全 文 ：核 农 学 报
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双肌辛胺一安息香 柱前
反应检测新方法研究
贾明宏 温贤芳
中国农业科学院原子能利用研究所 北京
梁渡湘
北京农业大学农业应用化学系 北京
本文研 究 双孤辛胺一安 息香柱前反应检测分析方法 。 首次发现双脉 辛胺
与安息香可发生反应 , 产物具机强的劳光活性 。 对该反应条件进行 了优化选择实验 。
结果表 明 以 各 , 为防氧化 剂 , 在碱性 条件下 , ℃水浴 中 , 双孤辛胺
与过量安 息香 一 即可 完成反应 , 衍生 产物在 礼二 二 , 凡 时具有
最大的 劳光强度 , 经冰浴冷却后 , 加 , 一 溶 液调 节 值 , 即可 直
接进行 浏定 。 最小检 出量 , 在 一 范围对峰 高呈线 性响应 , 结
果重现性 良好 , 个浓度 、 次重 复的变异 系数小 于 。 该方法各 项指标均能满
足该农药残留童分析对检测水平的要求 , 灵敏度有较大提 高 。 此外 , 该方法对
反应检浏徽童 凡 、孤和单取代脉基化合物也具有重要的参考价值 。
美挂词 反应检浏 双脉辛胺 安 色香
前 言
双肌辛胺农药是 日本大墨水化学工业株式会社开发的杀菌剂 , 英文通用名 一
,
其它名称有派克定 、培福朗 等 。 化学名称为双 一肛基辛基 一胺一 三 乙酸
盐 。 该药属中毒 、 非内吸 、 广谱性杀菌剂 , 局部渗透性强 , 主要作用机制为抑制类脂的生物合
成 , 对某些病原真菌有很强的生长抑制活性 , 可防治果树和小麦的病害 。 从分子结构来看 , 无
紫外和荧光活性基团 , 必须通过衍生转化才能分析检测 。 据报道 , 其检测方法主要有气相色谱
法 和液相色谱法 。 法需在 ℃下反应 , 操作繁琐费时 一 〕 法虽采用柱
后反应检测 , 简化了操作步骤 , 但灵敏度不理想 。 为此 , 研究灵敏 、 简单 、快速的检测方法具有
重要意义 。
材 料 与 方 法
实验材料及仪器 仪器 北分 一 高效液相色谱仪 、 荧光检测器 、 日立 宽
幅记录仪 、 岛津 荧光分光光度计 、恒温水浴 。 试剂 乙二醇甲醚 , 任琉基乙醇 一 , 安
息香 , 三轻 甲基氨基甲烷 , 苟三酮 , 邻苯二 甲醛 。 双肌辛胺标准品 纯度
此文于 年 月 日收到 。
核 农 学 报 卷
, 由 日本大墨水化学工业株式会社提供 。 试剂溶液和标准溶液 的配制 安息香溶液
按需要浓度 , 称取安息香 , 溶于 乙二醇 甲醚 中 、各 一 溶液 按需要浓度 , 称取 日
和 溶于水中 一 缓冲溶液 按需要浓度 , 称取 溶于水中 , 用浓
调节 一 五 一 混合溶液 按需要浓度 , 取 和 一 缓冲溶液
混合 标准溶液 按需要浓度 , 精称双肛辛胺标准品 , 溶于水中 。
试验方法 衍生反应步骤 按要求配制一定浓度的双肌辛胺标准溶液 , 取 川, 依次
用微量注射器加入冰浴冷却的 安息香 一 乙二醇 甲醚溶液 川、 母一
一 处以儿 拜 和 拌 , ℃下水浴反应 一 , 冰浴冷却后 ,
加 卜 一 , 拼 , 最后 定容 , 供 测 定 。 测定条
件 色谱柱 。 径 向加压柱 一 拌 , 径 向压 。 保护 柱 。
一 拌 , 柱温 。 ℃ 流动相 。 甲醇
’ 一 缓冲
溶液 , 流速 。 定量环 。 拜 检测器 。 荧光检测器 久 、 , 入
记录仪 。 纸速 , 反 压 。 。 在 上述条件下 , 双肌 辛胺保 留时间 为
方法的线性响应 取双肛辛胺标准品 , 配制成 、
、 、 、 、 即 标准
溶液 , 各取 川 , 按衍生反应步骤加入各试剂 , 在相 同条件下反应 , 最终定容 , 测
定 。 在 一 范围呈线性响应 , 最小检出量为 , 以绝对量对峰高统计计算 , 线性回
归方程为 , 相关系数 , 表明分析方法和仪器条件合理可行 。
