全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ２０１６， ４３（１）： １６８ － １７２ ＤＯＩ： １０􀆰 １３８０２ ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｚｗｂｈｘｂ． ２０１６􀆰 ０１􀆰 ０２５
基金项目：北京市农林科学院青年科研基金（ＱＮＪＪ ２０１３２０）
∗通讯作者（Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）， Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｚｈｏｕｙｉｎｇ１６＿２０１３＠ １６３． ｃｏｍ
收稿日期： ２０１５ － ０９ － ２０
北京地区茄子感染番茄褪绿病毒的分子鉴定
周　 莹∗　 黄金宝　 乔广行　 罗　 晨　 李明远
（北京市农林科学院植物保护环境保护研究所， 北京 １０００９７）
摘要： 为明确北京地区茄子感染番茄褪绿病毒（Ｔｏｍａｔｏ ｃｈｌｏｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＴｏＣＶ）的情况，于 ２０１５ 年 ３—
６ 月收集了 １０ 份疑似感染 ＴｏＣＶ 的设施茄子样品，通过 ＰＣＲ 分子鉴定法进行检测，并进一步对扩
增阳性样品 ＴｏＣＶ 的 ＣＰ 基因采用邻接法进行了系统进化分析。 结果表明，１０ 个检测样品中有 ４
个扩增得到约 ４６３ ｂｐ 的特异条带，经测序与 ＧｅｎＢａｎｋ 中 ＴｏＣＶ 序列相似性达到 ９９􀆰 ０％以上，表明
这 ４ 个样品均携带有该病毒，检出率为 ４０％ ；ＴｏＣＶ 茄子分离物的 ＣＰ 基因序列大小为 ７７４ ｂｐ，
ＧｅｎＢａｎｋ 登录号为 ＫＴ７５１００８，与 ＴｏＣＶ北京番茄分离物（ＫＣ３１１３７５）同源性最高，达到 ９９􀆰 ９％ ，确认
该序列为 ＴｏＣＶ 片段；系统进化树显示，ＴｏＣＶ 茄子分离物与 ＴｏＣＶ 日本分离物（ＡＢ５１３４４３）处于同
一分支，具有密切的亲缘关系，表明不同国家 ＴｏＣＶ分离物之间的亲缘关系与地理距离具有一定的
相关性。
关键词： 番茄褪绿病毒； 分子鉴定； 茄子分离物； 系统进化
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｍａｔｏ ｃｈｌｏｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ｏｎ ｅｇｇｐｌａｎｔｓ ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ
Ｚｈｏｕ Ｙｉｎｇ∗ 　 Ｈｕａｎｇ Ｊｉｎｂａｏ　 Ｑｉａｏ Ｇｕａｎｇｈａｎｇ　 Ｌｕｏ Ｃｈｅｎ　 Ｌｉ Ｍｉｎｇｙｕａｎ
（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｂｅｉｊｉｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ
Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９７， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ Ｔｏｍａｔｏ ｃｈｌｏｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ （ＴｏＣＶ） ｆｒｏｍ ｅｇｇｐｌａｎｔｓ ｉｎ
Ｂｅｉｊｉｎｇ， ｔｅｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｅｇｇｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｉｎ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅｓ ｆｒｏｍ Ｍａｒｃｈ ｔｏ Ｊｕｎｅ ｉｎ ２０１５． Ｔｈｅｓｅ
ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＰＣＲ ａｎｄ ｔｈｅ ＣＰ ｇｅｎｅ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃
ｊｏｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｆｏｕｒ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｏｒ ＴｏＣＶ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
