全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊员圆冤院员愿园猿 耀 员愿园愿允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员猿鄄园员鄄员缘摇 接受日期院圆园员猿鄄园远鄄员圆
基金项目院国家自然科学基金资助项目渊猿园怨苑员苑员愿 和 猿园远园园猿怨员冤袁国家转基因生物新品种培育重大专项渊圆园园怨在载园愿园园员 原 园员缘月冤
作者简介院牟少亮袁男袁讲师袁主要从事植物抗逆分子生物学研究遥 耘鄄皂葬蚤造院皂燥怎泽澡葬燥造蚤葬灶早岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院何水林袁男袁教授袁主要从事植物功能基因组学与遗传改良研究遥 耘鄄皂葬蚤造院泽澡造澡藻圆园员猿园源岳 葬造蚤赠怎灶援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤员圆鄄员愿园猿鄄园远
水稻 孕蚤鄄贼葬启动子的克隆及其功能分析
牟少亮员袁圆 摇 蔡金森员袁圆 摇 严摇 雁圆袁猿 摇 邱爱连员 袁猿 摇 官德义圆袁猿 摇 何水林圆袁猿
渊员 福建农林大学生命科学学院袁福建 福州摇 猿缘园园园圆曰圆 作物遗传改良与综合利用教育部
重点实验室袁福建 福州摇 猿缘园园园圆曰猿 福建农林大学作物科学学院袁福建 福州摇 猿缘园园园圆冤
摘摇 要院本研究分离了水稻品种日本晴 孕蚤鄄贼葬基因的启动子袁并构建其 郧哉杂融合表达载体袁通过农杆菌介
导的遗传转化获得了其转基因植株遥 以获得的转基因水稻为材料进行 郧哉杂 组织染色和 郧哉杂渊茁 原葡萄
糖苷酸酶冤酶活性分析袁结果表明袁郧哉杂 基因在根尧茎和叶中都有表达袁转基因植株在接种稻瘟病菌后
郧哉杂活性显著增加遥 用抗病信号分子水杨酸渊杂粤冤和茉莉酸甲酯渊酝藻允粤冤处理后袁孕蚤鄄贼葬 启动子驱动的
郧哉杂活性也显著增加遥 以上结果表明袁孕蚤鄄贼葬启动子是一个对稻瘟病菌应答的诱导型启动子袁同时 孕蚤鄄贼葬
启动子还受到 杂粤和 酝藻允粤的诱导表达遥
关键词院孕蚤鄄贼葬曰启动子曰郧哉杂曰转基因水稻
摇 摇 启动子是调控基因转录的重要元件袁它通过与转
录因子的相互识别调控下游基因的转录遥 在作物的基
因工程应用中袁常用组成型启动子袁如水稻肌动蛋白
渊粤糟贼员冤启动子咱员暂 袁玉米泛素渊哉遭蚤员冤启动子咱圆暂 遥 但这些
启动子驱动基因的组成型表达会造成作物体内物质和
能量的大量浪费袁对转基因植株生长尧发育尧产量以及
品质产生负面影响遥 因此袁寻找理想的病原菌诱导型
启动子是作物抗病基因工程的策略之一遥
由稻瘟病病菌渊酝葬早灶葬责燥则贼澡藻 燥则赠扎葬藻冤 引起的稻瘟
病是水稻的重要病害之一袁能够引起大幅度减产袁严重
时可以减产 源园豫 耀缘园豫 袁甚至绝收遥 孕蚤鄄贼葬是水稻中已
克隆的单拷贝抗稻瘟病基因袁它位于水稻第 员圆 号染色
体的着丝点附近袁编码一个 悦悦鄄晕月杂鄄蕴砸砸 蛋白遥 抗病
与感病水稻品种中 孕蚤鄄贼葬 等位基因编码蛋白仅有一个
氨基酸残基的差异袁抗病品种在 怨员愿 位点是丙氨酸袁而
感病品种是丝氨酸遥 该位点氨基酸的变化对于抗性蛋
白与无毒基因产物识别与否有决定性的影响咱猿暂 遥 在
未接种稻瘟菌状态下袁通过 砸晕粤印记杂交技术检测抗
病与感病品种 孕蚤鄄贼葬的转录水平袁结果显示它们的差别
不大袁都有较低的表达量咱猿暂 遥 接种稻瘟病菌后 孕蚤鄄贼葬
的转录情况如何袁 孕蚤鄄贼葬 上游启动子是否具有诱导活
性并不清楚遥 因此袁本研究以水稻品种日本晴为材料袁
克隆了 孕蚤鄄贼葬 上游启动子袁通过研究该启动子诱导的
