全 文 ：第 源员 卷摇 第 缘 期
圆园员源 年 员园 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 缘
韵糟贼援 摇 圆园员源
摇
基金项目院 中国烟草总公司资助项目渊员员园圆园园怨园圆园远缘鄄源冤袁山东烟草专卖局资助项目渊圆园员园园员冤袁农业部农作物病虫鼠害疫情监测与防治
项目渊圆员猿园员园愿冤袁山东省野泰山学者冶建设工程专项经费
作者简介院 赵洋袁男袁员怨愿愿年生袁硕士研究生袁研究方向为植物病原线虫生物防治袁 耘鄄皂葬蚤造院 扎赠愿怨园员岳 员远猿援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 憎怎曾蚤葬猿愿怨苑岳 员远猿援 糟燥皂
收稿日期院 圆园员源 原 园员 原 园远
渐狭蜡蚧菌 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂产几丁质酶
的活性及对南方根结线虫卵孵化的抑制作用
赵摇 洋员 摇 陈德鑫圆 摇 黄化刚猿 摇 武摇 侠员鄢
渊员援青岛农业大学农学与植物保护学院袁 山东省植物病虫害综合防控重点实验室袁 青岛 圆远远员园怨曰
圆援中国农业科学院烟草研究所袁 山东 青岛 圆远远员园员曰 猿援贵州省烟草公司毕节市公司袁 毕节 缘缘员苑园园冤
摘要院 为探究卵寄生真菌产生的几丁质酶对南方根结线虫卵孵化的抑制作用袁采用分离自黑龙江
大豆孢囊线虫孢囊上的菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿袁利用 晕粤郧和 责晕孕法测定其几丁质降解酶系和外切酶的
活性袁分析几丁质酶粗酶液对南方根结线虫卵的孵化抑制效果遥 结果表明袁菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 经形
态学和 陨栽杂序列分析鉴定为渐狭蜡蚧菌 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂曰在几丁质酶诱导培养基中培养
第 源 天时其分泌的几丁质降解酶系达酶活高峰袁为 员远援 怨园 哉 辕 皂蕴曰第 远 天外切酶达酶活高峰袁为
园援 缘怨 哉 辕 皂蕴袁之后酶活趋于稳定持续至第 员源 天曰几丁质酶分子量分别为 苑怨援 远尧远缘援 远尧缘源援 员尧源圆援 员 和
猿圆援 怨 噪阅葬曰其中培养第 苑 天的几丁质酶粗酶原液对南方根结线虫卵孵化的抑制率为 愿猿援 员苑豫 曰第 远
天菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 对卵的寄生率为 愿缘援 员园豫 遥 表明高效产几丁质酶的卵寄生真菌渐狭蜡蚧菌菌
株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 对南方根结线虫卵孵化具有明显的抑制效果遥
关键词院 渐狭蜡蚧菌曰 南方根结线虫曰 几丁质酶活性曰 卵寄生
陨灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 燥枣 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻鄄责则燥凿怎糟蚤灶早 枣怎灶早怎泽 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂 燥灶
藻早早鄄澡葬贼糟澡蚤灶早 燥枣 则燥燥贼鄄噪灶燥贼 灶藻皂葬贼燥凿藻 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬
在澡葬燥 再葬灶早员 摇 悦澡藻灶 阅藻曾蚤灶圆 摇 匀怎葬灶早 匀怎葬早葬灶早猿 摇 宰怎 载蚤葬员鄢
渊员援 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 陨灶贼藻早则葬贼藻凿 悦则燥责 孕藻泽贼 酝葬灶葬早藻皂藻灶贼 燥枣 杂澡葬灶凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦燥造造藻早藻 燥枣 粤早则燥灶燥皂赠 葬灶凿 孕造葬灶贼
孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 匝蚤灶早凿葬燥 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匝蚤灶早凿葬燥 圆远远员园怨袁 杂澡葬灶凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰 圆援 栽燥遭葬糟糟燥 砸藻泽藻葬则糟澡
陨灶泽贼蚤贼怎贼藻袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 匝蚤灶早凿葬燥 圆远远员园员袁 杂澡葬灶凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬曰
猿援 月蚤躁蚤藻 悦蚤贼赠 栽燥遭葬糟糟燥 月则葬灶糟澡袁 郧怎蚤扎澡燥怎 栽燥遭葬糟糟燥 悦燥则责燥则葬贼蚤燥灶袁 月蚤躁蚤藻 缘缘员苑园园袁 郧怎蚤扎澡燥怎 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 藻曾责造燥则藻 贼澡藻 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠 藻枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 责则燥凿怎糟藻凿 遭赠 藻早早鄄责葬则葬泽蚤贼蚤糟 枣怎灶早蚤 燥灶
酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬袁 葬 灶藻皂葬贼燥凿藻 藻早早鄄责葬则葬泽蚤贼蚤糟 枣怎灶早怎泽 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 憎葬泽 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 糟赠泽贼泽 燥枣