ｗａｓ ４０％ ． Ｔｈｅ ＣＰ ｇｅｎｅ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ， ｗｈｉｃｈ ｓｈａｒｅｄ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ９９􀆰 ９％
ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｗｉｔｈ ａｎ ｉｓｏｌａｔｅ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｆｒｏｍ Ｂｅｉｊｉｎｇ （ＫＣ３１１３７５）． Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｅｓ ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ｏｆ ｅｇｇｐｌａｎｔ （ＫＴ７５１００８） ｗａｓ ｃｌｏｓｅｒ ｔｏ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅ ｆｒｏｍ Ｊａｐａｎ （ＡＢ５１３４４３）， ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ
ａ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｔｏｍａｔｏ ｃｈｌｏｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ （ ＴｏＣＶ ）； ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ； ｉｓｏｌａｔｅ ｏｆ ｅｇｇｐｌａｎｔ；
ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ
　 　 番茄褪绿病毒（Ｔｏｍａｔｏ ｃｈｌｏｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＴｏＣＶ）隶
属于长线形病毒科毛形病毒属 Ｃｒｉｎｉｖｉｒｕｓ。 ＴｏＣＶ 引
起的植物早期症状表现为脉间褪绿黄化，与生理性
缺素症状很类似，常被认为是营养元素缺乏所致，因
此在早期很容易被误诊；病害发展到后期，叶片除严
重褪绿黄化外还出现坏死枯斑，严重影响植株生长，
造成减产。 该病毒病于 １９９８ 年在美国佛罗里达州
首次被报道（Ｗｉｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ． ，１９９８ａ），随后在西班牙
（Ｎａｖａｓ⁃Ｃａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ． ，２０００）、葡萄牙（Ｌｏｕｒｏ ｅｔ ａｌ． ，
２０００）、意大利（Ａｃｃｏｔｔｏ ｅｔ ａｌ． ，２００１）、希腊（Ｄｏｖａｓ ｅｔ
ａｌ． ，２００２）、法国（Ｄａｌｍｏｎ ｅｔ ａｌ． ，２００５）、巴西（Ｆｒｅｉｔａｓ
ｅｔ ａｌ． ，２０１２）等国家相继报道了 ＴｏＣＶ的发生。 我国
ＴｏＣＶ 的发生首次报道于 ２０１３ 年 （ Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ． ，
２０１３），目前北京（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ． ，２０１３）、山东（Ｋａｒｗｉｔｈａ
ｅｔ ａｌ． ，２０１４）、南京（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ． ，２０１４）、河北（孙国珍
等，２０１５）以及天津地区（高利利等，２０１５）番茄、辣
椒作物上已有 ＴｏＣＶ 的发生，造成减产和果实商品
性下降，引起严重的经济损失（刘永光等，２０１４）。
ＴｏＣＶ传播介体有烟粉虱 Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ（包括
Ａ、Ｂ和 Ｑ生物型）、温室白粉虱 Ｔｒｉａｌｅｕｒｏｄｅｓ ｖａｐｏｒａｒｉ⁃
ｏｒｕｍ和纹翅粉虱 Ｔｒｉａｌｅｕｒｏｄｅｓ ａｂｕｔｉｌｏｎｅａ等（Ｗｉｓｌｅｒ ｅｔ
