全 文 ：植物生理学报 Plant Physiology Journal 2013, 49 (2): 188~194188
收稿 2012-12-19　　修定 2012-12-28
资助 国家科技部“973”项目(2013CB127000)。
* 通讯作者(E-mail: huangjr@sibs.ac.cn; Tel: 021-54924145)。
拟南芥MicroRNA828负调控蔗糖诱导的花青素合成
谢烨, 孙毅, 李淡宁, 黄继荣*
中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所, 上海200032
摘要: 花青素生物合成途径及转录调控因子虽然已基本被阐明, 但其调控机理仍在日益更新。本研究利用蔗糖诱导花青素
合成的表型, 建立了一种筛选拟南芥花青素代谢突变体的方法。我们从T-DNA插入突变体库中筛选出一株花青素合成过
量突变体, 基因克隆结果表明是由MicroRNA828 (miR828)的功能缺失所致。进一步研究发现miR828过表达植株中蔗糖诱
导的花青素积累较野生型减少, 这与敲除miR828的靶基因TAS4导致花青素积累比野生型高的结果一致, 表明miR828负调
控花青素合成。miR828在各组织中表达量很低, 但其表达受到蔗糖诱导。在讨论中, 我们提出了miR828调控蔗糖诱导花青
素合成的模型。
关键词: 花青素; miR828; TAS4; 蔗糖; 负调控
MicroRNA828 Negatively Regulates Sucrose-Induced Anthocyanin Biosynthe-
sis in Arabidopsis
XIE Ye, SUN Yi, LI Dan-Ning, HUANG Ji-Rong*
Institute of Plant Physiology and Ecology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai
200032, China
Abstract: Anthocyanins displaying from red, blue to purple give plants a colorful world. They play an impor-
tant role in pollination, seed dispersal, and stress resistance. Although the anthocyanin biosynthetic pathway
and the transcription factors have been well-documented, regulatory mechanisms underlying anthocyanin bio-
synthesis are not fully understood. In this study, we established a system to screen mutants with high accumula-
tion of anthocyanin in Arabidopsis thaliana, and provided new evidence that small RNA is involved in antho-
cyanin biosynthesis. Using the phenomenon of sugar-induced anthocyanin biosynthesis, we obtained a mutant
accumulated a higher level of anthocyanin compared with the wild type (WT). TAIL-PCR analysis revealed that
the phenotype was resulted from the loss-of-function microRNA828 (miR828). Consistently, anthocyanin con-
tent was reduced in miR828 overexpressors under sucrose treatment. In addition, knockout of TAS4, the target
of miR828, also led to higher accumulation of anthocyanin in sugar-treated seedlings compared with WT. These
results indicate that miR828 negatively regulates anthocyanin biosynthesis. Further analysis demonstrated that
