全 文 ：!核 农 学 报!"#$%!"&"#$ $$,% ($$ )$!"#$%&"()#*+&$,-$.*#/#$&0*.+%*+1 收稿日期!"#$,*$#*#A!接受日期!"#$)*#*#,
基金项目!河北省科技厅计划项目"$""""A#)# 作者简介!钟尉方!女!讲师!主要从事天然活性物质提取研究% 0*1234$d6789\X3>A##;$,>:71 通讯作者!刘红英!女!教授!主要从事食品安全研究% 0*1234$43=####;@382>:71
文章编号!$###*A%%$""#$%##*$$,%*#+ 响应面法优化盐地碱蓬草总黄酮提取工艺研究 钟尉方!王岳鸿!刘红英 "河北农业大学海洋学院!河北 秦皇岛!##### 摘!要!以盐地碱蓬为原料!为优化盐地碱蓬中总黄酮的提取工艺!选择提取时间"提取温度"乙醇浓度" 液料比为自变量!总黄酮含量作为响应值!采用 -7^*-X68NX8 设计方法!研究各自变量及其交互作用对 总黄酮提取量的影响# 结果表明!响应面法优化所得的最佳工艺条件可靠!其最佳工艺条件为%提取时 间 )138"提取温度 "O"乙醇浓度 )Q"料液比$l"$# 在此条件下提取盐地碱篷总黄酮含量为 G%+19&9B$# 本结果与预测相近!可见响应面法优化盐地碱蓬草总黄酮提取工艺合理可行#
关键词!盐地碱蓬$响应面法$黄酮$提取工艺 /EF$$#G$$A&H5>3@@8>$##*A%%$G"#$%G#> $$,% !!盐地碱蓬"0#&+3& 1&1&#为一年生草本植物!主要 分布于欧洲及亚洲 $ B,( % 在我国河北)辽宁)山东)东 北)内蒙古)山西)陕西北部)宁夏)甘肃北部)青海)新 疆等沿海滩涂)盐碱土地都广泛生长!盐地碱蓬作为一 种能够生存于沿海滩涂)盐碱土壤的植物逐渐引起专 家学者注意% 盐地碱篷草中含有非常丰富的营养物 质!蛋白质)多糖)生物碱)黄酮)酚醌类等化合物 ) B( ! 其中黄酮类等有效成分对治疗冠心病)清除自由基)抑 菌)抗癌)保肝活性等方面有显著效果 + BA( % 研究表明 盐地碱蓬的化学成分)营养成分)生物活性)胁迫环境 生存机制)富集重金属能力等 & B$)( !在多领域具有较 高开发利用价值!极具种植栽培潜力% 因此可以预测 未来盐地碱蓬的产量必将不断扩大!可持续地)综合性 地利用盐地碱蓬必将成为新的研究热点% 本文旨在研究响应面法优化提取盐地碱蓬中总黄 酮的提取工艺 $% B$( !为盐地碱篷的进一步开发利用提 供理论依据和技术支持% 目前黄酮提取方法有热水提 取法)乙酸乙酯提取法)乙醇提取法% 乙醇提取方法可 以有效的避免多糖)鞣质)果胶等杂质的干扰 $+( % 本 文选择超声波辅助技术!乙醇溶剂提取方法!利用 /X@398*0^SX?T软件设计试验条件对提取工艺及其影响 因素优化组合 $A B"#( !筛选最优的提取工艺条件为进一 步开发利用盐地碱蓬提供理论依据% !"材料与方法 !#!"试验材料 盐地碱蓬"采摘于秦皇岛北戴河滩涂湿地#!芦丁 标准品"上海硕光科技公司#&无水乙醇)浓盐酸)氢氧 化钠)三氯化铝)亚硝酸钠等均为分析纯% !#$"仪器与设备 UfB$A## 紫外可见分光光度计 "北京普析通用 仪器有限责任公司#&iWB)## Ri/m型高功率数控 超声波清洗器"昆山超声仪器有限公司#&bI B$# 型 高速粉碎机"北京燕山正德机械设备有限公司#&UR` B$A-型离心机"上海安亭科学仪器厂#&D."