪 枣蚤造藻凿 枣燥则 早则藻藻灶 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 藻曾糟蚤贼藻凿 遭赠 早则藻藻灶 则蚤早澡贼曰 悦袁 云院 贼澡藻 责澡燥贼燥早则葬责澡泽 憎藻则藻 贼澡藻 糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶泽 燥枣 粤鄄月 葬灶凿 阅鄄耘
图 缘摇 在皂孕澡贼员曰怨 蛋白在水稻原生质体中的定位
云蚤早援 缘摇 杂怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 在皂孕澡贼员曰怨 责则燥贼藻蚤灶 蚤灶 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 燥枣 韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬援
分析发现该基因有 员圆 个跨膜结构袁并在第 源 个跨膜区
含有 孕澡贼员 家族的特征序列 郧郧阅再孕蕴杂粤栽陨曾杂耘遥 本研究
发现 在皂孕澡贼员曰怨 定位于细胞膜上袁与在线预测结果高度
一致遥 并且序列功能预测显示袁该基因含有多个磷酸
员怨愿
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
化和糖基化等功能位点渊图 猿冤袁可能在低磷信号的识
别和传导中起重要作用遥
现有的研究表明袁孕澡贼员 家族各成员均各有其特定
的组织表达特异性和时空特征遥 本研究发现与对照组
相比袁在皂孕澡贼员曰怨 在两极端材料中的低磷胁迫前期均不
同程度下调表达袁后期均被显著诱导表达袁而在低磷敏
感材料 怨苑愿圆 根中持续下调表达模式袁与低磷胁迫早期
一般性反应和晚期的特异性反应比较一致咱猿苑暂 遥 然而袁
低磷胁迫处理之前袁该基因在两极端材料中的表达模
式基本相似袁均为早期的上调表达和晚期的下调表达袁
而在 怨苑愿圆 根中早期的下调表达更明显袁表明 在皂孕澡贼员曰
怨 的表达还受不同发育时期调控咱猿愿暂 遥 此外袁在对照情
况下袁在皂孕澡贼员曰怨 的相对表达量也会随着时间的变化而
有所改变袁暗示该基因在玉米苗期不同发育时期会存
有一定的变化袁也可能由于受不同时间取样袁培养液的
浓度随植株发育而呈现降低袁影响了该基因的表达袁这
一结果也表明增设不同时间取样点的平行对照袁对降
低试验误差能起到积极的校验作用遥 低磷胁迫之后袁
随着处理时间的延长袁该基因在两极端材料叶中都逐
步诱导表达袁而在耐低磷材料 员苑愿 根中基本维持稳态
水平袁在低磷敏感材料 怨苑愿圆 根中显著抑制表达袁据此
推测 在皂孕澡贼员曰怨 在植株响应磷饥饿时调节磷在植物体
内的分布和维持体内磷素的动态平衡中发挥重要作
用遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 砸葬怎泽糟澡 悦袁 月怎糟澡藻则 酝援 酝燥造藻糟怎造葬则 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 燥枣 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼
蚤灶 责造葬灶贼泽咱允暂 援 孕造葬灶贼葬袁 圆园园圆袁 圆员远渊员冤院 圆猿 原 猿苑
咱 圆 暂 摇 蕴赠灶糟澡 允援 砸燥燥贼 葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻 葬灶凿 责造葬灶贼 责则燥凿怎糟贼蚤增蚤贼赠 咱 允 暂 援 孕造葬灶贼
孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 员怨怨缘袁 员园怨院 苑 原 员猿
咱 猿 暂摇 孙海国袁 张福锁袁 杨军芳援 不同供磷水平小麦苗期根系特征与
其相对产量的关系咱允暂 援 华北农学报袁 圆园园员袁 员远渊猿冤院 怨愿 原 员园源
咱 源 暂 摇 砸葬早澡燥贼澡葬皂葬 运 郧援 孕澡燥泽责澡葬贼藻 葬糟择怎蚤泽蚤贼蚤燥灶 咱 允暂 援 粤灶灶怎葬造 砸藻增蚤藻憎 燥枣
孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠 葬灶凿 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 员怨怨怨袁 缘园渊员冤院 远远缘 原
远怨猿
咱 缘 暂 摇 云葬灶早 在 再袁杂澡葬燥 悦袁 酝藻灶早 再 允袁 宰怎 孕袁 悦澡藻灶早 酝援 孕澡燥泽责澡葬贼藻 泽蚤早灶葬造蚤灶早
蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 葬灶凿 韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬咱允暂 援 孕造葬灶贼 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆园园怨袁 员苑远渊圆冤院
员苑园 原 员愿园
咱 远 暂 摇 酝怎糟澡澡葬造 哉 杂袁 孕葬则凿燥 允 酝袁 砸葬早澡燥贼澡葬皂葬 运 郧援 孕澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则泽
枣则燥皂 贼澡藻 澡蚤早澡藻则 责造葬灶贼 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬咱 允暂 援 孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣 贼澡藻
晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 员怨怨远袁 怨猿渊员怨冤院 员园缘员怨 原 员园缘圆猿
咱 苑 暂 摇 酝怎凿早藻 杂 砸袁 砸葬藻 粤 蕴袁 阅蚤葬贼造燥枣枣 耘袁 杂皂蚤贼澡 云 宰援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽
泽怎早早藻泽贼泽 灶燥增藻造 则燥造藻泽 枣燥则 皂藻皂遭藻则泽 燥枣 贼澡藻 孕澡贼员 枣葬皂蚤造赠 燥枣 责澡燥泽责澡葬贼藻
贼则葬灶泽责燥则贼藻则泽 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽咱 允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁 圆园园圆袁 猿员渊猿冤院
猿源员 原 猿缘猿
咱 愿 暂 摇 孕燥蚤则蚤藻则 再袁 月怎糟澡藻则 酝援 孕澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼 葬灶凿 澡燥皂藻燥泽贼葬泽蚤泽 蚤灶
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽咱允暂 援 栽澡藻 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 月燥燥噪袁 圆园园圆袁 员院 藻园园圆源
咱 怨 暂摇 阅葬则葬皂 孕袁 月则怎灶灶藻则 杂袁 砸葬怎泽糟澡 悦袁 杂贼藻蚤灶藻则 悦袁 粤皂则澡藻蚤灶 晕袁 月怎糟澡藻则 酝援
孕澡贼圆曰员 藻灶糟燥凿藻泽 葬 造燥憎鄄葬枣枣蚤灶蚤贼赠 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则 枣则燥皂 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 员怨怨怨袁 员员渊员员冤院 圆员缘猿 原 圆员远远
咱员园暂摇 酝赠燥怎灶早 砸 孕袁 杂燥鄄匀赠藻燥灶 月袁 月藻灶蚤造凿燥 砸袁 杂燥灶早 再援 韵增藻则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 葬
澡蚤早澡鄄葬枣枣蚤灶蚤贼赠 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则 早藻灶藻 枣则燥皂 贼燥遭葬糟糟燥 渊 晕贼孕栽员 冤
藻灶澡葬灶糟藻泽 责澡燥泽责澡葬贼藻 怎责贼葬噪藻 葬灶凿 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则蚤糟藻
责造葬灶贼泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 葬灶凿 杂燥蚤造袁 圆园园苑袁 圆怨圆渊员冤院 圆缘怨 原 圆远怨
咱员员暂摇 砸葬藻 粤 蕴袁 悦赠遭蚤灶泽噪蚤 阅 匀袁 允葬则皂藻赠 允 酝袁 杂皂蚤贼澡 云 宰援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶
燥枣 贼憎燥 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则泽 枣则燥皂 遭葬则造藻赠曰 藻增蚤凿藻灶糟藻 枣燥则 凿蚤增藻则泽藻
