全 文 :植物生理学通讯 第43卷 第1期,2007年2月 125
陌上菜的组织培养与植株再生
张伟,高嵩,付欣,姜长阳*
辽宁师范大学生命科学学院,辽宁大连 116029
Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Lindernia procumbens (Krock.)
Philcox.
ZHANG Wei, GAO Song, FU Xin, JIANG Chang-Yang*
College of Life Science, Liaoning Normal University, Dalian, Liaoning, 116029, China
收稿 2006-11-03 修定 2007-01-10
资助 辽宁师范大学教学改革项目(20050101123)。
*通讯作者(E-mail:changyangjiang@126.com;Tel:
0411-84258983)。
1 植物名称 陌上菜[Lindernia procumbens (Krock.)
Philcox.],又称母草。
2 材料类别 嫩茎节间。
3 培养条件 愈伤组织诱导培养基:(1) MS+6-BA
0.5 mg·L-1 (单位下同) ;(2) MS+6-BA 0.5+2,4-D
1;(3) MS+6-BA 0.5+NAA 1;(4) MS+6-BA 0.5+
IBA 1;(5) MS+6-BA 0.5+IAA 1。愈伤组织分化
培养基:(6) 1/2MS+6-BA 0.4+IAA 0.1;(7) 1/2
MS+6-BA 0.4+2,4-D 0.1;(8) 1/2MS+6-BA 0.4+
NAA 0.1;(9) 1/2MS+6-BA 0.4+IBA 0.1。生根培
养基:(10) 1/2MS+IAA 0.2;(11) 1/2MS+IAA 0.6;
(12) 1/2MS+IAA 1。上述MS培养基中均加30 g·L-1
蔗糖,1/2MS 培养基中加 15 g·L-1 蔗糖。所有琼
脂固体培养基的胨力强度均为180 g·cm-2,pH 5.8~
6.0。光强40~60 mmol·m-2·s-1,光照时间10~12 h·d-1;
培养温度 8 ~ 2 2 ℃。愈伤组织分化培养时光强
60~100 mmol·m-2·s-1,光照时间10~11 h·d-1,培
养温度 21 ℃。
4 生长与分化情况
4.1 无菌材料的获得 将3月下旬野外采集的陌上
菜嫩茎放入250 mL的磨口广口瓶中,用自来水冲
洗 20 min,加 0.05% 的安利洗涤液振荡洗涤 10
min,再用自来水振荡洗涤 5 次,移至超净台上,
用75%的乙醇灭菌10 s左右后,迅速用无菌水清
洗 2 次,接着用 0.05% 的 HgCl2 溶液振荡灭菌 8
min,再用无菌水振荡清洗 5 次,即获得无菌材
料。
4.2 愈伤组织的诱导 用解剖刀将无菌嫩茎切成长
0.2 cm左右具有节间的茎段后,再从中间纵向切
开,接着,将纵切口向下接种到培养基(1)~(5)
上,进行愈伤组织的诱导培养。接种60 d时,在
培养基(1)、(4)、(5)上未见变化,(2)、(3)在节间
处开始形成愈伤组织。随后,愈伤组织迅速生
长,培养到85 d 时,培养基(2)、(3)上的愈伤组
织诱导率分别为 7 6 % 和 6 5 %。观察表明,此时
在培养基(3)上诱导的愈伤组织为淡黄、灰白相间
的松软状,为没有分化能力的愈伤组织;在培养
基(2)上诱导的愈伤组织为浅绿色的颗粒状,为具
有分化能力的愈伤组织。在培养基(2)上的愈伤组
织经过连续10代的继代培养,不仅愈伤组织生长
快,而且其外部仍然保持着浅绿色颗粒状。
4.3 分化培养 把在培养基(2)上继代培养的愈伤组
织接种到培养基(6)~(9)上进行分化培养。培养40 d
左右,培养基(8)上的愈伤组织的上部颗粒由浅绿
色变成绿色;再过 10 d 左右,绿色颗粒就会分
化形成绿色的芽点,分化率为 95% 以上;在培养
基(8)上继续培养30 d左右,芽点就会长成数量不
等、高矮不同的丛生不定芽。把在培养基(8)上分
化培养的不定芽剪成具有 2~3 个顶芽或侧芽的茎
段,接种到培养基( 8 ) 上进行分化继代培养,
15~20 d 开始分化,50 d 时形成丛生不定芽,每
个茎段能分化出 19~26 个不定芽。
4.4 试管苗的生根 将高1 cm左右的不定芽从基部
剪下后,转接至培养基(10)~(12)上进行生根培
养。虽然在 3 种培养基上均可生根,但在培养基
(11)上,10 d可形成根原基,随后根系迅速生长,
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35 d时生根率为 93%,平均每株试管苗生根 6.1
条,根长 2~3 cm,生根试管苗生长较为旺盛。
4.5 试管苗的移栽 将培养生根试管苗的三角瓶打
开,在光强80~100 mmol·m-2·s-1 下炼苗 3 d 后取
出,在净水中洗去根部的培养基后,移栽到分别
装有珍珠岩、炉灰渣、河沙 3 种基质的温室内的
花盆中,在保持温度14~20 ℃、湿度90% 以上和
没有直射光的条件下,30 d 时的成活率分别为
2 4 % 、8 7 % 、9 1 % 。移栽试管苗的生长比较旺
盛。于 5 月中旬移栽到河流旁,当年的长势和生
长发育情况与河流旁野外生长的苗一致。
5 意义与进展 陌上菜属于玄参科母草属一年生草
本植物,生长于水边及湿地,由于在2 ℃条件下
就能生长,所以每年三四月份到水面大量结冰
前,辽宁南部地区有的农民就采集嫩茎叶作为鹅
的青饲料,不仅鹅非常喜食,而且还能减少成鹅
的发病率,降低幼雏死亡率。另外,陌上菜全
草可入药,可用于治疗血尿等疾病。因此,近
年来辽宁南部有的农民试图在水边种植,但在湿
地生长的陌上菜不易形成种子,且种子的发芽率
非常低。本文采用组织培养的方法获得了陌上菜
的试管苗,为满足农民种植的需要提供了可能。
尽管目前玄参科植物的组织培养已有报道(武宗信
等2002),但陌上菜组织培养和植株再生的报道迄
今未见。
参考文献
武宗信, 解红蛾, 冯文龙, 解晓红, 陈丽, 李江辉, 李红霞(2002). 地
黄的组织培养和快速繁殖. 植物生理学通讯, 38 (6): 582