全 文 ：基于 ＥＳＴ￣ＳＳＲ标记的莲属种质资源遗传多样性分析∗
徐玉仙１ꎬ２ꎬ３ꎬ 张微微２ꎬ４ꎬ 莫海波２ꎬ 李 春２ꎬ３ꎬ 曹建国１ꎬ 田代科２ꎬ３∗∗
(１ 上海师范大学生命与环境科学学院ꎬ 上海 ２００２３４ꎻ ２ 上海辰山植物园、 中国科学院上海辰山植物
科学研究中心ꎬ 上海 ２０１６０２ꎻ ３ 上海市资源植物功能基因组学重点实验室ꎬ 上海 ２０１６０２ꎻ
４ 上海农林职业技术学院ꎬ 上海 ２０１６００)
摘要: 利用 ＥＳＴ￣ＳＳＲ分子标记对 ３０个亚洲莲、 ６个美洲莲及 １４个亚美杂交莲品种 (野生居群) 进行遗传
多样性分析ꎬ 结果表明: 从 １２３对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物中筛选出 ５２对 (４２ ３％) 扩增稳定、 具有多态性的引物ꎻ
利用这 ５２对引物对 ５０个不同类型代表的莲属品种进行扩增ꎬ 共获得 １７７条多态性条带ꎬ 引物的等位基因
数和多态性信息量 (ＰＩＣ) 的范围分别为 ２~８个和 ０ ６３ (ＮＮＦＢ￣１０５９)￣ ０ ９１ (ＮＮＦＢ￣７５０)ꎬ 平均为 ３ ４个和
０ ７９ꎮ 利用 ＮＴＳＹＳ￣ｐｃ２.１１软件对扩增结果进行 Ｊａｃｃａｒｄ相似性系数分析ꎬ ５０个荷花品种材料遗传相似系数
为 ０ ２４~０ ８６ꎻ 通过 ＵＰＧＭＡ法进行聚类分析ꎬ 在遗传相似系数 ０ ３７处供试荷花材料可分为 ４大类群: 亚
洲莲品种均聚类在 Ｉ、 ＩＩ类群中ꎬ ＩＩＩ类群绝大部分为亚美杂交莲品种ꎬ ＩＶ类群为美洲莲ꎬ 亚美杂交莲品种
与亚洲莲品种的亲缘关系相对较近ꎬ 与传统分类及前人研究结果相一致ꎮ
关键词: 莲ꎻ ＥＳＴ￣ＳＳＲꎻ 遗传多样性ꎻ 亲缘关系
中图分类号: Ｑ １６ 文献标志码: Ａ 文章编号: ２０９５－０８４５(２０１５)０５－５９５－１０
Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ
Ｂａｓｅｄ ｏｎ ＥＳＴ￣ＳＳＲ Ｍａｒｋｅｒｓ
Ｘｕ Ｙｕ￣ｘｉａｎ１ꎬ２ꎬ３ꎬ Ｚｈａｎｇ Ｗｅｉ￣ｗｅｉ２ꎬ４ꎬ Ｍｏ Ｈａｉ￣ｂｏ２ꎬ Ｌｉ Ｃｈｕｎ２ꎬ３ꎬ Ｃａｏ Ｊｉａｎ￣ｇｕｏ１ꎬ Ｔｉａｎ Ｄａｉ￣ｋｅ２ꎬ３∗∗
(１ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００２３４ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｃｈｅｎｓｈａｎ
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｃｈｅｎｓｈａｎ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｇａｒｄｅｎꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１６０２ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ
３ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１６０２ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ
４ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１６００ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｅｓｔｉｍａｔｅ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆｏｒ ３０ ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａꎬ ６
ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｌｕｔｅａ ａｎｄ １４ ｈｙｂｒｉｄｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｓｐｅｃｉｅｓ. Ｔｈｅ ５２ ｏｆ １２３ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ (４２ ３％)
ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ａｎｄ ｔｈｅｎ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ ｔｈｅ ５０ Ｎｅｌｕｍｂｏ ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ. Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １７７ ａｌｌｅｌｅｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄꎬ ａｎｄ ｔｈｅ
ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ｐｅｒ ｌｏｃｕｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ (ＰＩＣ) ｖａｌｕｅ ｖａｒｉｅｄ ｆｒｏｍ ２ ｔｏ ８ ｗｉｔｈ ａｎ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ
３ ４ ａｌｌｅｌｅｓ ａｎｄ ｆｒｏｍ ０ ６３ (ＮＮＦＢ￣１０５９) ｔｏ ０ ９１ (ＮＮＦＢ￣７５０) ｗｉｔｈ ａｎ ａｖｅｒａｇｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ０ ７９ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｊａｃｃａｒｄ
ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＮＴＳＹＳ￣ｐｃ２.１１ ｓｏｆｔｗａｒｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｗａｓ ｆｒｏｍ ０ ２４ ｔｏ ０ ８６. Ｔｈｅ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂｙ ＵＰＧＭＡ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ５０ ａｃ￣
ｃｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｆｏｕｒ ｍａｊｏｒ ｇｒｏｕｐｓ ａｔ ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ０ ３７. Ｇｒｏｕｐ Ｉ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ
ＩＩ ｉｎｃｌｕｄｅｄ Ｎ ｎｕｃｉｆｅｒａꎻ ｇｒｏｕｐ ＩＩＩ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｔｈｅ ｍａｊｏｒｉｔｙ ｏｆ Ａｓｉａｎ￣Ａｍｅｒｉｃａｎ ｌｏｔｕｓ ｈｙｂｒｉｄｓꎻ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ ＩＶ ｉｎｃｌｕｄｅｄ
Ｎ ｌｕｔｅａ. Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎꎬ ｔｈｅ Ａｓｉａｎ￣Ａｍｅｒｉｃａｎ ｈｙｂｒｉｄｓ ｗｅｒｅ ｃｌｏｓｅｒ ｔｏ Ｎ ｎｕｃｉｆｅｒａ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐꎬ ｗｈｉｃｈ ｉｓ
ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｅｖｉｏｕｓ ｒｅｐｏｒｔｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｎｅｌｕｍｂｏꎻ ＥＳＴ￣ＳＳＲꎻ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎻ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ
植 物 分 类 与 资 源 学 报 ２０１５ꎬ ３７ (５): ５９５~６０４
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＤＯＩ: １０.７６７７ / ｙｎｚｗｙｊ２０１５１５００４
∗
∗∗
基金项目: 上海市绿化和市容管理局攻关项目 (Ｆ１１２４２１)、 上海市绿化和市容管理局科学技术项目 (Ｇ１４２４２７)
通讯作者: Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｄｋｔｉａｎ＠ｓｉｂｓ ａｃ ｃｎ
收稿日期: ２０１５－０１－０６ꎬ ２０１５－０３－１６接受发表
作者简介: 徐玉仙 (１９８７－) 女ꎬ 硕士ꎬ 主要从事园艺植物分子生物学方面的研究ꎮ
莲ꎬ 又名荷花ꎬ 莲科 (Ｎｅｌｕｍｂｏｎａｃｅａｅ) 莲属
(Ｎｅｌｕｍｂｏ) 多年生水生草本植物ꎬ 不仅是中国的
传统名花ꎬ 印度和越南的国花ꎬ 也是世界著名的
观赏、 食用和药用植物ꎬ 因此具有十分重要的经
济和文化价值 (王其超和张行言ꎬ ２００５)ꎮ 莲属
植物仅两种: 分布于亚洲、 澳洲北部的亚洲莲
(Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ Ｇａｅｒｔｎ.) 和分布于北美、 中美洲、
南美的美洲莲 (Ｎｅｌｕｍｂｏ ｌｕｔｅａ Ｗｉｌｌｄ.) ( Ｊｏｈｎ 等ꎬ
２０１４)ꎬ 两者虽然在地理上存在隔离ꎬ 但相互杂交
可孕ꎬ 不存在生殖隔离现象 (黄秀强等ꎬ １９９２)ꎮ
荷花在中国栽培历史悠久ꎬ 产生了极其丰富
的品种ꎬ 目前全世界通过自然变异直接筛选、 人
工杂交、 离子注入和太空辐射等手段培育出的品
种接近 ２ ０００个ꎮ 莲属ꎬ 特别是亚洲莲的遗传多
样性极为丰富ꎬ 但其种下分类及亲缘关系还不十
分明确ꎬ 甚至还存在一些混淆ꎻ 一些野生资源已
处于濒危处境ꎬ 亟待加强保护 (董玉琛和郑殿
升ꎬ ２００５ꎻ Ｔｉａｎ 等ꎬ ２００８)ꎮ 此外ꎬ 传统的以花
色、 花型、 株型等形态学特征为标准的分类法很
难将所有资源准确分类和鉴定ꎮ 因此ꎬ 在形态学
特征观察的基础上以分子标记技术为补充可更好
地研究荷花种质资源的遗传多样性和亲缘关系ꎬ
这将对莲属资源的分类、 鉴定、 育种和保护具有
重要意义ꎮ
近年来ꎬ 随着分子生物技术的迅速发展ꎬ 利
用 ＲＡＰＤ、 ＳＲＡＰ、 ＡＦＬＰ、 ＩＳＳＲꎬ 基因组 ＳＳＲ 等
分子标记进行荷花种质资源遗传多样性及亲缘关
系的研究报道较多 (彭欲率等ꎬ ２００４ꎻ 汪岚等ꎬ
２００４ꎻ 刘月光等ꎬ ２００６ꎻ Ｘｕｅ 等ꎬ ２００６ꎻ Ｇｕｏ 等ꎬ
２００７ꎻ Ｈａｎ等ꎬ ２００７ꎻ Ｃｈｅｎ等ꎬ ２００８ꎻ Ｈａｎ等ꎬ ２００９ꎻ
Ｋｕｂｏ等ꎬ ２００９ａꎻ Ｎａ 等ꎬ ２００９ꎻ Ｌｉ 等ꎬ ２０１０ꎻ Ｆｕ
等ꎬ ２０１１ꎻ Ｐａｎ等ꎬ ２０１１ꎻ 吴景栋等ꎬ ２０１１ꎻ Ｈｕ 等ꎬ
２０１２ꎻ Ｌｉｕ 等ꎬ ２０１２ꎻ 欧阳冬梅等ꎬ ２０１２ꎻ Ｙａｎｇ
等ꎬ ２０１２ａꎻ 刘艺平等ꎬ ２０１３ꎻ Ｙａｎｇ 等ꎬ ２０１３)ꎮ
ＳＳＲ (简单序列重复) 标记又称微卫星 ＤＮＡꎬ 是
近年来发展起来的建立在 ＰＣＲ 基础上的第二代
分子标记ꎬ 是指真核生物基因组中散在分布的由
１~６个碱基对组成的简单重复序列ꎬ 根据引物开
发序列来源不同ꎬ 可分为基因组 ＳＳＲ标记 (来源
于基因组序列ꎬ ｇＳＳＲ) 和转录组 ＳＳＲ标记 (来源
于转录组序列或 ＥＳＴ序列ꎬ ＥＳＴ￣ＳＳＲ)ꎮ ＥＳＴ￣ＳＳＲ
作为一种与基因表达相关的 ＳＳＲ 分子标记ꎬ 不
仅具备传统基因组 ＳＳＲ 标记的共显性、 多态性
高、 重复性好等特点ꎬ 而且随着高通量测序技术
的发展ꎬ 其开发经济、 通用性高及性状连锁等优
势已在很多植物研究中得到开发和应用 (姚利华
和滕元文ꎬ ２００８ꎻ 杨春和刘爱忠ꎬ ２０１１)ꎮ 但是ꎬ
至今利用 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 标记进行荷花种质资源的遗
传多样性方面的研究非常有限ꎬ 且标记数和分析
的品种数量均很少 (Ｋｕｂｏ等ꎬ ２００９ｂꎻ Ｐａｎ等ꎬ ２０１０ꎻ
Ｙａｎｇ等ꎬ ２０１３)ꎮ
本实验利用 ５２对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物对 ５０个不同
类型代表性的荷花品种进行遗传多样性分析ꎬ 旨
在了解其遗传背景及亲缘关系ꎬ 为今后荷花种质
资源分类、 保护利用、 品种鉴定及分子标记辅助
育种 (ＭＡＳ) 等奠定理论基础和提供实践参考ꎮ
１ 材料与方法
１ １ 实验材料
选取 ５０个来自不同地区、 不同类型的代表性荷花
品种为材料ꎬ 包括 ３０ 个亚洲莲、 ６ 个美洲莲及 １４ 个亚
美杂交莲 (表 １)ꎮ 所有材料均通过无性繁殖种植于上
海辰山植物园 “国际荷花资源圃”ꎬ 经作者之一田代
科博士鉴定ꎬ 所有材料均有腊叶标本或照相记录作为
凭证ꎮ
１ ２ 基因组 ＤＮＡ的提取
取鲜样 (幼嫩叶) １００ ｍｇꎬ 用液氮磨成粉状ꎬ 再用
ＤＮＡ试剂盒 ( ＤＰ３２０ꎬ 北京天根) 提取基因组 ＤＮＡꎮ
ＤＮＡ提取后于 ０ ８％琼脂糖凝胶电泳进行检测ꎬ 电泳缓
冲液为 １ × ＴＡＥꎬ 电压 １００ Ｖꎻ ＤＮＡ纯度和浓度测量利用
ＮａｎｏＤｒｏｐ ２０００紫外可见光谱仪 (Ｔｈｅｒｍｏ) 进行测定ꎬ 稀
释至 ５０ ｎｇμＬ－１的工作液ꎮ
１ ３ ＳＳＲ分析
ＰＣＲ扩增反应总体积为 １０ μＬꎬ 其中反应混合液中
包括: ５ μＬ的 ２ × ＥＳ Ｔａｑ ｍｉｘ (北京康为)ꎬ ＤＮＡ (５０ ｎｇ
μＬ－１) 模板 １ μＬꎬ 引物 ０ ５ μＬ (１０ μＭ)ꎬ ３ ５ μＬ 的
ｄｄＨ２Ｏꎮ ＰＣＲ扩增反应程序: ９４ ℃预变性 ３ ｍｉｎꎻ ９４ ℃
变性 ３０ ｓꎬ ５２ ℃退火 ３０ ｓꎬ ７２ ℃延伸 ３０ ｓꎬ 共 ３０ 个循
环ꎻ 最后 ７２ ℃延伸 ５ ｍｉｎꎮ ＰＣＲ产物中加入 ６ μＬ变性剂
９４ ℃变性 ５ ｍｉｎꎬ 迅速放于冰上冷却ꎬ ６％聚丙烯酰胺凝
胶进行检测ꎬ 银染方法显色ꎮ 白炽灯下观察电泳结果ꎬ
进行数据统计和扫描照相ꎮ 实验所有 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引物均由
上海生工生物工程股份有限公司合成ꎮ
１ ４ 数据分析
ＥＳＴ￣ＳＳＲ扩增产物以 ０、 １统计建立数据库ꎮ 在相同迁
移率位置上ꎬ 有带记为 １ꎬ 无带记为 ０ꎬ 缺失数据记为－ꎮ
６９５ 植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 ３７卷
表 １ ５０个荷花品种材料信息
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ５０ Ｎｅｌｕｍｂｏ ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ
编号
Ｎｏ.
品种名 (缩写)
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎａｍｅ (ａｂ.)