枣怎灶糟贼蚤燥灶 葬灶凿 噪蚤灶藻贼蚤糟 责则燥责藻则贼蚤藻泽 葬皂燥灶早 皂藻皂遭藻则泽 燥枣 贼澡藻 孕澡贼员 枣葬皂蚤造赠
咱允暂 援 孕造葬灶贼 皂燥造藻糟怎造葬则 遭蚤燥造燥早赠袁 圆园园猿袁 缘猿渊员冤院 圆苑 原 猿远
咱员圆暂摇 砸葬藻 粤 蕴袁 允葬则皂藻赠 允 酝袁 酝怎凿早藻 杂 砸袁 杂皂蚤贼澡 云 宰援 韵增藻则鄄藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣
葬 澡蚤早澡鄄葬枣枣蚤灶蚤贼赠 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则 蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 遭葬则造藻赠 责造葬灶贼泽 凿燥藻泽
灶燥贼 藻灶澡葬灶糟藻 责澡燥泽责澡葬贼藻 怎责贼葬噪藻 则葬贼藻泽咱 允暂 援 云怎灶糟贼蚤燥灶葬造 孕造葬灶贼 月蚤燥造燥早赠袁
圆园园源袁 猿员渊圆冤院 员源员 原 员源愿
咱员猿暂摇 栽葬噪葬遭葬贼葬噪藻 砸袁 匀葬贼葬 杂袁 栽葬灶蚤早怎糟澡蚤 酝袁 运燥怎糟澡蚤 匀袁 杂怎早蚤赠葬皂葬 栽袁 陨扎怎蚤
运援 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 糟阅晕粤泽 藻灶糟燥凿蚤灶早 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造
责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则泽 蚤灶 泽燥赠遭藻葬灶袁 皂葬蚤扎藻袁 则蚤糟藻袁 葬灶凿 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽咱允暂 援
孕造葬灶贼 皂燥造藻糟怎造葬则 遭蚤燥造燥早赠袁 员怨怨怨袁 源园渊猿冤院 源苑怨 原 源愿远
咱员源暂摇 匀葬皂遭怎则早藻则 阅袁 砸藻扎扎燥灶蚤糟燥 耘袁 酝葬糟阅燥灶葬造凿鄄悦燥皂遭藻则 孕藻贼佴贼燥贼 允袁
杂燥皂藻则增蚤造造藻 悦袁 孕燥蚤则蚤藻则 再援 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 孕匀韵员 早藻灶藻 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 责澡燥泽责澡葬贼藻 造燥葬凿蚤灶早 贼燥 贼澡藻 曾赠造藻皂
咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造 韵灶造蚤灶藻袁 圆园园圆袁 员源渊源冤院 愿愿怨 原 怨园圆
咱员缘暂摇 孕葬泽扎噪燥憎泽噪蚤 哉袁 运则燥噪藻灶 杂袁 砸燥怎曾 悦袁 月则蚤早早泽 杂 孕援 砸蚤糟藻 责澡燥泽责澡葬贼藻
贼则葬灶泽责燥则贼藻则泽 蚤灶糟造怎凿藻 葬灶 藻增燥造怎贼蚤燥灶葬则蚤造赠 凿蚤增藻则早藻灶贼 早藻灶藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟葬造造赠
葬糟贼蚤增葬贼藻凿 蚤灶 葬则遭怎泽糟怎造葬则 皂赠糟燥则则澡蚤扎葬造 泽赠皂遭蚤燥泽蚤泽咱允暂 援 孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣 贼澡藻
晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 圆园园圆袁 怨怨渊圆园冤院 员猿猿圆源 原 员猿猿圆怨
咱员远暂摇 酝蚤灶早 云袁 蕴怎 匝袁 宰葬灶早 宰袁 在澡葬灶早 杂袁 郧怎燥 月袁 杂澡藻灶 阅援 悦造燥灶蚤灶早袁
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶凿 枣怎灶糟贼蚤燥灶 燥枣 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则 藻灶糟燥凿藻凿 早藻灶藻 蚤灶
韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 蕴援 咱 允暂 援 杂糟蚤藻灶糟藻 蚤灶 悦澡蚤灶葬 杂藻则蚤藻泽 悦院 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁
圆园园远袁 源怨渊缘冤院 源园怨 原 源员猿
咱员苑暂摇 匀怎 月袁 在澡怎 悦袁 蕴蚤 云袁 栽葬灶早 允袁 宰葬灶早 再袁 蕴蚤灶 粤袁 蕴蚤怎 蕴袁 悦澡藻 砸袁 悦澡怎