匀藻贼藻则燥凿藻则葬 早造赠糟蚤灶藻泽 蚤灶枣藻糟贼蚤灶早 泽燥赠遭藻葬灶 蚤灶 匀藻蚤造燥灶早躁蚤葬灶早 孕则燥增蚤灶糟藻援 月葬泽藻凿 燥灶 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则泽 葬灶凿
陨栽杂 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶葬造赠泽蚤泽袁 贼澡藻 泽贼则葬蚤灶 憎葬泽 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤藻凿 葬泽 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂援 栽澡藻 糟澡蚤贼蚤灶燥造赠贼蚤糟 泽赠泽贼藻皂泽 葬灶凿
藻曾燥糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 责则燥凿怎糟藻凿 遭赠 贼澡藻 枣怎灶早怎泽 憎藻则藻 皂藻葬泽怎则藻凿 遭赠 皂藻葬灶泽 燥枣 晕粤郧 葬灶凿 责晕孕袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡藻
皂燥造藻糟怎造葬则 憎藻蚤早澡贼泽 燥枣 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 憎藻则藻 皂藻葬泽怎则藻凿 遭赠 葬糟贼蚤增蚤贼赠 泽贼葬蚤灶蚤灶早 燥枣 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻泽援 栽澡藻 藻早早泽 燥枣 酝援 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬
憎藻则藻 贼则藻葬贼藻凿 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 糟则怎凿藻 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 枣则燥皂 蕴援 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 贼燥 凿藻贼藻则皂蚤灶藻
贼澡藻 泽怎责责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 藻早早鄄澡葬贼糟澡蚤灶早援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 糟澡蚤贼蚤灶燥造赠贼蚤糟 泽赠泽贼藻皂泽 则藻葬糟澡藻凿 贼澡藻
澡蚤早澡藻泽贼 造藻增藻造 燥枣 员远援 怨园 哉 辕 皂蕴 燥灶 贼澡藻 枣燥怎则贼澡 凿葬赠援 栽澡藻 藻曾燥糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 则藻葬糟澡藻凿 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 造藻增藻造 燥枣
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藻泽贼蚤皂葬贼藻凿 葬泽 苑怨援 远袁 远缘援 远袁 缘源援 员袁 源圆援 员袁 葬灶凿 猿圆援 怨 噪阅葬袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡藻 皂葬曾蚤皂怎皂 蚤灶澡蚤遭蚤贼燥则赠 则葬贼藻 燥枣
藻早早鄄澡葬贼糟澡蚤灶早 则藻葬糟澡藻凿 愿猿援 员苑豫 燥灶 贼澡藻 泽藻增藻灶贼澡 凿葬赠 遭赠 燥则蚤早蚤灶葬造 糟则怎凿藻 藻灶扎赠皂藻 葬枣贼藻则 贼则藻葬贼皂藻灶贼 葬灶凿 贼澡藻 则葬贼藻 燥枣
责葬则葬泽蚤贼蚤泽皂 憎葬泽 愿缘援 员园豫 燥灶 贼澡藻 泽蚤曾贼澡 凿葬赠 葬枣贼藻则 藻早早 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶援 栽澡藻 藻早早鄄责葬则葬泽蚤贼蚤糟 枣怎灶早怎泽 蕴援 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂
悦郧酝悦悦缘猿圆愿 憎蚤贼澡 澡蚤早澡 造藻增藻造 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 责则燥增蚤凿藻凿 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 泽怎责责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 藻早早鄄澡葬贼糟澡蚤灶早 燥枣
酝援 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬援
运藻赠 憎燥则凿泽院 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂曰 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬曰 糟澡蚤贼蚤灶燥造赠贼蚤糟 葬糟贼蚤增蚤贼赠曰 藻早早鄄责葬则葬泽蚤贼蚤泽皂
摇 摇 根结线虫病是根结线虫 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥灶早灶蚤贼葬
渊运燥枣燥造凿 驭 宰澡蚤贼藻冤 悦澡蚤贼憎燥燥凿 引起的一种重要的植物
病害袁每年在世界范围内造成的农业经济损失达数
十亿美元咱员 原 圆暂 遥 传统的化学杀线剂会对环境造成严
重污染袁化学药剂的大量使用使植物寄生性线虫抗
药性随之加强袁降低其防治效果咱猿暂 遥 寻找安全有效
的防治根结线虫方法成为当务之急袁生物防治和生
态防治是根结线虫可持续治理的重要途径袁其中食
线虫真菌的分离筛选及其作用机理的研究已成为线
虫生物防治的热点之一遥
根结线虫卵寄生真菌对根结线虫病害的生物防
治具有重大潜力咱源暂 遥 卵是根结线虫生活史中的一
个重要阶段袁也是线虫卵寄生真菌作用最为敏感的
潜在靶标咱缘暂 遥 线虫的卵壳分为 猿 层院内层为脂质层袁