#$).型 电子分析天平"上海精天电子仪器有限公司#&/RRB &#+.型电热恒温鼓风干燥箱"上海一恒科技有限公 司#&L0B%"-旋转蒸发器"上海亚荣公司#&冷冻干燥 机"北京松源华兴科技发展有限公司#% !#%"试验方法 $G,G$!黄酮含量测定方法 +"$ B"",!精密称取芦丁标准 品 $#19!超声波辅助 #Q乙醇溶解!室温定容至 $##1` 容量瓶中!配成 $##"9*1` B$的芦丁标准溶液% 精确吸取芦丁标准溶液 #)$)"),)))%)1` !分别置于 "%1` 容量瓶中!各加 %Q亚硝酸钠溶液 #G,#1` !振摇 %,$$
核!农!学!报 "& 卷
均匀并放至 138!再加入 $#Q三氯化铝溶液 #G,#1` ! 摇匀后放置 138!最后加入$G#174*`B$的氢氧化钠 )G#1` !用 #Q乙醇溶液定容至$##1` !放置 $%138 后!测定其 %$#81处吸光度值!绘制芦丁含量与吸光
度的标准曲线!得到回归方程%
$G,G"!单因素试验 +",,!盐地碱蓬全草!干燥)精密称 取$#9!加入一定浓度乙醇溶剂!在设定的条件下"考
察提取温度)提取时间)乙醇浓度)料液比#超声回流
提取!过滤!石油醚萃取!下层溶液浓缩!用乙醇定容至
"%#1` !摇匀作为样品溶液% 取样品溶液 $1` 移至 "%1` 容量瓶中!按照标准曲线制作方法操作!测定吸 光度!根据芦丁标准曲线计算稀释后碱篷总黄酮浓度 ":#% 每组平行 , 次!取平均值!计算样品中总黄酮的 提取率% 黄酮提取率 kKCMCm 1 C$##Q
式中$稀释倍数$"%&mB最初定容体积""%#1` #&1B样品质 量"$#G#9#%
$G,G,!响应面分析 +") B"%,!根据单因素试验筛选的乙 醇浓度)提取时间)料液比和提取温度四因素三水平试 验!采用 /X@398*0^SX?TAG#G+G$ 软件设计试验条件!选
用 -7^*-X68NX8 模型!以超声波提取总黄酮含量为响
应值!做四因素三水平二次回归正交组合设计试验!以
."提取时间#)-"提取温度#)K"乙醇浓度#)/"料液
比#为自变量!以碱篷总黄酮含量为响应值"b#!进行
响应面分析!每组平行 , 次!取平均值!优化盐地碱蓬
黄酮提取工艺 "( %
$"结果和分析$#!"芦丁标准曲线绘制
以芦丁标准液浓度为 轴^)吸光度为 <轴!绘制标
准曲线并得到回归方程"图 $#!所得回归方程为 #G#$#% B^#G##)&!?" k#G&&&,%$#$"单因素试验结果 "G"G$!乙醇浓度!在料液比为 $l"#"\Ha#)提取时间 为 #138)提取温度为 #O条件下!不同浓度乙醇对盐 地碱篷总黄酮含量的影响见图 "% 研究结果表明!随着乙醇浓度的升高总黄酮含量 先升高后逐渐降低!当乙醇体积分数为 #Q左右时黄 酮含量最高!因此选择 %#Q)#Q)+#Q的乙醇提取浓 度进行响应面分析% "G"G"!超声时间!在料液比为$l"#"\Ha#!提取温度
图 !"芦丁标准曲线
/*01!"D.698658IG534:-;5G.*9
图 $"乙醇浓度对提取总黄酮含量的影响 /*01$";;4I.-;4.M69-,I-9I49.56.*-9
-9.-.6,;,63-9-*8:I-9.49.