种源
Ｓｐｅｃｉｅｓ
品种类型
Ｔｙｐｅ
生态型
Ｈａｂｉｔａｔ
株型
Ｐｌａｎｔ ｓｉｚｅ
花型
Ｆｌｏｗｅｒ ｆｏｒｍ
花色
Ｆｌｏｗｅｒ ｃｏｌｏｒ
１ 黄莲￣１＃ (ＮＬ￣１＃) 美洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 黄色
２ 黄莲￣３＃ (ＮＬ￣３＃) 美洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 黄色
３ 黄莲￣４＃ (ＮＬ￣４＃) 美洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 黄色
４ 黄莲￣８＃ (ＮＬ￣８＃) 美洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 黄色
５ 黄鸟 (ＹＢ) 美洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 黄色
６ 艾江南 (ＡＪＮ) 美洲莲 栽培型 温带型 中小株 半重瓣 黄色
７ 粉团 (ＦＴ) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 重瓣 粉色
８ 粉青莲 (ＦＱＬ) 亚洲莲 栽培型 温带型 中小株 单瓣 复色
９ 湘韵 (ＸＹ) 亚洲莲 栽培型 热带型 中小株 单瓣 复色
１０ 粉凌云 (ＦＬＹ) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 重瓣 粉色
１１ 冬红花 (ＤＨＨ) 亚洲莲 栽培型 热带型 大株 单瓣 红色
１２ 傲霜 (ＡｏＳ) 亚洲莲 栽培型 热带型 大株 单瓣 白色
１３ 雪里红花 (ＸＬＨＨ) 亚洲莲 栽培型 热带型 中小株 单瓣 红色
１４ 普兰店古莲 (ＰＬＤＧＬ) 亚洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 红色
１５ 千瓣莲 (ＱＢＬ) 亚洲莲 野生型 温带型 大株 千瓣 粉色
１６ 北孙各庄古莲 (ＢＳＧＺＧＬ) 亚洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 红色
１７ 鄂莲 ３号 (ＥＬ￣３) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 单瓣 白色
１８ 玉臂藕 (ＹＢＬ) 亚洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 复色
１９ 白洋淀白莲 (ＢＹＤＢＬ) 亚洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 白色
２０ 青菱红莲 (ＱＬＨＬ) 亚洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 红色
２１ 白洋淀红莲 (ＢＹＤＨＬ) 亚洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 红色
２２ 黑龙江红莲 (ＨＬＪＨＬ) 亚洲莲 野生型 温带型 大株 单瓣 红色
２３ 八一莲 (ＢＹＬ) 亚洲莲 栽培型 温带型 中小株 单瓣 粉色
２４ 总统 (ＴＰ) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 单瓣 红色
２５ 小红十八 (ＸＨＳＢ) 亚洲莲 栽培型 热带型 中小株 单瓣 红色
２６ 粉红凌霄 (Ｔｈａｉ￣２＃) 亚洲莲 野生型 热带型 大株 重瓣 红色
２７ 泰国莲￣８＃ (Ｔｈａｉ￣８＃) 亚洲莲 野生型 热带型 大株 单瓣 白色
２８ 泰国莲￣１０＃ (Ｔｈａｉ￣１０＃) 亚洲莲 野生型 热带型 大株 单瓣 白色
２９ 易建莲 (ＹＪＬ) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 单瓣 红色
３０ 巨子 (ＪＺ) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 单瓣 红色
３１ 一丈青 (ＹＺＱ) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 单瓣 白色
３２ 单洒锦 (ＤＳＪ) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 单瓣 复色
３３ 大洒锦 (ＤａＳＪ) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 重瓣 复色
３４ 艳阳天 (ＹＹＴ) 亚洲莲 栽培型 温带型 中小株 单瓣 红色
３５ 至尊千瓣 (ＺＺＱＢ) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 千瓣 红色
３６ 中山红莲 (ＺＳＨＴ) 亚洲莲 栽培型 温带型 大株 重台 红色
３７ 杏黄 (ＸＨ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 中小株 单瓣 黄色
３８ 黄羚羊 (ＨＬＹ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 中小株 重台 黄色
３９ 卡罗琳娜皇后 (ＣＱ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 大株 单瓣 复色
４０ 伯里夫人 (ＳＬＣＭ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 大株 重瓣 复色
４１ 舞妃莲 (ＷＦＬ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 大株 单瓣 复色
４２ 友谊牡丹莲 (ＹＹＭＤＬ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 大株 重瓣 黄色
４３ 旭日耀芒 (ＧＳ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 大株 半重瓣 黄色
４４ 春晓 (ＣＸ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 中小株 半重瓣 复色
４５ 粉舞妃 (ＦＷＦ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 中小株 单瓣 复色
４６ 黄舞妃 (ＨｕＷＦ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 大株 单瓣 黄色
４７ 美三色 (ＭＳＳ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 中小株 单瓣 复色
４８ 茉莉莲 (ＭＬＬ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 中小株 单瓣 黄色
４９ 小舞妃 (ＸＷＦ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 中小株 单瓣 复色
５０ 黄牡丹 (ＨＭＤ) 亚美杂交莲 栽培型 温带型 中小株 重瓣 黄色
注: 编号为 １－４ꎬ ２６－２８七个荷花材料为野生居群
７９５５期 徐玉仙等: 基于 ＥＳＴ￣ＳＳＲ标记的莲属种质资源遗传多样性分析
数据分析采用 ＮＴＳＹＳ￣ｐｃ２.１１ 软件进行ꎬ 以 Ｊａｃｃａｒｄ 计算
遗传相似系数ꎬ 利用非加权组平均法 (ＵＰＧＭＡ) 对 ５０
个供试荷花品种进行聚类分析ꎬ 构建分子系统树ꎮ 多态
性信息 (ＰＩＣ) 值计算方法参照 Ｂｏｔｓｔｅｉｎ等 (１９８０)ꎮ
２ 结果与分析
２ １ ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物筛选
从本课题组基于荷花转录组序列信息开发并
经过有效性检测的 １２３ 对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引物中筛选
出 ５２对扩增稳定、 具有多态性的引物 (图 １)ꎬ
多态性比率为 ４２ ３％ꎮ 随后利用具多态性的 ＥＳＴ￣
ＳＳＲ引物对 ５０ 个荷花品种进行扩增ꎬ 共扩增出
１７７条多态性条带ꎬ 每对引物的等位基因数范围
从 ２到 ８个ꎬ 平均为 ３ ４个 (表 ２)ꎬ 这一结果与
Ｈｕ等 (２０１２) 研究结果相似ꎮ 多态性信息量
(ＰＩＣ) 是用来评估引物多态性信息量水平 (高:
ＰＩＣ > ０ ５ꎻ 适中: ０ ５ > ＰＩＣ > ０ ２５ꎻ 低: ＰＩＣ <
０ ２５) (Ｂｏｔｓｔｅｉｎ等ꎬ １９８０)ꎮ 在本实验所筛选的 ５２
对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物中ꎬ 所得 ＰＩＣ 值的范围从 ０ ６３
(ＮＮＦＢ￣１０５９) 到 ０ ９１ (ＮＮＦＢ￣７５０)ꎬ 平均为 ０ ７９ꎬ
这表明本实验所筛选的引物具有较高的多态性ꎬ
可以有效地用于荷花遗传多样性分析ꎮ
图 １ 引物 ＮＮＦＢ￣２７７９对部分荷花品种扩增产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳图 (编号同表 １)
Ｆｉｇ １ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒ ＮＮＦＢ￣２７７９ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｉｎ ＰＡＧＥ (Ｎｏ. ｉｓ ｓａｍｅ ａｓ Ｔａｂｌｅ １)
表 ２ ５２对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ标记引物特征
Ｔａｂｌｅ ２ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ５２ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒｓ
编号
Ｎｏ.
引物名称
Ｐｒｉｍｅｒ ｎａｍｅ
ＳＳＲ基序
ＳＳＲ ｍｏｔｉｆ
引物序列 Ｆ / Ｒ (５′－３′)
Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′－３′)
等位基因
Ａｌｌｅｌｅ
多态性信息量
ＰＩＣ
１ ＮＮＦＢ＿２８ (ＴＣ)８ Ｆ: ＧＡＡＡＣＧＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＡＡＧＣＲ: ＡＧＣＣＧＴＧＧＴＴＴＧＴＡＣＧＡＧＴＴ ３ ０ ７９
２ ＮＮＦＢ＿３４ (ＡＧ)７ Ｆ: ＣＧＧＧＣＡＡＴＡＡＡＴＣＣＡＴＣＡＣＴＲ: ＴＴＴＣＣＣＴＡＣＴＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴ ２ ０ ７４
３ ＮＮＦＢ＿７９ (ＴＣ)８ Ｆ: ＧＡＧＡＧＧＡＧＧＧＧＴＧＧＡＧＡＡＴＣＲ: ＧＧＧＡＴＧＧＧＡＧＡＡＡＴＧＧＡＧＡＴ ２ ０ ６５
４ ＮＮＦＢ＿８３ (ＴＣＴ)１０ Ｆ: ＣＡＧＣＡＣＣＡＴＴＣＴＧＴＡＡＴＣＧＣＲ: ＧＴＧＴＧＡＧＣＧＴＡＴＴＴＧＧＡＴＣＧ ６ ０ ８８
５ ＮＮＦＢ＿８６ (ＴＣ)６ Ｆ: ＴＴＧＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＡＴＧＴＡＡＧＧＲ: ＴＣＡＣＣＴＣＣＡＣＡＧＣＡＣＡＧＡＡＣ ４ ０ ８０
６ ＮＮＦＢ＿１２５ (ＴＣ)１５ Ｆ: ＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＲ: ＧＧＧＡＡＴＴＧＡＧＧＡＴＴＣＧＡＴＧＡ ３ ０ ７８
７ ＮＮＦＢ＿１８４ (ＣＴ)８ Ｆ: ＡＧＡＡＴＧＧＴＴＧＡＴＧＧＧＴＡＧＣＧＲ: ＣＣＡＴＧＡＣＡＡＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＧＡＧ ３ ０ ７９
８ ＮＮＦＢ＿１８６ (ＴＣ)１４ Ｆ: ＴＣＴＣＴＧＴＣＣＡＣＡＡＡＣＣＧＡＴＧＲ: ＣＡＧＡＴＴＣＴＧＧＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡ ３ ０ ８２
９ ＮＮＦＢ＿４０４ (ＴＣ)９ Ｆ: ＡＡＴＴＧＣＡＡＧＧＧＡＡＧＧＴＴＧＡＡＲ: ＧＣＡＧＣＴＴＴＡＡＧＧＣＣＡＡＡＣＴＧ ３ ０ ８２
８９５ 植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 ３７卷
续表 ２ Ｔａｂｌｅ ２ ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ
编号
Ｎｏ.