中间层为几丁质层袁外层主要为卵黄层咱缘暂 遥 中间层
几丁质约占整个卵壳成分的 源园豫 袁是卵壳中最厚且
最坚固的结构袁是防御土壤微生物侵入的有效屏
障咱远暂 遥 食线虫真菌厚孢轮枝菌 灾藻则贼蚤糟蚤造造蚤怎皂 糟澡造葬皂赠凿燥泽鄄
责燥则蚤怎皂尧萨克拉轮枝菌 灾援 泽怎糟澡造葬泽责燥则蚤怎皂咱苑暂 尧淡紫拟青霉
孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽咱愿暂 尧厚垣普奇尼亚菌 孕燥糟澡燥灶蚤葬
糟澡造葬皂赠凿燥泽责燥则蚤葬咱怨暂和交枝顶孢菌 粤糟则藻皂燥灶蚤怎皂 蚤皂责造蚤糟葬鄄
贼怎皂咱员园暂等均能够产生较高活性的几丁质酶系袁其在
线虫卵壳降解或者软化过程中发挥着重要作用袁可
降低卵壳透性袁干扰根结线虫卵正常孵化或使 圆 龄
幼虫提早破壳而出不能在土壤中存活咱员员 原 员圆暂 遥 此类
真菌在寄生线虫卵的过程中袁菌丝吸附到线虫体表袁
识别并形成侵入结构袁如附着胞和侵染钉袁在侵染钉
穿透线虫卵壳的同时分泌蛋白酶和几丁质酶降解卵
壳结构使卵壳破损和透性下降而失水袁整个寄生过
程是附着胞机械压力和酶解作用共同完成的咱员猿暂 遥
离体条件下袁测定食线虫真菌对线虫的直接寄生性
及其分泌的具有杀线活性的次生代谢产物或水解酶
系对线虫生命的抑制效果袁是评价食线虫真菌生防
潜力的一种重要方法咱员源暂 遥
在葬则藻 驭 郧葬皂泽咱员缘暂通过形态学和 陨栽杂 序列分析重
新建立了蜡蚧属 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 泽责责援 袁该属真菌是一类
重要的食线虫真菌咱员远暂 袁其中已报道的刀孢蜡蚧菌
蕴援 责泽葬造造蚤燥贼葬藻咱员苑 原 员愿暂 尧蕴援 葬灶贼蚤造造葬灶怎皂咱员圆暂等可侵染南方根
结线虫的卵尧雌虫和 圆 龄幼虫遥 渐狭蜡蚧菌 蕴援 葬贼贼藻灶鄄
怎葬贼怎皂是蜡蚧属真菌中的一个重要种袁分布广泛袁目
前已从波兰的一种蝴蝶幼虫尧美国的一株枯枝咱员缘暂和
韩国的蚜虫咱员怨暂等中分离得到遥 渐狭蜡蚧菌可有效
寄生桃蚜 酝赠扎怎泽 责藻则泽蚤糟葬藻咱圆园暂 尧棉蚜 粤责澡蚤泽 早燥泽泽赠责蚤蚤咱圆员暂等
农业害虫袁具有重要的生防潜力遥 在葬则藻 等咱圆圆暂报道该
菌可以寄生线虫的卵袁但是目前尚未有该菌对根结
线虫卵寄生的系统报道遥 因此袁本研究通过测定渐
狭蜡蚧菌对南方根结线虫卵的寄生性和产生几丁质
酶系的规律袁并利用产生几丁质酶高峰期的渐狭蜡
蚧菌培养滤液处理南方根结线虫卵袁探究几丁质酶
对虫卵的破坏过程袁以期为进一步开发利用其生物
防治价值奠定理论基础遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试菌株与根结线虫院菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 分离
自黑 龙 江 大 豆 孢 囊 线 虫 孢 囊 渊 专 利 号院 在蕴
圆园员员员园猿怨远园员愿援 源冤袁分别保存于中国普通微生物菌种
保藏中心和青岛农业大学线虫研究室遥 南方根结线
虫样本采自山东寿光番茄大棚内遥
培养基院菌株鉴定培养采用马铃薯葡萄糖琼脂
培养基渊责燥贼葬贼燥 凿藻曾贼则燥泽藻 葬早葬则 皂藻凿蚤怎皂袁 孕阅粤冤院圆园豫马
铃薯煮沸取滤液袁并添加 圆豫蔗糖和 圆豫琼脂曰寄生
性测定菌株培养采用水琼脂培养基渊憎葬贼藻则 葬早葬则 皂藻鄄
凿蚤怎皂袁 宰粤冤院圆豫琼脂曰几丁质酶诱导培养基院园郾 圆豫
胶体几丁质尧园郾 员豫 运匀圆孕韵源尧园郾 圆豫 晕葬圆匀孕韵源尧园郾 园猿豫晕葬悦造尧园郾 猿豫 运晕韵猿尧园郾 园猿豫 酝早杂韵源窑苑匀圆韵尧园郾 园园员豫云藻杂韵源 和 园郾 猿豫胰蛋白胨渊贼则赠责贼燥灶藻冤遥
试剂院阅晕粤提取试剂盒 阅灾愿员员粤购自日本 栽葬运葬砸葬
公司曰引物 陨栽杂员鄄云 和 陨栽杂源鄄砸 由上海生工生物工程
技术服务有限公司合成曰扩增用聚合酶 孕悦砸 酝葬泽贼藻则
酝蚤曾渊圆 伊 冤购自美国 栽澡藻则皂燥 公司曰其它化学试剂均
为国产分析纯遥
愿源缘 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
仪器院耘糟造蚤责泽藻 愿园蚤 显微照相系统袁日本 晕蚤噪燥灶 公
司曰孕栽悦圆园园 孕悦砸 仪袁美国 月蚤燥鄄砸葬凿 公司曰匀粤栽云园园园员园
混合纤维素膜袁美国 酝蚤造造蚤责燥则藻公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 菌株的分离与鉴定
菌株的分离院采用过筛法从黑龙江大豆根围土
壤分离大豆孢囊线虫孢囊袁用 圆援 园豫 晕葬悦造韵 表面消
毒 圆 耀 猿 皂蚤灶后袁移入半选择性培养基袁置于 圆苑 益温
箱内培养袁定期观察袁将长出的真菌挑至 孕阅粤 平板
上培养鉴定遥
菌株的鉴定院利用 孕阅粤 平板培养菌株 悦郧酝鄄
悦悦缘猿圆愿袁观察其菌落形态袁采用玻片培养法在显微
镜下观察其分生孢子尧分生孢子梗尧晶体等的形成情
况遥 采用 阅晕粤 提取试剂盒提取该菌 阅晕粤袁利用通
用 孕悦砸 扩增引物 陨栽杂员鄄云渊缘忆鄄悦栽栽郧郧栽悦粤栽栽栽粤郧粤郧鄄
郧粤粤郧栽鄄猿忆冤 和 陨栽杂源鄄砸 渊 缘忆鄄悦悦栽悦悦郧悦栽栽粤栽栽郧粤栽粤栽鄄
郧悦鄄猿忆冤进行 陨栽杂鄄则阅晕粤序列扩增袁缘园 滋蕴 孕悦砸 反应体
系院模板 阅晕粤 圆 滋蕴尧缘 滋皂燥造 辕 蕴上下游引物各 圆援 缘 滋蕴尧
孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾渊圆 伊 冤 圆缘 滋蕴尧凿凿匀圆韵 员愿 滋蕴遥 反应条
件院怨源 益 源 皂蚤灶曰怨源 益 员 皂蚤灶袁缘缘 益 猿园 泽袁苑圆 益 怨园 泽袁猿缘
个循环曰苑圆 益 员园 皂蚤灶遥 孕悦砸 产物经 员豫凝胶电泳检
测后送交上海生工生物工程技术服务有限公司测
序遥 将测得的 陨栽杂鄄则阅晕粤 序列在 晕悦月陨 数据库中进
行 月蕴粤杂栽 比对 渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 早燥增 辕
遭造葬泽贼冤袁申请 郧藻灶月葬灶噪登录号袁采用 酝藻早葬 源援 园 软件用
