全 文 ：第 21 卷　第 1 期　　　　　　　　　　　　　植　　　物　　　研　　　究 2001年　1 月
Vol.21　No.1　　　　　　　　　　　BULLETIN OF BOTANICAL RESEARCH Jan., 　2001
高效液相色谱法测定红景天甙含量方法的研究
王　洋1　张　璞2　于　涛1　王化田1　阎秀峰1＊＊
(1.东北林业大学森林植物生态学开放研究实验室 ,哈尔滨　150040)
(2.沈阳药科大学基础部有机教研室 ,沈阳　110015)
摘　要　以高效液相色谱法作为红景天甙含量检测方法 ,系统探讨了用超声法从高山红景天根中
提取红景天甙用以制备分析样品的方法 。确定的最佳提取条件为:以蒸馏水为提取溶剂在 60℃
下超声提取 40 min。
关键词　高山红景天;红景天甙;高效液相色谱法;超声提取法
STUDYON THE METHOD FOR DETERMINATION
OF SALIDROSIDE BY HPLC
WANG Yang
1　ZHANG Pu2　YU Tao1　WANG Hua-tian1　YAN Xiu-feng1＊＊
(1.Open Research Laboratory of Forest P lant Ecology , Nor theast Forestry University ,Harbin 150040)
(2.Division of Organic Chemistry , Basic Department , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110015)
Abstract　The determination of salidroside in roots of Rhodiola sachalinensis by HPLC were stud-
ied.The ext racted conditions of salidroside using ult rasonic ex t raction method from Rhodiola sachali-
nensis to prepare assay sample were systematacially discussed.The optimal condit ions w ere distilled
water as the solvent , 60℃ as the ex tracted temperature and 30 min as the ext racted time.
Key words　Rhodiola sachalinensis;Salidroside;HPLC;Ultrasonic ex traction method
　　高山红景天(Rhodiola sachalinensis)为景天科
红景天属的多年生草本植物 ,具有很高的药用价值 。
其免疫作用强于人参和刺五加而无人参的过度兴奋
和刺五加的致便秘作用 ,具有抗疲劳 、抗衰老 、抗缺
氧 、抗辐射 、兴奋智力之功效 ,可治疗多种疾病 ,有巨
大的经济价值和广阔的开发前景[ 1～ 3] ,因而也成为
研究者们的关注热点[ 4 ～ 7] 。红景天甙(Salidroside ,
C14H20O7)是高山红景天的主要药用活性成分[ 1] 。
近年来利用高效液相色谱法测定红景天甙含量的方
法已有报导[ 8 ～ 11] ,但所采用的样品提取方法均存在
提取时间长且红景天甙不易提取完全的问题 。本文
以高效液相色谱法作为红景天甙含量检测方法 ,探
讨了超声法提取高山红景天根中红景天甙的新方
法 ,使红景天甙含量分析更简便 、快速。
1　仪器和材料
仪器:JASCO高效液相色谱仪 ,975型紫外检测
器;Pharmacia 4060型紫外可见分光光度计;Biofuge
22R高速冷冻离心机;AB104 型电子天平;Multi-
tempⅢ型恒温循环水浴;B-321型超声波清洗器。
试剂:乙腈为色谱纯 ,乙醇为分析纯 。
标准品:红景天甙标准品购于中国生物制品和
药品检定所。
材料:高山红景天根采于吉林省长白山 ,80℃烘
干至恒重 ,粉碎至 60目 ,干燥器中保存备用 。
第一作者简介:王洋(1971-),女 ,博士 ,从事植物化学研究。　国家自然科学基金资助项目(No.39700013)　＊＊通讯作者(Author for correspondence)　收稿日期:2000-5-18
2　红景天甙含量的高效液相色谱分析
2.1　色谱条件
色谱柱:HPLC Technology 公司的 Techsphere
ODS柱(4.6 mm×25 cm ,5 μm);流速:1 ml / min;
进样量:10μl。
2.1.1　检测波长的确定
于 200 ～ 400nm 对红景天甙标准品的紫外吸收
进行了波长扫描 , 红景天甙的最大吸收波长为
280nm ,因此选择 280nm 作为红景天甙的紫外检测
波长 。
2.1.2　流动相的选择
在波长 280nm 、进样量 10μl 、流速 1 m l / min的
条件下 ,分别以不同比例的乙腈/水为流动相分析红
景天甙标准溶液 。结果表明 ,流动相乙腈/水为 1/9
时红景天甙的保留时间为 6.3 min ,而且峰形良好 。
在此条件下对红景天甙提取样品进行分析表明 ,红
景天甙与其它组分分离良好。因此 ,选择乙腈/水
(1/9)作为红景天甙含量测定的流动相 。
2.2　标准溶液的配制
精密称取红景天甙标准品 5 mg 于 10 ml的容
量瓶中 ,以乙腈/水(1/9)为溶剂 ,超声溶解并定容至
刻度 ,摇匀备用 。
2.3　标准曲线的绘制
