全 文 ：植物生理学通讯 第 40卷 第 5期，2004年 10月 591
尾叶桉叶片的离体培养和植株再生
关亚丽 黄敏仁* 王明庥
南京林业大学林木遗传和基因工程重点实验室，南京 210037
In vitro Culture and Plantlet Regeneration from Leaves of Eucalyptus urophylia
GUAN Ya-Li, HUANG Min-Ren*, WANG Ming-Xiu
Key Laboratory of Forest Genetic and Gene Engineering, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037
收稿 2004-01-30 修定 　 2004-05-08
* 通讯作者(E-mail: mrhuang@njfu.edu.cn,Tel：025-
85427412)。
1 植物名称 尾叶桉(Eucalyptus urophylia)。
2 材料类别 无菌萌发种子苗的幼叶片。
3 培养条件 萌发培养基：(1)MS+3% 蔗糖。诱导
分化培养基：(2)MS+6-BA 0.8~1.5 mg·L-1(单位下
同)+KT 0.5+NAA 0.1+3% 蔗糖。丛生芽增殖和生
长培养基：(3)MS+6-BA 0.2+NAA 0.02+3% 蔗糖。
生根培养基：(4)1/2MS+NAA 0.5+2% 蔗糖；(5)
MS+NAA 0.5+2% 蔗糖；(6)改良 H+NAA 0.5+2%
蔗糖。以上培养基均加入 0.65% 琼脂，pH 5.8。
培养温度(25±2)℃，光照 16 h ·d -1，光照度
1 900~2 000 lx。
4 生长与分化情况
4.1 无菌萌发 用纱布包好种子，经自来水冲洗后，
无菌条件下用75%酒精浸泡 30 s，再用 0.1% 升
汞消毒3~4 min，取出后无菌水冲洗3~4 次，消
毒滤纸吸干表面水分，然后将种子接种于培养基
(1)上。20 d后种子开始萌发, 30 d时选取长势良
好、发育正常的单株在培养基(3)上增殖生长后，
用培养基(6)生根建立试管无性系植株。
4.2 丛生芽的诱导 从无性系植株自上而下选取第
3~6 个叶片，用手术刀横切成 3 部分，近轴面朝
上植入培养基(2)中，暗培养10 d 后移至光下培
养。接种 14 d 后叶片边缘开始皱缩，21 d 后叶
迅速膨大，在叶脉切口处出现一些红色或绿色的
芽点，随后发育成芽。60 d后统计，在含KT 0.5、
NAA 0.1 的 MS 培养基中，随着 6-BA 浓度的提高
(0.8、1.0、1.5)，芽的发生率先增加后减小，分
别为 33.3%、43.1%、13.4%。由上可见，含 6-
BA 1.0、KT 0.5、NAA 0.1 的 MS 培养基较适宜
于诱导尾叶桉叶片产生不定芽。
4.3 丛生芽的增殖 60 d后，将培养基(2)中产生的
不定芽丛切下，转入培养基(3)中进行增殖及生长
培养，30 d 的增殖系数可达到4。小芽长至2~3
c m 后，进行生根诱导。
4.4 诱导生根 切取3 cm左右的不定芽分别接种于
培养基(4)~(6)上，9 d后，培养基(4)和(6)上的芽
苗开始生根，30 d 后，培养基(5)上的芽苗有少
量出现1 条不定根，而(4)和(6)上的芽出现3~4条
根，根系发达，因此低盐浓度的培养基诱导尾叶
桉生根的效果较好。统计分析显示，培养基(4)及
(6)生根诱导率分别为 92% 和 100%。
4.5 试管苗移栽 选择生长健壮、根系发达的生根
苗进行移栽。移栽前在室内揭开封口膜炼苗2~3 d，
然后小心取出，洗去基部培养基，栽于用山泥、
火烧土和河沙等量混合的基质中，淋透水，覆盖
薄膜保湿，防风，遮荫，成活率可达 80% 以上。
5 意义与进展 桉树是桃金娘科桉树属的用材树种，
原产澳大利亚及邻近岛屿。因速生丰产、用途广
泛而被广为引种，与杨树及松树一起誉为世界三
大速生造林树种。但在我国桉树人工林中青枯病
时有发生，尾叶桉是易感病种类之一，严重时发
病率达 30%~ 4 0 %。目前，在桉树青枯病难以用
化学方法防治的情况下，培育抗病品种是急需解
决的问题。我们以叶片为外植体，建立了尾叶桉
叶盘再生系统，从叶片直接诱导产生不定芽，这
可避免通过愈伤组织分化不定芽时产生的变异。
尾叶桉叶片直接诱导产生不定芽尚未见报道。