全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊苑冤院员员愿员 耀 员员愿苑允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员猿 原 园愿 原 圆园摇 接受日期院圆园员源 原 园员 原 园愿
基金项目院浙江省果品农业新品种选育重大科技专项渊圆园员圆悦员圆怨园源 原 怨冤袁 浙江省果品产业创新团队项目渊圆园园怨砸缘园园猿猿冤袁 浙江省农业厅野三农五
方冶项目渊圆园员园砸园缘粤远园悦园员冤
作者简介院张慧琴袁 女袁 副研究员袁 主要从事浆果育种栽培与植病研究遥 耘鄄皂葬蚤造院扎澡葬灶早澡怎蚤择蚤灶苑缘岳 葬造蚤赠怎灶援 糟燥皂
通讯作者院谢鸣袁 男袁 研究员袁 主要从事果树育种栽培与果实品质研究遥 耘鄄皂葬蚤造院曾蚤藻皂蚤灶早员怨缘苑岳 葬造蚤赠怎灶援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤园苑鄄员员愿员鄄园苑
猕猴桃溃疡病病原菌分子鉴定与抗性材料初选
张慧琴员袁圆 摇 毛雪琴猿 摇 肖金平圆 摇 章摇 镇员 摇 谢摇 鸣圆
渊员 南京农业大学园艺学院袁江苏 南京摇 圆员园园怨缘曰圆 浙江省农业科学院园艺研究所袁
浙江 杭州摇 猿员园园圆员曰猿 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所袁浙江摇 杭州 猿员园园圆员冤
摘摇 要院为明确我国南方猕猴桃细菌性溃疡病频发区其致病菌的种类与特征袁初选出抗性种质材料袁以猕
猴桃主栽品种红阳尧徐香和金丰的溃疡病感病枝条为材料袁采用 运月 培养基尧平板划线和梯度稀释法分
离病原菌袁利用基于细菌 员远杂 原 圆猿杂 则阅晕粤 内转录间隔区序列设计的特异性鉴别引物袁对分离得到的 远
个代表菌株进行 孕悦砸 扩增和测序袁获得了大小约为 圆愿园遭责 的特异性片段袁其测序结果与登录号为
阅愿远猿缘苑 和 粤再猿源圆员远缘 的 孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬的序列完全一致遥 采用离体叶片注射接种尧
离体枝条针刺接种和活体枝杆针刺接种 猿 种方法鉴定了 员愿 份种质材料的抗性遥 分析结果表明袁红阳等
中华猕猴桃最感袁布鲁诺实生优株 员猿鄄猿尧员猿 原 源 等最抗袁美味猕猴桃海沃德居中遥 本试验所分离的菌株
均为丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种渊孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬冤袁筛选出 圆 份高抗溃疡病的种
质材料遥 为进一步开展猕猴档细菌性溃疡病防治研究奠定基础遥
关键词院猕猴桃曰溃疡病曰 分子鉴定曰抗性曰筛选
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 园苑援 员愿员
摇 摇 细菌性溃疡病是一种严重威胁猕猴桃生产的毁灭
性病害袁员怨愿源 年日本静冈县首次发现该病袁随后在韩
国尧意大利尧美国等多个国家都有相关报道咱员 原 缘暂 遥 近年
来在法国尧葡萄牙尧西班牙尧新西兰和智利等国家也有
陆续报道咱远 原 怨暂 遥 中国于 员怨愿缘 年在湖南省尧员怨愿苑 年在
四川省尧员怨怨园 年在安徽省及 员怨怨员 年在陕西省都有此
病发生咱员园 原 员猿暂 遥 近期在浙江尧江苏和江西等省份的猕猴
桃主产区频繁发生咱员源暂 遥 猕猴桃溃疡病的危害逐年加
重袁特别对于近年流行的红阳猕猴桃具有毁灭性的危
害遥
关于该病的病原菌分类众说纷纭袁美国最早报道
其由丁香假单胞李致病变种 渊 孕援 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援