ａｌ． ，１９９８ｂ；Ｎａｖａｓ⁃Ｃａｓｔｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ． ，２０００），不通过病毒
汁液摩擦传播。 ＴｏＣＶ 寄主范围有茄科（主要包括
番茄、辣椒、烟草、矮牵牛、酸浆等）、番杏科、苋科、
夹竹桃科、藜科、菊科和蓝雪科等植物 （Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ
ａｌ． ，２００６；Ｗｉｎｔｅｒｍａｎｔｅｌ ＆ Ｗｉｓｌｅｒ，２００６），Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．
（２０１５）也报道了茄子 Ｓｏｌａｎｕｍ ｍｅｌｏｎｇｅｎａ Ｌ．是 ＴｏＣＶ
的自然寄主，验证了 ＴｏＣＶ 可以从感病番茄通过烟
粉虱传播到茄子上，并能表现出 ＴｏＣＶ 的典型症状。
茄子是设施栽培中的重要蔬菜作物，在我国蔬菜生
产中占有重要的地位。 随着近几年我国设施农业的
快速发展，特别是北方保护地设施茄子栽培面积的
不断扩大，加之重茬连作及设施栽培管理措施不当，
导致设施茄子生产中出现了许多新问题亟待解决，
尤其是茄子病毒病发生严重，已成为生产中的重要
限制因子。
目前设施茄子对 ＴｏＣＶ的感染及携带情况尚不
明确。 因此，为明晰当前北京地区设施茄子感染
ＴｏＣＶ的情况，本研究于 ２０１５ 年 ３—６ 月收集了疑似
感染 ＴｏＣＶ的设施茄子样品进行 ＲＴ⁃ＰＣＲ分子鉴定，
并分析 ＴｏＣＶ茄子分离物与其它分离物之间的亲缘
关系，以期在了解不同寄主感染 ＴｏＣＶ 的情况以及
不同寄主分离物亲缘关系的基础上对 ＴｏＣＶ 的扩散
风险进行评估，为番茄褪绿病害的综合防治提供基
础数据。
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试植物：在北京平谷区马昌营镇和通州区张
家湾镇设施茄子大棚中观察到大量茄子叶片出现褪
绿症状，经初步调查表现该症状的植株占到 ４０％ ～
５０％ ，同时大棚中也发现有粉虱的存在。 采集疑似
感染 ＴｏＣＶ的茄子叶片样品共 １０ 份，保存在 － ８０℃
冰箱待用。 选取北京海淀区番茄病样为阳性对照，
经测序确认被 ＴｏＣＶ 感染；未表现褪绿症状且经检
测为 ＴｏＣＶ阴性的健康茄子样品为阴性对照。
试剂及仪器：植物 ＲＮＡ 提取试剂盒、一步法
ＲＴ⁃ＰＣＲ试剂盒、琼脂糖凝胶 ＤＮＡ 纯化回收试剂
盒、载体 ｐＭＤ１８⁃Ｔ、连接酶、大肠杆菌 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
ＤＨ５α，宝生物工程（大连）有限公司；其余试剂均为
国产分析纯。 ＰＣＲ 仪、Ｇｅｌ Ｄｏｃ ＸＲ 凝胶成像系统、
ＰｏｗｅｒＰａｃ系列电泳仪，美国 Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ公司。
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 茄子感染 ＴｏＣＶ的症状观察
为明确设施茄子感染 ＴｏＣＶ 后表现症状的发生
发展规律，于 ２０１５年 １—９月于平谷区马昌营镇设施
大棚中设点观察茄子生长周期中 ＴｏＣＶ 症状的发展
过程，茄子于 １ 月开始播种，分别于苗期、开花期、结
果期进行 ＴｏＣＶ 症状的观察。 设施大棚采用常规栽
培管理，整个生长季棚室中有少到中量烟粉虱存在。
１􀆰 ２􀆰 ２ 样品 ＲＮＡ的提取及 ＲＴ⁃ＰＣＲ检测
提取 １０ 个待测茄子样品及 ２ 个对照样品的总
ＲＮＡ，每个样品称取 １００ ｍｇ，使用植物 ＲＮＡ提取试剂
盒，参照说明书提取各样品的总 ＲＮＡ。 采用 ＴｏＣＶ检
测通用引物 Ｔｏｃ５：５′⁃ＧＧＴＴＴＧＧＡＴＴＴＴＧＧＴＡＣＴＡＣＡＴ⁃
ＴＣＡＧＴ⁃３′和 Ｔｏｃ６：５′⁃ＡＡＡＣＴＧＣＣＴＧＣＡＴＧＡＡＡＡＧＴＣ⁃
ＴＣ⁃３′（Ｄｏｖａｓ ｅｔ ａｌ． ，２００２）对供试样品进行ＲＴ⁃ＰＣＲ检
测，确认样品是否携带 ＴｏＣＶ，阳性样品预期 ＰＣＲ 扩
增产物大小为 ４６３ ｂｐ。 利用引物 Ｔｏｐ９：５′⁃ＧＡＡＧＴ⁃
ＧＡＧＡＧＡＴＴＴＣＴＴＧＡＧＧ⁃３′和 ＴｏＣＰｍ：５′⁃ＣＧＡＧＣＡＧ ＡＧ⁃
ＡＴＣＣＴＣＴＴ⁃３′（Ｊａｃｑｕｅｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ． ，２００９）扩增外壳蛋
白（ｃｏａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＰ）基因，预期 ＰＣＲ扩增产物大小为
８８３ ｂｐ。 所用引物均由生工生物工程（上海）股份有