the expression level of miR828 was quite low in various tissues, but was significantly induced by sucrose. We
proposed a model to explain the importance of miR828 and TAS4 in sugar-regulated anthocyanin biosynthesis.
Key words: anthocyanin; miR828; TAS4; sucrose; negative regulation
花青素属于类黄酮化合物 , 赋予了植物花
朵、果实、叶等器官由红色、蓝色到紫色的多种
色彩, 在帮助植物吸引昆虫传粉、种子散播等方
面具有重要的生物学意义。近年来的研究表明,
花青素还在植物防御紫外辐射、病虫侵害和抵抗
干旱、严寒等诸多逆境中发挥重要作用(Tsukaya
等1991; Dixon和Paiva 1995; Castellarin等2007)。
在遗传学发展史上, 花青素扮演着举足轻重的角
色。例如孟德尔遗传定律和玉米(Zea mays)中转
座子(transposons)的发现, 副突变和重复基因沉默
引起的表观遗传现象(Brink 1973; Ronchi等1995)
以及矮牵牛(Petunia hybrida)中共抑制现象的解释
(Napoli等1990)。此外, 花青素是一种纯天然的可
食用色素, 因富含酚羟基而具有极强的抗氧化能
力(Hernandez等2008), 适量摄入花青素能帮助人
体清除代谢过程中产生的活性氧自由基, 具有延
缓衰老, 预防心血管疾病和癌症发生等功效(Bagchi
谢烨等: 拟南芥MicroRNA828负调控蔗糖诱导的花青素合成 189
等2004; Wang和Stoner 2008)。
目前, 花青素的生物合成途径以及在转录水
平上的调控机理已基本阐明(Dixon和Paiva 1995;
Holton和Cornish 1995)。研究发现由WD40蛋白、
bHLH和MYB转录因子组成的转录复合体能够直
接结合到花青素合成下游结构基因的启动子, 促
使花青素的合成(Broun 2005; Gonzalez等2008)。
在模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)中, 参与
该过程的WD40蛋白有TTG1; bHLH转录因子有
TT8、GL3、EGL3; MYB转录因子则包括PAP1、
PAP2、MYB113、MYB114及MYBL2、CPC
(Petroni和Tonelli 2011)。因此, 近年来有关花青素
的研究主要集中在上游信号转导途径及合成后的
修饰、转运等过程(Grotewold和Davies 2008;
Gomez等2011; Yonekura-Sakakibara等2012)。诸如
低温、强光、干旱等逆境均能诱导花青素的积累
(Dixon和Paiva 1995; Castellarin等2007; Zhang等
2011); 而蔗糖(Solfanelli等2006)、缺磷(Dixon和
Paiva 1995)和缺氮(Scheible等2004; Rubin等2009)
的胁迫也能诱导花青素的积累。但它们影响花青
素合成的分子机制有待深入研究。此外, 人们对
于花青素生物降解途径几乎一无所知。因此, 完
善花青素代谢途径及其调控机制具有非常重要的
生物学意义。
本研究建立了一种拟南芥花青素代谢突变体
的筛选体系, 并阐释了植物小分子RNA (Micro-
RNA)调控花青素合成的新机制。首先, 通过筛选
突变体库, 我们得到了一株花青素合成过量的突
变体CS75240-1。热不对称交错PCR的结果表明该
突变体中T-DNA插入到MicroRNA828 (miR828)的
外显子区域, 引起该基因功能缺失; 同时, miR828
过表达植株中的花青素含量较野生型减少, 表明
miR828能够负调控拟南芥中花青素合成。最后,
RT-PCR的结果表明miR828在各个组织中的表达量
均很低, 但其表达受到蔗糖的诱导, 且这一过程可
能通过PAP1的上调而实现。
材料与方法
1 材料
用于筛选的拟南芥(Arabidopsis thaliana)种子
来自SALK的T-DNA插入突变体库, 编号从CS-
75001到CS75400, 其遗传背景为Columbia-0 (Col-
0)。T-DNA插入载体为pROK2。
2 实验方法
2.1 突变体的筛选
将T-DNA插入诱变种子与野生型(Col-0)种子
分别消毒后在4 ℃条件下春化3 d。然后将种子加