邻接法 渊 灶藻蚤早澡遭燥则鄄躁燥蚤灶蚤灶早袁 晕允冤绘制系统发育树并
分析遥
员援 圆援 圆 几丁质酶的制备和活性测定
产几丁质酶培养条件院将几丁质酶诱导培养基
调节 责匀值为 缘援 缘袁园援 员缘 酝孕葬尧员圆员 益灭菌 猿园 皂蚤灶 备
用遥 将在 孕阅粤平板上活化 苑 凿 的渐狭蜡蚧菌菌落
边缘 远 皂皂菌块 猿 块接种于装有 员圆园 皂蕴 几丁质酶
诱导培养基的 圆缘园 皂蕴 锥形瓶中袁置于摇床 圆苑 益尧
员缘园 则 辕 皂蚤灶培养袁猿 次重复遥 从第 圆 天开始每隔 圆 天
取 员援 缘 皂蕴培养滤液袁员员 园园园 则 辕 皂蚤灶 离心 员缘 皂蚤灶袁上清
液 原 圆园 益保存袁备用遥
几丁质降解酶系和外切酶活性测定院参照
晕早怎赠藻灶等咱员圆暂方法袁并加以改进遥 几丁质降解酶系
活性依据胶体几丁质生成的 晕鄄乙酰葡萄糖胺渊晕鄄
葬糟藻贼赠早造怎糟燥泽葬皂鄄蚤灶藻袁晕粤郧冤含量测定袁其中酶促反应体
系采用 园援 缘 皂蕴 员援 园豫胶体几丁质和 园援 源 皂蕴 园援 员 皂燥造 辕 蕴
责匀 缘援 缘 磷酸钠缓冲液袁其它相同遥 几丁质外切酶活
性测定以 责晕孕鄄晕粤郧为底物袁测定酶促反应生成的对
硝基苯酚渊籽鄄灶蚤贼则燥责澡藻灶燥造袁责晕孕冤含量袁其中酶促反应
体系采用 员 皂早 辕 皂蕴 责晕孕鄄晕粤郧 缘园 滋蕴和 园援 员 皂燥造 辕 蕴 责匀
缘郾 园 醋酸缓冲液 员园园 滋蕴袁其它相同遥
几丁质降解酶系活性染色院向过滤后的培养
滤液加 渊 晕匀源 冤圆杂韵源 至浓度 源园豫 袁在 源 益 下过夜曰
愿 园园园 则 辕 皂蚤灶 离心去上清袁将沉淀透析后重溶制成粗
酶液遥 在 苑豫丙烯酰胺中加入糖基化几丁质作为几
丁质酶反应底物袁聚丙烯酰胺凝胶电泳荧光染色参
照 栽则怎凿藻造 驭 粤泽泽藻造蚤灶咱圆猿暂方法遥 同时进行变性蛋白染
色袁依据标准蛋白质分子量谱带袁估算变性电泳的可
溶性蛋白质谱带和对应胶板的几丁质酶活性电泳谱
带的分子量袁并标示对应谱带遥
员援 圆援 猿 渐狭蜡蚧菌对南方根结线虫卵的寄生能力测定
采集被线虫侵染的番茄病根用清水洗净袁在解
剖镜下直接挑取新鲜卵块袁置于含 员援 园豫 晕葬悦造韵的
小瓶中袁涡旋震荡袁制成 猿 园园园 个卵 辕 皂蕴的悬浮液遥
在直径 怨园 皂皂 培养皿内倒入一层薄的加入
缘园 滋早 辕 皂蕴链霉素的 宰粤培养基袁冷却后将 源 片经消
毒的盖玻片平铺在培养基边缘袁滴加 宰粤 将其埋入
培养基内遥 挑取 孕阅粤 平板上 圆苑 益培养 苑 凿 的渐狭
蜡蚧菌纯培养物边缘直径 远皂皂菌块袁置于宰粤培养
基中央袁圆苑 益培养袁待菌丝长到盖玻片边缘时袁分别
取猿园 滋蕴含有约 员园园 个卵悬液滴加在对应的盖玻片
上袁猿 次重复遥 对照组为不接菌加入 缘园 滋早 辕 皂蕴 链霉
素的 宰粤培养基遥 远 凿后将培养皿内玻片取出袁滴加
园援 员豫乳酸棉兰染色 员园 皂蚤灶袁用清水轻轻冲洗干净袁
制成临时玻片袁在显微镜下检查卵的寄生情况并拍
照袁计算卵的寄生率遥 卵的寄生率 越 渊对照孵化的
卵数量 原 处理孵化的卵数量冤 辕对照孵化的卵数
量 伊员园园豫 遥
员援 圆援 源 几丁质酶粗酶液对卵孵化的抑制测定
将培养 源 凿 的渐狭蜡蚧菌培养液 源 益条件下
愿 园园园 则 辕 皂蚤灶离心 员缘 皂蚤灶袁取上清液在 圆 号滤纸上过
滤袁滤液再经 园援 源缘 滋皂 的混合纤维素膜过滤后制成
几丁质酶粗酶液遥 将粗酶液和根结线虫卵悬浮液加
入到 圆源 孔板中袁以几丁质酶粗酶原液为 员园园豫浓度
并稀释至 源 个浓度梯度袁分别为 圆缘豫 尧缘园豫 尧苑缘豫和
员园园豫 袁以 员园园 益加热缘 皂蚤灶灭活粗酶液为对照袁源 次
重复袁圆苑 益培养 苑 凿袁中间每隔 圆 天轻微晃动 圆源 孔板
以保证通气遥 定期观察卵壳变化情况袁苑 凿后统计卵
孵化数袁计算卵孵化相对抑制率遥 孵化率 越 渊 允枣 伊
员园园冤 辕 渊耘蚤 垣 允蚤冤 伊 员园园豫 袁其中袁允枣 表示孵化 圆 龄幼虫
的数量曰耘蚤 表示起始成熟卵的数量曰允蚤 表示起始 圆
龄幼虫的数量曰相对抑制率 越 渊对照孵化率 原处理
怨源缘缘 期 赵摇 洋等院 渐狭蜡蚧菌 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂产几丁质酶的活性及对南方根结线虫卵孵化的抑制作用
孵化率冤 辕对照孵化率 伊员园园豫 遥
员援 猿 数据分析
应用 杂孕杂杂 员苑援 园 软件进行方差分析并绘图袁采
用最小显著差异法渊蕴杂阅冤进行显著性检验遥
圆 结果与分析
圆援 员 菌株的分离和鉴定
真菌 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 菌株在 孕阅粤培养基上菌落生
长缓慢袁呈白色棉状袁产生大量的分生孢子袁分生孢
子梗单生或轮生袁产生晶体遥 菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 的
则阅晕粤鄄陨栽杂序列 郧藻灶月葬灶噪 登录号为 允匝怨园员怨猿怨袁其 则阅鄄
晕粤鄄陨栽杂序列和渐狭蜡蚧菌 蕴援 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂 运再运园园猿圆源
渊粤月猿苑愿缘员猿冤的相应序列同源性高达 怨怨豫 遥 系统发
育树显示渊图 员冤袁该菌与渐狭蜡蚧菌 蕴援 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂
属于同一类群袁鉴定菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 为渐狭蜡蚧
菌 蕴援 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂遥
图 员 基于 则阅晕粤鄄陨栽杂序列的菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 及相关类群的系统发育树