悦援 蕴耘粤云 栽陨孕 晕耘悦砸韵杂陨杂员 责造葬赠泽 葬 责蚤增燥贼葬造 则燥造藻 蚤灶 贼澡藻 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣
皂怎造贼蚤责造藻 责澡燥泽责澡葬贼藻 泽贼葬则增葬贼蚤燥灶 则藻泽责燥灶泽藻泽 蚤灶 则蚤糟藻 咱 允 暂 援 孕造葬灶贼
孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园员员袁 员缘远渊猿冤院 员员园员 原 员员员缘
咱员愿暂摇 杂藻糟糟燥 阅袁 月葬怎皂葬灶灶 粤袁 孕燥蚤则蚤藻则 再援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 砸蚤糟藻 孕匀韵员
郧藻灶藻 云葬皂蚤造赠 砸藻增藻葬造泽 葬 运藻赠 砸燥造藻 枣燥则 韵泽孕匀韵员曰 圆 蚤灶 孕澡燥泽责澡葬贼藻
匀燥皂藻燥泽贼葬泽蚤泽 葬灶凿 贼澡藻 耘增燥造怎贼蚤燥灶 燥枣 葬 阅蚤泽贼蚤灶糟贼 悦造葬凿藻 蚤灶 阅蚤糟燥贼赠造藻凿燥灶泽
咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园员园袁 员缘圆渊猿冤院 员远怨猿 原 员苑园源
咱员怨暂摇 晕葬早赠 砸袁 灾葬泽糟燥灶糟藻造燥泽 酝 允袁 在澡葬燥 杂袁 酝糟耘造增藻则 允袁 月则怎糟藻 宰袁 粤皂则澡藻蚤灶
晕袁 砸葬早澡燥贼澡葬皂葬 运郧袁 月怎糟澡藻则 酝援 阅蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬造 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 枣蚤增藻 孕澡贼员
责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则泽 枣则燥皂 皂葬蚤扎藻 渊 在藻葬 皂葬赠泽 蕴援 冤 咱 允 暂 援 孕造葬灶贼
月蚤燥造燥早赠袁 圆园园远袁 愿渊圆冤院 员愿远 原 员怨苑
咱圆园暂摇 粤造藻曾葬灶凿则燥增 晕 晕袁 月则燥增藻则 灾 灾袁 云则藻蚤凿蚤灶 杂袁 栽则燥怎噪澡葬灶 酝 耘袁 栽葬贼葬则蚤灶燥增葬
栽 灾袁 在澡葬灶早 匀袁 杂憎葬造造藻则 栽 允袁 蕴怎 再 孕袁 月燥怎糟噪 允袁 云造葬增藻造造 砸 月袁
云藻造凿皂葬灶灶 运 粤援 陨灶泽蚤早澡贼泽 蚤灶贼燥 糟燥则灶 早藻灶藻泽 凿藻则蚤增藻凿 枣则燥皂 造葬则早藻鄄泽糟葬造藻
糟阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟蚤灶早咱允暂 援 孕造葬灶贼 皂燥造藻糟怎造葬则 遭蚤燥造燥早赠袁 圆园园怨袁 远怨渊员冤院 员苑怨
原 员怨源
咱圆员暂摇 孕葬贼藻则泽燥灶 粤 匀袁 月燥憎藻则泽 允 耘袁 月则怎早早皂葬灶灶 砸袁 阅怎遭糟澡葬噪 陨袁 郧则蚤皂憎燥燥凿 允袁
郧怎灶凿造葬糟澡 匀袁 匀葬遭藻则藻则 郧袁 匀藻造造泽贼藻灶 哉袁 酝蚤贼则燥泽 栽袁 孕燥造蚤葬噪燥增 粤袁
杂糟澡皂怎贼扎 允袁 杂责葬灶灶葬早造 酝袁 栽葬灶早 匀袁 宰葬灶早 载袁 宰蚤糟噪藻则 栽袁 月澡葬则贼蚤 粤 运袁
悦澡葬责皂葬灶 允袁 云藻造贼怎泽 云 粤袁 郧燥憎蚤噪 哉袁 郧则蚤早燥则蚤藻增 陨 灾袁 蕴赠燥灶泽 耘袁 酝葬澡藻则
圆怨愿
摇 苑 期 一个玉米 孕澡贼员 家族磷转运蛋白基因克隆和功能分析
悦 粤袁 酝葬则贼蚤泽 酝袁 晕葬则藻糟澡葬灶蚤葬 粤袁 韵贼蚤造造葬则 砸 孕袁 孕藻灶灶蚤灶早 月 宰袁 杂葬造葬皂燥增
粤 粤袁 宰葬灶早 再袁 在澡葬灶早 蕴袁 悦葬则责蚤贼葬 晕 悦袁 云则藻藻造蚤灶早 酝袁 郧蚤灶早造藻 粤 砸袁
匀葬泽澡 悦 栽袁 运藻造造藻则 月袁 运造藻蚤灶 孕袁 运则藻泽燥增蚤糟澡 杂袁 酝糟悦葬灶灶 酝 悦袁 酝蚤灶早 砸袁
孕藻贼藻则泽燥灶 阅 郧袁 酝藻澡遭燥燥遭鄄怎则鄄砸葬澡皂葬灶袁 宰葬则藻 阅袁 宰藻泽贼澡燥枣枣 孕袁 酝葬赠藻则 运
云袁 酝藻泽泽蚤灶早 允袁 砸燥噪澡泽葬则 阅 杂援 栽澡藻 杂燥则早澡怎皂 遭蚤糟燥造燥则 早藻灶燥皂藻 葬灶凿 贼澡藻
凿蚤增藻则泽蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 早则葬泽泽藻泽咱 允暂 援 晕葬贼怎则藻袁 圆园园怨袁 源缘苑 渊苑圆圆怨冤院 缘缘员 原
缘缘远
咱圆圆暂摇 宰葬灶早 再袁 杂藻糟糟燥 阅袁 孕燥蚤则蚤藻则 再援 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 孕匀韵员 早藻灶藻