为 #O!乙醇体积分数为 #Q条件下!不同提取时间
对盐地碱篷总黄酮含量的影响如图 , 所示%
图 %"提取时间对总黄酮含量的影响
/*01%";;4I.-;4W.56I.*-9.*A4-9.-.6,
;,63-9-*8:I-9.49.
提取时间为 )%138 时盐地碱篷总黄酮含量最大!
而后逐渐趋于平衡略有下降!说明一定时间后!超声提
取不会提高盐地碱篷总黄酮的含量!可能会造成黄酮
的分解% 故选择 ,#))%)#138 的提取时间进行响应面
分析%
, $$! 期 响应面法优化盐地碱蓬草总黄酮提取工艺研究 "G"G,!料液比!在乙醇体积分数为 #Q)提取时间 为 #138)提取温度为 #O的条件下!考察不同料液比 对盐地碱蓬总黄酮含量的影响"图 )#% 图 <"料液比对总黄酮含量的影响 /*01<";;4I.-;A6.45*6,,*RG*856.*- -9 .-.6,;,63-9-*8:I-9.49. 随着料液比上升总黄酮含量逐渐升高% 当料液比 为 $l"#"\Ha#时达到最高!随后逐渐缓慢下降!故选择 料液比为 $l$%)$l"#)$l"% 做响应面分析% "G"G)!提取温度!在料液比为 $l"#"\Ha#)乙醇体积 分数为 #Q)提取时间为 #138 的条件下!不同提取 温度对盐地碱篷总黄酮提取率的影响!如图 % 所示% 图 ="提取温度对总黄酮含量的影响 /*01=";;4I.-;4W.56I.*-9.4A+456.G54-9 .-.6,;,63-9-*8:I-9.49. 提取温度为 %#O时所得盐地碱篷总黄酮含量最 高!当温度高于 %#O时总黄酮含量基本保持持平或有 所下降!可能超声条件下高温使黄酮分解!故选择 )#) %#)#O的提取温度进行响应面分析% $#%"响应面设计试验结果及分析 "G,G$!-7^*-X68NX8 设计实验方案及试验结果!采用 /X@398*0^SX?TAG#G+G$ 软件设计试验条件!选用 -7^* -X68NX8 模型!对表 $ 的结果进行多元线性回归拟合! 得到总黄酮的提取量对提取时间".#)提取温度"-#) 乙醇浓度"K#)料液比"/#的二次多项回归方程模型$ bkG), h#G##%%A,.h#G#&)-h#G$$ Kh#G#+&/h
#G#,).- B #G##+%.K h #G#)./ B #G#)"-K B
#G#A-/B#G# $$K/B#G$"." B#G$&-" B#G$,K" B #G$+/"% "G,G"!响应面回归模型的方差分析!为了检验回归 方程的有效性!进一步确定各因素对总黄酮提取率的 影响程度!对回归模型进行了方差分析!结果见表 "% !!模型的 Ek$&GA"!:p#G###$!差异极显著!即对 黄酮提取率的影响显著% 失拟项 >值为 #G,$A!失拟 项不显著!通过对试验模型可信度进行分析!得到决定 系数 ?" k#G&A%"!响应值的变化有 &AG%"Q来源于所 选因素!表明方程拟合度较好% 说明该回归方程很好 的描述各试验因素与响应值之间关系!试验方法可靠% 对模型进行回归方程系数显著性检验可知$-)K)/) -K)-/).")-")K")/" 的 :值小于 #G#$!说明提取温 度)乙醇浓度)料液比)提取温度和乙醇浓度)料液比的 交互项及 , 个因素的二项式都具有显著性影响!而其 他交互项)提取时间显著项较差!表明试验因素对响应 值是一种非线性关系% 响应曲面坡度越陡峭!表明响应值对于因素的改 变越敏感&反之曲面越平缓!表明响应值对于因素的改 变越迟钝!图 (图 A 直观的反映了各显著性影响因 素交互作用对响应值的影响!提取温度)乙醇浓度交互 作用曲面陡峭!表明对黄酮提取率交互作用明显% 各 试验因子对响应值的影响的关系为!Kx-x/x.% "G,G,!优化与验证!根据所得的模型!进一步确定各 因素最佳条件!得优化的提取条件$ .k)138!-k "O!Kk)Q!/k$l"$!总黄酮得率达到最大值为 G%+19*9B$% 为检验试验结果与真实情况的一致性 和可靠性!进行验证试验!总黄酮得率达到最大值为 G%$19*9B$!相对偏差小于 $Q% 因此!响应面法优化 所得的最佳工艺条件可靠!具有实用价值% %"讨论 本研究以秦皇岛滩涂湿地盐地碱蓬为原料!经过 烘干杀青!剪碎!超声波提取% 由提取总黄酮优化的结 果可知!采用乙醇溶剂提取!符合黄酮化合物易溶于醇 溶剂的特性&对提取温度而言!温度的提高在一定程度 上能提高黄酮提取速率!但温度过高会造成苷键水解 和色素的溶出&提取时间方面!时间的延长!可以提高 黄酮的提取效率!但另一方面!随着超声提取进行!盐 +,$$