入到不含蔗糖的1/2 Murashige and Skoog (MS)液
体培养基中, 在120 rpm的摇床上培养, 温度为
21~23 ℃, 光照强度为100 μmol·m-2·s-1, 16 h光照, 8
h黑暗。种子在上述条件下培养2 d后长出子叶。
再用含3%蔗糖的1/2MS液体培养基诱导幼苗积累
花青素。3 d后 , 将幼苗再次移到不含蔗糖的
1/2MS液体培养基中培养。约2 d后, 观察幼苗花
青素积累情况。待野生型幼苗紫色褪去后, 筛选
花青素残留的突变体幼苗。
2.2 花青素含量的测定
取20颗左右的幼苗称重后, 用0.6 mL含有1%
HCl的甲醇溶液浸泡提取花青素, 并在4 ℃黑暗中
孵育。第2天加入0.4 mL的水和0.4 mL的三氯甲
烷, 充分混匀。12 000 rpm离心3 min, 吸取上清。
检测在530和657 nm这2个波长下的吸光值, 所有
样品均重复3次。花青素相对含量计算公式为(A530–
0.25×A657)·g
-1 (Rabino和Mancinelli 1986)。
2.3 突变基因的鉴定
运用热不对称交错PCR (thermal asymmetric
interlaced PCR, TAIL-PCR)的方法鉴定突变体中的
T-DNA插入位点(Liu等1995)。TAIL-PCR的操作
步骤如下: 第一轮PCR反应以突变体基因组DNA
为模板, 而第二、三轮PCR反应分别以前一次反应
产物的50倍和10倍稀释液作为模板。DNA提取用
TIANGEN Plant Genomic DNA Kit。三轮PCR反应
中先后依次用到特定引物L B 6 0 0、L B 4 0 0和
LB200, 它们是位于T-DNA载体pROK2左边界的3
个长度为21~22 bp的高特异性引物序列。此外, 每
轮PCR均用到8种随机简并引物(AD primer 1~8)。
它们为长度15~16 bp的短片段引物, 是根据拟南芥
普遍存在的蛋白质保守氨基酸序列设计而成。由
于简并引物的低特异性和多样性, 使得其退火序
列在整个基因组中覆盖范围较广。每轮PCR反应
均要用对应的特定引物分别与8种简并引物配对
进行8个PCR反应。最后, 将第三轮PCR反应产物
植物生理学报190
在1%琼脂糖凝胶上电泳, 切胶后用TIANgel Midi
Purificaiton Kit回收电泳得到的所有DNA片段。
DNA片段由Invitrogen公司测序, 结果经数据库
(TAIR10 Whole Genome)序列比对(TAIR BLAST
2.2.8), 确定T-DNA插入位点。反应所用引物序列
见表1, TAIL-PCR的反应步骤及简单原理见表2。
2.4 miR828过表达材料的构建和鉴定
以野生型幼苗cDNA为模板, 设计特异性正向
引物TOPO-Forward (F)和反向引物TOPO-Reverse
(R)将miR828的全长cDNA序列用KOD高保真酶扩
增后在1%琼脂糖凝胶上电泳, 切胶后用TIANgel
Midi Purificaiton Kit回收目的片段(引物序列见表
1)。将目的片段连入pENTR/SD/D-TOPO载体中,
转TOPO10感受态细胞, 将鉴定到的阳性克隆用含
有50 μg·mL-1卡那霉素的Luria-Bertani (LB)液体培
养过夜, 用QIAprep Spin Miniprep Kit抽取质粒送
Invitrogen公司测序。得到正确的测序结果后, 将
质粒中的目的片段经LR反应导入到pGWB2载体
中, 转感受态细胞。将鉴定到的阳性克隆用含有50
μg·mL-1卡那霉素和潮霉素的LB液体培养过夜, 用
QIAprep Spin Miniprep Kit抽取质粒。上述操作原
理见Invitrogen公司的pENTR Directional TOPO
Cloning Kits。最后将目的片段导入到农杆菌GV3-
101感受态细胞。28 ℃培养2 d后, 鉴定阳性克隆,
表2 热不对称交错PCR的反应步骤及简单原理
Table 2 Procedures and simple principles of TAIL-PCR
反应步骤 循环数 PCR程序 简单原理
TAIL-PCR 1 1 92 ℃, 3 min; 95 ℃, 1 min
5 94 ℃, 30 s; 62 ℃, 1 min; 72 ℃, 2 min 5次高特异性循环
1 94 ℃, 30 s; 25 ℃, 2 min; 0.2 ℃/s ramping to 72 ℃; 72 ℃, 3 min 1次低特异性循环
94 ℃, 30 s; 65 ℃, 1 min; 72 ℃, 2 min;
15 94 ℃, 30 s; 65 ℃, 1 min; 72 ℃, 2 min; 15次TAIL循环