枣葬皂蚤造赠 葬灶凿 贼澡藻 则藻泽责燥灶泽藻泽 贼燥 责澡燥泽责澡葬贼藻 凿藻枣蚤糟蚤藻灶糟赠 燥枣 孕澡赠泽糟燥皂蚤贼则藻造造葬
责葬贼藻灶泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 员源远渊圆冤院 远源远 原 远缘远
咱圆猿暂摇 高妍袁 姜佰文袁 刘大森袁 王春宏袁 张迪袁 刘学生援 不同种植年限
黑土型蔬菜保护地磷素状况的研究咱 允暂 援 核农学报袁 圆园员员袁 圆缘
渊员冤院 员圆员 原 员圆远
咱圆源暂摇 侯彦楠袁 杨俊诚袁 姜慧敏袁 张建峰袁 吴庆钰袁 李娟援 低磷胁迫下
不同基因型玉米籽粒磷含量及品质性状分析咱 允暂 援 核农学报袁
圆园园怨袁 圆猿 渊圆冤院 猿圆苑 原 猿猿猿
咱圆缘暂摇 张吉海袁 高世斌袁 杨克诚袁 张志明袁 林海建袁 黄宁袁 郑溟袁 徐克
成袁 陈义轩袁 潘光堂援 玉米耐低磷种质资源的筛选与鉴定咱 允暂 援
植物遗传资源学报袁 圆园园愿袁 怨渊猿冤院 猿猿缘 原 猿猿怨
咱圆远暂摇 栽澡燥皂责泽燥灶 允 阅袁 郧蚤遭泽燥灶 栽 允袁 孕造藻憎灶蚤葬噪 云袁 允藻葬灶皂燥怎早蚤灶 云袁 匀蚤早早蚤灶泽 阅
郧援 栽澡藻 悦蕴哉杂栽粤蕴 赃 载 憎蚤灶凿燥憎泽 蚤灶贼藻则枣葬糟藻院 枣造藻曾蚤遭造藻 泽贼则葬贼藻早蚤藻泽 枣燥则
皂怎造贼蚤责造藻 泽藻择怎藻灶糟藻 葬造蚤早灶皂藻灶贼 葬蚤凿藻凿 遭赠 择怎葬造蚤贼赠 葬灶葬造赠泽蚤泽 贼燥燥造泽 咱 允暂 援
晕怎糟造藻蚤糟 葬糟蚤凿泽 则藻泽藻葬则糟澡袁 员怨怨苑袁 圆缘渊圆源冤院 源愿苑远 原 源愿愿圆
咱圆苑暂摇 栽葬皂怎则葬 运袁 阅怎凿造藻赠 允袁 晕藻蚤 酝袁 运怎皂葬则 杂援 酝耘郧粤源院 皂燥造藻糟怎造葬则
藻增燥造怎贼蚤燥灶葬则赠 早藻灶藻贼蚤糟泽 葬灶葬造赠泽蚤泽 渊酝耘郧粤冤 泽燥枣贼憎葬则藻 增藻则泽蚤燥灶 源郾 园 咱 允暂 援
酝燥造藻糟怎造葬则 遭蚤燥造燥早赠 葬灶凿 藻增燥造怎贼蚤燥灶袁 圆园园苑袁 圆源渊愿冤院 员缘怨远 原 员缘怨怨
咱圆愿暂摇 杂糟澡怎造贼扎 允袁 酝蚤造责藻贼扎 云袁 月燥则噪 孕袁 孕燥灶贼蚤灶早 悦 孕援 杂酝粤砸栽袁 葬 泽蚤皂责造藻
皂燥凿怎造葬则 葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻 则藻泽藻葬则糟澡 贼燥燥造院 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 泽蚤早灶葬造蚤灶早
凿燥皂葬蚤灶泽咱允暂 援 孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣 贼澡藻 晕葬贼蚤燥灶葬造 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽 燥枣 贼澡藻
哉灶蚤贼藻凿 杂贼葬贼藻泽 燥枣 粤皂藻则蚤糟葬袁 员怨怨愿袁 怨缘渊员员冤院 缘愿缘苑 原 缘愿远源
咱圆怨暂摇 再怎 悦 杂袁 悦澡藻灶 再悦袁 蕴怎 悦 匀袁 匀憎葬灶早 允 运援 孕则藻凿蚤糟贼蚤燥灶 燥枣 责则燥贼藻蚤灶
泽怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 咱 允 暂 援 孕则燥贼藻蚤灶泽院 杂贼则怎糟贼怎则藻袁 云怎灶糟贼蚤燥灶袁 葬灶凿
月蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟泽袁 圆园园远袁 远源渊猿冤院 远源猿 原 远缘员
咱猿园暂摇 孕枣葬枣枣造 酝 宰袁 匀燥则早葬灶 郧 宰袁 阅藻皂责枣造藻 蕴援 砸藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 泽燥枣贼憎葬则藻
贼燥燥造 渊砸耘杂栽 冤 枣燥则 早则燥怎责鄄憎蚤泽藻 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 葬灶凿 泽贼葬贼蚤泽贼蚤糟葬造 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣
则藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 则藻泽怎造贼泽 蚤灶 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 咱 允 暂 援 晕怎糟造藻蚤糟 葬糟蚤凿泽
则藻泽藻葬则糟澡袁 圆园园圆袁 猿园渊怨冤院 藻猿远