郧哉杂酶活性袁分析 孕蚤鄄贼葬 启动子在不同器官的活性及
其在稻瘟菌和抗病信号分子处理条件下的诱导特征遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
本研究用的水稻材料是已完成基因组测序的粳稻
品种日本晴遥 大肠杆菌渊耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤冤菌株 阅匀员园月袁
根癌农杆菌渊粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽冤菌株 耘匀粤员园缘
为本实验室保存遥 责酝阅员愿 原 栽 载体购自大连 栽葬砸葬运葬
公司袁责阅晕韵砸 原圆园苑 和 责酝阅悦员远猿 载体由 悦怎则贼蚤泽教授惠
赠遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 孕蚤鄄贼葬启动子的克隆与测序根据 晕悦月陨 网站上
公布的日本晴基因组序列袁设计引物 渊 孕蚤贼葬云院 缘忆鄄
粤粤粤粤郧悦粤郧郧栽栽悦郧悦粤郧郧栽栽粤鄄猿忆曰 孕蚤贼葬砸院 缘忆鄄悦郧悦栽粤郧鄄
悦栽郧粤粤郧粤栽悦粤郧粤栽悦粤鄄猿忆冤遥 对 孕蚤鄄贼葬 编码区上游 阅晕粤
序列进行 孕悦砸 扩增袁程序为院怨缘益 缘 皂蚤灶曰怨源益 猿园 泽袁
缘源益 源园 泽袁苑圆益 员圆园 泽袁猿缘 个循环曰苑圆益 员园 皂蚤灶遥 扩增
产物鉴定纯化后连接到 责酝阅员愿 原 栽袁送三博远志生物
有限公司测序遥 通过 孕造葬灶贼悦粤砸耘渊 澡贼贼责院 辕 辕 遭蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼鄄
猿园愿员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
蚤糟泽援 责泽遭援 怎早藻灶贼援 遭藻 辕 憎藻遭贼燥燥造泽 辕 责造葬灶贼糟葬则藻 辕 澡贼皂造 辕 冤 咱源暂软件对
该启动子保守的顺式作用元件进行预测分析遥
员郾 圆郾 圆摇 孕蚤鄄贼葬启动子的 郧哉杂融合表达载体构建摇 利用
早葬贼藻憎葬赠技术咱缘暂分别通过入门载体 责阅晕韵砸 原 圆园苑 和目
的载体 责酝阅悦员远猿袁 进行 月孕 和 蕴砸 反应袁构建了 孕蚤鄄贼葬
启动子的 郧哉杂 融合表达载体袁并转化到农杆菌
耘匀粤员园缘 中用于下游的水稻遗传转化遥
员郾 圆郾 猿摇 农杆菌介导的遗传转化和转基因植株的获得
摇 以水稻品种日本晴的成熟胚为受体材料袁愈伤组织
在农杆菌浸染之后袁分别经过筛选培养尧分化培养和生
根培养等袁获得 孕蚤鄄贼葬 启动子驱动的 郧哉杂 表达转基因
植株袁具体步骤参照 杂藻蚤蚤糟澡蚤 的方法咱远暂 遥 获得的各转基
因 株 系 选 择 潮 霉 素 的 特 异 引 物 渊 缘忆鄄
粤悦粤悦粤郧悦悦粤栽悦郧郧栽悦悦粤郧粤悦鄄猿忆和 缘忆鄄粤栽悦栽栽粤郧悦悦粤鄄
郧粤悦郧粤郧悦郧郧郧鄄猿忆冤进行 孕悦砸验证遥
员郾 圆郾 源摇 郧哉杂活性检测摇 收获的 栽园转基因种子经过潮
霉素筛选袁选择发芽率接近 猿颐 员的株系进行种植遥 收
获的 栽员 种子及其 栽圆 植株进行 郧哉杂 组织化学染色和
活性的定量分析遥 郧哉杂染色液的配制参照 允藻枣枣藻则泽燥灶 的
方法并略加修改咱苑暂 遥 郧哉杂染色液配方为院园郾 圆 皂燥造窑蕴 原员
磷酸钠缓冲液渊责匀 值 越 苑郾 园冤袁园郾 员 皂燥造窑蕴 原员铁氰化钾袁
园郾 员 皂燥造窑蕴 原员亚铁氰化钾袁员郾 园 皂燥造窑蕴 原员乙二胺四乙酸二
钠袁园郾 员豫 载鄄郧造怎糟遥 将样品放入 郧哉杂 染色液 猿苑益保温