引物名称
Ｐｒｉｍｅｒ ｎａｍｅ
ＳＳＲ基序
ＳＳＲ ｍｏｔｉｆ
引物序列 Ｆ / Ｒ(５′－３′)
Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′－３′)
等位基因
Ａｌｌｅｌｅ
多态性信息量
ＰＩＣ
１０ ＮＮＦＢ＿４５５ (ＡＧ)１２ Ｆ: ＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＡＧＡＧＧＧＲ: ＡＴＡＡＧＧＧＴＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＧ ５ ０ ８７
１１ ＮＮＦＢ＿４５７ (ＡＧ)１３ Ｆ: ＡＣＡＡＣＣＡＡＣＣＣＴＣＴＴＧＣＡＴＣＲ: ＧＡＧＡＧＣＴＴＧＴＣＡＡＡＧＧＧＴＧＣ ３ ０ ８０
１２ ＮＮＦＢ＿５１０ (ＧＡ)８ Ｆ: ＣＣＡＧＡＧＣＣＧＴＡＡＧＣＧＴＡＧＴＣＲ: ＧＣＣＣＣＧＡＡＣＴＣＡＡＴＴＡＣＴＣＡ ２ ０ ７３
１３ ＮＮＦＢ＿５７２ (ＡＧ)１３ Ｆ: ＣＡＡＣＡＧＣＧＣＡＡＡＡＧＡＡＡＣＡＡＲ: ＴＣＧＴＣＴＴＴＧＣＡＧＡＡＣＣＡＣＴＧ ２ ０ ７４
１４ ＮＮＦＢ＿５９６ (ＣＧＣ)９ Ｆ: ＧＣＧＧＣＡＡＡＣＴＣＣＡＡＡＣＡＡＧＲ: ＴＧＧＧＡＡＣＧＡＣＡＴＧＡＧＣＡＴＴＡ ２ ０ ７３
１５ ＮＮＦＢ＿６２５ (ＴＣ)７ Ｆ: ＴＧＴＧＡＴＧＡＡＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＴＲ: ＡＧＡＡＣＧＣＣＴＴＣＡＡＴＴＧＧＡＴＴ ４ ０ ８４
１６ ＮＮＦＢ＿６５２ (ＧＡＴ)８ Ｆ: ＧＴＧＧＡＡＧＣＡＣＣＧＴＴＴＣＡＴＣＴＲ: ＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＧＡＴＧＧＡＣＡＡ ３ ０ ８２
１７ ＮＮＦＢ＿６７１ (ＴＣ)９ Ｆ: ＧＣＡＴＣＧＣＴＧＣＡＡＡＣＴＧＡＡＴＡＲ: ＧＴＧＧＡＧＣＣＴＣＣＧＡＣＴＡＴＴＴＧ ５ ０ ８７
１８ ＮＮＦＢ＿７３０ (ＴＣＴ)５ Ｆ: ＴＧＡＴＴＴＣＴＣＣＣＡＧＡＣＣＣＡＴＣＲ: ＴＧＴＣＧＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＡＴＴＧＧ ２ ０ ７４
１９ ＮＮＦＢ＿７５０ (ＣＴ)１０ Ｆ: ＡＣＴＴＴＧＡＧＣＴＴＧＡＴＣＧＧＣＡＣＲ: ＣＡＧＣＴＧＡＡＣＧＧＡＡＣＴＧＡＧＡＡ ８ ０ ９１
２０ ＮＮＦＢ＿７６４ (ＴＣＣ)７ Ｆ: ＣＡＴＴＣＣＡＴＣＴＴＡＴＧＴＡＴＣＣＡＴＴＴＣＡＲ: ＧＧＴＣＧＡＧＧＡＡＣＣＡＴＧＡＧＡＡＡ ２ ０ ６７
２１ ＮＮＦＢ＿７９７ (ＴＡ)７ Ｆ: ＣＴＴＣＣＧＴＴＴＴＣＣＴＴＴＣＣＣＴＣＲ: ＧＣＣＴＧＣＴＣＴＧＡＣＡＧＴＡＡＣＣＣ ３ ０ ８１
２２ ＮＮＦＢ＿８２９ (ＣＴＧ)６ Ｆ: ＣＣＡＴＣＣＡＡＣＣＡＡＡＡＴＴＣＡＣＣＲ: ＡＧＣＡＧＧＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＧＴＧＧ ３ ０ ８２
２３ ＮＮＦＢ＿８３７ (ＧＡＡ)５ Ｆ: ＴＧＡＣＣＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＣＣＣＡＧＲ: ＧＡＴＴＧＣＣＴＴＡＧＣＣＡＧＣＡＧＴＣ ６ ０ ８７
２４ ＮＮＦＢ＿８７１ (ＴＣ)１３ Ｆ: ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＡＧＧＣＴＧＴＴＡＧＣＲ: ＧＧＴＣＣＴＣＡＴＣＴＴＣＴＴＧＣＡＧＣ ２ ０ ７５
２５ ＮＮＦＢ＿１０５９ (ＣＴ)７ Ｆ: ＧＧＡＡＡＡＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＴＴＴＲ: ＣＴＴＣＴＴＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＴ ２ ０ ６３
２６ ＮＮＦＢ＿１１４０ (ＣＴ)７ Ｆ: ＣＣＴＧＧＧＧＴＴＴＡＡＧＴＴＧＴＧＧＡＲ: ＴＴＧＧＧＡＴＴＴＡＧＡＣＣＣＡＧＣＡＧ ５ ０ ８７
２７ ＮＮＦＢ＿１１６７ (ＡＧＡ)６ Ｆ: ＧＧＡＴＧＣＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＧＡＡＴＲ: ＡＴＡＡＡＴＴＧＡＴＣＴＧＧＣＣＧＡＣＧ ３ ０ ７８
２８ ＮＮＦＢ＿１２１１ (ＡＧ)８ Ｆ: ＴＧＧＴＣＴＣＧＡＣＡＧＣＡＴＴＧＡＡＧＲ: ＧＧＴＣＡＡＴＣＡＴＣＣＣＡＣＴＴＧＣＴ ２ ０ ７４
２９ ＮＮＦＢ＿１３７５ (ＣＴ)８ Ｆ: ＴＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＡＴＣＣＴＣＴＣＲ: ＡＴＧＡＡＧＡＧＣＣＣＴＧＴＣＡＣＣＡＧ ４ ０ ８５
３０ ＮＮＦＢ＿１３９０ (ＧＧＡ)５ Ｆ: ＡＣＡＴＧＴＴＧＣＡＡＧＴＧＡＧＣＣＴＧＲ: ＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＡＧＴＣＣＣＴＴＣ ２ ０ ６８
３１ ＮＮＦＢ＿１５０４ (ＧＡＡ)６ Ｆ: ＣＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＡＡＴＣＡＧＡＡＡＲ: ＣＴＴＴＣＴＣＴＧＣＧＴＣＴＧＧＣＴＴＣ ３ ０ ８２
３２ ＮＮＦＢ＿１５５６ (ＧＡ)６ Ｆ: ＧＴＡＧＣＡＣＧＡＴＧＡＣＣＴＧＣＴＧＡＲ: ＴＣＧＴＴＧＡＣＡＡＡＡＧＧＣＴＴＴＧＣ ２ ０ ６７
３３ ＮＮＦＢ＿１６０１ (ＧＡ)６ Ｆ: ＡＧＧＡＡＧＡＡＧＣＡＧＴＧＣＣＡＡＡＡＲ: ＴＴＧＴＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＣＴＣＧＴ ３ ０ ８２
９９５５期 徐玉仙等: 基于 ＥＳＴ￣ＳＳＲ标记的莲属种质资源遗传多样性分析
续表 ２ Ｔａｂｌｅ ２ ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ
编号
Ｎｏ.