方法精密度 按要求浓度配制双 呱辛胺标准溶 液 , 按上述 方法重复进行衍 生反应 和
测定 , 设置 个浓度的平均重复次数大于 , 计算每次重复进样平均峰高 , 求出标准偏
差 , 变异系数小于 , 符合残留分析方法对检测重复性的要求 。
表 方法的精密度
浓度 多次进样平均峰高
详
平均值 标准偏差 变异系数
,
一
结 果 与 讨 论
一 双服辛胺衍生反应
从现有的文献来看 , 肌基化合物 , 特别在微量到痕量级范围内 , 分析检测 比较困难 , 一般均
需衍生转化〔 一 “〕。 方法繁琐费时 , 方法常使用柱后反应检测 一 “〕, 但灵敏度不高 。
本研究曾试用某些简单肌基化合物的多种柱后反应检测法进行双肌辛胺的分析 , 并为适应这
些方法的柱后反应进行了多种色谱分离方式 的选择 , 如
一柱 、 一柱 、 一柱和离子对色谱
法等 , 但结果均不理想 。 后改用安息香为衍生试剂 , 碱性条件下柱前衍生反应后 , 经 分
离 , 荧光分光光度计测定表明 与 、苟三酮反应相 比 , 双肌辛胺与安息香反应产物的荧光
强度显著地高于与其它试剂反应产物的荧光强度 , 即安息香方法灵敏度更高 。 图 是双呱辛
期 双肌辛胺一安息香 柱前反应检测新方法研究
胺与不同衍生试剂反应产物的荧光图谱及空白对照图谱 。
具体测定方法如下 取等浓度 、 等体积的双肌辛胺标准溶液 份 , 按下述流程进行衍生反
应 紫外光照后与 反应 碱性条件下与 反应 碱性条件下与苟三酮反应
碱性条件下 与安息香反应 。 用荧光分光光度计测定产物的 蝙和 , 比较其荧光强度 。
份 双弧辛胺各 司
照射 加 叮
℃下
备
反应
去
加 以 司
℃下反应
备
一
, ℃下
反应 加
〔洲
司
反应 而
备
苟三酮
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反应
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安息香溶液 浏
去
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下反应
奋
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《〕 混合液 司
去
水
定溶 司 荧光测定
荧光分光光度计条件 狭缝 。 凡二 , 凡 二 扫描速度 。 标尺 自动调节 。
由图 可见 , 双肛辛胺经 照射和碱性条件均与
一 不反应 或反应
产物无荧光活性 , 在碱性条件下与苟三酮反应 , 不如与安息香反应产物荧光 活性高 。 这一结
果对提高双孤辛胺检测灵敏度具有重要意义 , 也是本方法最终确定的实验依据所在 。
双弧辛胺与安息香的反应 , 国内外尚未见报道 , 但根据一些简单肌基化合物类似反应的研
究报道 , ’侧 , 推测其可能的反应式如下
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双肌辛胺乙酸盐 安息香 双
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当然 , 确证上述反应过程还需进一步的结构鉴定 。 该反应速度很快 , 可进行柱后反应检
测 , 但反应过程中需适 时加入 防氧化剂 日一 一 以巧 和调节 值 , 柱后反应因在线进
行 , 很难控制 。 另外 , 要寻找既有利用于柱后反应 , 又有利于样品分离的流动相非常困难 。 因
此 , 选择柱前进行衍生反应 , 经反相柱分离后荧光测定 。
《二 反应优化选择
安息香的浓度 取 份 双孤辛胺标准溶液 沁 , 分别加入浓度为 、 、 、 、
、 的安息香的乙二醇 甲醚溶液 拼 , 日一 卜 和
溶液各 拜 , ℃水浴反应 , 冰浴冷却后 , 加 工 ,
核 农 学 报 卷
混合液 川在上述 条件下测 定 , 以安息香浓度对色谱峰高作图 , 结果见 图
