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陌上菜及其复方提取物抗肿瘤作用的实验



全 文 :DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2010.11.002
收稿日期:2009-09-28;修回日期:2010-03-16
基金项目:四川省中医药管理局基本科研业务专项课题
资助项目(200862)
作者单位:610041成都,四川省中医药科学院药理所
通信作者:潘嘉,E-mail:panjia028@163.com
作者简介:刘洁(1979-),女,硕士,助理研究员,主要从
事中药药理与毒理的研究
陌上菜及其复方提取物抗肿瘤作用的实验
刘 洁,潘 嘉,何光星
Anti-tumor Effects of Lindernia Procumbens Philcox and Its Complex Extractions
LIU Jie,PAN Jia,HE Guang-xing
Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences,Chengdu610041,China
Corresponding Author:PAN Jia,E-mail:panjia028@163.com
Abstract:Objective To explore the effects of BSC and BMZCY on transplantable carcinoma and organ
index in model animals.Methods Lewis lung carcinoma and C57BL/6mice organ index as spleen and
thymus were used to observe the effects of BSC and BMZCY on H22ascite tumor.Results BSC and
BMZCY had the tendency to prolong the lifecycle of mice beared H22,and also inhibited C57BL/6mice
Lewis lung cancer,and the inhibitory rate was over thirty percent.Compared with the control,no sta-
tistical difference was found on C57BL/6mice organ index as spleen and thymus.Conclusion BSC and
BMZCY could prevent the growth on H22ascite tumor and Lewis lung cancer.
Key words:Lindernia procumbens Philcox;H22hepatoma;Lewis lung cancer
摘 要:目的 探讨陌上菜提取物(BSC)和陌上菜复方提取物(BMZCY)对小鼠移植性肿瘤和模型动
物脏器指数的影响。方法 建立移植性肿瘤模型,观察BSC和BMZCY对 H22肝癌腹水瘤和Lewis
肺癌的影响及对C57BL/6小鼠脏器指数(脾、胸腺)的影响。结果 BSC和BMZCY对 H22肝癌腹水
瘤小鼠生命周期有一定的延长作用,对Lewis肺癌有明显的抑制作用,抑瘤率大于30%;与阴性组比
较,对C57BL/6小鼠的脏器指数(脾、胸腺)无任何影响。结论 BSC和BMZCY可抑制H22肝癌腹水
瘤和Lewis肺癌的生长。
关键词:陌上菜;H22肝癌;Lewis肺癌
中图分类号:R73-36;R735.7;R734.2  文献标识码:A  文章编号:1000-8578(2010)11-1219-03
0 引言
陌上菜[Linderniaprocumbens(Krock.)Phileox]
又称母草,属于玄参科母草属一年生草本植物,主要
分布于东北、华东、中南及西南等地[1-2]。传统中医
将由陌上菜组成的方剂用于抗炎、消肿、止痛之用。
一老中医经过对该药数十年研究并反复验证得出,
由该药为主组成的方剂在临床治疗肝癌、肺癌、淋巴
瘤有较好的疗效。本研究对陌上菜及其复方有效部
份开展抗肿瘤作用药效学研究,为临床用药提供科
学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验药物 陌上菜由本院生药所研究员舒
光明采集并鉴定,注射用盐酸柔比多星(阿霉素
ADM),规格,10mg/瓶,批号,0608E1,国药准字,
H44024359,由深圳万乐药业有限公司提供。
1.1.2 试验动物 KM 小鼠,雌性,体重(18.0~
22.0)g,由四川省中医药科学院动物所提供;C57
BL/6小鼠,SPF级,雌性,体重17.0~22.0g,由四
川大学实验动物中心提供。
1.1.3 细胞株 H22肝癌细胞株(重庆中药研究
所),Lewis肺癌细胞株(成都中药安全性评价中心
药理研究部),悬浮/贴壁生长于含10%小牛血清、