引物名称
Ｐｒｉｍｅｒ ｎａｍｅ
ＳＳＲ基序
ＳＳＲ ｍｏｔｉｆ
引物序列 Ｆ / Ｒ(５′－３′)
Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′－３′)
等位基因
Ａｌｌｅｌｅ
多态性信息量
ＰＩＣ
３４ ＮＮＦＢ＿１６３５ (ＧＡＡ)５ Ｆ: ＡＣＣＡＣＧＴＡＡＣＴＣＧＡＡＣＣＡＧＧＲ: ＣＡＧＡＧＣＡＧＡＧＧＣＡＣＡＣＧＴＴＡ ２ ０ ６２
３５ ＮＮＦＢ＿１６９５ (ＡＧ)７ Ｆ: ＡＴＧＧＴＧＡＧＧＧＧＡＡＡＧＧＡＡＴＣＲ: ＡＧＣＡＧＣＡＧＧＣＡＴＴＣＴＧＡＴＴＴ ２ ０ ６５
３６ ＮＮＦＢ＿１８１４ (ＣＴ)８ Ｆ: ＴＧＡＡＣＴＧＡＴＧＴＴＣＡＴＧＧＧＧＡＲ: ＧＣＡＡＣＣＣＴＧＣＡＡＣＴＡＣＴＧＣＴ ４ ０ ８４
３７ ＮＮＦＢ＿１８１７ (ＡＧ)８ Ｆ: ＡＡＧＧＴＡＧＣＡＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＡＲ: ＣＣＡＡＣＣＧＧＡＡＣＣＴＡＴＧＴＴＧＴ ３ ０ ８０
３８ ＮＮＦＢ＿１９３０ (ＧＧＴ)７ Ｆ: ＧＣＡＣＴＧＡＡＧＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＴＲ: ＴＡＡＡＧＴＴＧＧＣＣＴＣＣＡＡＣＣＡＣ ４ ０ ８４
３９ ＮＮＦＢ＿２０２６ (ＴＣ)９ Ｆ: ＣＣＴＡＴＣＡＴＧＣＣＡＡＴＧＧＧＴＣＴＲ: ＡＡＣＴＧＣＣＣＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＣ ４ ０ ８７
４０ ＮＮＦＢ＿２０８４ (ＡＧ)８ Ｆ: ＡＧＣＴＴＣＣＡＡＧＴＣＣＡＣＧＡＡＡＡＲ: ＡＡＧＴＣＧＣＣＡＡＡＧＣＧＡＴＡＧＡＡ ３ ０ ８２
４１ ＮＮＦＢ＿２１３５ (ＧＴＧ)９ Ｆ: ＡＴＧＡＧＡＧＧＧＧＡＡＴＴＴＴＴＧＧＧＲ: ＴＡＡＧＴＧＴＣＴＴＣＧＧＣＴＴＧＣＣＴ ３ ０ ８１
４２ ＮＮＦＢ＿２３３２ (ＧＡＡ)６ Ｆ: ＣＡＴＧＧＧＡＡＴＧＡＡＡＣＡＡＡＣＣＡＲ: ＧＧＧＡＣＴＡＧＧＡＧＧＧＣＧＴＴＴＡＧ ５ ０ ８７
４３ ＮＮＦＢ＿２３８６ (ＣＣＴ)５ Ｆ: ＡＣＴＣＡＡＣＴＧＡＡＣＣＧＴＣＧＴＣＣＲ: ＴＴＡＡＴＧＧＴＴＡＣＡＧＧＧＣＣＧＡＧ ３ ０ ７７
４４ ＮＮＦＢ＿２４１６ (ＴＣ)１１ Ｆ: ＣＧＧＣＧＡＴＴＡＡＧＧＣＴＣＴＧＴＡＧＲ: ＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＡ ４ ０ ８５
４５ ＮＮＦＢ＿２４２０ (ＴＣ)１１ Ｆ: ＣＧＣＴＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＣＡＡＣＣＡＲ: ＴＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＧＡＣＴＧＴＧＡ ５ ０ ８７
４６ ＮＮＦＢ＿２５０４ (ＡＴＣ)５ Ｆ: ＡＴＴＣＡＣＣＣＡＡＴＧＣＣＡＣＣＴＡＡＲ: ＴＣＧＡＴＣＡＣＡＴＴＧＡＴＣＡＡＧＣＣ ２ ０ ６７
４７ ＮＮＦＢ＿２５２１ (ＡＧ)１１ Ｆ: ＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＧＴＴＴＴＣＣＴＧＡＲ: ＧＴＴＡＧＣＧＡＣＣＣＣＣＧＴＴＴＴＴＴ ４ ０ ８３
４８ ＮＮＦＢ＿２６４６ (ＧＡ)７ Ｆ: ＣＴＴＴＧＣＴＧＣＴＡＣＴＣＣＧＡＡＣＣＲ: ＴＣＣＴＴＣＡＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＧＡＧ ６ ０ ８９
４９ ＮＮＦＢ＿２６９８ (ＧＡ)８ Ｆ: ＴＧＧＴＴＴＣＣＣＡＡＣＡＡＴＴＧＧＡＴＲ: ＧＧＣＴＴＴＣＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＴＧＣ ７ ０ ９０
５０ ＮＮＦＢ＿２７７９ (ＧＡＴ)７ Ｆ: ＴＴＡＣＧＡＧＧＣＣＡＡＧＧＴＴＣＡＴＣＲ: ＡＡＣＴＣＣＴＴＧＣＡＡＴＣＣＡＴＴＣＧ ３ ０ ７７
５１ ＮＮＦＢ＿２８２０ (ＡＴ)７ Ｆ: ＧＧＣＡＴＡＣＡＴＡＡＣＡＴＡＧＣＧＴＧＣＲ: ＧＧＧＴＧＣＴＴＴＣＡＴＴＧＧＴＧＴＴＴ ４ ０ ８２
５２ ＮＮＦＢ＿３０４２ (ＣＴＴ)７ Ｆ: ＴＣＴＴＡＧＣＡＣＣＴＣＴＣＡＡＣＡＣＣＡＡＲ: ＧＧＧＴＣＴＣＡＧＣＧＴＣＡＡＴＧＴＴＴ ２ ０ ７３
总计 Ｔｏｔａｌ １７７ ４１ １２
平均 Ｍｅａｎ ３ ４ ０ ７９
２ ２ 聚类分析
根据 ５２ 对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引物的扩增结果ꎬ 用
ＮＴＳＹＳ￣ｐｃ２.１１软件进行聚类分析ꎬ 得出 ５０ 个供
试荷花品种的聚类树图 (图 ２)ꎮ 由图 ２ 可知供
试的荷花种质资源的遗传相似系数范围为 ０ ２４~
０ ８６ꎬ 遗传相似系数小ꎬ 遗传距离大ꎬ 其亲缘关
系就越远ꎮ 由此表明本研究所选的供试荷花品种
间差异明显ꎬ 具有较为丰富的遗传变异ꎮ
在遗传相似系数为 ０ ３７时ꎬ 可以将 ５０ 个供
试荷花品种分为四大类群: Ｉꎬ ＩＩꎬ ＩＩＩ 和 ＩＶꎮ 亚
洲莲品种均聚类在 Ｉ、 ＩＩ 类群中ꎬ ＩＩＩ 类群为亚美
杂交莲品种 (除 ‘友谊牡丹莲’、 ‘黄牡丹’ 外)ꎬ
００６ 植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 ３７卷
ＩＶ类群为美洲莲ꎮ 在亚洲莲品种聚集的第 Ｉ 大
类群中包含 ‘粉团’、 ‘冬红花’、 ‘傲霜’、 ‘雪里
红’、 ‘湘韵’ 和 ‘粉青莲’ ６个亚洲莲栽培品种ꎬ
其中ꎬ 重瓣型的 ‘粉团’ 与其他 ５ 个单瓣型的亚
洲莲栽培品种相比ꎬ 表现出较远的亲缘关系ꎮ 第
ＩＩ大类群包括 ２４ 个亚洲莲品种和 ２ 个亚美杂交
莲品种 (‘友谊牡丹莲’、 ‘黄牡丹’)ꎮ 在遗传相
似系数为 ０ ４２ 时ꎬ 又可以进一步分为 ＩＩａ、 ＩＩｂ
两个亚群ꎮ ＩＩａ亚群包括 １７ 个野生型、 藕莲、 千
瓣型、 热带型的较原始的品种ꎬ 其中ꎬ 来自中国