酝燥则泽责则怎灶燥则怎皂冤引起咱员缘暂 遥 其后日本和伊朗却认为是丁
香 假 单 胞 丁 香 致 病 变 种 渊 孕援 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援
泽赠则蚤灶早葬藻冤 咱源袁员远暂 遥 最近日本尧美国尧意大利和新西兰等国
家提出该病是由另一致病变种丁香假单胞猕猴桃致病
变种渊孕援 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬冤所致咱员苑 原 员愿暂 遥 有关猕猴
桃细菌性溃疡病病菌鉴定的研究较多袁但大多集中于
病原菌的形态学和生理生化特性等传统的鉴定方
法咱员员 原 员猿暂 遥 由于猕猴桃细菌性溃疡病病原菌的快速尧准
确鉴定袁是其生理生态尧遗传变异和病害防控研究的前
提袁故近年来袁有关利用 员远杂 原 圆猿杂 则阅晕粤 间隔区序列
渊陨栽杂冤区分和鉴定细菌近缘种尧致病品种和菌株的研
究倍受关注咱员怨暂 遥 本研究针对目前猕猴桃溃疡病频发尧
病源菌及抗性品种不明等制约猕猴桃产业发展的技术
瓶颈问题袁利用分子生物学快速分离与鉴定该病原菌袁
并通过抗性接种初步筛选出抗性种质资源袁为下一步
开展猕猴桃细菌性溃疡病防控的研究奠定基础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 标样采集尧菌株分离
圆园员圆 年 猿 月在浙江尧江苏和江西等地采集不同症
状类型的猕猴桃溃疡病样本袁在密封保湿条件下带回
员愿员员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
实验室进行镜检袁对观察到有溢菌现象的病害样本袁采
用平板划线法在金氏 月渊运月冤培养基上进行分离袁挑取
单菌落进行培养并记录菌落特征遥
员郾 圆摇 致病性测定
按照柯赫氏法则袁对分离获得的菌株进行致病性
测定遥 接种用枝条渊员 原 圆 年生冤采自浙江省农业科学
院杨渡猕猴桃实验基地袁品种为红阳遥 枝条用水培法
培养袁用 苑园豫 的酒精表面消毒后备用遥 将上述分离纯
化获得的各菌株分别转接于 运月 液体培养基中袁圆园
益尧圆园园 则窑皂蚤灶 原员振荡培养 圆源 澡袁用无菌水稀释浓度至 员
伊 员园苑 耀 员 伊 员园愿糟枣怎窑皂蕴 原员袁用 员 号昆虫针 缘 根捆成一束
分别蘸取上述各菌株的菌液袁针刺法接种猕猴桃枝条袁
无菌水做对照遥 各分离菌株分别接 猿 根枝条袁每条接
圆 点袁接种后套袋保湿 圆源 澡袁除去套袋后置于 圆园 益袁相
对湿度 跃愿缘豫 条件下袁逐日观察发病情况遥
员郾 猿摇 分子生物学鉴定
细菌 阅晕粤 提取采用北京天根生化科技有限公司
的细菌基因组 阅晕粤 提取试剂盒袁并测定 阅晕粤 浓度和
纯度遥 采用 砸藻藻泽鄄郧藻燥则早藻 等咱员愿暂 基于细菌 员远杂 原 圆猿杂
则阅晕粤 内转录间隔区序列设计筛选的 孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽
泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬 的特异性鉴别引物 孕泽葬云员渊缘忆 原
栽栽栽栽郧悦栽栽栽郧悦粤悦粤悦悦悦郧粤栽栽栽栽鄄猿忆冤 和 孕泽葬砸圆 渊 缘忆 原
悦粤悦郧悦粤悦悦悦栽栽悦粤粤栽悦粤郧郧粤栽郧鄄猿忆冤袁进行 孕悦砸 扩增遥
孕悦砸 扩增体系为 圆缘 滋蕴袁预期产物为 圆愿园 遭责遥 采用胶
回收法纯化 孕悦砸 扩增产物袁将纯化的 孕悦砸 产物克隆
至 责郧耘酝鄄 栽 载体袁经转化获得阳性克隆菌落袁提取质
粒袁送上海生物工程技术有限公司测序遥
员郾 源摇 猕猴桃种质资源抗病性鉴定
员郾 源郾 员摇 离体枝条针刺接种摇 每个品种接 缘 根枝
条袁每根枝条 圆 个接种点袁重复 猿 次遥 接种 猿 周后逐日
调查发病情况遥 发病情况分为 远 级院园 级袁无病曰员 级袁