核!农!学!报 "& 卷
!!!! 表 !"响应面分析方案及试验结果
L6),4!"/6I.-5:69854:G,.:-;54:+-9:4:G5;6I4696,7:*:
编号
M=1]X?
.时间
U31XH138
-温度
UX1SX?2T=?XHO
K浓度
K78:X8T?2T378HQ
/料液比
I743P*43g=3P ?2T37"\Ha#
总黄酮含量
K78TX8T7[T7T24[42a7873P@H"19*1` B$#$ #")%# #"%## $"+## B$"$l$%# G")
" B$",## # #"##$"$l"%# G$&,
, $"## # B$"%## #"$l"## G$"+
) # # G,$& % B$ # $# G",$ # # $G"%A +$ $"## # # G")" A # # # # G%$)
& # # # # G $$$# # $ # B$ G$,)$$ $#$ # G,")
$" # # B$ B$%G&"+$, B$# # B$ G$#"$) # # # # G%A
$%$ B$")## # # %G&+$ $# # B$ %G&A)
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"A # $#$ G$" "& #$ B$# G$+A
图 >"提取温度与乙醇浓度对盐地碱篷总黄酮含量的影响
/*01>"T4:+-9:4:G5;6I4+,-.698*.:I-9.-G5+,-.-;I5-::(*9.456I.*-9)4.C4494W.56I.*-9.4A+456.G54
6984.M69-,I-9I49.56.*-9-9.-.6,;,63-9-*8:I-9.49.
A, $$! 期 响应面法优化盐地碱蓬草总黄酮提取工艺研究 表 $"响应面回归模型方差分析 L6),4$"E65*69I4696,7:*:;-5.M4)G*,.54054::*-9A-84, 方差来源 I7=?:X 平方和 I=17[@g=2?X@ II 自由度 3[ 均方 L*@g=2?X E值 EQB&#+ :值 :QB&#+ 显著性 I3983[3:28:X Z7PX4 #G+& $) #G#%+ $&GA" p#G###$ !!! . #G###,+)$ $ #G#),$ ), #G+"," - #G$$ $#G$$,G&+ p#G###$ !!!
K #G$%$ #G$% %#G&) p#G###$ !!!
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.- #G##)&" $#G##)&"$G) #G""$, .K #G###$A"" $#G###$A"" #G#) #GA#)%
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/" #G$&$ #G$& G$ p#G###$!!! 剩余 LX@3P=24 #G#)#$) #G###"A,
失拟
2`:N 7[[3T
#G#," $# #G###,$+& $G%, #G,$A
误差
J=?XX??7?
#G##A"& ) #G##"#+)
总和
K=?T7T24
#GA, "A
!!注$!!!!表示差异极显著!:p#G###$& !表示差异显著!#G#$pJp#G###$%
M7TX$!!!38P3:2TX@63964<@3983[3:28TP3[X?X8:X! :p#G###$>! 38P3:2TX@@3983[3:28 P3[X?X8:X! #G#$p:p#G###$>
图 ?"提取温度与料液比对盐地碱篷总黄酮含量的影响
/*01?"T4:+-9:4:G5;6I4+,-.698*.:I-9.-G5+,-.-;I5-::(*9.456I.*-9)4.C4494W.56I.*-9.4A+456.G54
698A6.45*6,,*RG*856.*- -9.-.6,;,63-9-*8:I-9.49.