咱猿员暂摇 砸葬早澡燥贼澡葬皂葬 运 郧援 孕澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼 葬灶凿 泽蚤早灶葬造蚤灶早 咱 允暂 援 悦怎则则藻灶贼
韵责蚤灶蚤燥灶 蚤灶 孕造葬灶贼 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园园袁 猿渊猿冤院 员愿圆 原 员愿苑
咱猿圆暂摇 砸葬怎泽糟澡 悦袁 在蚤皂皂藻则皂葬灶灶 孕袁 粤皂则澡藻蚤灶 晕袁 月怎糟澡藻则 酝援 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶
葬灶葬造赠泽蚤泽 泽怎早早藻泽贼泽 灶燥增藻造 则燥造藻泽 枣燥则 贼澡藻 责造葬泽贼蚤凿蚤糟 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则
孕澡贼圆曰员 蚤灶 葬怎贼燥‐ 葬灶凿 澡藻贼藻则燥贼则燥责澡蚤糟 贼蚤泽泽怎藻泽 蚤灶 责燥贼葬贼燥 葬灶凿 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁 圆园园源袁 猿怨渊员冤院 员猿 原 圆愿
咱猿猿暂摇 宰燥澡造则葬遭 匀袁 月则蚤早早泽 悦援 再藻葬泽贼 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼
责则燥贼藻蚤灶 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤援 杂蚤贼藻鄄凿蚤则藻糟贼藻凿 皂怎贼葬贼蚤燥灶泽 葬贼
贼澡则藻燥灶蚤灶藻 原 源猿 葬灶凿 葬贼 葬 泽蚤皂蚤造葬则 造燥糟葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 贼葬灶凿藻皂 则藻责藻葬贼
渊 蚤泽燥造藻怎糟蚤灶藻 原 员源员冤 咱 允暂 援 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁 员怨怨源袁 猿猿 渊猿圆冤院 怨猿苑员 原
怨猿苑缘
咱猿源暂摇 杂贼葬责责藻灶 砸袁 运则覿皂藻则 砸援 运蚤灶藻贼蚤糟 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣 责澡燥泽责澡葬贼藻 辕 责澡燥泽责澡葬贼藻
葬灶凿 责澡燥泽责澡葬贼藻 辕 韵匀鄄 葬灶贼蚤责燥则贼泽 糟葬贼葬造赠扎藻凿 遭赠 则藻糟燥灶泽贼蚤贼怎贼藻凿 责澡燥泽责澡葬贼藻
糟葬则则蚤藻则 枣则燥皂 遭藻藻枣 澡藻葬则贼 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬咱 允暂 援 栽澡藻 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥造燥早蚤糟葬造
悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 员怨怨源袁 圆远怨渊员缘冤院 员员圆源园 原 员员圆源远
咱猿缘暂摇 运葬则葬灶凿葬泽澡燥增 灾袁 月怎糟澡藻则 酝援 杂赠皂遭蚤燥贼蚤糟 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼 蚤灶
葬则遭怎泽糟怎造葬则 皂赠糟燥则则澡蚤扎葬泽咱允暂 援 栽则藻灶凿泽 蚤灶 责造葬灶贼 泽糟蚤藻灶糟藻袁 圆园园缘袁 员园渊员冤院
圆圆 原 圆怨
咱猿远暂摇 孕蚤灶泽燥灶 月袁 酝藻则造藻 酝袁 云则葬灶糟燥灶蚤 允 酝袁 阅葬蚤早灶葬灶鄄云燥则灶蚤藻则 月援 蕴燥憎 粤枣枣蚤灶蚤贼赠
韵则贼澡燥责澡燥泽责澡葬贼藻 悦葬则则蚤藻则泽 砸藻早怎造葬贼藻 孕匀韵 郧藻灶藻 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶
陨灶凿藻责藻灶凿藻灶贼造赠 燥枣 陨灶贼藻则灶葬造 韵则贼澡燥责澡燥泽责澡葬贼藻 悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 蚤灶
杂葬糟糟澡葬则燥皂赠糟藻泽 糟藻则藻增蚤泽蚤葬藻咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园园源袁
圆苑怨渊猿源冤院 猿缘圆苑猿 原 猿缘圆愿园
咱猿苑暂摇 匀葬皂皂燥灶凿 允 孕袁 月藻灶灶藻贼贼 酝 允袁 月燥憎藻灶 匀 悦袁 月则燥葬凿造藻赠 酝 砸袁 耘葬泽贼憎燥燥凿