云蚤早援 员 晕藻蚤早澡遭燥则鄄躁燥蚤灶蚤灶早 贼则藻藻 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 憎蚤贼澡 陨栽杂 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 则阅晕粤 早藻灶藻泽 枣则燥皂 悦郧酝悦悦缘猿圆愿
蚤泽燥造葬贼藻 葬灶凿 贼澡藻 燥贼澡藻则 枣怎灶早蚤 凿藻责燥泽蚤贼藻凿 蚤灶 郧藻灶月葬灶噪
圆援 圆 几丁质降解酶系和外切酶的活性
在 园援 圆豫胶体几丁质作为主要 悦源和 晕源的半
液体培养基内袁渐狭蜡蚧菌从第 圆 天开始产生几丁
质降解酶袁第 源 天达到酶活高峰为 员远援 怨园 哉 辕 皂蕴袁酶
活高峰持续至第 远 天之后逐渐下降曰几丁质外切酶
也从第 圆 天开始产生袁但在第 远 天才达到酶活高峰
为 园援 缘怨 哉 辕 皂蕴袁随后略有下降袁至 员源 凿时一直保持高
水平活性袁稳定在 园援 缘猿 耀 园援 缘源 哉 辕 皂蕴 之间渊图 圆冤遥
培养 员源 凿的渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 有 缘 条几
丁质酶活性电泳谱带袁分子量分别为 苑怨郾 远尧远缘郾 远尧
缘源郾 员尧源圆郾 员 和 猿圆郾 怨 噪阅葬渊图 猿冤遥
图 圆 渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 培养液中几丁质降解酶系和外切酶的活性
云蚤早援 圆 栽蚤皂藻 糟燥怎则泽藻 燥枣 糟澡蚤贼蚤灶燥造赠贼蚤糟 葬灶凿 藻曾燥糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 蚤灶 糟怎造贼怎则藻 枣蚤造贼则葬贼藻泽 枣则燥皂
蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂 悦郧酝悦悦缘猿圆愿
摇 摇 图中数据为平均数 依标准差遥 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 枣蚤早怎则藻 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援
园缘缘 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
图 猿 渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 产生的几丁质降解酶活性染色谱带
云蚤早援 猿 悦澡蚤贼蚤灶葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 蚤灶 杂阅杂鄄孕粤郧耘
糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 园援 园员豫 早造赠糟燥造 糟澡蚤贼蚤灶 葬泽 泽怎遭泽贼则葬贼藻
摇 摇 酝院 蛋白 酝葬则噪藻则 渊员源援 源 耀 怨苑援 源 噪阅葬冤曰 粤院 变性胶谱带曰 月院 活性谱带遥 酝院 孕则燥贼藻蚤灶 皂葬则噪藻则 渊员源援 源 原 怨苑援 源 噪阅葬冤曰 粤院 责则燥贼藻蚤灶 遭葬灶凿泽 憎藻则藻
泽贼葬蚤灶藻凿 憎蚤贼澡 糟燥燥皂葬泽泽蚤藻 遭造怎藻 砸鄄圆缘园曰 月院 葬糟贼蚤增藻 责则燥枣蚤造藻泽 泽贼葬蚤灶藻凿 憎蚤贼澡 糟葬造糟燥枣造怎燥则 憎澡蚤贼藻 酝圆砸援
圆援 猿 渐狭蜡蚧菌对南方根结线虫卵的寄生
显微观察发现被渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿
寄生的卵壳周围菌丝丰富袁形成网状袁菌丝在卵壳表
面形成侵染钉以穿破卵壳袁菌丝侵入后在卵内生长袁
阻滞卵的胚胎发育袁使卵不能正常孵化出幼虫袁由于
被侵染的卵壳遭到破坏袁透性增加袁所以容易被棉兰
染色渊图 源鄄粤冤遥 该菌对南方根结线虫卵接种后 远 凿
的寄生率为 愿缘援 员园豫 遥 对照组未接菌的卵壳表面光
滑袁内容物均匀袁胚胎发育正常渊图 源鄄悦运冤袁后期大部
分可孵化出 圆 龄幼虫遥
图 源 渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 对南方根结线虫卵的寄生
云蚤早援 源 孕葬则葬泽蚤贼蚤泽皂 燥枣 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 燥灶 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 藻早早泽
摇 摇 粤院 菌丝处理曰 悦运院 对照遥 粤院 栽则藻葬贼藻凿 澡赠责澡葬藻曰 悦运院 糟燥灶贼则燥造援
圆援 源 几丁质酶粗酶液对南方根结线虫卵孵化的抑制
渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 几丁质酶粗酶液
对根结线虫卵孵化的抑制率随时间的增加而递增袁
其中以几丁质酶粗酶原液抑制活性最高袁苑缘豫粗酶
液次之袁二者差异不显著袁但均显著高于 圆缘豫 和
缘园豫浓度处理遥 培养 苑 凿 时几丁质酶粗酶原液对根
结线虫卵孵化的抑制率最大袁可达 愿猿援 员苑豫 渊图 缘冤遥
显微镜下观察发现根结线虫卵壳有不同程度的变
化遥 第 员 天渐狭蜡蚧菌粗酶液处理的卵壳稍有缢缩
渊图 远鄄粤员冤袁猿 凿后可以看到处理的卵内容物聚集袁卵
壳变空渊图 远鄄粤圆冤袁而对照组可清晰地观察到卵内的
员 龄幼虫渊图 远鄄悦运圆冤曰苑 凿 后处理的卵壳破裂袁大量
内容物外渗渊图 远鄄粤猿冤袁而对照组能看到孵化的 圆 龄
幼虫渊图 远鄄悦运猿冤遥
员缘缘缘 期 赵摇 洋等院 渐狭蜡蚧菌 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂产几丁质酶的活性及对南方根结线虫卵孵化的抑制作用
图 缘 渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 几丁质酶粗酶液对南方根结线虫卵孵化的抑制效果
云蚤早援 缘 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 贼澡藻 糟则怎凿藻 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 枣则燥皂 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 燥灶 贼澡藻 澡葬贼糟澡蚤灶早 燥枣
酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 藻早早泽
摇 摇 图中数据为平均数 依标准差遥 柱上不同字母表示经 蕴杂阅法检验在 孕 约 园援 园缘 水平差异显著遥 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 枣蚤早怎则藻 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂阅援 阅蚤枣鄄
枣藻则藻灶贼 造藻贼贼藻则泽 燥灶 贼澡藻 遭葬则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 蕴杂阅 贼藻泽贼援
图 远 渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 几丁质酶粗酶液对南方根结线虫卵发育的影响
云蚤早援 远 耘枣枣藻糟贼 燥枣 贼澡藻 糟则怎凿藻 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 枣则燥皂 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 燥灶 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼
燥枣 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 藻早早泽
摇 摇 粤院 菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿培养滤液曰 悦运院 灭活培养滤液处理曰 员院 处理后第 员天南方根结线虫的卵曰 圆院 处理后第 猿天南方根结线虫的
卵曰 猿院 处理后第 苑天南方根结线虫的卵遥 粤院 悦怎造贼怎则藻 枣蚤造贼则葬贼藻泽 枣则燥皂 悦郧酝悦悦缘猿圆愿曰 悦运院 蚤灶葬糟贼蚤增葬贼藻凿 枣蚤造贼则葬贼藻泽曰 员院 酝援 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 藻早早泽 燥灶 贼澡藻 枣蚤则泽贼
凿葬赠曰 圆院 酝援 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 藻早早泽 燥灶 贼澡藻 贼澡蚤则凿 凿葬赠曰 猿院 酝援 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 藻早早泽 燥灶 贼澡藻 泽藻增藻灶贼澡 凿葬赠援
猿 讨论
线虫卵寄生真菌产生的几丁质降解酶系对定居
性根结类和胞囊类线虫的卵壳消解和寄生起着重要
作用咱圆源暂 袁卵寄生真菌菌丝接触到线虫卵后产生几丁
质酶和其它水解酶类消解卵壳袁协助真菌菌丝机械
性穿入卵内咱员猿暂 遥 渐狭蜡蚧菌对根结线虫的拮抗作
用有不同的作用方式要寄生和卵孵化抑制遥 卵寄生
真菌的寄生性测定是评价一株菌株生防潜力的重要
指标之一咱圆缘暂 袁渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 能够寄
生南方根结线虫卵袁接种后 远 凿 的寄生率可达
愿缘郾 员园豫 袁这与曹君正等咱员愿暂报道的高效菌株刀孢蜡
蚧菌对南方根结线虫卵的寄生率为 愿缘郾 苑远豫和林森
等咱员园暂报道的高效菌株交枝顶孢菌对南方根结线虫
圆缘缘 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
卵的寄生率为 愿圆郾 员员豫 基本相近袁但要高于 杂蚤灶早澡
等咱圆远暂报道的淡紫拟青霉对南方根结线虫卵的寄生
率 苑缘郾 园豫 袁说明渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 对南
方根结线虫卵的寄生效率较高遥
食线虫真菌产生的几丁质降解酶系主要包括几
丁质内切酶 耘悦猿援 圆援 员援 员源和一种外切酶 耘悦猿援 圆援 员援 猿园遥
晕早怎赠藻灶等咱员圆暂圆园园苑 年采用与本研究类似方法测定了
蕴援 葬灶贼蚤造造葬灶怎皂 产生几丁质降解酶系和外切几丁质酶
活性袁均在第 远 天达到酶活高峰袁分别为 员援 远 哉 辕 皂蕴
和 园援 园园怨 哉 辕 皂蕴遥 本研究测定渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝鄄
悦悦缘猿圆愿 产生的几丁质降解酶系活性高峰期出现较
早袁在第 源 天袁产外切几丁质酶活性高峰期与 蕴援 葬灶鄄
贼蚤造造葬灶怎皂基本相符袁但是酶活分别为 员远援 怨园 哉 辕 皂蕴 和
园援 缘怨 哉 辕 皂蕴袁均远高于 蕴援 葬灶贼蚤造造葬灶怎皂咱员圆暂 遥 根结线虫卵
壳中间层主要成分为由 晕鄄乙酰葡萄糖胺构成的几
丁质袁渐狭蜡蚧菌产生的内切酶接触到卵壳后随机
酶切几丁质多聚物产生寡聚体混合物袁接着外切酶
将这些寡聚体进一步降解为 晕鄄乙酰葡萄糖胺单
体咱圆苑暂 袁使线虫卵壳几丁质降解袁卵壳出现破裂袁内容
物外渗袁卵变空袁抑制卵的孵化遥 渐狭蜡蚧菌产生的
几丁质酶粗酶液对卵的孵化抑制率可达 愿猿郾 员苑豫 袁
高于 蕴援 葬灶贼蚤造造葬灶怎皂 的 苑愿郾 园豫 咱员圆暂 遥 本研究中该菌产
生的几丁质降解酶系活性较强袁采用灭活粗酶液作
对照袁发现几丁质酶在消解线虫卵壳的过程中能高
效破坏线虫卵遥 表明渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿
产生的几丁质酶在该菌寄生南方根结线虫卵的过程
中发挥着重要作用袁同时线虫的卵壳是几丁质酶发
挥作用的潜在靶标遥
本研究鉴定的渐狭蜡蚧菌菌株 悦郧酝悦悦缘猿圆愿 能
高效寄生南方根结线虫卵袁产生较高活性的几丁质
酶系袁对线虫卵壳有明显的消解作用袁可高效抑制南
方根结线虫卵的孵化遥 这将为进一步开发利用卵寄