地碱蓬中其他多糖类物质也相应的溶出!黄酮的纯度 会有所下降&适合的物料比可以有效地溶解总黄酮!而
&, $$核!农!学!报 "& 卷 图 ["乙醇浓度与料液比对盐地碱篷总黄酮含量的影响 /*01["T4:+-9:4:G5;6I4+,-.698*.:I-9.-G5+,-.-;I5-::(*9.456I.*-9)4.C4494.M69-,I-9I49.56.*-9 698A6.45*6,,*RG*856.*- -9.-.6,;,63-9-*8:I-9.49. 且不会造成溶剂的浪费% 吴晓莉等 "+(优化了木槿花 总黄酮超声提取工艺!结果是乙醇浓度为 #Q)提取 时间 "#138)料液比 "#l$% 吴现芳等 "A(研究了响应面 优化八宝景天叶总黄酮的超声提取工艺!结果是乙醇 浓度 +"Q!料液比 "$l$!超声温度为 )O!超声时间 )A138% 这 " 位学者的研究均采用超声波乙醇溶剂提 取!以黄酮含量为优化指标!优化结果与本试验较接 近!说明响应面优化超声波辅助提取黄酮的方法可靠% <"结论 通过响应面法分析!得到乙醇提取盐地碱蓬总黄 酮的最佳工艺条件为提取时间 )138)提取温度 "O) 乙醇浓度 )Q)料液比 $l"$!在此条件下总黄酮提取 量为 G%+ 19*9B$% 较单因素提取有相应的提高!证 明采用响应面法优化提取工艺方法可靠!为盐地碱蓬 提取提供理论基础!对盐地碱篷的研究开发具有重要 意义% 参考文献! $ (!中国科学院中国植物志编辑委员会>中国植物志"第 "% 卷*第" 分册# Z(>北京$科学出版社!$&&#$$ $% B$,%
" (!张学杰!樊守金!李法曾>中国碱蓬资源的开发利用研究状况
V(>中国野生植物资源!"##,!""""# $$B, , (!I=8 bZ!e627V!e67= _!_= .J>K=??X8T@3T=2T378 28P S?7@SX:T7[ I=2XP2PXaX47S1X8T38 K6382V(>V7=?8247[-X35389UX:687479<28P -=@38X@@f83aX?@3T"##%!,,"$# $$ B)<br ) (!张泽生!王丽!杨建波!马洁!苏亚伦>盐地碱蓬的化学成分研究 V(>天然产物研究与开发! "#$"!$""")# $++% B++!A$, % (!丁海荣!洪立洲!杨智青!王茂文!王凯!朱小梅>盐生植物碱蓬及 其研究进展V(>江西农业学报!"##A!"#"A# $ ,% B,+ (!崔洋洋!周凤琴!郭庆梅!赵金凤!陈萌>中药碱蓬的文献考证与 研究进展V(>时珍国医国药!"#$#!"$"$## $")% B") + (!高健>盐地碱蓬中黄酮类物质的提取及抗氧化性研究V(>盐城 工学院学报$自然科学版!"##%!$A""# $ %% A (!张跃林!张滨>碱蓬中黄酮的提取工艺与鉴别V(>中国食物与营 养!"##A!"A# $) & (!闫留华!彭建云>潮间带生境下两种表型盐地碱蓬的抗氧化系统 比较V(>植物生理学通讯!"##A!))"$#$$ #& B $$$ $#(!段迪!杨青>紫红色表型盐地碱蓬叶片营养成分分析V(>山东师 范大学学报$自然科学版!"##A!",",#$$ $A B$"#
$$(!林学政!陈靠山!何培青>种植盐地碱蓬改良滨海盐渍土对土壤 微生物区系的影响V(>生态学报!"##!"",# $A#$ BA#+ $"(!周东生!王奇志!王鸣!董云发!冯煦!梁敬钰>盐地碱蓬化学成分 及其开发利用的研究进展 V(>中国野生植物资源!"#$$ !,#
"$#$ B&
$,(!张爱琴!庞秋颖!阎秀峰>碱蓬属植物耐盐机理研究进展V(>生 态学报!"#$,!,,"$"#$,%+% B,%A,