员圆 澡后袁用 苑园豫脱色至背景影响最小遥
测定 郧哉杂酶活性采用分光光度法袁具体步骤参照
曾凡锁等咱愿暂的方法遥 酶活力单位定义为每分钟水解
硝基苯基 原 遭鄄阅 原葡萄糖醛酸苷渊孕晕孕郧冤生成 员 滋酝 对
硝基苯酚的酶量为一个单位遥 郧哉杂 活性以每毫克蛋
白的酶活力来表示遥 至少选择两个以上株系进行分
析袁每个株系选择 缘 棵水稻植株进行实验遥 多个株系
的数据分析得出了相近的结果袁在野结果与分析冶中的
数据为 员 个株系的分析结果遥
员郾 圆郾 缘摇 水稻稻瘟病菌尧茉莉酸甲酯尧水杨酸和脱落酸
处理摇 选择大约 猿 周的 栽圆 转基因水稻幼苗进行处理遥
采用喷雾接种法接种稻瘟病菌孢子袁稻瘟病菌渊菌株
为 早怎赠员员冤分生孢子浓度为 员园缘 个孢子窑皂蕴 原员袁接种后
第 源尧缘尧远 天取样遥 激素处理方法是分别将 杂粤渊员园园
滋酝冤尧粤月粤渊员园园 滋酝冤尧酝藻允粤渊员园园 滋酝冤喷雾在转基因水
稻叶面袁喷后 员圆 澡剪取叶片进行定量分析遥 对照植株
进行喷洒无菌水处理遥 萌发的种子则是浸泡在上述 猿
种激素溶液中袁对照组浸泡在无菌水中袁员圆 澡 后进行
郧哉杂染色分析遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 孕蚤鄄贼葬启动子的分离和序列分析
利用特异性引物对 孕蚤鄄贼葬基因上游 阅晕粤进行 孕悦砸
扩增袁电泳结果显示获得的 阅晕粤 片段大小约 圆郾 员 噪遭
渊图 员冤袁进一步的测序结果显示该 阅晕粤 片段全长为
圆员苑怨 遭责袁与 晕悦月陨 网站公布的结果相似性为 怨怨郾 苑豫 遥
孕造葬灶贼悦粤砸耘软件分析表明袁该启动子片段除了 栽粤栽粤鄄
遭燥曾和 悦粤粤栽鄄遭燥曾基本元件外袁还包括了多个与逆境相
关的作用元件渊图 圆冤遥 例如袁猿 个 宰鄄遭燥曾袁圆 个 悦郧栽悦粤鄄
皂燥贼蚤枣袁圆 个 耘砸耘袁猿 个 匀杂耘等遥
注院第 员 泳道要孕蚤鄄贼葬启动子 孕悦砸扩增产物曰酝要阅蕴圆园园园 阅晕粤标记遥
晕燥贼藻院 酝院 阅蕴圆园园园 阅晕粤 皂葬则噪藻则曰 蕴葬灶藻员院 粤皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 责则燥凿怎糟贼
燥枣 孕蚤鄄贼葬 责则燥皂燥贼藻则援
图 员摇 水稻 孕蚤鄄贼葬启动子 孕悦砸扩增
云蚤早援 员摇 孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 则蚤糟藻 孕蚤鄄贼葬 责则燥皂燥贼藻则
圆郾 圆摇 孕蚤鄄贼葬启动子在转基因水稻中的 郧哉杂活性
选分蘖期阳性水稻转基因植株的根尧茎尧叶片和叶
鞘进行 郧哉杂染色遥 结果表明袁在上述器官中都能明显
观察到蓝色渊图 猿冤袁表明 郧哉杂 基因在根尧茎和叶中都
有表达遥 该结果也说明 孕蚤鄄贼葬 启动子没有明显的器官
特异性遥
圆郾 猿摇 孕蚤鄄贼葬启动子对稻瘟菌和抗病信号分子处理的诱
导表达活性
选 猿 周左右的水稻幼苗渊源 耀 缘 叶期冤用稻瘟病菌
接种遥 郧哉杂染色结果表明袁接种后的第 源尧缘尧远 天都能
观察到 郧哉杂 基因表达袁第 源 天病斑处只有轻微的蓝
色袁第 缘 和 远 天叶片蓝色较明显袁说明与未接种稻瘟病
菌的叶片 渊 悦运冤相比袁郧哉杂 基因表达增强 渊图 源粤冤遥
郧哉杂酶活性分析结果表明袁第 源 天时袁郧哉杂 酶活性是
对照渊悦运冤的 员郾 缘 倍袁第 远 天增加到 员郾 愿 倍渊图 源月冤遥
上述结果表明袁孕蚤鄄贼葬启动子是一个对稻瘟病菌处理产
源园愿员
摇 员圆 期 水稻 孕蚤鄄贼葬启动子的克隆及其功能分析
