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假俭草的组织培养与植株再生



全 文 :植物生理学通讯 第 40 卷 第 1期,2004 年 2 月62
假俭草的组织培养与植株再生
马生健1,2 曾富华1 蓝海婷1 吴志华1,2 卢向阳2
1 湛江师范学院生物系,湛江 524048; 2 湖南农业大学生物技术系,长沙 410128
Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Common Centipedegrass
MA Sheng-Jian1,2, ZENG Fu-Hua1, LAN Hai-Ting1, WU Zhi-Wua1,2, LU Xiang-Yang2
1Department of Biology, Zhanjiang Normal College, Zhanjiang 524048; 2Department of Biotechnology, Hunan Agricultural
University, Changsha 410128
收稿 2003-02-08 修定  2003-08-25
资助 广东省科技攻关项目(2KM03103N)和湛江科技攻关项目
(湛财企[2001]114 号;[2001]121.18)。
1 植物名称 假俭草(Eremochloa ophiuroides),
又名百足草。
2 材料类别 成熟种子。
3 培养条件 (1)诱导愈伤组织培养基: MS+6-BA 0.1
mg.L-1(单位下同)+2,4-D 4.5。(2)继代培养基:
MS+6-BA 0.1+2,4-D 4.0+Vc 5.0。(3)芽分化培养基:
MS+6-BA 2.0+NAA 1.0+CoCl2 5.0+TDZ 0.5。(4)生根培
养基:1/2MS+NAA 0.5+IAA 0.5+MET 0.5+活性炭
0.1%。以上培养基均加3% 蔗糖、0.3% 植物凝胶
(Phytagel,Sigma分装), pH 5.8~6.0。培养温度为
(26±2)℃,诱导愈伤组织时不光照,分化、生根时
光照12 h.d-1,光照度2 000 lx。
4 生长与分化情况
4.1 无菌外植体的获得 将假俭草成熟种子浸入双
蒸水中保湿3 h,然后经75%乙醇浸泡30 s,0.1%
HgCl2表面消毒处理10 min,不停地摇动,然后在超净台
上用无菌水冲洗5~8 次。
4.2 愈伤组织的诱导 将假俭草的种子接种在诱导
培养基上15 d 左右,种胚部位长出黄色种芽,同
时,白色不透明的疏松愈伤组织也诱导长出。接
种30 d后,将去掉种芽的愈伤组织在继代培养基上
连续继代60 d。每30 d换 1次新鲜的培养基。大
部分愈伤组织转变成黄色致密结节状的胚性结构。
4.3 芽的分化和生根 将上述胚性愈伤组织移入分
化培养基上,5~7 d 后有绿芽长出,20 d 左右大
部分愈伤组织长出了数十个芽,分化长芽率在
90% 以上。当芽长至 3~5 cm 时转入生根培养基
上,10~15 d后都长出2~3 cm的白根。芽分化培
养基中增加了CoCl2 和 TDZ,CoCl2 能抑制体内乙
烯的产生,T D Z 是一种类似于细胞分裂素的物
质,此两类物质都能提高假俭草愈伤组织的分化
长芽率;生根培养基上添加了活性炭。
4.4 组培苗的移栽 待芽丛长至5~8 cm、根长至
3~5 cm 时,将培养瓶从光照培养箱移至自然气
候条件下适应 3~5 d,然后开盖炼苗 2~3 d,小
心取出分化苗丛,用无菌水冲净根部残留的培养
基,移栽到经高温灭菌的土壤中,定期浇灌
1/2Hoagland 培养液,成活率达 100%,且苗
生长旺盛(图 1)。
5 意义与进展 假俭草属禾本科蜈蚣草属,原
产于我国南部,是一种暖季型的草坪草,有许
多优良性状,适应多种土壤和气候,应用广
泛。柴明良[1]认为暖季型比冷季型草坪草更难诱
导出胚性愈伤组织及再生植株。本文用的植物
凝胶固化剂能明显提高暖季型假俭草胚性愈伤组
织的诱导率和分化率。得到的结果可为假俭草
的遗传转化体系建立提供技术基础,同时也可
供其它草坪草的组织培养和转基因研究参考。
国内外对暧季型草坪草进行组织培养的种类不
多,主要有结缕草与狗牙根,假俭草的组织培
养在国内尚未见报道。
参考文献
1 柴明良.草坪草转基因研究进展.科技通报,2002,18(1):
68~69
图1 假俭草移栽成活