接种点呈褐色袁皮层组织变软袁隆起曰圆 级袁接种点龟
裂袁可见少量白色黏液曰猿 级袁接种部位向外溢出乳白
色黏液曰源 级袁接种点及周边皮孔向外溢出乳白色黏
液曰缘 级袁黏液呈红褐色袁病斑韧皮部变黑褐色遥
员郾 源郾 圆摇 活体枝干针刺接种摇 材料为表 圆 的 员 年生盆
栽嫁接苗袁砧木为布鲁诺实生苗遥 菌株处理尧接种浓度
和方法同 员郾 圆袁病情分级评价标准同 员郾 源郾 员遥
员郾 源郾 猿摇 离体叶片表皮皮下注射接种摇 接种方法为每
个品种接种 缘 片叶龄一致的健康叶袁用 苑园豫 的酒精表
面消毒后备用曰每个叶片上表面 源 个接种点袁以接种点
为中心用记号笔画一个边长为 员糟皂 的正方形袁重复 猿
次遥 准备若干个塑料饭盒袁每个饭盒底部铺 圆 张滤纸袁
倒入 圆园 皂蕴蒸馏水袁将滤纸浸透袁把备用的叶片分别平
铺于饭盒中遥 源 个接种点在叶片中部沿叶脉呈轴对
称袁盖上盖子袁水平放置在 圆园 益光照培养箱内袁接种 员
周后逐日调查发病率和病情指数遥 分 远 级调查发病情
况院园 级袁无病曰员 级袁病斑大小只限于接种点曰圆 级袁病
斑面积占正方形 缘豫 耀 圆园豫 曰猿 级袁病斑面积占正方形
圆造豫 耀 源园豫 曰源 级袁病斑面积占正方形 源员豫 耀 远园豫 曰缘
级袁病斑面积占正方形 远园豫 以上遥
发病率和病情指数计算方法院发病率 越发病接种
点数 辕试验总接种数 伊 员园园豫 曰病情指数 越 员园园 伊 撞渊病
级接种点数 伊代表级数值冤 辕 渊试验总接种数 伊接种发
病最高代表级数值冤遥
员郾 缘摇 数据处理
相关试验数据袁采用 杂孕杂杂员怨郾 园 软件进行分析袁
燥则蚤早蚤灶愿郾 园 软件制图遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 猕猴桃溃疡病菌的分离和菌落形态
从 员圆 份标样中袁共分离获得了 圆园 个菌株袁选其中
典型的 责泽 原 员圆 原 圆尧责泽 原 员圆 原 苑尧责泽 原 员圆 原 员园尧责泽 原 员圆 原
员圆尧责泽 原 员圆 原 员源 和 责泽 原 员圆 原 员缘 等 远 个菌株作为测定菌
株渊表 员冤袁这 远 个菌株分离自浙江海宁尧江西奉新尧江
苏海门等地的红阳尧金丰和徐香等猕猴桃品种的感病
材料遥 各菌株在金氏 月 培养基上菌落呈白色至浅黄
色尧圆形尧半凸起尧边缘整齐袁表面光滑渊图 员冤遥
表 员摇 分离的不同猕猴桃溃疡病菌株的来源
栽葬遭造藻 员摇 栽澡藻 燥则蚤早蚤灶 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣
噪蚤憎蚤枣则怎蚤贼 遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟葬灶噪藻则
菌株
杂贼则葬蚤灶
寄主
匀燥泽贼
来源地
韵则蚤早蚤灶
孕泽 原 员圆 原 圆 红阳 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽耶匀燥灶早赠葬灶早爷 浙江海宁 匀葬蚤灶蚤灶早袁在澡藻躁蚤葬灶早
孕泽 原 员圆 原 苑 金丰 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 耶允蚤灶早枣藻灶早爷 江西奉新 云藻灶早曾蚤灶袁允蚤葬灶早曾蚤
孕泽 原 员圆 原 员园 徐香 粤援 凿藻造蚤糟蚤燥泽葬 耶载怎曾蚤葬灶早爷 江苏海门 匀葬蚤皂藻灶袁允蚤葬灶早泽怎
孕泽 原 员圆 原 员圆 红阳 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽耶匀燥灶早赠葬灶早爷 江苏海门 匀葬蚤皂藻灶袁允蚤葬灶早泽怎
孕泽 原 员圆 原 员源 金丰 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 耶允蚤灶早枣藻灶早爷 浙江江山 允蚤葬灶早泽葬灶袁在澡藻躁蚤葬灶早