部分地区较原始的亚洲莲大部分聚在一支上ꎬ 而
来自泰国境内的野生莲型 ( Ｔｈａｉ￣２＃、 Ｔｈａｉ￣８ ＃、
Ｔｈａｉ￣１０＃) 聚在另一支上ꎬ 这可能与地理分化不
同有关ꎻ 此外ꎬ 红色、 大株型的 ‘中山红台’ 和
图 ２ ５０个荷花品种遗传相似系数的非加权组平均法 (ＵＰＧＭＡ) 聚类分析树状图
Ｆｉｇ ２ Ａ ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｏｆ ５０ Ｎｅｌｕｍｂｏ ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ｕｓｉｎｇ ＵＰＧＭＡ ｍｅｔｈｏｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
１０６５期 徐玉仙等: 基于 ＥＳＴ￣ＳＳＲ标记的莲属种质资源遗传多样性分析
‘至尊千瓣’ 聚在一起ꎬ 说明两者亲缘关系较近ꎻ
ＩＩｂ亚群包含有 ７ 个亚洲莲栽培品种和 ２ 个亚美
杂交莲品种ꎬ 这 ７个亚洲莲栽培品种大部分为大
株、 单瓣型品种ꎬ 如 ‘易建莲’、 ‘单洒锦’、 ‘一
丈青’、 ‘艳阳天’ 等ꎮ 第 ＩＩＩ 大类群包含有 １２ 个
亚美杂交莲和 １个美洲莲 (‘艾江南’)ꎬ 这表明供
试的亚美杂交莲品种除 ‘友谊牡丹莲’、 ‘黄牡丹’
外均聚在一支上ꎮ 第 ＩＶ 大类群包含黄莲 １＃、 黄
莲 ３＃、 黄莲 ４＃、 黄莲 ８＃和 ‘黄鸟’ ５个野生型美
洲莲居群ꎬ 其中ꎬ ‘黄鸟’ 与其他的 ４个野生型美
洲莲居群相比ꎬ 表现出相对较远的亲缘关系ꎮ
由聚类图还可以看出ꎬ 在遗传相似系数为
０ ３７处ꎬ 包含绝大部分亚洲莲品种的第 ＩＩ 大类
群与包含亚美杂交莲的第 ＩＩＩ 大类群聚在一大支
上ꎬ 然后再与第 Ｉ大类群聚在一起ꎬ 最后才与包
含有美洲莲的第 ＩＶ 大类群聚在一起ꎬ 表明亚美
杂交莲品种与亚洲莲品种亲缘关系相对较近ꎮ
３ 讨论
ＥＳＴ￣ＳＳＲ作为一种与基因表达相关的 ＳＳＲ分
子标记ꎬ 不仅具备传统基因组 ＳＳＲ 标记的共显
性、 多态性高、 重复性好等特点ꎬ 而且因开发经
济、 通用性高及性状连锁等优势已在很多植物研
究中得到开发和应用ꎮ 然而ꎬ 基于 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 标
记进行荷花种质资源的遗传多样性分析较少且标
记数目有限 (Ｋｕｂｏ等ꎬ ２００９ｂꎻ Ｐａｎ等ꎬ ２０１０ꎻ Ｙａｎｇ
等ꎬ ２０１３)ꎮ 通常因转录组序列的保守性ꎬ ＥＳＴ￣
ＳＳＲ标记的多态性低于基因组 ＳＳＲ 标记 (Ｅｕｊａｙｌ
等ꎬ ２００２ꎻ Ｌｉａｎｇ 等ꎬ ２００９)ꎬ 但是本实验筛选的
ＥＳＴ￣ＳＳＲ标记具有较高的多态性ꎮ 以前基于基因
组 ＳＳＲ 标记的荷花种质资源遗传多样性方面的
研究报道中ꎬ 平均每对引物的等位基因数为 ３ ３
~５ ８ꎻ 平均每对引物的 ＰＩＣ 值为 ０ ３~０ ５ (Ｋｕｂｏ
等ꎬ ２００９ｂꎻ Ｐａｎ等ꎬ ２０１０ꎬ ２０１１ꎻ Ｈｕ等ꎬ ２０１２ꎻ Ｌｉｕ
等ꎬ ２０１２ꎻ Ｙａｎｇ 等ꎬ ２０１２ａ)ꎻ 基于 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 标记
的平均每对引物的等位基因数和 ＰＩＣ 值分别为
２ ７、 ０ ３ꎮ 然而ꎬ 在本实验中ꎬ 平均每对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ
引物的等位基因数与 ＰＩＣ 值分别为 ３ ４、 ０ ７９ꎬ
这表明本实验的 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引物具有更高的多态
性ꎬ 原因一方面可能是供试荷花材料的资源代表
性高、 基因型丰富ꎻ 另一方面可能是测序序列的
高覆盖率 (Ｅｕｊａｙｌ等ꎬ ２００２ꎻ Ｄｕｔｔａ等ꎬ ２０１１)ꎮ
本研究可将供试的荷花品种分为亚洲莲 (Ｉ、
ＩＩ)、 亚美杂交莲 (ＩＩＩ) 和美洲莲 (ＩＶ)ꎻ 并且聚
于第 Ｉꎬ ＩＩ 大类群的亚洲莲品种明显与第 ＩＶ 类
群的美洲莲区分开ꎬ 这很大程度上与种间长期的
地理隔离有关ꎬ 所得结果与前人的研究相一致
(Ｃｈｅｎ等ꎬ ２００８ꎻ Ｌｉ 等ꎬ ２０１０ꎻ Ｐａｎ 等ꎬ ２０１０ꎻ Ｆｕ
等ꎬ ２０１１ꎻ Ｈｕ 等ꎬ ２０１２ꎻ Ｙａｎｇ 等ꎬ ２０１２ｂ)ꎮ 另
外ꎬ 同属于亚洲莲ꎬ 分别来自中国和泰国的荷花
品种 (Ｔｈａｉ￣２＃、 Ｔｈａｉ￣８＃、 Ｔｈａｉ￣１０＃) 各自聚在不
同的亚支上ꎬ 表明它们之间也因地理隔离导致遗
传变异与分化ꎮ 聚类于 ＩＩａ 亚群的野生型较原始
的亚洲莲与第 Ｉ 大群类及 ＩＩｂ 亚群内的栽培亚洲
莲品种区别开来ꎬ 表明由于人工选择、 现代农业
的发展与进步及生存环境变化的影响ꎬ 导致它们
之间各种性状及遗传背景出现了明显差异ꎮ 虽
然ꎬ 根据资源的地理分布差异、 野生型、 栽培品
种等传统分类标准ꎬ 本实验利用 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 标记
将供试材料明显区分开ꎬ 但一些品种ꎬ 特别是栽
培型的亚洲莲品种ꎬ 基于性状分类如株型、 花
型、 花色等ꎬ 同一类型品种往往聚类于不同的群
或亚群内ꎬ 表明不同品种即使单一性状相同也不
一定能聚类到一起ꎮ 原因一方面可能是供试的荷
花品种数量不够大或可用标记数有限ꎬ 不足以形
成一个与形态学特征相一致的清晰的区分模式ꎻ
另一方面也可能是供试的栽培亚洲莲品种因种内
或品种间频繁发生杂交从而产生了较高的遗传多
样性 (Ｌｉｕ等ꎬ ２０１２)ꎬ 而聚类结果又同时受到多
种形态学性状的影响ꎮ 此外ꎬ 也可能因荷花品种
繁多ꎬ 部分品种遗传背景复杂或不清ꎬ 前人根据
形态特征可能将其错误分类ꎮ
由聚类图可知ꎬ 原属亚美杂交莲的 ‘友谊牡
丹莲’ 和 ‘黄牡丹’ 却聚在了亚洲莲品种内ꎬ 这
与传统分类记载 (王其超和张行言ꎬ ２００５) 有出
入ꎬ 可能因为 ‘友谊牡丹莲’ 是采用性状倾向于
亚洲莲的亚美杂交莲品种 ‘伯里夫人’ (‘Ｍｒｓ.