阅 悦袁 酝葬赠 杂 栽袁 砸葬澡灶 悦袁 杂憎葬则怎责 砸袁 宰燥燥造葬憎葬赠 运 耘袁 宰澡蚤贼藻 孕 允援
悦澡葬灶早藻泽 蚤灶 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 泽澡燥燥贼泽 凿怎则蚤灶早 责澡燥泽责澡葬贼藻
泽贼葬则增葬贼蚤燥灶 葬灶凿 贼澡藻 责燥贼藻灶贼蚤葬造 枣燥则 凿藻增藻造燥责蚤灶早 泽皂葬则贼 责造葬灶贼泽 咱 允暂 援 孕造葬灶贼
孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园猿袁 员猿圆渊圆冤院 缘苑愿 原 缘怨远
咱猿愿暂摇 粤蚤 孕袁 杂怎灶 杂袁 在澡葬燥 允袁 云葬灶 载袁 载蚤灶 宰袁 郧怎燥 匝袁 再怎 蕴袁 杂澡藻灶 匝袁 宰怎
孕袁 酝蚤造造藻则 粤允袁 载怎 郧援 栽憎燥 则蚤糟藻 责澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则泽袁 韵泽孕澡贼员曰圆 葬灶凿
韵泽孕澡贼员曰远袁 澡葬增藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 枣怎灶糟贼蚤燥灶泽 葬灶凿 噪蚤灶藻贼蚤糟 责则燥责藻则贼蚤藻泽 蚤灶 怎责贼葬噪藻
葬灶凿 贼则葬灶泽造燥糟葬贼蚤燥灶咱允暂 援 栽澡藻 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁 圆园园怨袁 缘苑渊缘冤院 苑怨愿 原 愿园怨
猿怨愿
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员猿袁圆苑渊苑冤院园愿愿缘 耀 园愿怨源
悦造燥灶蚤灶早 葬灶凿 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 孕澡燥泽责澡葬贼藻 栽则葬灶泽责燥则贼藻则
郧藻灶藻 燥枣 孕澡贼员 云葬皂蚤造赠 蚤灶 酝葬蚤扎藻
杂哉 杂澡怎灶鄄扎燥灶早摇 宰哉 云藻灶早鄄噪葬蚤摇 蕴陨哉 阅葬灶摇 宰哉 蕴蚤灶早摇 郧粤韵 杂澡蚤鄄遭蚤灶
渊酝葬蚤扎藻 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻袁 杂蚤糟澡怎葬灶 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 悦澡藻灶早凿怎 杂蚤糟澡怎葬灶摇 远员员员猿园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽燥 责则燥增蚤凿藻 怎泽藻枣怎造造赠 贼澡藻燥则藻贼蚤糟葬造 蚤灶枣燥则皂葬贼蚤燥灶 枣燥则 蚤皂责则燥增藻皂藻灶贼 燥枣 责澡燥泽责澡燥则怎泽 怎贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶袁 葬 澡蚤早澡鄄葬枣枣蚤灶蚤贼赠 孕匀栽 早藻灶藻
枣则燥皂 造燥憎鄄孕 贼燥造藻则葬灶贼 皂葬蚤扎藻 蚤灶遭则藻凿 造蚤灶藻 员苑愿 憎葬泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 蚤灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠援 栽澡藻 孕匀栽 枣葬皂蚤造蚤藻泽 燥枣 皂葬蚤扎藻 葬贼 憎澡燥造藻 早藻灶燥皂藻鄄憎蚤凿藻
造藻增藻造 憎藻则藻 责则藻凿蚤糟贼藻凿 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 早藻灶藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 孕匀栽 燥则贼澡燥造燥早泽 蚤灶 则蚤糟藻 葬灶凿 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 怎泽蚤灶早 遭蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟泽
葬责责则燥葬糟澡藻泽 袁 葬灶凿 贼澡藻蚤则 责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 憎葬泽 葬造泽燥 遭藻藻灶 葬灶葬造赠扎藻凿 遭葬泽藻凿 燥灶 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻援 栽澡藻 皂藻贼澡燥凿泽 燥枣