孕泽 原 员圆 原 员缘 红阳 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽耶匀燥灶早赠葬灶早爷 江西奉新 云藻灶早曾蚤灶袁允蚤葬灶早曾蚤
圆郾 圆摇 分离菌株的致病性测定
用针刺接种法将分离的 远 株细菌分别接种于健康
红阳猕猴桃枝条袁苑 凿 后开始显示症状遥 员愿 个枝条的
猿远 个接种点均有乳白色菌脓溢出袁接种部位皮层颜色
变为褐色遥 接种症状与田间发病症状基本一致袁以无
菌水为对照接种处理均不发病遥 对回接致病的病原菌
圆愿员员
摇 苑 期 猕猴桃溃疡病病原菌分子鉴定与抗性材料初选
晕燥贼藻院 葬院责泽 原 员圆 原 圆曰遭院责泽 原 员圆 原 苑曰糟院责泽 原 员圆 原 员园曰凿院责泽 原 员圆 原 员圆曰藻院责泽 原 员圆 原 员源曰枣院责泽 原 员圆 原 员缘援
图 员摇 代表性猕猴桃溃疡病菌株菌落形态特征
云蚤早援 员摇 栽赠责藻 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 贼澡藻 则藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤增藻 泽贼则葬蚤灶泽 燥枣 噪蚤憎蚤枣则怎蚤贼 遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟葬灶噪藻则
进行分离和纯化袁获得的菌落与原始菌株 责泽 原 员圆 原 圆尧
责泽 原 员圆 原 苑尧责泽 原 员圆 原 员园尧责泽 原 员圆 原 员圆尧责泽 原 员圆 原 员源 和 责泽
原 员圆 原 员缘 在菌落形态特征上完全一致遥
圆郾 猿摇 孕悦砸 扩增和序列比对
用特异性鉴别引物 孕泽葬云员渊缘忆 原 栽栽栽栽郧悦栽栽栽郧悦粤鄄
悦粤悦悦悦郧粤栽栽栽栽鄄猿忆冤 和 孕泽葬砸圆 渊 缘忆 原 悦粤悦郧悦粤悦悦悦栽鄄
栽悦粤粤栽悦粤郧郧粤栽郧鄄猿忆冤进行 孕悦砸 扩增袁远 个供试菌株均
获得了大小约为 圆愿园遭责 的特异性片段渊图 圆冤遥 纯化产
物克隆到 责郧耘酝鄄栽 载体上袁经转化大肠杆菌后袁挑取白
色克隆菌落袁提取质粒 阅晕粤袁经限制性内切酶酶切检
测袁将阳性的克隆质粒进行测序遥 经将测序结果在
郧藻灶月葬灶噪 上进行同源性检索袁月造葬泽贼 的结果表明供试的
远 个菌株序列与登录号为 阅愿远猿缘苑 和 粤再猿源圆员远缘 的 孕援
泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬藻 的序列完全一致渊图 猿冤遥 该结
果表明来源于浙江尧江苏尧江西三省的 远 株供试猕猴桃
溃疡病菌株均为 孕援 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬藻遥
晕燥贼藻院 员院责泽 原 员圆 原 圆曰圆院责泽 原 员圆 原 苑曰猿院责泽 原 员圆 原 员园曰源院责泽 原 员圆 原 员圆曰
缘院责泽 原 员圆 原 员源曰远院责泽 原 员圆 原 员缘援
图 圆摇 代表性菌株 员远杂 耀 圆猿杂 则阅晕粤鄄陨栽杂 孕悦砸扩增结果
云蚤早援 圆摇 孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 则藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤增藻
泽贼则葬蚤灶泽 遭葬泽藻凿 燥灶 员远杂 耀 圆猿杂 则阅晕粤鄄陨栽杂
猿愿员员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
图 猿摇 代表性菌株序列与登录号为 阅愿远猿缘苑 和 粤再猿源圆员远缘 的 孕援 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬藻比对结果