100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素的 RPMI1640
培养液中,于37℃、5%CO2 的饱和湿度培养箱中培
养,每2~3天换一次液。
1.2 方法
1.2.1 试验药物制备 陌上菜干燥后粉碎成粗粉,
用75%的乙醇浸泡1h,水浴加热回流提取3h过滤,
滤液回收乙醇至醇无味;将剩余药渣与8倍体积水
混合煎煮2h过滤,将两次所得滤液浓缩成浸膏即得
陌上菜提取物(BSC);黄芪采用二次水提法制成流
浸膏,陌上菜与黄芪提取物以1∶3(原生药质量比)
混合即得复方提取物(BMZCY)。
·9121·肿瘤防治研究2010年第37卷第11期
1.2.2 陌上菜及其复方提取物对H22肝癌腹水瘤的
影响 收获处于对数生长期的 H22细胞,1 000r/min
离心5min,Hanks液洗涤2次并调节细胞浓度
(1×107/ml),将 细 胞 接 种 于 KM 小 鼠 腹 腔 内
0.2ml/只。接种14天后抽取腹水用0.9%氯化钠
溶液稀释,同时取稀释液加锥虫蓝染色计算活细胞
数。将稀释液接种于KM小鼠腹腔内0.2ml/只(约
含活细胞数1×106 个)[3-4]。将小鼠随机分组,每组
10只。复方提取物(BMZCY)高、中、低剂量组(相
当于原生药中陌上菜12、6、3g/kg)、陌上菜提取物
(BSC)高、中、低剂量组(相当于原生药12、6、3g/
kg)、ADM组(2mg/kg)、阴性组。于接种后第二日开
始灌胃给药,ADM组采用静脉给药,容量为0.2ml/
10g,阴性组给予等量0.9%氯化钠溶液。除ADM组
连续给药6天,其余各组连续给药12天。实验期间
分别记录药物组和阴性组动物的死亡情况,实验周期
最长为60天。计算生命延长率%=(药物组平均生
存时间/阴性组平均生存时间-1)×100%。
1.2.3 陌上菜及复方提取物对Lewis肺癌移植瘤
的影响 将处于对数生长期的Lewis细胞用0.25%
的胰蛋白酶消化脱壁后,终止消化,加入RPMI1640
培养液,吹打细胞制成悬液,1 000r/min离心5min,
Hanks液洗涤2次,用锥虫蓝染色法计数活细胞
数。将细胞接种于 C57BL/6小鼠左前腋窝皮下
0.2ml/只(约含细胞数1×107 个),待肿瘤长大1cm
×1cm×1cm时作为种鼠供实验用。无菌剥离种鼠
肿瘤,用 Hanks液冲洗3次,清除血污、脂肪及坏
死组织,将肿瘤剪切成1mm×1mm×1mm 碎块,
Hanks液冲洗2次,按比例加入0.9%氯化钠溶液
(1g∶3ml),再在玻璃匀浆器内研磨,经80~100目
筛网过滤制成单细胞悬液,用锥虫蓝染色法计数活
细胞数并调整细胞浓度(5×106/ml)。将制备好的
单细胞悬液接种于 C57BL/6小鼠左前腋窝皮下
0.2ml/只(约含细胞数1×106 个)[5-6]并随机分组,
每组9只。复方提取物(BMZCY)高、中、低剂量组
(相当于原生药中陌上菜6、3、1.5g/kg)、陌上菜提
取物(BSC)高、中、低剂量组(相当于原生药6、3、
1.5g/kg)、ADM 组(2mg/kg)、阴性组。于接种后
第二日开始灌胃给药,ADM 组采用静脉给药,容量
为0.2ml/10g,阴性组给予等量0.9%氯化钠溶液。
除ADM 组连续给药6天,其余各组连续给药12
天。于接种后第六日开始测量肿瘤体积(V=0.5×
移植瘤长径L×移植瘤最短径W2),隔日一次,绘制
肿瘤体积生长曲线,并每周称重2次。待阴性组平
均肿瘤体积大于0.5cm3,将动物脱颈处死,剖取肿
瘤、脾、胸腺称重,计算抑瘤率、脏器指数。
2 结果
2.1 陌上菜及其复方提取物对H22肝癌腹水瘤的影响
BSC、BMZCY可抑制H22肝癌KM小鼠移植性
腹水瘤的生长,具有明显延长荷瘤小鼠生存时间,见
表1。
表1 陌上菜及其复方提取物对H22肝癌腹水瘤的影响
(n=10,珚x±s)
Table 1 Effects of BSC and BMZCY on mice hepatoma
H22ascite tumor(n=10,珚x±s)
Groups
Dosage
(g/kg)
Average survival
time(d)
Survival
extending(%)
Control - 15.5±1.1 -
BSC  12  18.4±2.5* 18.7
BSC  6  19.2±3.1** 23.9
BSC  3  18.3±3.2* 18.1
BMZCY  12  17.7±2.5* 14.2
BMZCY  6  19.8±2.9** 27.7
BMZCY  3  18.3±2.0* 18.1
ADM  0.002  21.9±1.8** 41.2
 Note:compared with the control*:P<0.05,**:P<0.01
2.2 陌上菜及复方提取物对Lewis肺癌C57BL/6
小鼠移植瘤的影响
阴性组同一时间点平均瘤体积均处于各药物组
的上方,表明药物组的肿瘤体积小于阴性组,见图
1。BSC和BMZCY对Lewis肺癌C57BL/6小鼠移
植瘤有明显的抑制作用,抑瘤率大于30%,见表2;