94 ℃, 30 s; 44 ℃, 1 min; 72 ℃, 2 min
1 72 ℃, 5 min; 10 ℃, 10 min
TAIL-PCR 2 1 94 ℃, 2 min
94 ℃, 30 s; 64 ℃, 1 min; 72 ℃, 2.5 min;
20 94 ℃, 30 s; 64 ℃, 1 min; 72 ℃, 2.5 min; 20次TAIL循环
94 ℃, 30 s; 44 ℃, 1 min; 72 ℃, 2.5 min
1 72 ℃, 5 min; 10 ℃, 10 min
TAIL-PCR 3 1 94 ℃, 2 min
35 94 ℃, 20 s; 48 ℃, 20 s; 72 ℃, 1.5 min 扩增目的片段
1 72 ℃, 5 min; 10 ℃, 10 min
表1 文章中用到的引物序列
Table 1 Primers used in this paper
引物名称 引物序列(5′→3′) 引物名称 引物序列(5′→3′)
LB600 AGTGGACTCTTGTTCCAAACTG miR828-TOPO-F CACCGTGACAAAGTCACAAAAGTGATAAAC
LB400 GCTCCTTTCGCTTTCTTCCCT miR828-TOPO-R AAAAGATAAAACTCATACATGATATTAAATAGTC
LB200 GGTGTCATCTATGTTACTAGA miR828-RT-F GTGACAAAGTCACAAAAGTGATAAAC
AD1 NTCGASTWTSGWGTT miR828-RT-R AAAAGATAAAACTCATACATGATATTAAATAGTC
AD2 NGTCGASWGANAWGAA TAS4-RT-F ACATCACTATTTTAGGCAGTCAATGG
AD3 WGTGNAGWANCANAGA TAS4-RT-R CTCAAACACTGACGTGAACCTTATACA
AD4 NCTAGWASTWGSTTG PAP1-RT-F AGGGTTCGTCCAAAGGGCTGCGA
AD5 NTGGCGWSATNTSATA PAP1-RT-R AACGTCAAAAGCCAAGGTGTCCCCCT
AD6 TGWGNAGSANCASAGA ACTIN2-RT-F TCTTCTTCCGCTCTTTCTTTCC
AD7 AGWGNAGWANCAWAGG ACTIN2-RT-R TCTTACAATTTCCCGCTCTGC
AD8 STTGNTASTNCTNTGC
　　M=A/C, R=A/G, W=A/T, S=C/G。
谢烨等: 拟南芥MicroRNA828负调控蔗糖诱导的花青素合成 191
并将得到的阳性克隆转化到植物中(Clough和Bent
1998)。约1个月后收取转基因T1代种子。将春化
后的T1代种子在含有75 μg·mL
-1卡那霉素的1/2MS
固体培养基上培养, 1周后挑选能在抗性培养基上
生长的转基因幼苗移栽于土中(蛭石:黑土:珍珠岩=
6:3:1), 21~23 ℃, 16 h光照(120 μmol·m-2·s-1)/8 h黑
暗的光周期。取3~4周大植株叶片 , 检测其中
miR828的表达量, 保留2~3株表达量最高的转基因
植株进行后续实验。
2.5 基因表达水平检测
取新鲜植物材料, 通过Promega的RNAgents
Total RNA Isolation System的方法提取总RNA, 并
用Ambion的DNaseI treatment & remove Kit去除
RNA中残留的少量DNA。然后用Promega反转录
体系得到cDNA。以cDNA为模板, 检测基因的表
达水平。RT-PCR检测各基因表达水平的引物均由
Invitrogen公司合成, 具体序列见表1 (ACTIN2为内
参基因)。
实验结果
1 花青素含量突变体CS75240-1的筛选及其突变
基因克隆
CS75240-1是从编号为CS75240的突变群体中
筛选得到的一株突变体。正常情况下, 当野生型
幼苗再次用无蔗糖液体培养2 d后, 幼苗中的紫色
几乎完全褪去, 而CS75240-1则在胚轴处仍有明显
的花青素积累(图1-A)。花青素含量的动态检测结
果表明, CS75240-1中花青素滞留的表型是由于在
蔗糖诱导过程中花青素的过量积累所造成的, 而
并非是由于花青素降解受阻所引起的(图1-B)。为
了克隆突变基因, 我们运用TAIL-PCR扩增该突变
体中的部分T-DNA及其旁邻序列。测序结果表明
T-DNA插在miR828基因启动子ATG之后的第29个
碱基处(图1-C)。RT-PCR的结果也表明CS75240-1
中miR828的转录本完全缺失(图1-D)。因此, 我们
将该突变体命名为mir828-1。
2 miR828通过TAS4途径调控花青素合成