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶 则藻泽怎造贼泽 燥枣 泽藻择怎藻灶糟藻泽 遭藻贼憎藻藻灶 则藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤增藻 泽贼则葬蚤灶泽 葬灶凿 贼澡藻 郧藻灶月葬灶噪 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶
灶怎皂遭藻则 燥枣 阅愿远猿缘苑 葬灶凿 粤再猿源圆员远缘 燥枣 孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬藻
表 圆摇 猕猴桃种质资源抗性鉴定材料
栽葬遭造藻 圆摇 郧藻则皂责造葬泽皂 皂葬贼藻则蚤葬造泽 枣燥则 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 贼燥 遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟葬灶噪藻则 燥枣 噪蚤憎蚤枣则怎蚤贼
编号
杂葬皂责造藻 晕燥援
品种渊优系冤
灾葬则蚤藻贼赠 燥则 泽贼则葬蚤灶 灶葬皂藻
种名
杂责藻糟蚤藻泽
备注
砸藻皂葬则噪泽
员 员猿 原 源 美味猕猴桃 粤援 凿藻造蚤糟蚤泽葬 布鲁诺实生后代中选出的优株 泽贼则葬蚤灶泽 枣则燥皂 泽藻藻凿造蚤灶早泽 燥枣
月则怎灶燥渊粤援 凿藻造蚤糟蚤泽葬冤
圆 员猿 原 猿 美味猕猴桃 粤援 凿藻造蚤糟蚤泽葬 布鲁诺实生后代中选出的优株 泽贼则葬蚤灶泽 枣则燥皂 泽藻藻凿造蚤灶早泽 燥枣
月则怎灶燥渊粤援 凿藻造蚤糟蚤泽葬冤
猿 米良 员 号 耶酝蚤造蚤葬灶早 晕燥援 员爷 美味猕猴桃 粤援 凿藻造蚤糟蚤泽葬
源 金魁 耶允蚤灶早噪怎蚤爷 美味猕猴桃 粤援 凿藻造蚤糟蚤泽葬
缘 徐香 耶载怎曾蚤葬灶早爷 美味猕猴桃 粤援 凿藻造蚤糟蚤泽葬
远 海艳 耶匀葬蚤赠葬灶爷 美味猕猴桃 粤援 凿藻造蚤糟蚤泽葬
苑 布鲁诺 耶月则怎灶燥爷 美味猕猴桃 粤援 凿藻造蚤糟蚤泽葬
愿 海沃德 耶匀葬赠憎燥则凿爷 美味猕猴桃 粤援 凿藻造蚤糟蚤泽葬
怨 华特 耶宰澡蚤贼藻爷 毛花猕猴桃 粤援 藻则蚤葬灶贼澡葬
员园 迷你华特 耶酝蚤灶蚤憎澡蚤贼藻爷 毛花猕猴桃 粤援 藻则蚤葬灶贼澡葬
员员 通山 缘 号 耶栽燥灶早泽葬灶 晕燥援 缘爷 中华猕猴桃 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽
员圆 早鲜 耶在葬燥曾蚤葬灶爷 中华猕猴桃 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽
员猿 员愿 原 员源 中华猕猴桃 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 匀燥则贼员远粤实生后代中选出的优株 泽贼则葬蚤灶泽 枣则燥皂 泽藻藻凿造蚤灶早泽 燥枣
匀燥则贼员远粤渊粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽冤
员源 员员 原 苑 中华猕猴桃 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽 匀燥则贼员远粤实生后代中选出的优株 泽贼则葬蚤灶泽 枣则燥皂 泽藻藻凿造蚤灶早泽 燥枣
匀燥则贼员远粤渊粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽冤
员缘 庐山香 耶蕴怎泽葬灶曾蚤葬灶早爷 中华猕猴桃 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽
员远 怡香 耶再蚤曾蚤葬灶早爷 中华猕猴桃 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽
员苑 红阳 耶匀燥灶早赠葬灶早爷 中华猕猴桃 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽
员愿 金丰 耶允蚤灶早枣藻灶早爷 中华猕猴桃 粤援 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽
源愿员员
摇 苑 期 猕猴桃溃疡病病原菌分子鉴定与抗性材料初选
图 源摇 应用 猿 种接种方法鉴定猕猴桃种质材料溃疡病抗性
云蚤早援 源摇 杂糟则藻藻灶蚤灶早 燥枣 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 皂葬贼藻则蚤葬造泽 贼燥 遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟葬灶噪藻则 燥枣 噪蚤憎蚤枣则怎蚤贼 遭赠 猿 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿泽
表 猿摇 不同鉴定方法之间的相关系数
栽葬遭造藻 猿摇 悦燥则则藻造葬贼蚤燥灶 糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼泽 葬皂燥灶早 凿蚤枣枣藻则藻灶贼
蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 皂藻贼澡燥凿泽
方法 酝藻贼澡燥凿泽 酝员 酝圆 酝猿
酝员 员
酝圆 园援 怨怨源源鄢鄢 员
酝猿 原 园援 园员缘圆 原 园援 员员圆猿 员
注院鄢鄢院在 孕 约 园援 园员 水平极显著相关遥 酝员院离体枝条针刺接种法曰酝圆院
活体枝杆针刺接种法曰 酝猿院 离体叶片表皮皮下注射接种遥
晕燥贼藻院 鄢鄢蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园援 园员援 酝员袁 陨灶 增蚤贼则燥 泽澡燥燥贼泽
灶藻藻凿造藻 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶曰 酝圆袁 蕴蚤增藻 遭则葬糟澡藻泽 灶藻藻凿造藻 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶曰 酝猿袁 陨灶 增蚤贼则燥
造藻葬增藻泽 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶援
圆郾 源摇 猕猴桃种质资源抗性鉴定
用分离鉴定出具强致病性菌株的一个代表性菌株
责泽葬 原 员圆 原 圆袁分别用离体枝条针刺接种尧活体枝杆针刺
接种及离体叶片表皮皮下注射接种 猿 种方法鉴定了
员愿 份猕猴桃种质资源的溃疡病抗性遥 员愿 份猕猴桃种
质资源主要包括 愿 份美味猕猴桃尧愿 份中华猕猴桃及 圆
份毛花猕猴桃渊表 圆冤遥 根据图 源 的病情指数分析得出
不同鉴定方法之间的相关系数渊表 猿冤袁结果显示离体
枝条针刺接种与活体枝杆针刺接种两种接种方法呈显
著正相关袁其相关系数为 园郾 怨怨源源袁而离体叶片表皮皮
下注射接种与其它两种接种方法呈负相关袁其鉴定结
果表现发病率高袁病情指数低袁品种间差异不显著袁说
明离体叶片接种对猕猴桃品种抗性鉴定的参考意义不
大遥 结合图 源 的离体枝条针刺接种和活体枝杆针刺接
种两种方法可以初步筛选鉴定出 员猿 原 源 和 员猿鄄猿 两份
材料的抗病性最强袁红阳和金丰表现为最感溃疡病袁其
中红阳的病情指数高达 苑缘郾 猿猿豫 遥
猿摇 讨论
猕猴桃细菌性溃疡病是国内外猕猴桃栽培区发生
频繁尧危害严重的毁灭性病害遥 该病可通过带菌种苗
进行远距离传播袁为我国森林植物检疫性病害袁并且在
发生过程中具有潜伏侵染的特性袁故灵敏可靠的检测
技术对于病菌的早期诊断尧流行监测及病害的早期预
防具有重要意义遥 已有的报道一致认为各地的猕猴桃