$)(!王耀平!白军红!肖蓉!高海峰!黄来斌!黄辰>黄河口盐地碱蓬湿 地土壤 B植物系统重金属污染评价 V(>生态学报!"#$,!,,
"$##$,#A, B,#&%(!-XdX??2Z.! I28TX43L0! E43aX3?20J! m342?` I! 0@:24X3?2`
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2824U2428T2!"##A!+"%# $&% B++$(!蒲彪!岳金玫!陈安均!刘兴艳>响应面法优化块菌多糖的超声波
辅助提取工艺V(>核农学报!"#$,!"+"+#$&& B$##"$+(!黄晓昆!朱加元!黄晓冬>南方碱蓬根茎叶总黄酮提取与含量测
定V(>亚热带植物科学!"##!,%")# $,% B,A$A(! X`XV! 3`8 b! 2`8PX8 _ E! 03TX8134X?LL>EST313d2T378 7[28
X^T?2:T378 S?7:XP=?X[7?T6Xg=28T3[3:2T378 7[m0 38 T712T728P
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28P .824<@3@!"###!$,"$# $)% B%+$&(!王宗成!王多!王凯!王宁!张敏>响应面法优化喜树叶总黄酮提
取工艺的研究V(>食品工业>"#$)!,#""#$+& BA"
"#(!张金凤!袁会领!刘希斌!栾兴社!李丛丛>响应面法优化茼蒿中
黄酮类物质的提取工艺V(>食品工程!"#$"!",#$$"A B$,$"$(!韩帅!李淑燕!陈芹芹!李珊!倪元颖>响应面分析法优化闪式提
取胡柚皮中黄酮类化合物工艺V(>食品科学! "# $$!,""$## $%" #)$$
!"#$%&"()#*+&$,-$.*#/#$&0*.+%*+1
"#$%!"&"#$ $$,% ($$ )$B% ""(!裴轶琨>响应面法优化高压脉冲电场提取沙棘果皮渣黄酮V(> 中国酿造!"#$"!,$"$,# $%+ B$
",(!王岩>响应面优化花生壳黄酮提取工艺研究V(>农业科技与装
备!"#$#!"&#$"% B"A
")(!刘丽媛!钟尉方!陈福杰>响应面法优化搅拌型板栗酸奶的加工
工艺V(>中国酿造!"#$"!,$"%# && B"#"
"%(!张志清!宋燕!刘翔>响应面法优化提取花椒籽蛋白质工艺研究
V(>核农学报!"#$,!"+"+#$&AA B&&%
"(!孙海涛!邵信儒>响应面法优化超声波提取山核桃壳色素工艺
V(>东北林业大学学报!"#$"!)#""#$+) B++
"+(!吕惠卿!吴晓莉>木槿花总黄酮超声提取工艺的优化V(>中国中
医药科技!"##&!$"#$)$B), "A(!吴现芳!赵成爱!余梅燕>响应面法优化八宝景天叶总黄酮的超 声提取工艺V(>食品工业科技!"#$,!"+"+# $&& B$##"
U+.*A*Z6.*-9-;W.56I.*-9S5-I4::-;L-.6,/,63-9-*8:/5-A
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19*9B$>U6X?X[7?X! =@389?X@S78@X@=?[2:X2824<@3@T77ST312d2T378 7[X^T?2:T378 S?7:X@@7[T7T24[42aX873P@[?711#&+3& 1&1& 3@[X2@3]4X> K47C-58:$0#&+3& 1&1&!?X@S78@X@=?[2:X1XT67P7479$)$$