为了进一步确认miR828对于花青素合成的调
控作用, 我们获得了miR828过表达株系。将野生
型 (WT)、mir828-1和miR828过表达2个株系
(miR828 OE-1和OE-2)的T2代种子在含有3%蔗糖
的1/2MS固体培养基上萌发, 6 d后测定花青素的含
量。实验结果显示mir828-1中花青素含量明显高
于野生型, 而过表达的2个株系中花青素含量则明
显低于野生型(图2)。这一结果表明miR828能够负
调控花青素的合成。
图1 突变体CS75240-1的筛选及突变基因的鉴定
Fig.1 Screening of CS75240-1 and identification of the mutated gene
A: 野生型和CS75240-1表型; B: 野生型和CS75240-1中花青素含量动态检测; C: CS75240-1中T-DNA插入位点; D: miR828的表达水平。
植物生理学报192
关于miR828调控花青素合成的机理, 已有的
研究表明miR828能够诱发Trans-Acting SiRNA Gene
4 (TAS4)转录本的剪切, 从而产生小分子RNAs (ta-
siRNAs), 其中一个TAS4-siRNA81(-)的靶基因为
PAP1、PAP2和MYB113, 而这些靶基因编码的MYB
转录因子都能调控花青素的合成(Hsieh等2009;
Chen等2010)。为了验证TAS4是否参与花青素的
合成调控, 我们从SALK突变体库中订购了编号为
CS329139的TAS4的突变体种子, 并成功鉴定到纯
合突变株, 命名为tas4。花青素含量检测结果显示
tas4较野生型积累更多花青素, 且含量与mir828-1
中相当(图2)。这一结果暗示miR828 对于花青素
合成的负调控可能是通过TAS4来实现的。
3 在正常条件下miR828表达水平很低
现有研究表明, 花青素主要在叶片的表皮细
胞中合成(Sun等2012); 在组织水平上花青素积累
在叶片包括子叶的远轴面与下胚轴, 以及主茎基
部等部位(Solfanelli等2006; Gonzalez等2008; Gou
等2011)。那么miR828的表达是否也具有组织特异
性呢？为此, 我们检测了miR828在不同组织中的
表达水平。RT-PCR的结果表明miR828的表达量几
乎在所有组织中都很低, 将其转录本扩增38个循
环才能看到较浅的带(图3, 内参基因ACTIN2扩增
26个循环)。将miR828自身启动子序列接上GUS报
告基因后, 在这些组织中也几乎检测不到活性。上
述结果暗示在正常情况下miR828的表达量很低。
4 蔗糖处理下miR828、TAS4和PAP1表达水平的检测
之前的研究表明蔗糖能够诱导TAS4的表达
(Luo等2011)。那么蔗糖能否诱导miR828的表达
呢？我们将在无糖1/2MS液体培养基中生长至3 d
的野生型幼苗用3%蔗糖处理, 并在0、1、2、5、
10、16、24和36 h共8个时间点取样, 分析其中
miR828、TAS4和PAP1的表达量。RT-PCR分析结
果表明蔗糖能够诱导miR828的表达, 且表达量在
处理16 h时达到最高水平(图4)。TAS4的表达量同
图2 野生型、mir828-1、tas4及miR828过表达幼苗在含3%蔗糖的1/2MS培养基中生长6 d后的花青素含量
Fig.2 Anthocyanin content in seedlings of WT, mir828-1, tas4 and miR828 overexpressors
grown in half MS containing 3% sucrose for 6 days
A: 各材料表型特征; B: 各材料中花青素含量。
图3 不同组织中miR828的表达水平
Fig.3 Transcriptional levels of miR828 in various tissues
图4 蔗糖处理下miR828、TAS4和PAP1的表达水平
Fig.4 Transcriptional levels of miR828, TAS4
and PAP1 under sucrose treatment
谢烨等: 拟南芥MicroRNA828负调控蔗糖诱导的花青素合成 193
样在16 h时达到最高水平(图4)。有意思的是 ,
PAP1的表达虽然也受到蔗糖的诱导, 但其表达量
在10 h时就达到最高(图4)。虽然PAP1的表达量在
16 h时仍处于较高水平, 但其在24 h时的表达量骤
减, 低于10 h时而与5 h时相当; 与此同时, miR828
和TAS4在24 h时的表达量仍然处于相对较高水平,
明显高于10 h时(图4)。可见, 蔗糖诱导PAP1的表