注院耘砸耘院乙烯应答元件曰悦郧栽悦粤鄄皂燥贼蚤枣院酝藻允粤应答元件曰宰鄄遭燥曾院真菌激发子应答元件曰栽悦鄄则蚤糟澡 则藻责藻葬贼泽院防御反应应答元件曰匀杂耘院高温应答元件遥
晕燥贼藻院耘砸耘院 藻贼澡赠造藻灶藻鄄则藻泽责燥灶泽蚤增藻 藻造藻皂藻灶贼曰 悦郧栽悦粤鄄皂燥贼蚤枣院 藻造藻皂藻灶贼 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 贼澡藻 酝藻允粤鄄则藻泽责燥灶泽蚤增藻灶藻泽泽曰 宰鄄遭燥曾院 枣怎灶早葬造 藻造蚤糟蚤贼燥则
则藻泽责燥灶泽蚤增藻 藻造藻皂藻灶贼曰 栽悦鄄则蚤糟澡 则藻责藻葬贼泽院 藻造藻皂藻灶贼 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 凿藻枣藻灶泽藻 葬灶凿 泽贼则藻泽泽 则藻泽责燥灶泽蚤增藻灶藻泽泽曰 匀杂耘院 藻造藻皂藻灶贼 蚤灶增燥造增藻凿 蚤灶 澡藻葬贼 泽贼则藻泽泽 则藻泽责燥灶泽蚤增藻灶藻泽泽援
图 圆摇 孕蚤鄄贼葬启动子的序列及其顺式作用元件
云蚤早援 圆摇 晕怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶凿 糟蚤泽鄄葬糟贼蚤灶早 藻造藻皂藻灶贼泽 燥枣 孕蚤鄄贼葬 责则燥皂燥贼藻则
生应答的诱导型启动子遥
选择幼苗期的水稻进行 杂粤尧酝藻允粤 和 粤月粤渊脱落
酸冤处理遥 郧哉杂酶活性分析表明袁在 杂粤 和 酝藻允粤 处理
后袁郧哉杂酶活性出现了显著增强渊孕 约 园郾 园缘冤袁而 粤月粤
处理后袁郧哉杂 酶活性变化不显著渊图 缘粤冤遥 对刚萌发
的转基因种子用激素处理并进行 郧哉杂 染色袁结果表
明袁对照组渊悦运冤有轻微的蓝色袁酝藻允粤 和 杂粤 处理组相
对于对照组蓝色更深袁而 粤月粤处理组也只看到轻微的
蓝色渊图 缘月冤遥 综上所述袁 孕蚤鄄贼葬启动子对 杂粤 和 酝藻允粤
有应答袁而对 粤月粤没有应答遥
猿摇 讨论
砸基因在植物的病害防御过程中发挥着重要作
用袁它们的作用符合野基因对基因冶 渊早藻灶藻 枣燥则 早藻灶藻冤学
说遥 有关 砸基因的作用机制已有了广泛和深入研究袁
但对 砸基因的表达调控研究并不多见咱怨暂 遥 研究表明袁
一部分 砸基因表现为病原菌和环境因子诱导表达袁如
缘园愿员
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
图 猿摇 孕蚤鄄贼葬启动子在转基因水稻不同
器官组织的化学组织染色分析
云蚤早援 猿摇 郧哉杂 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽藻泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼
燥则早葬灶泽 燥枣 孕蚤鄄贼葬 责则燥皂燥贼藻则 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 则蚤糟藻
水稻稻瘟病抗性基因 孕蚤遭 的表达受病原菌尧温度和水
分等袁以及抗病信号分子 渊 杂粤尧 允粤 和乙烯等冤的诱
导咱员园暂 遥 拟南芥霜霉病抗性基因 砸孕孕愿 受病原菌和 杂粤
的诱导表达咱怨暂 遥 水稻白叶枯病抗性基因 载葬员 的表达
受病原菌尧创伤以及 杂粤尧允粤 和 粤月粤 的诱导咱员员 原 员圆暂 遥 一
注院粤院组织化学染色摇 月院郧哉杂酶活性测定渊鄢 孕 约 园郾 园缘冤遥
晕燥贼藻院粤院 匀蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 泽贼葬蚤灶蚤灶早 月院 郧哉杂 葬糟贼蚤增蚤贼赠 藻泽泽葬赠渊鄢 孕 约 园郾 园缘冤 援