限公司合成。
按照试剂盒说明进行一步法 ＲＴ⁃ＰＣＲ，ＲＴ⁃ＰＣＲ
反应体系为：２ × １ Ｓｔｅｐ Ｂｕｆｆｅｒ 反应缓冲液 ２５ μＬ、
ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ １ Ｓｔｅｐ Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｘ ２ μＬ、２０ μｍｏｌ ／ Ｌ上下
游引物各 １ μＬ、总 ＲＮＡ １ μＬ，加 ＲＮａｓｅ Ｆｒｅｅ Ｈ２Ｏ至
总体积为 ５０ μＬ。 充分混匀后于 ＰＣＲ 仪上进行反
应。 ＰＣＲ 反应程序为：５０℃ ３０ ｍｉｎ； ９４℃ ２ ｍｉｎ；
９４℃变性 ４５ ｓ， ５８℃退火 ３０ ｓ，７２℃延伸 ３０ ｓ，３０ 个
循环；７２℃延伸 ５ ｍｉｎ。 ＰＣＲ反应以感染 ＴｏＣＶ番茄
样品为阳性对照，以健康茄子样品为阴性对照。
１􀆰 ２􀆰 ３ ＰＣＲ扩增产物的克隆测序及分析
将 ＰＣＲ 扩增产物回收克隆到载体 ｐＭＤ１８⁃Ｔ
上，筛选阳性克隆委托博迈德科技发展有限公司进
行测序。 所得序列利用 ＯＲＦ Ｆｉｎｄｅｒ 软件预测分析
其开放阅读框；以 ＤＮＡＭＡＮ ６􀆰 ０ 软件对所得序列进
９６１１ 期 周　 莹等： 北京地区茄子感染番茄褪绿病毒的分子鉴定
行比较分析；为了分析 ＴｏＣＶ 茄子分离物系统进化
关系及分类地位，选取国内外不同地区有代表性的
ＴｏＣＶ番茄分离物，基于 ＴｏＣＶ ＣＰ 基因序列，采用
ＭＥＧＡ ５􀆰 ０５ 软件以邻接法构建系统发育进化树，各
分支置信度（ｂｏｏｔｓｔｒａｐ）进行 １ ０００ 次重复分析。
２ 结果与分析
２􀆰 １ 感染 ＴｏＣＶ的茄子植株田间症状
经观察，茄子于苗期未表现明显症状，开花期开
始叶片逐渐显现褪绿症状，被感染的茄子植株表现
出与感病番茄相似的症状，下部叶片首先表现脉间
褪绿变黄（图 １⁃Ａ），类似于生理性缺素，逐渐从下部
叶片扩展到上部叶片；随着症状的发展，除了叶脉保
持绿色外，整个叶片呈黄色，同时叶片变脆，后期出
现坏死斑点等典型的 ＴｏＣＶ 症状（图 １⁃Ｂ），随着枯
黄的叶片逐渐落叶，整个植株长势越来越弱，果实营
养供应受到影响。 而健康茄子植株叶片颜色翠绿正
常（图 １⁃Ｃ）。
图 １ 北京地区设施茄子感染 ＴｏＣＶ后的症状表现
Ｆｉｇ． １ Ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ＴｏＣＶ ｏｎ ｅｇｇｐｌａｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ
Ａ： 茄子感染 ＴｏＣＶ的早期症状； Ｂ： 茄子感染 ＴｏＣＶ的后期症状； Ｃ： 健康茄子植株。 Ａ： Ｔｈｅ ｅａｒｌｙ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｅｇｇｐｌａｎｔ
ｐｌａｎｔｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ＴｏＣＶ； Ｂ： ｔｈｅ ｌａｔｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｅｇｇｐｌａｎｔ ｐｌａｎｔｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ＴｏＣＶ； Ｃ： ｈｅａｌｔｈｙ ｅｇｇｐｌａｎｔ ｐｌａｎｔｓ．
　
２􀆰 ２ 供试茄子样品中 ＴｏＣＶ的检测
用 Ｔｏｃ５ ／ Ｔｏｃ６ 引物对供试 １０ 个样品进行了 ＲＴ⁃
ＰＣＲ检测，其中 ４ 个茄子样品扩增得到约 ４６３ ｂｐ 的
特异条带（图 ２），经测序后比对，扩增出的特异条带
序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中的 ＴｏＣＶ 序列相似性均达到
９９􀆰 ０％以上，表明所扩增到的基因片段属于 ＴｏＣＶ，
所测样品中 ＴｏＣＶ的检出率为 ４０％ 。
图 ２ 利用 ＴｏＣＶ特异性引物对北京地区
设施茄子样品的 ＲＴ⁃ＰＣＲ检测结果
Ｆｉｇ． ２ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＲＴ⁃ＰＣＲ ｏｆ ＴｏＣＶ ｏｎ ｅｇｇｐｌａｎｔｓ
ｉｎ ｔｈｅ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ
Ｍ： ＤＬ２０００； １ ～ １０： 茄子样品； １１： 阳性对照； １２：