达水平受到miR828和TAS4的调控。这一结果也符
合PAP1作为TAS4直接靶基因的报道 (Hsieh等
2009)。之前的研究表明PAP1与TAS4之间存在着
互为调控关系(Luo等2011)。加入蔗糖后PAP1首先
被诱导, 接着PAP1促进TAS4的表达, 而TAS4的上升
反馈负调控PAP1的表达。我们的结果也进一步证
实了这一点。PAP1在10 h时就处于最高表达水平,
导致了TAS4在下一个时间点处于最高表达水平,
而随着24 h时PAP1表达量的骤减, TAS4在36 h时的
表达水平也明显降低了。miR828与TAS4类似的表
达模式暗示PAP1与miR828之间可能也存在着互为
调控机制, 蔗糖诱导的miR828的表达很可能通过
优先上调PAP1来实现。但这一推测需要用实验进
一步验证。
讨　　论
本研究通过筛选糖诱导花青素合成异常的突
变体, 鉴定到一个新的mir828缺失突变体, 并通过
构建miR828过表达株系证明miR828能够负调控蔗
糖诱导下花青素合成 ; 其次我们的研究还表明
miR828在拟南芥各个组织中的表达量很低, 但受
到糖诱导; 其三, 遗传数据表明敲除miR828的靶标
基因TAS4也导致花青素积累比野生型高, 这个结
果说明TAS4介导miR828调控的花青素合成。最后,
蔗糖均诱导miR828、TAS4和PAP1表达, 但从表达
模式来看, PAP1的转录水平受到miR828和TAS4水
平的负调控。以上研究结果表明miR828主要是通
过促进TAS4剪切生成TAS4-siRNA81(-), 进而将
PAP1、PAP2和MYB113作为靶基因, 从而负调控花
青素的合成。这与已报道的研究结果一致(Luo等
2011)。
我们知道高浓度蔗糖、缺磷、缺氮等条件能
够诱导花青素的合成, Hsieh等(2009)发现miR828
的表达受到缺磷的诱导 , 而TAS4的表达受到缺
磷、缺氮的诱导; Luo等(2011)发现TAS4的表达受
到蔗糖的诱导; 而我们的实验结果也表明miR828
的表达受到蔗糖的诱导。不同的环境胁迫条件同
时造成了miR828和TAS4的表达量上调, 说明其中
很可能存在着类似的机制。Luo等(2011)发现PAP1
能够直接结合到TAS4的启动子区域来激活TAS4的
表达。Hsieh等(2009)发现即使在正常培养条件下
PAP1过表达材料(pap1-D)中的miR828和TAS4表达
量也较野生型要高。同时, 我们的结果也表明蔗
糖诱导的miR828的表达很可能通过优先上调PAP1
的表达而实现。所以, 一方面miR828和TAS4能够
抑制靶基因PAP1、PAP2和MYB113的表达, 另一方
面这种抑制作用发生的前提是靶基因的表达。因
此, 花青素的积累在miR828过表达材料中明显受
到抑制 (图2-A) , 这可能是由于组成型过表达
miR828从源头上抑制了PAP1等靶基因的表达。即
使在蔗糖处理下, 这些靶基因也不会像它们在野
生型中那样高表达。可见, miR828和TAS4起到了
一种调节器的作用。它们的存在使得PAP1、PAP2
和MYB113的表达不至于太高, 也不至于太低, 进而
调控下游F3H、DFR和ANS等花青素合成结构基
因的表达, 影响花青素的合成。但是由于目前还
没有找到PAP1能够直接结合到miR828启动子区域
并激活其表达的证据, 所以也不排除蔗糖处理通
过其他途径来诱导miR828的表达。此外, 序列比
对分析表明MYB113可以不通过TAS4而直接受到
miR828的调控(Rajagopalan等2006)。图2的结果显
示mir828和tas4中花青素的含量并无差异, 这可能
是由于PAP1、PAP2和MYB113之间存在着功能冗
余所致, 且PAP1在它们中间发挥主要功能(Gonza-
lez等2008)。综上所述, miR828介导的花青素合成
负调控可以用图5来概括。
相对于转录因子直接参与花青素合成的调控,
植物体内MicroRNA抑制靶基因表达为我们提供
了一种全新的花青素合成调控机理。目前, 有关
MicroRNA参与花青素合成调控的报告不多, 除了
miR828外, miR156被发现能调控茎顶端(靠近花序
处)的花青素积累(Guo等2011)。相信随着相关研
究的逐步深入, 会有更多的参与花青素合成调控
的方式被发现, 它们将为植物花色的改造、农作
物品质的改良提供更多有效途径。
植物生理学报194
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图5 miR828介导的花青素合成负调控
Fig.5 miR828-mediated negative regulation
of anthocyanin biosynthesis