Ｐｅｒｒｙ Ｄ. Ｓｌｏｃｕｍ’)通过自交或同其他品种自然杂
交培育而来的 (培育者仅记载该品种来源于 ‘伯
里夫人’ 的种子)ꎻ ‘黄牡丹’ 的母本又是 ‘友谊
牡丹莲’ꎮ 杂交品种经多次杂交或自交后ꎬ 杂交
后代的遗传组成发生了显著变化ꎬ 表观性状通常
由来自亲本的遗传物质比例决定ꎬ 而这些比例在
荷花长期的人工或自然选育过程中表现是不均衡
２０６ 植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 ３７卷
的 (黄国振ꎬ １９８７ꎻ Ｃｈｅｎ 等ꎬ ２００８ꎻ 刘艺平等ꎬ
２０１３)ꎬ 有关这方面的问题有待于进一步探讨研
究ꎮ 原被归类为美洲莲栽培品种的 ‘艾江南’
(张行言和陈龙清ꎬ ２０１１) 没有聚在 ＩＶ (美洲莲
群) 内ꎬ 而与亚美杂交莲聚在一起ꎮ 经观察 ‘艾
江南’ 不同开花时期花被ꎬ 我们发现其花色虽为
黄色ꎬ 但瓣尖带红色ꎬ 而红色只能来源于亚洲
莲ꎬ 这表明 ‘艾江南’ 应该是亚美杂交莲后代ꎬ
之前可能被错误分类ꎮ
本研究发现采自同一地方湖南汉寿县城郊的
‘玉臂藕’ 与 ‘鄂莲 ３ 号’ 聚在同一支上ꎬ 并且
遗传相似系数较大为 ０ ８ꎬ 两品种间的遗传差异
较小ꎬ 原因可能是: 供试采集的 ‘玉臂藕’ 与
‘湖南泡子’ 形态学性状相近ꎬ 可能就是 ‘湖南
泡子’ 或其近似种源ꎻ ‘鄂莲 ３号’ 是由 ‘湖南泡
子’ 作为母本 (仅记载来自湖南ꎬ 具体产地不
详)ꎬ ‘竹节藕’ 为父本ꎬ 经过人工杂交选育的品
种 (周国林等ꎬ ２０００)ꎮ 以前的研究推测 ‘至尊
千瓣’ 可能来自与之花色、 花型、 株型等均相近
的 ‘中山红台’(Ｔｉａｎ和 Ｔｉｌｔꎬ ２０１１ꎻ 黄秀等ꎬ ２０１４)ꎬ
从本实验聚类结果来看ꎬ 两者在遗传相似系数大
约为 ０ ６０ 时聚在一起ꎬ 表明两者遗传差异小ꎬ
亲缘关系较近ꎬ 从分子方面支持验证了这一推
测ꎮ 这些结果也说明本研究开发的 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引
物对疑难荷花资源的亲缘关系推断和辅助鉴定起
到了很好的效果ꎮ
本研究利用 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引物将供试的荷花品
种资源清晰地分为亚洲莲、 美洲莲、 亚美杂交莲
三大类群ꎬ 再次证明了 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 标记用于荷花
品种遗传多样性分析研究的有效性和重要性ꎮ 由
于荷花种质资源繁多ꎬ 栽培历史悠久ꎬ 品种分类
混乱ꎬ 单方面依靠形态学或分子标记研究荷花的
遗传多样性及亲缘关系是不够科学的ꎬ 也很难保
证结果准确ꎬ 只有两者相互结合ꎬ 相互佐证才能
更好地解决莲属的部分种质资源混乱、 遗传背景
不清和亲缘关系等问题ꎬ 为更好地保护和利用莲
属资源提供科学的决策和实践指导ꎮ
致谢 感谢南京艺莲苑丁跃生先生、 中科院北京植物园
张会金高工、 北京莲花池公园李鹏飞工程师、 三水荷花
世界梁常娥女士、 美国奥本大学 Ｋｅｎ Ｔｉｌｔ 教授等协助采
集部分实验材料ꎮ
〔参 考 文 献〕
董玉琛ꎬ 郑殿升ꎬ ２００５. 国家重点保护农业野生植物要略 [Ｍ].
北京: 中国气象出版社
王其超ꎬ 张行言ꎬ ２００５. 中国荷花品种图志 [Ｍ]. 北京: 中国林
业出版社
张行言ꎬ 陈龙清ꎬ ２０１１. 中国荷花新品种图志 [Ｍ]. 北京: 中国
林业出版社
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Ｆｕ Ｊꎬ Ｘｉａｎｇ ＱＹꎬ Ｚｅｎｇ ＸＢ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１１. Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉ￣
ｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｌｏｔｕｓ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｇｒｏｗｎ ｉｎ Ｃｈｉｎａ
ｂｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ １３６ (５): ３３９—３４９
Ｇｕｏ ＨＢꎬ Ｌｉ ＳＭꎬ Ｐｅｎｇ Ｊ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ
ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ＲＡＰＤ [ Ｊ] . Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｃｒｏｐ
Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎꎬ ５４ (４): ７４１—７４８
Ｈａｎ ＹＣꎬ Ｔｅｎｇ ＺＣꎬ Ｃｈａｎｇ ＦＨ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７. Ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａ￣
ｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｉｎ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ ｕｓｉｎｇ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＩＴＳ ｓｅ￣
ｑｕｅｎｃｅ ｄａｔａꎬ ＩＳＳＲ ａｎｄ ＲＡＰＤ ｍａｒｋｅｒｓ [ Ｊ] . Ａｑｕａｔｉｃ Ｂｏｔａｎｙꎬ
８７: １４１—１４６
Ｈａｎ ＹＣꎬ Ｔｅｎｇ ＺＣꎬ Ｒｏｂｅｒｔ Ｗ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００９. Ｍａｔｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｎａｔｕｒａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ ( Ｎｅｌｕｍ￣
ｂｏｎａｃｅａｅ) ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＩＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ ａｎｄ
Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎꎬ ２７７ (１￣２): １３—２０
Ｈｕ ＪＨꎬ Ｐａｎ Ｌꎬ Ｌｉｕ ＨＧ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１２. Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｓａｃｒｅｄ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ Ｇａｅｒｔｎ.) ｕｓｉｎｇ ＡＦＬＰ
ａｎｄ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｐｏｒｔｓꎬ ３９ ( ４):
３６３７—３６４７
Ｈｕａｎｇ ＧＺ (黄国振)ꎬ １９８７. Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ａ ｎｅｗ ｃｕｌｔｉｖａｒ ｏｆ ｙｅｌｌｏｗ ｌｏｔｕｓ
Ｎｅｌｕｍｂｏ × ｎｕｃｉｆｅｒａ ｃｖ. Ｆｒｉｅｎｄｓｈｉｐ Ｐｅｏｎｙ [ Ｊ] . Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕ￣
ｒａｅ Ｓｉｎｉｃａ (园艺学报)ꎬ １４ (２): １２９—１３２
Ｈｕａｎｇ Ｘ (黄秀)ꎬ Ｔｉａｎ ＤＫ (田代科)ꎬ Ｚｈａｎｇ ＷＷ (张微微) ｅｔ
ａｌ.ꎬ ２０１４. Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｆｌｏｒａｌ ｏｒｇａｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｉｎｇｌｅ ａｎｄ ｄｏｕｂｌｅ ｆｌｏｗｅｒｓ ｉｎ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ [ Ｊ] .
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ (植物分类与资源学报)ꎬ ３６
３０６５期 徐玉仙等: 基于 ＥＳＴ￣ＳＳＲ标记的莲属种质资源遗传多样性分析
(３): ３０３—３０９
Ｈｕａｎｇ ＸＱ (黄秀强)ꎬ Ｃｈｅｎ ＪＹ (陈俊愉)ꎬ Ｈｕａｎｇ ＧＺ (黄国振)ꎬ
１９９２. Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ
ｔｈｅ ｔｗｏ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｓｐｅｃｉｅｓ [ Ｊ] . Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｓｉｎｉｃａ (园艺
学报)ꎬ １９ (２): １６４—１７０
Ｊｏｈｎ ＨＷꎬ ２０１４. Ｆｌｏｒａ ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ [ＯＬ]. ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｅｆｌｏｒａｓ.
ｏｒｇ / ｆｌｏｒａｔａｘｏｎ.ａｓｐｘ? ｆｌｏｒａ＿ｉｄ ＝ １＆ｔａｘｏｎ＿ｉｄ ＝ １０６０８.３
Ｋｕｂｏ Ｎꎬ Ｈｉｒａｉ Ｍꎬ Ｋａｎｅｋｏ Ａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００９ａ. Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｈａｒａｃ￣
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔ (ＳＳＲ) ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｌｏ￣
ｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ) [Ｊ]. Ａｑｕａｔｉｃ Ｂｏｔａｎｙꎬ ９０ (２): １９１—１９４
Ｋｕｂｏ Ｎꎬ Ｈｉｒａｉ Ｍꎬ Ｋａｎｅｋｏ Ａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００９ｂ. Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｓｉ￣
ｔｙ ｏｆ ｓａｃｒｅｄ ａｎｄ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｓｐｅｃｉｅｓ: ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａ￣
ｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｌｏｔｕｓ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｉｎ Ｊａｐａｎ ｕｓｉｎｇ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ
[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓꎬ ７ (０３): ２６０—２７０
Ｌｉ Ｚꎬ Ｌｉｕ ＸＱꎬ Ｒｏｂｅｒｔ Ｗ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｃｌａｓｓｉｆｉ￣
ｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒｉｇｉｎｓ ｂｙ ＲＡＰＤ ａｎｄ
ＩＳＳＲ ａｎａｌｙｓｉｓ [Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅꎬ １２５ (４): ７２４—７３２
Ｌｉａｎｇ ＸＱꎬ Ｃｈｅｎ ＸＰꎬ Ｈｏｎｇ ＹＢ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００９. Ｕｔｉｌｉｔｙ ｏｆ ＥＳＴ￣ｄｅｒｉｖｅｄ
ＳＳＲ ｉｎ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｐｅａｎｕｔ (Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ Ｌ.) ａｎｄ Ａｒａｃｈｉｓ ｗｉｌｄ
ｓｐｅｃｉｅｓ [Ｊ] . ＢＭＣ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ９ (１): ３５
Ｌｉｕ ＹＬꎬ Ｙａｎｇ Ｍꎬ Ｘｉａｎｇ ＱＹ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１２. Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｓａ￣
ｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｍｏｎｇ ｌｏｔｕｓ ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏ￣
ｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ １３７ (３): １８０—１８８
Ｌｉｕ ＹＧ (刘月光)ꎬ Ｔｅｎｇ ＹＹ (滕永勇)ꎬ Ｐａｎ Ｃ (潘辰) ｅｔ ａｌ.ꎬ
２００６. Ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＳＲＡＰ ｍａｒｋｅｒｓ [ Ｊ] .
Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ＆ Ｂｉｏｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ (氨基酸和生物资源)ꎬ ２８ (１):
２９—３２
Ｌｉｕ ＹＰ (刘艺平)ꎬ Ｌｉ Ｃ (李创)ꎬ Ｌｉ Ｎ (李娜) ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３. ＩＳＳＲ
ｍａｒｋｅｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ
Ｇａｅｒｔｎ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ ＆ Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉ￣
ｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ) (西北农林科技大学学报: 自然科学版)ꎬ ４１
(４): １３９—１４６
Ｎａ ＡＮꎬ Ｇｕｏ ＨＢꎬ Ｋｅ ＷＤꎬ ２００９. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｒｈｉｚｏｍｅ ｌｏｔｕｓ
(Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ Ｇａｅｒｔｎ. ｓｓｐ. ｎｕｃｉｆｅｒａ) ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ ｆｒｏｍ Ｃｈｉｎａ
ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ ＲＡＰＤ ｍａｒｋｅｒｓ [Ｊ] . Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａꎬ
８ (１): ３１—３９
Ｏｕｙａｎｇ ＤＭ (欧阳冬梅)ꎬ Ｌｉｕ Ｈ (刘凰)ꎬ Ｘｕ ＪＸ (徐金星) ｅｔ ａｌ.ꎬ
２０１２. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ
ＳＲＡＰ ｍａｒｋｅｒｓ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈａｎｇｊｉａｎｇ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ (长江蔬
菜)ꎬ (１６): ３５—３８
Ｐａｎ Ｌꎬ Ｘｉａ ＱＪꎬ Ｑｕａｎ ＺＷ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０. Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ＥＳＴ￣
ＳＳＲｓ ｆｒｏｍ ｓａｃｒｅｄ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ Ｇａｅｒｔｎ) ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｕｔｉ￣
ｌｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎ ｎｕｃｉｆｅｒａ [Ｊ] . Ｊｏｕｒ￣
ｎａｌ Ｈｅｒｅｄｉｔｙꎬ １０１ (１): ７１—８２
Ｐａｎ Ｌꎬ Ｑｕａｎ ＺＷꎬ Ｈｕ ＪＨ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１１. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎ￣
ｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ) ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ ｓｉｍｐｌｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔｓ [ Ｊ] . Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ １５９ ( ３):
４２８—４４１
Ｐｅｎｇ ＹＬ (彭欲率)ꎬ Ｈａｎ ＹＣ (韩延闯)ꎬ Ｗａｎｇ Ｌ (汪岚) ｅｔ ａｌ.ꎬ
２００４. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ) ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ
ｂｙ ＡＦＬＰ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ [Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ (分子植物
育种)ꎬ ２ (６): ８２３—８２７
Ｔｉａｎ ＤＫꎬ Ｔｉｌｔ Ｋꎬ ２０１１. ‘Ｚｈｉｚｕｎ Ｑｉａｎｂａｎ’: Ａ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｏｂ￣
ｓｃｕｒｅ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ) ｃｕｌｔｉｖａｒ ｗｉｔｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｇ ｌｅｇｅｎｄ [ Ｊ] .
Ｈｏｒｔｓｃｉｅｎｃｅꎬ ４６ (７): １０４４—１０４５
Ｔｉａｎ ＨＬꎬ Ｃｈｅｎ ＸＱꎬ Ｗａｎｇ ＪＸ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００８. Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｈａｒａｃ￣
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｆｏｒ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ) [Ｊ] .
Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ ９ (５): １３８５—１３８８
Ｗａｎｇ Ｌ (汪岚)ꎬ Ｈａｎ ＹＣ (韩延闯)ꎬ Ｐｅｎｇ ＹＬ (彭欲率) ｅｔ ａｌ.ꎬ
２００４. Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＳＳＲ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｔｏ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｌｏｔｕｓ
ｒｏｏｔ [Ｊ] . Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ＆ Ｂｉｏｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ (氨基酸和生物资
源)ꎬ ２６ (３): ２０—２２
Ｗｕ ＪＤ (吴景栋)ꎬ Ｌｉｕ ＳＣ (刘生财)ꎬ Ｙａｎｇ ＳＣ (杨盛春) ｅｔ ａｌ.ꎬ
２０１１. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ３０ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ
Ｇａｅｒｔｎ.) ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｂｙ ＲＡＰＤ ｍａｒｋｅｒ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｃｈａｎｇｊｉａｎｇ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ (长江蔬菜)ꎬ (１６): ４２—４５
Ｘｕｅ ＪＨꎬ Ｚｈｕｏ ＬＨꎬ Ｚｈｏｕ ＳＬꎬ ２００６. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ
ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ｗｉｌｄ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ) ｉｎ Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
[Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎꎬ ５１ (４): ４２１—４３２
Ｙａｎｇ Ｍꎬ Ｈａｎ ＹＮꎬ Ｘｕ ＬＭ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１２ａ. Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅ￣
ｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ) ｕｓｉｎｇ ＳＳＲ ａｎｄ ＳＲＡＰ ｍａｒｋｅｒｓ
[Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅꎬ １４２: １８５—１９５
Ｙａｎｇ Ｍꎬ Ｈａｎ ＹＮꎬ Ｒｏｂｅｒｔ ＶＢ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１２ｂ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｌｉｎｋａｇｅ ｍａｐｓ ｆｏｒ
Ａｓｉａｎ ａｎｄ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｌｏｔｕｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｎｏｖｅｌ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ
ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ ｃｕｌｔｉｖａｒ [ Ｊ] . ＢＭＣ Ｇｅ￣
ｎｏｍｉｃｓꎬ １３: ６５３
Ｙａｎｇ Ｍꎬ Ｌｉｕ Ｆꎬ Ｈａｎ ＹＮ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｆｒｏｍ Ａｍｅｒｉｃａꎬ Ｔｈａｉｌａｎｄ ａｎｄ Ｃｈｉｎａ:
Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｒｅｅｄｉｎｇ [ Ｊ] . Ａｑｕａｔｉｃ Ｂｏｔａ￣
ｎｙꎬ １０７: １—７
Ｙａｎｇ Ｃ (杨春)ꎬ Ｌｉｕ ＡＺ (刘爱忠)ꎬ ２０１１. Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＥＳＴ￣ＳＳＲ
ｍａｒｋｅｒｓ ｆｒｏｍ Ｊａｔｒｏｐｈａ ｃｕｒｃａｓ (Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｃｅａｅ) ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉ￣
ｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｍｏｎｇ ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ [ Ｊ ] .
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ (植物分类与资源学报)ꎬ ３３
(５): ５２９—５３４
Ｙａｏ ＬＨ (姚利华)ꎬ Ｔｅｎｇ ＹＷ (滕元文)ꎬ ２００８. Ａ ｂｒｉｅｆ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｏｎ ＥＳＴ￣ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｆｒｕｉｔ
ｔｒｅｅｓ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｒｕｉｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ (果树学报)ꎬ ２５ ( ２):
２１９—２２４
４０６ 植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 ３７卷