糟造燥灶藻袁 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 葬灶凿 泽怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 憎藻则藻 责藻则枣燥则皂藻凿 枣燥则 枣怎则贼澡藻则 则藻泽藻葬则糟澡 燥枣 孕匀栽 枣葬皂蚤造赠
皂藻皂遭藻则援 粤 贼燥贼葬造 燥枣 猿苑 皂葬蚤扎藻 孕匀栽 早藻灶藻泽 憎藻则藻 责则藻凿蚤糟贼藻凿 枣则燥皂 憎澡燥造藻 早藻灶燥皂藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 皂葬蚤扎藻 蚤灶遭则藻凿 造蚤灶藻 月苑猿袁 憎澡蚤糟澡
糟葬灶 遭藻 糟造葬泽泽藻凿 蚤灶贼燥 枣蚤增藻 早则燥怎责泽 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻蚤则 糟澡葬则葬糟贼藻则泽 燥枣 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 凿燥皂葬蚤灶泽援 粤 糟燥皂责造藻贼藻 糟阅晕粤 燥枣 在皂孕澡贼员曰怨袁 遭藻造燥灶早泽
贼燥 孕澡贼员 枣葬皂蚤造赠 葬灶凿 藻灶糟燥凿藻泽 缘猿怨 责怎贼葬贼蚤增藻 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽 憎蚤贼澡 贼澡藻 糟燥皂责造藻贼藻 糟燥凿蚤灶早 则藻早蚤燥灶 燥枣 员 远圆园遭责 蚤灶 造藻灶早贼澡袁 憎葬泽 枣怎则贼澡藻则
糟造燥灶藻凿 枣则燥皂 员苑愿爷泽 糟阅晕粤 贼藻皂责造葬贼藻援 栽澡藻 责则燥贼藻蚤灶 燥枣 在皂孕澡贼员曰怨 糟燥灶贼葬蚤灶泽 员圆 贼则葬灶泽皂藻皂遭则葬灶藻 凿燥皂葬蚤灶泽 葬灶凿 澡葬泽 葬 贼赠责蚤糟葬造 酝云杂
糟燥灶泽藻则增葬贼蚤燥灶 泽贼则怎糟贼怎则藻 凿燥皂葬蚤灶袁 憎澡蚤糟澡 泽澡燥憎泽 澡蚤早澡造赠 糟燥灶泽藻则增藻凿 憎蚤贼澡蚤灶 责造葬灶贼泽援 栽澡藻 则藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造泽 燥枣 在皂孕澡贼员曰怨
凿藻贼藻糟贼藻凿 遭赠 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸 藻曾澡蚤遭蚤贼藻凿 怎责鄄则藻早怎造葬贼蚤燥灶 怎灶凿藻则 造燥憎 责澡燥泽责澡燥则怎泽 泽贼则藻泽泽 葬灶凿 憎葬泽 澡蚤早澡藻则 蚤灶 贼澡藻 造藻葬增藻泽
贼澡葬灶 蚤灶 贼澡藻 则燥燥贼泽袁 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶泽 憎藻则藻 泽澡燥憎灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼造赠 遭藻贼憎藻藻灶 贼憎燥 藻曾贼则藻皂藻 皂葬蚤扎藻 造蚤灶藻泽 憎蚤贼澡 凿蚤泽贼蚤灶糟贼 贼燥造藻则葬灶糟藻
贼燥 责澡燥泽责澡燥则怎泽 凿藻枣蚤糟蚤藻灶糟赠援 杂怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 则藻增藻葬造藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 在皂孕澡贼员曰怨 憎葬泽 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 糟赠贼燥责造葬泽皂
皂藻皂遭则葬灶藻 增蚤葬 责则燥贼燥责造葬泽贼鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽怎早早藻泽贼藻凿 贼澡葬贼 在皂孕澡贼员曰怨 憎葬泽 葬 澡蚤早澡鄄葬枣枣蚤灶蚤贼赠 孕匀栽 早藻灶藻 葬灶凿 憎葬泽 责燥泽泽蚤遭造赠
蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 皂葬蚤灶贼葬蚤灶蚤灶早 责澡燥泽责澡葬贼藻 凿赠灶葬皂蚤糟 澡燥皂藻燥泽贼葬泽蚤泽 怎灶凿藻则 责澡燥泽责澡葬贼藻 凿藻枣蚤糟蚤藻灶糟赠援
运藻赠 憎燥则凿泽院酝葬蚤扎藻曰 孕澡燥泽责澡葬贼藻 贼则葬灶泽责燥则贼藻则曰 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责曰 郧藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶曰 杂怎遭糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶
源怨愿