阴性对照。 Ｍ： ＤＬ２０００； １ － １０： ｅｇｇｐｌａｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ； １１：
ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ； １２： ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ．
　
２􀆰 ３ ＴｏＣＶ茄子分离物 ＣＰ基因的扩增结果
选取 ＴｏＣＶ 检测为阳性的 ２ 个茄子样品，采用
Ｔｏｐ９（ ＋ ） ／ ＴｏＣＰｍ（ － ）引物扩增其 ＣＰ 基因，得到
８８３ ｂｐ的目的条带（图 ３），将条带进行回收、连接转
化，测序所得序列经开放阅读框软件分析获得 ７７４
ｂｐ 的 ＣＰ 基因， ２ 个样品的 ＣＰ 基因同源性为
１００％ ，提交至 ＧｅｎＢａｎｋ获得登录号为 ＫＴ７５１００８。
图 ３ 北京地区设施茄子样品 ＴｏＣＶ ＣＰ
基因的扩增结果
Ｆｉｇ． ３ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＰ ｇｅｎｅ ｏｆ ＴｏＣＶ ｆｒｏｍ ｅｇｇｐｌａｎｔｓ
ｉｎ ｔｈｅ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ
Ｍ： ＤＬ２０００； １ ～ ２： 茄子阳性样品； ３： 阳性对照；
４： 阴性对照。 Ｍ： ＤＬ２０００； １ － ２： ｅｇｇｐｌａｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ；
３： ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ； ４： ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ．
　
２􀆰 ４ ＴｏＣＶ ＣＰ基因序列的进化分析
将获得的 ＴｏＣＶ 茄子分离物 ＣＰ 基因序列进行
ＢＬＡＳＴ Ｎ检索，与 ＴｏＣＶ北京番茄分离物（ＫＣ３１１３７５）
０７１ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
同源性最高，达到 ９９􀆰 ９％，确认该序列为 ＴｏＣＶ片段。
系统发育进化树显示，北京地区设施茄子样品的
ＴｏＣＶ序列与北京番茄 ＴｏＣＶ 分离物处于同一分支，
并且二者与 ＴｏＣＶ日本分离物（ＡＢ５１３４４３）处于同一
大支，亲缘关系较近，而且进化树分支与国家地理位
置具有一定的相关性，我国 ＴｏＣＶ 分离物与希腊、以
色列、土耳其、黎巴嫩等国 ＴｏＣＶ 分离物的亲缘关系
要近于远在北美洲的美国 ＴｏＣＶ分离物（图 ４）。
图 ４ 基于 ＣＰ基因序列构建的 ＴｏＣＶ茄子分离物及其相关分离物的系统进化树
Ｆｉｇ． ４ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＣＰ ｇｅｎｅ ｏｆ ＴｏＣＶ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｎ ｅｇｇｐｌａｎｔｓ
　
３ 讨论
番茄褪绿病毒是北方地区蔬菜上继番茄黄化曲
叶病毒（Ｔｏｍａｔｏ ｙｅｌｌｏｗ ｌｅａｆ ｃｕｒｌ ｖｉｒｕｓ，ＴＹＬＣＶ）之后另
一种重要的病毒。 该病毒具有广泛的寄主范围，可
危害包括番茄、辣椒、烟草等重要的蔬菜、经济作物
以及一些花卉、杂草，而且多种粉虱均是其传播介
体，这为 ＴｏＣＶ 的传播和流行提供了有利条件。 目
前，ＴｏＣＶ在我国蔬菜主产地山东番茄种植区已呈暴
发状态（刘永光等，２０１４），河北省部分地区番茄上
ＴｏＣＶ普遍发生（孙国珍等，２０１５），北京地区番茄受
害地块发病率普遍在 ５０％以上（周涛等，２０１４），天
津地区番茄种植区 ＴｏＣＶ 零星发生 （高利利等，
２０１５）。 本课题组继证实茄子为 ＴｏＣＶ 自然寄主之
后（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ． ，２０１５），对北京地区设施茄子感染
ＴｏＣＶ的情况进行了分子检测，结果表明，平谷区马
昌营镇与通州区张家湾镇 ２ 地设施茄子上已有
ＴｏＣＶ的发生，检出率达 ４０％ ；调查中也发现采集地
设施番茄上 ＴｏＣＶ 普遍发生，设施大棚中均观察到
少到中量的烟粉虱，因此关注 ＴｏＣＶ 侵染番茄的同
时，应警惕茄子上该病毒的发生与扩展，避免 ＴｏＣＶ
在多种作物上的大发生。
根据 ＴｏＣＶ茄子分离物 ＣＰ 基因构建的系统进
化树显示，北京地区设施茄子样品的 ＴｏＣＶ 序列与