生真菌提供新的资源和理论依据遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 宰蚤造造蚤葬皂泽燥灶 灾 酝袁 郧造藻葬泽燥灶 悦 粤援 孕造葬灶贼鄄灶藻皂葬贼燥凿藻 蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽援
悦怎则则藻灶贼 韵责蚤灶蚤燥灶 蚤灶 孕造葬灶贼 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园猿袁 远渊源冤院 猿圆苑 原 猿猿猿
咱圆暂 运蚤藻憎灶蚤糟噪 杂袁 杂蚤噪燥则葬 砸 粤援 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟燥灶贼则燥造 燥枣 贼澡藻 则燥燥贼鄄噪灶燥贼
灶藻皂葬贼燥凿藻 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 遭赠 孕葬藻糟蚤造燥皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 泽贼则葬蚤灶
圆缘员援 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦燥灶贼则燥造袁 圆园园远袁 猿愿渊圆冤院 员苑怨 原 员愿苑
咱猿暂 运藻则则赠 月 砸援 砸澡蚤扎燥泽责澡藻则藻 蚤灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽 葬灶凿 贼澡藻 藻曾责造燥蚤贼葬贼蚤燥灶 燥枣 皂蚤鄄
糟则燥遭蚤葬造 葬早藻灶贼泽 枣燥则 贼澡藻 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟燥灶贼则燥造 燥枣 责造葬灶贼鄄责葬则葬泽蚤贼蚤糟 灶藻皂葬鄄
贼燥凿藻泽援 粤灶灶怎葬造 砸藻增蚤藻憎 燥枣 孕澡赠贼燥责葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园园园袁 猿愿渊员冤院 源圆猿 原
源源员
咱源暂 酝燥则贼燥灶 悦 韵袁 匀蚤则泽糟澡 孕 砸袁 运藻则则赠 月 砸援 陨灶枣藻糟贼蚤燥灶 燥枣 责造葬灶贼鄄责葬则葬泽蚤贼蚤糟
灶藻皂葬贼燥凿藻泽 遭赠 灶藻皂葬贼燥责澡葬早燥怎泽 枣怎灶早蚤要葬 则藻增蚤藻憎 燥枣 贼澡藻 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶
燥枣 皂燥造藻糟怎造葬则 遭蚤燥造燥早赠 贼燥 怎灶凿藻则泽贼葬灶凿 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶 责则燥糟藻泽泽藻泽 葬灶凿 贼燥
蚤皂责则燥增藻 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 糟燥灶贼则燥造援 晕藻皂葬贼燥造燥早赠袁 圆园园源袁 远渊圆冤院 员远员 原员苑园
咱缘暂 月怎则早憎赠灶 月袁 晕葬早藻造 月袁 砸赠藻则泽藻 允袁 藻贼 葬造援 匀藻贼藻则燥凿藻则葬 早造赠糟蚤灶藻泽院
藻早早泽澡藻造造 怎造贼则葬泽贼则怎糟贼怎则藻 葬灶凿 澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 糟澡蚤鄄
贼蚤灶燥怎泽 糟燥皂责燥灶藻灶贼泽援 耘曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造 孕葬则葬泽蚤贼燥造燥早赠袁 圆园园猿袁 员园源渊员 辕
圆冤院 源苑 原 缘猿
咱远暂 酝燥燥泽葬增蚤 酝 砸袁 在葬则藻 砸袁 在葬皂葬灶蚤扎葬凿藻澡 匀 砸袁 藻贼 葬造援 孕葬贼澡燥早藻灶蚤糟蚤贼赠
燥枣 灾藻则贼蚤糟蚤造造蚤怎皂 藻责蚤责澡赠贼怎皂 蚤泽燥造葬贼藻泽 葬早葬蚤灶泽贼 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 躁葬增葬灶蚤糟葬援
陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕藻泽贼 酝葬灶葬早藻皂藻灶贼袁 圆园员员袁 缘苑 渊 源 冤院
圆怨员 原 圆怨苑
咱苑暂 栽蚤噪澡燥灶燥增 灾 耘袁 蕴燥责藻扎鄄蕴造燥则糟葬 蕴 灾袁 杂葬造蚤灶葬泽 允袁 藻贼 葬造援 孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻泽 枣则燥皂 贼澡藻 灶藻皂葬贼燥责澡葬早燥怎泽 枣怎灶早蚤
灾藻则贼蚤糟蚤造造蚤怎皂 糟澡造葬皂赠凿燥泽责燥则蚤怎皂 葬灶凿 灾援 泽怎糟澡造葬泽责燥则蚤怎皂援 云怎灶早葬造 郧藻鄄
灶藻贼蚤糟泽 葬灶凿 月蚤燥造燥早赠袁 圆园园圆袁 猿缘渊员冤院 远苑 原 苑愿
咱愿暂 运澡葬灶 粤袁 宰蚤造造蚤葬皂泽 运袁 酝燥造造燥赠 酝 孕袁 藻贼 葬造援 孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟澡葬则鄄
葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 泽藻则蚤灶藻 责则燥贼藻葬泽藻 葬灶凿 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻泽 枣则燥皂 孕葬藻糟蚤造燥皂赠鄄
糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 葬灶凿 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥灶 圆阅 早藻造泽援 孕则燥鄄
贼藻蚤灶 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶凿 孕怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶袁 圆园园猿袁 猿圆渊圆冤院 圆员园 原 圆圆园
咱怨暂 张成敏袁 武侠袁才秀华援 厚垣普奇尼亚菌 孕燥糟澡燥灶蚤葬 糟澡造葬皂赠凿燥泽鄄
责燥则蚤葬产生的几丁质酶对南方根结线虫卵孵化的影响援 中国