与阴性组比较,BSC,BMZCY对C57BL/6小鼠体重
和免疫脏器指数均无影响,而阳性药 ADM 却能减
轻动物体重、抑制胸腺指数,见图2、表3。
表2 陌上菜及其复方提取物对Lewis肺癌C57BL/6
小鼠瘤重、抑瘤率的影响(珚x±s)
Table 2 Effects of BSC and BMZCY on C57BL/6mice
Lewis lung carcinoma tumor weight and inhibitory rate(珔x±s)
Groups
Dosage
(g/kg)
Animal number
Before  After
administration administration
Tumor
weight
(g)
Inhibitory
rate
(%)
Control - 9  9  3.63±1.17  -
BSC  6  9  8  2.37±0.40*  34.7
BSC  3  9  9  2.29±0.327* 37.0
BSC  1.5  9  9  2.16±0.42*  40.5
BMZCY  6  9  8  2.26±0.60*  37.8
BMZCY  3  9  8  2.00±0.47*  44.9
BMZCY  1.5  9  9  2.35±0.61*  35.5
ADM  0.002  9  7  1.20±0.82*  66.9
 Note:compared with the control,*:P<0.01
·0221· 肿瘤防治研究2010年第37卷第11期
图1 陌上菜复方和陌上菜提取物对Lewis
肺癌C57BL/6小鼠瘤体积的影响
Figure 1 Effects of BSC and BMZCY on tumor
volume of Lewis lung carcinoma
表3 陌上菜及其复方提取物对Lewis肺癌C57BL/6
小鼠脏器指数影响(珚x±s)
Table 3 Effects of BSC and BMZCY on C57BL/6
mice Lewis lung carcinoma organ index(珚x±s)
Groups
Dosage
(g/kg)
Organ index
Spleen  Thyrum
Control - 1.02±0.20  0.19±0.05
BSC  6  0.98±0.13  0.15±0.05
BSC  3  1.19±0.28  0.20±0.05
BSC  1.5  1.31±0.23  0.18±0.06
BMZCY  6  1.04±0.10  0.14±0.04
BMZCY  3  1.03±0.23  0.12±0.06
BMZCY  1.5  0.98±0.31  0.14±0.05
ADM  0.002  0.98±0.11  0.04±0.02*
  Note:compared with the control,*P<0.01
图2 陌上菜复方和陌上菜提取物对Lewis肺癌
C57BL/6小鼠移植瘤体重的影响
Figure 2 Effects of BSC and BMZCY on weight of C57BL/6
mice beared Lewis lung tumor
3 讨论
本实验结果显示BSC、BMZCY对 H22肝癌腹
水瘤有一定的抑制作用,可延长小鼠生命周期,但延
长率小于30%;对 Lewis肺癌的影响结果显示,
BSC、BMZCY组肿瘤体积明显小于阴性组,抑瘤率
大于30%;实验结果同时表明BSC、BMZCY对应剂
量(陌上菜剂量相同)对 H22、Lewis抑制作用差异
无统计意义,且对C57BL/6小鼠的脏器指数(脾、胸
腺)无影响(P>0.05),而ADM 对小鼠胸腺有很强
的抑制作用(P<0.01)。实验期间观察到,BSC、
BMZCY组高剂量动物在给药后2h个别出现拉稀
症状,于次日症状消失,除此之外未发现小鼠其他异
常情况。而ADM组小鼠在连续给药4天出现食欲
降低、体重下降、精神不振以及死亡等症状。表明
BSC、BMZCY在抑制肿瘤的同时未表现出对荷瘤
小鼠的明显不良反应。
癌症是严重威胁人类生命健康的疾病。因此,
寻找具有较强抗肿瘤作用又安全的新药已经成为全
世界关注的课题[7-8]。植物来源的抗肿瘤药物在化
学结构方面具有多样性,同时在作用机制方面也具
有多样性。因此,从植物中寻找作用于各种靶点的
抗肿瘤活性物质有巨大的潜力,寻找这一类植物药
成为抗肿瘤药研究热点[9-10]。由陌上菜组成的方剂
目前在临床用于治疗淋巴瘤、肝癌、肺癌、食管癌有
较好的疗效,早期的肿瘤患者用药后对缩小肿瘤体
积,防止肿瘤的扩散恶化有明显疗效;对中晚期肿瘤
患者,用药后对于减轻由于疾病带来的各种临床症
状,改善患者的生活质量,延长生命周期均有很好的
疗效。目前对陌上菜的研究还处于基础研究阶段,
还需我们做进一步的研究探索其能否对抗更多肿
瘤,抗肿瘤作用机制以及有效成分的研究等。
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[编辑校对:周永红]
·1221·肿瘤防治研究2010年第37卷第11期