分别精密吸取红景天甙标准溶液 0.25 ml、0.5
ml、1.0 m l、2.0 ml 、2.5 ml于 5 ml容量瓶中 ,以乙腈
/水(1/9)为溶剂定容 ,摇匀 。按照上述确定的色谱
条件 ,分别取稀释后样品及原标准溶液进样分析 ,每
样重复测定 3 次 ,取峰面积的平均值。峰面积(Y)
与红景天甙浓度(X / mg/ml)的线性回归方程为:
　Y=2019845.1183X-8409.7917 ,相关系数 R=
0.9999。在该条件下 ,红景天甙浓度的线性范围为
0.025 mg / ml ～ 0.50 mg / ml。
3　分析样品的制备
3.1　超声法提取红景天甙
选择乙醇浓度 、提取时间及提取温度进行 3 因
素11水平 U11(113)均匀试验设计 ,以筛选最佳提取
条件。每个试验均精密称取红景天根粉 1 g 于 50
ml容量瓶 ,加入 40 ml相应浓度的乙醇在相应温度
条件下超声提取相应时间 ,而后冷却至室温 ,用对应
浓度的乙醇定容至刻度 ,在上述选定的条件下用高
效液相色谱分析红景天甙含量 。均匀设计试验条件
及结果见表 1。
对试验结果进行逐步回归分析(引入变量 F -
检验值 F1=0.05 ,剔除变量 F -检验值 F2 =0.05),
得如下回归方程:
Y=0.6304276-0.0029523X1 +0.0130434X2
+0.0015561X3-0.0000169X1X2
-0.0000969X1X3-0.0000162X22
-0.0000089X2X3
其中 X1:乙醇浓度 / %
X2:提取温度 / ℃
X3:提取时间 / min
回归方程的 F =61.23>F(0.05)=19.37 , 回归
方程显著 , 有意义 。回 归 方程 的 复相 关 系数 R
=0.9980 ,残差标准差 s=0.17 ,残差平方和 SE=
0.05 ,本方程对试验结果拟合较好(表 1)。
对影响红景天甙提取率的各因素进行逐步回归
模型分析 ,得到了各因素对红景天甙提取率影响的
变化曲线图(图 1)。从图 1可以看出 ,随着乙醇浓
度的提高 ,溶剂对红景天甙的溶出能力逐渐降低 ,蒸
馏水为红景天甙的最佳提取溶剂。红景天甙的提取
率随提取温度的提高而增加 , 但当提取温度高于
45℃以上时 ,红景天甙的提取率增加很少 ,说明此时
已趋于最佳提取条件 ,最佳提取温度为 60℃。红景
天甙的提取率随提取时间增加基本呈降低的趋势 ,
提取时间在 20 min ～ 60 min的范围内红景天甙的
提取率基本保持稳定 ,根据回归方程计算最佳提取
时间为 42.8 min ,因此选择 40 min作为提取时间。
3.2　精密度
精密称取 5份高山红景天根粉 ,每份 1 g ,按以
上确定的提取方法制备分析样品 ,并在选定的色谱
条件下分析红景天甙含量 ,测得高山红景天甙含量
为 1.0794%,RSD为 3.52%。
3.3　回收率的测定
精密称取 3份高山红景天根粉 ,每份 0.5 g ,分
别加入红景天甙标准品 5 mg ,按确定的提取方法制
备分析样品 ,并在上述色谱条件下进样分析 ,测得平
均回收率 93.37%。
4　结果与讨论
确定了用高效液相色谱法分析红景天甙含量
时 ,制备分析样品的最佳提取条件:以蒸馏水为提取
溶剂在 60℃下超声提取 40 min。
将利用本方法提取红景天甙所得的分析样品与
索氏提取法制备的分析样品进行了红景天甙含量测
定结果的对比 ,结果表明本方法提取的红景天甙含
量略高于索氏提取法 ,但差别不显著。这亦说明用
本提取方法制备的红景天甙含量分析样品 ,不仅简
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便 、快速 ,而且可靠。
表 1 U11(113)均匀设计试验条件及结果表(偏差值:0.1847)
Table 1　U11(113)Experimental conditions and results by uniform design(deviation:0.1847)
试验号
No.
乙醇浓度/ %
Concentra tion
of alcohol
提取温度/ ℃
Extracted
temperature
提取时间/ min
Extracted time
红景天甙提取率/ %
Yield of
salidroside
拟合值
Fitted value
残差值
Residual value
1 0 60 100 1.0339 1.0333 0.0006
2 30 30 60 0.8806 0.8828 -0.0022
3 50 20 200 0.6841 0.6885 -0.0044
4 70 55 40 0.8254 0.8263 -0.0009
5 80 15 140 0.6898 0.6810 0.0088
6 100 40 20 0.6732 0.6711 0.0021
7 40 10 80 0.7086 0.7162 -0.0076
8 20 25 120 0.8783 0.8647 0.0136
9 90 35 160 0.7290 0.7388 -0.0098
10 10 45 180 0.8566 0.8638 -0.0072
11 60 50 220 0.6984 0.6912 0.0072
图 1 　各因素对红景天甙提取率的影响
Fig.1　 Influence on the yield of salidroside by different facto rs
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