。 由图 可见 , 安息香过量对反应有利 。
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碱性条件下与苟三酮反应 碱性条件下与安息香反应
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图 双呱辛胺与各衍生试剂 反应产物的荧光强度
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安息香 浓度
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浓度
口。
图 安息香浓度对反应的影响 图 浓度对反应的影响
的浓度 选定安息香浓度为 , 变化 浓度为 、 、 、 、 、 ,
其它试剂及反应测 定条件同 。 结果见图 。 由图 可见 , 碱性较弱影 响反应速度 , 碱性太
强可能使产物分解 。 因此 , 浓度选择 为宜 。
日一 一 以兀的作用 选定安息香和 浓度分别为 和 , 其它条
件同上述 , 加入和不加 一 一 剐飞 分别进行反应 , 产物放置一定的时间后测定 , 比较
产物峰高变 化 。 加入 尽 一 以 反 应后 , 产 物 内几 乎 不分解 , 若不 加 一
处以见 反应 , 产物 内分解了约 一 。 可见 ,
一 一 以毛能有效地防止产物氧
期 双肛辛胺 安息香 柱前反应检测新方法研究
化分解 。 此外 , 试验中还发现 件 一 能有效地抑制本底荧光 。
反应温度 反应条件同上述 , 在加 一 的情况下 , 温度在 、 、 、 、
℃分别进行反应测定 。 以反应温度对色谱峰高作图 , 结果如图 。 反应温度大于 ℃时比
较有利 , 可使反应在较短时间内迅速完成 。
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图 温度对反应的影响
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图 双肛辛胺 、盐酸肌和
与安息香反应产物色谱图
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四 ,
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反应时间 反应条件同上述 , 选择反应温度为 ℃ , 反应时间分别为 、 、 、 、
、 进行测定 。 比较不同反应时间下的色谱峰高发现 , 加热反应时间为 一 即可使
反应完全 , 加热反应时间过长可能导致产物分解 。
三 方法的适用范围
取含有一定量的双肌辛胺 、 玩 和盐酸弧水溶液 , 在上述反应条件下 , 和盐酸肌均能
与安息香反应生成荧光物质 , 在本方法选定的 凡二 、 条件下均有响应 , 并能线性重复 。
由图 可见 , 在反应过程中 , 无论 和盐酸肌是否存在 , 等量的双肌辛胺反应产物的响
应峰高不变 , 且在选定色谱条件下能与 和盐酸肌反应产物峰完全分离 。 实验结果表明
本方法不仅可以灵敏地检测双肌辛胺 , 而且可同时检出微量的 和某些肌基化合物等 。
结 论
双肌辛胺在碱性条件下 , 以 件 一 处 为防氧化剂 , 与安息香可发生衍生反应 。
该反应速度较快 , 在 ℃水浴中 , 一 即可完成 , 其衍生产物在 凡、 , 礼 二
时 , 具有最大的荧光强度 。
利用该反应即可直接进行 柱前反应测定微量双肌辛胺 。 最小检出量 , 在
一 范围对峰高呈线性响应 , 结果重现 良好 , 变异系数小于 。 该方法各项指标均
符合农药残留量分析对检测水平的要求 , 灵敏度有较大提高 , 提供了一个新的分析途径 。
该反应对 反应检测微量 、 弧和单取代肌基化合物也具有重要的参考价值 。
参 考 文 献
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