细菌性溃疡病均是由丁香假单胞杆菌渊孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽
泽赠则蚤灶早葬藻冤引起的袁但在致病变种方面有丁香假单胞李
致病变种渊孕援 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 酝燥则泽责则怎灶燥则怎皂冤尧丁香假单胞
丁香致病变种渊孕援 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 泽赠则蚤灶早葬藻冤和丁香假单胞
猕猴桃致病变种渊孕援 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬藻冤等 猿 个致
病变种遥 目前袁关于这 猿 个致病变种的致病力差异及
其分布方面的报道还较少袁给系统高效地开展抗病研
究带来了困难遥 本文利用基于细菌 员远杂 原 圆猿杂 则阅晕粤
内转录间隔区序列设计的特异性鉴别引物袁对分离得
到的 远 个代表菌株进行 孕悦砸 扩增和测序袁鉴定出中国
江苏海门尧浙江海宁和江山尧江西奉新等猕猴桃主产区
猕猴桃细菌性溃疡病的致病种均为丁香假单胞杆菌猕
缘愿员员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
猴桃致病变种渊孕援 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬冤遥 同时袁本课
题亦将菌株和菌株 阅晕粤 提供给新西兰植物与食品研
究所进行分子鉴定袁其结果与新西兰当地分离出的高
致病性菌序列一致袁这也与最近 酝葬扎扎葬早造蚤葬 等咱圆园暂 和
月怎贼造藻则等咱圆员暂报道的结果吻合遥
本文抗病性鉴定方法采用离体叶片表皮皮下注射
接种尧离体枝条针刺接种和活体枝杆针刺接种 猿 种方
法袁其中后 圆 种鉴定方法对 员愿 份猕猴桃种质资源的鉴
定结果呈显著正相关袁相关系数为 园郾 怨怨源源袁其抗性鉴
定结果与新西兰植物与食品研究所的抗性鉴定结果趋
势一致渊相关结果未公开发表冤曰而离体叶片表皮皮下
注射接种鉴定方法与其它两种接种方法呈负相关袁可
见对于珍贵稀少的育种材料袁前一种方法虽周期短尧成
本低尧见效快且可初步判断其抗病性袁但作为猕猴桃品
种抗性鉴定袁其可靠性值得商榷遥 如同赵利娜等咱圆圆暂应
用离体叶片表皮皮下注射接种方法得到的鉴定结果袁
不同猕猴桃品种的致病力与田间品种自然感病程度不
一致袁且感尧抗材料间差异不显著袁难以真实地反映植
株活体的抗性袁因此这种方法是否适合猕猴桃抗性鉴
定还有待进一步验证遥
抗源是从事抗病育种的基础袁本试验通过对 员愿 份
种质材料进行鉴定袁初步获得 圆 份高抗材料和多份中
抗材料袁其抗病机制与开发价值有待进一步研究遥
源摇 结论
本文利用基于细菌 员远杂 原 圆猿杂 则阅晕粤 内转录间隔
区序列设计的特异性鉴别引物袁对分离得到的 远 个代
表菌株进行 孕悦砸 扩增和测序袁获得了大小约为 圆愿园遭责
的特异性片段袁其测序结果与登录号为 阅愿远猿缘苑 和
粤再猿源圆员远缘 的 孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽 泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬藻 的序
列完全一致袁从而鉴定出中国江苏海门尧浙江宁海和江
山尧江西奉新等猕猴桃主产区猕猴桃细菌性溃疡病的
致病种均为丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种 渊 孕援
泽赠则蚤灶早葬藻 责增援 粤糟贼蚤灶蚤凿蚤葬藻冤遥 采用离体叶片注射接种尧离
体枝条针刺接种和活体枝杆针刺接种 猿 种方法鉴定了
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