图 源摇 孕蚤鄄贼葬启动子在接种稻瘟菌时的应答分析
云蚤早援 源摇 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 孕蚤鄄贼葬 责则燥皂燥贼藻则 则藻泽责燥灶凿 贼燥 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 酝援 燥则赠扎葬藻
部分 砸基因在病原菌侵染时表达量并没有变化袁如亚
麻 蕴远 锈病抗性基因咱员猿暂和拟南芥丁香假单胞菌抗性基
因 砸孕酝员咱员源暂等遥 越来越多的研究表明袁过量表达 砸 基
因会引起植物的发育迟缓等不利现象咱员缘暂 遥 因此袁了解
砸基因在植物体内的表达特征对作物的遗传改良有重
要的参考意义遥
本研究以水稻品种日本晴为材料袁对 孕蚤鄄贼葬启动子
的活性分析发现袁孕蚤鄄贼葬 启动子在根尧茎和叶中都有活
性袁而且表现为稻瘟病菌诱导型启动子遥 说明袁孕蚤鄄贼葬
在水稻的根尧茎和叶都具有一定的本底表达袁在遭受稻
瘟病菌侵染胁迫时袁该基因表现为诱导表达遥 杂粤 和
允粤是植物中基本防御信号分子袁其介导的信号途径与
植物抗性密切相关咱员远 原 员苑暂 遥 通常认为袁杂粤和 允粤 信号途
径在 砸基因的下游遥 本研究用 杂粤 和 酝藻允粤 处理转基
因水稻植株 员圆 澡 后袁孕蚤鄄贼葬 启动子驱动 郧哉杂 活性显著
升高渊图 缘冤遥 表明 孕蚤鄄贼葬启动子对 杂粤 和 酝藻允粤 的处理
都能应答袁孕蚤鄄贼葬的表达可能受下游 杂粤和 允粤途径的影
响遥 序列分析表明袁孕蚤鄄贼葬启动子区域包括多个与病原
菌应答的元件袁如宰鄄遭燥曾和 悦郧栽悦粤鄄皂燥贼蚤枣遥 宰鄄遭燥曾是真
菌诱导元件袁砸孕孕愿 基因对病原菌和 杂粤 的应答就与其
启动子的 宰鄄遭燥曾 相关咱怨暂 遥 悦郧栽悦粤鄄皂燥贼蚤枣 是 酝藻允粤 响应
元件袁长春花 阅粤栽 基因对 允粤 的应答与启动子区的 猿
个 悦郧栽悦粤鄄皂燥贼蚤枣 有关咱员愿暂 遥 孕蚤鄄贼葬 启动子对病原菌尧杂粤
和 酝藻允粤的应答很可能也与这些元件有关遥
源摇 结论
水稻品种日本晴 孕蚤鄄贼葬 启动子区域包含 宰鄄遭燥曾 等
多个与逆境相关的作用元件遥 对 孕蚤鄄贼葬 启动子驱动的
郧哉杂活性分析表明袁孕蚤鄄贼葬启动子在转基因水稻植株的
根尧劲和叶中都具有活性袁是一个稻瘟病菌诱导型启动
远园愿员
摇 员圆 期 水稻 孕蚤鄄贼葬启动子的克隆及其功能分析
注院粤院叶片的 郧哉杂酶活性测定渊鄢 孕 约 园郾 园缘冤曰月院萌发种子的组织化学染色遥
晕燥贼藻院粤院 郧哉杂 葬糟贼蚤增蚤贼赠 藻泽泽葬赠 蚤灶 造藻葬增藻泽渊鄢 孕 约 园郾 园缘冤曰 月院 匀蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 泽贼葬蚤灶蚤灶早 燥枣 早藻则皂蚤灶葬贼藻凿 泽藻藻凿泽援
图 缘摇 孕蚤鄄贼葬启动子在 杂粤尧酝藻允粤和 粤月粤处理的应答分析
云蚤早援 缘摇 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 孕蚤鄄贼葬 责则燥皂燥贼藻则 则藻泽责燥灶凿 贼燥 杂粤袁 酝藻允粤 葬灶凿 粤月粤
子遥 另外袁其活性还还受到抗病信号分子 渊 杂粤 和
酝藻允粤冤的诱导遥
参考文献院
咱 员 暂摇 酝糟耘造则燥赠 阅袁 月造燥憎藻则泽 粤 阅袁 允藻灶藻泽 月袁 宰怎 砸援 悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则泽 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 则蚤糟藻 葬糟贼蚤灶 员 渊粤糟贼员冤 缘鸳 则藻早蚤燥灶 枣燥则 怎泽藻