北京番茄 ＴｏＣＶ分离物（ＫＣ３１１３７５）处于同一分支，
前期的虫传试验证明番茄上的 ＴｏＣＶ 可以经烟粉虱
传播到茄子上致病（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ． ，２０１５），结合田间观
察结果以及不同寄主上 ＴｏＣＶ 最早发生时间，２０１３
年北京地区番茄上检测到 ＴｏＣＶ，随后 ２０１４ 年该地
区茄子上也发现了 ＴｏＣＶ，综合以上情况可初步判
断，茄子感染 ＴｏＣＶ 很可能由感病番茄通过烟粉虱
传播而引起，但 ＴｏＣＶ 是否可以从感病茄子经由烟
粉虱传播到番茄上致病还有待进一步研究。 ＴｏＣＶ
北京分离物与 ＴｏＣＶ 日本分离物（ＡＢ５１３４４３）处于
同一大支，亲缘关系较近，而我国 ＴｏＣＶ 分离物与希
腊、以色列、土耳其、黎巴嫩等国 ＴｏＣＶ 分离物的亲
缘关系要近于美国 ＴｏＣＶ 分离物，表明进化树分支
与国家地理位置之间具有一定的相关性，这进一步
说明 ＴｏＣＶ可能通过粉虱或种苗调运在临近国家间
传播，因此粉虱防控及种苗检测是控制该病害的重
要环节。
当前 ＴｏＣＶ在我国有局部发生到大面积普遍发
生的势头，而我国对于 ＴｏＣＶ 的研究仍处于起步阶
段，亟需开展相关工作控制该病的大发生，诸如
ＴｏＣＶ寄主范围的进一步调查、对不同寄主的致病力
差异以及流行过程中不同寄主中 ＴｏＣＶ 重组、变异
等情况的研究；另外在生产上发病地区应全面开展
ＴｏＣＶ综合防控工作，如粉虱防控、现有品种抗性评
价以及综合防治措施实施等，未发生地区则应慎重
从发病区引入种苗，并做好种苗监测和粉虱防控
工作。
１７１１ 期 周　 莹等： 北京地区茄子感染番茄褪绿病毒的分子鉴定
参 考 文 献 （Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
Ａｃｃｏｔｔｏ ＧＰ， Ｖａｉｒａ ＡＭ， Ｖｅｃｃｈｉａｔｉ Ｍ， Ｆｉｎｅｔｔｉ Ｓｉａｌｅｒ ＭＭ， Ｇａｌｌｉｔｅｌｌｉ
Ｄ， Ｄａｖｉｎｏ Ｍ． ２００１． Ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ Ｔｏｍａｔｏ ｃｈｌｏｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｎ
Ｉｔａｌｙ． Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ， ８５（１１）： １２０８
Ｄａｌｍｏｎ Ａ， Ｂｏｕｙｅｒ Ｓ， Ｃａｉｌｌｙ Ｍ， Ｇｉｒａｒｄ Ｍ， Ｌｅｃｏｑ Ｈ， Ｄｅｓｂｉｅｚ Ｃ，
Ｊａｃｑｕｅｍｏｎｄ Ｍ． ２００５． Ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ Ｔｏｍａｔｏ ｃｈｌｏｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ
Ｔｏｍａｔｏ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｃｈｌｏｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｔｏｍａｔｏ ｃｒｏｐｓ ｉｎ Ｆｒａｎｃｅ． Ｐｌａｎｔ
Ｄｉｓｅａｓｅ， ８９（１１）： １２４３
Ｄｏｖａｓ ＣＩ， Ｋａｔｉｓ ＮＩ， Ａｖｇｅｌｉｓ ＡＤ． ２００２． Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｉｎｉ⁃
ｖｉｒｕｓｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｅｐｉｄｅｍｉｃｓ ｏｆ ａ ｙｅｌｌｏｗｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｔｏｍａ⁃
ｔｏ ｉｎ Ｇｒｅｅｃｅ． Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ， ８６（１２）： １３４５ － １３４９
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ｍｅｌｏｎｇｅｎａ Ｌ． ） ｉｎ Ｃｈｉｎａ． Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ， ９９（１１）： １６５７
（责任编辑：李美娟）
２７１ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