蚤灶 皂燥灶燥糟燥贼 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 咱 允暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则 葬灶凿 郧藻灶藻则葬造 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁
员怨怨员袁 圆猿员渊员冤院员缘园 原 员远园
咱 圆 暂摇 悦澡则蚤泽贼藻灶泽藻灶 粤 匀袁 杂澡葬则则燥糟噪 砸 粤袁 匝怎葬蚤造 孕 匀援 酝葬蚤扎藻 责燥造赠怎遭蚤择怎蚤贼蚤灶
早藻灶藻泽院 泽贼则怎糟贼怎则藻袁 贼澡藻则皂葬造 责藻则贼怎则遭葬贼蚤燥灶 燥枣 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶凿 贼则葬灶泽糟则蚤责贼
泽责造蚤糟蚤灶早袁 葬灶凿 责则燥皂燥贼藻则 葬糟贼蚤增蚤贼赠 枣燥造造燥憎蚤灶早 贼则葬灶泽枣藻则 贼燥 责则燥贼燥责造葬泽贼泽 遭赠
藻造藻糟贼则燥责燥则葬贼蚤燥灶咱允暂援 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 员怨怨圆袁 员愿渊源冤院远苑缘 原
远愿怨
咱 猿 暂摇 月则赠葬灶 郧 栽袁 宰怎 运 杂袁 云葬则则葬造造 蕴袁 允蚤葬 再袁 匀藻则泽澡藻赠 匀 孕袁 酝糟粤凿葬皂泽 杂
粤袁 云葬怎造噪 运 晕袁 阅燥灶葬造凿泽燥灶 郧 运袁 栽葬则糟澡蚤灶蚤 砸袁 灾葬造藻灶贼 月援 粤 泽蚤灶早造藻
葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 凿蚤泽贼蚤灶早怎蚤泽澡藻泽 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 葬灶凿 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 葬造造藻造藻泽 燥枣
贼澡藻 则蚤糟藻 遭造葬泽贼 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 早藻灶藻 孕蚤鄄贼葬咱允暂援 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 圆园园园袁 员圆渊员员冤院
圆园猿猿 原 圆园源远
咱 源 暂摇 蕴藻泽糟燥贼 酝袁 阅藻澡葬蚤泽 孕袁 栽澡蚤躁泽 郧袁 酝葬则糟澡葬造 运袁 酝燥则藻葬怎 再袁 灾葬灶 凿藻 孕藻藻则
再袁 砸燥怎扎藻 孕袁 砸燥皂遭葬怎贼泽 杂院 孕造葬灶贼悦粤砸耘袁 葬 凿葬贼葬遭葬泽藻 燥枣 责造葬灶贼 糟蚤泽鄄
葬糟贼蚤灶早 则藻早怎造葬贼燥则赠 藻造藻皂藻灶贼泽 葬灶凿 葬 责燥则贼葬造 贼燥 贼燥燥造泽 枣燥则 蚤灶 泽蚤造蚤糟燥 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣
责则燥皂燥贼藻则 泽藻择怎藻灶糟藻泽咱 允暂 援 晕怎糟造藻蚤糟 粤糟蚤凿泽 砸藻泽藻葬则糟澡袁 圆园园圆袁 猿园 渊员冤院
猿圆缘 原 猿圆苑
咱 缘 暂摇 悦怎则贼蚤泽 酝 阅袁 郧则燥泽泽灶蚤噪造葬怎泽 哉援 粤 早葬贼藻憎葬赠 糟造燥灶蚤灶早 增藻糟贼燥则 泽藻贼 枣燥则 澡蚤早澡鄄
贼澡则燥怎早澡责怎贼 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 早藻灶藻泽 蚤灶 责造葬灶贼葬 咱 允 暂 援 孕造葬灶贼
孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园猿袁 员猿猿渊圆冤院 源远圆 原 源远怨
咱 远 暂摇 杂藻蚤蚤糟澡蚤 栽袁 晕葬澡燥 匀袁 运葬扎怎噪燥 韵援 耘葬则造赠 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 燥枣 泽糟怎贼藻造造怎皂 贼蚤泽泽怎藻
憎蚤贼澡 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 葬造造燥憎泽 澡蚤早澡鄄泽责藻藻凿 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 燥枣 则蚤糟藻咱允暂 援 栽澡藻
孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造袁 圆园园远袁 源苑渊远冤院 怨远怨 原 怨苑远
咱 苑 暂摇 允藻枣枣藻则泽燥灶 砸 粤援 粤泽泽葬赠蚤灶早 糟澡蚤皂藻则蚤糟 早藻灶藻泽 蚤灶 责造葬灶贼泽院 栽澡藻 郧哉杂 早藻灶藻
枣怎泽蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂咱允暂 援 孕造葬灶贼 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠 砸藻责燥则贼藻则袁 员怨愿苑袁 缘 渊员冤院
猿愿苑 原 源园缘
咱 愿 暂 摇 曾凡锁袁钱晶晶袁康君袁王红艳袁王亦洲袁詹亚光援 转基因白桦中
郧哉杂基因表达的定量分析咱允暂 援 植物学报袁 圆园园怨袁 源源 渊源冤院 源愿源 原
源怨园
咱 怨 暂摇 酝燥澡则 栽 允袁 酝葬皂皂葬则藻造造葬 晕 阅袁 匀燥枣枣 栽袁 宰燥枣枣藻灶凿藻灶 月 允袁 允藻造藻泽噪燥 允 郧袁
酝糟阅燥憎藻造造 允 酝援 栽澡藻 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 凿燥憎灶赠 皂蚤造凿藻憎 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 早藻灶藻 砸孕孕愿
蚤泽 蚤灶凿怎糟藻凿 遭赠 责葬贼澡燥早藻灶泽 葬灶凿 泽葬造蚤糟赠造蚤糟 葬糟蚤凿 葬灶凿 蚤泽 则藻早怎造葬贼藻凿 遭赠 宰 遭燥曾
糟蚤泽 藻造藻皂藻灶贼泽 咱 允暂 援 酝燥造藻糟怎造葬则 孕造葬灶贼鄄酝蚤糟则燥遭藻 陨灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽袁 圆园员园袁 圆猿
渊员园冤院 员猿园猿 原 员猿员缘
咱员园暂摇 宰葬灶早 在 载袁 再葬皂葬灶燥怎糟澡蚤 哉袁 运葬贼葬赠燥泽藻 再袁 杂葬泽葬噪蚤 栽袁 再葬灶燥 酝援
耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 孕蚤遭 则蚤糟藻鄄遭造葬泽贼鄄则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 早藻灶藻 枣葬皂蚤造赠 蚤泽 怎责鄄则藻早怎造葬贼藻凿
遭赠 藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 枣葬增燥怎则蚤灶早 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 葬灶凿 遭赠 糟澡藻皂蚤糟葬造
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