农业科学袁 圆园园怨袁 源圆渊员园冤院 猿缘园怨 原 猿缘员缘
咱员园暂 林森袁 武侠袁 曹君正袁 等援 产生几丁质酶的交枝顶孢渊粤糟则藻鄄
皂燥灶蚤怎皂 蚤皂责造蚤糟葬贼怎皂冤对南方根结线虫生防潜力援 植物病理
学报袁 圆园员猿袁 源猿渊缘冤院 缘园怨 原 缘员苑
咱员员暂 运澡葬灶 粤袁 宰蚤造造蚤葬皂泽 运 蕴袁 晕藻增葬造葬蚤灶藻灶 匀 运 酝援 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 孕葬藻糟蚤造燥鄄
皂赠糟藻泽 造蚤造葬糟蚤灶怎泽 责则燥贼藻葬泽藻 葬灶凿 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 燥灶 贼澡藻 藻早早泽澡藻造造 泽贼则怎糟贼怎则藻泽
葬灶凿 澡葬贼糟澡蚤灶早 燥枣 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 躁葬增葬灶蚤糟葬 躁怎增藻灶蚤造藻泽援 月蚤燥造燥早蚤糟葬造
悦燥灶贼则燥造袁 圆园园源袁 猿员渊猿冤院 猿源远 原 猿缘圆
咱员圆暂 晕早怎赠藻灶 灾 晕袁 运蚤皂 再 允袁 韵澡 运 栽袁 藻贼 葬造援 栽澡藻 则燥造藻 燥枣 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻
枣则燥皂 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬灶贼蚤造造葬灶怎皂 月鄄猿 蚤灶 责葬则葬泽蚤贼蚤泽皂 贼燥 则燥燥贼鄄噪灶燥贼
灶藻皂葬贼燥凿藻 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬 藻早早泽援 月蚤燥糟燥灶贼则燥造 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿
栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园园苑袁 员苑渊员园冤院 员园源苑 原 员园缘愿
咱员猿暂 蕴燥责藻扎鄄蕴造燥则糟葬 蕴 灾袁 韵造蚤增葬则藻泽鄄月藻则灶葬遭藻怎 悦袁 杂葬造蚤灶葬泽 允袁 藻贼 葬造援 孕则藻鄄
责藻灶藻贼则葬贼蚤燥灶 藻增藻灶贼泽 蚤灶 枣怎灶早葬造 责葬则葬泽蚤贼蚤泽皂 燥枣 灶藻皂葬贼燥凿藻 藻早早泽援 酝赠鄄
糟燥造燥早蚤糟葬造 砸藻泽藻葬则糟澡袁 圆园园圆袁 员园远渊源冤院 源怨怨 原 缘园远
咱员源暂 晕蚤贼葬燥 允 运袁 酝藻赠藻则 杂 蕴 云袁 韵造蚤增藻则 允 耘袁 藻贼 葬造援 陨泽燥造葬贼蚤燥灶 燥枣 枣造葬增蚤责鄄
蚤灶袁 葬 枣怎灶早怎泽 糟燥皂责燥怎灶凿 葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤糟 贼燥 责造葬灶贼鄄责葬则葬泽蚤贼蚤糟 灶藻皂葬鄄
贼燥凿藻泽援 晕藻皂葬贼燥造燥早赠袁 圆园园圆袁 源渊员冤院 缘缘 原 远猿
咱员缘暂 在葬则藻 砸袁 郧葬皂泽 宰援 粤 则藻增蚤泽蚤燥灶 燥枣 灾藻则贼蚤糟蚤造造蚤怎皂 泽藻糟贼蚤燥灶 孕则燥泽贼则葬贼葬援
陨灾援 栽澡藻 早藻灶藻则葬 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬灶凿 杂蚤皂责造蚤糟蚤造造蚤怎皂 早藻灶援 灶燥增援 晕燥增葬
匀藻凿憎蚤早蚤葬袁 圆园园员袁 苑猿渊员冤院 员 原 缘园
咱员远暂 郧燥藻贼贼藻造 酝 杂袁 运燥蚤噪藻 酝袁 运蚤皂 允 允袁 藻贼 葬造援 孕燥贼藻灶贼蚤葬造 燥枣 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂
泽责责援 枣燥则 皂葬灶葬早藻皂藻灶贼 燥枣 蚤灶泽藻糟贼泽袁 灶藻皂葬贼燥凿藻泽 葬灶凿 责造葬灶贼 凿蚤泽藻葬鄄
泽藻泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣 陨灶增藻则贼藻遭则葬贼藻 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 怨愿渊猿冤院 圆缘远 原
圆远员摇
猿缘缘缘 期 赵摇 洋等院 渐狭蜡蚧菌 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂产几丁质酶的活性及对南方根结线虫卵孵化的抑制作用
咱员苑暂 郧葬灶 在袁 再葬灶早 允袁 在澡葬灶早 运 匝袁 藻贼 葬造援 悦造燥灶蚤灶早 燥枣 贼澡藻 早藻灶藻 蕴藻糟葬灶鄄
蚤糟蚤造造蚤怎皂 责泽葬造造蚤燥贼葬藻 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 蕴责糟澡蚤员 葬灶凿 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 蚤贼泽 责燥鄄
贼藻灶贼蚤葬造 则燥造藻 蚤灶 贼澡藻 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造 燥枣 则燥燥贼鄄噪灶燥贼 灶藻皂葬贼燥凿藻 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻
蚤灶糟燥早灶蚤贼葬援 粤责责造蚤藻凿 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园园苑袁 苑远
渊远冤院 员猿园怨 原 员猿员苑
咱员愿暂 曹君正袁 武侠袁 林森援 刀孢蜡蚧菌的鉴定及其对南方根结
线虫不同生活阶段的定殖援 中国农业科学袁 圆园员圆袁 源缘渊员圆冤院
圆源园源 原 圆源员员
咱员怨暂 运蚤皂 允 允袁 郧燥藻贼贼藻造 酝 杂袁 郧蚤造造藻泽责蚤藻 阅 砸援 孕燥贼藻灶贼蚤葬造 燥枣 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂
泽责藻糟蚤藻泽 枣燥则 凿怎葬造 皂蚤糟则燥遭蚤葬造 糟燥灶贼则燥造 燥枣 葬责澡蚤凿泽 葬灶凿 贼澡藻 糟怎糟怎皂遭藻则
责燥憎凿藻则赠 皂蚤造凿藻憎 枣怎灶早怎泽袁 杂责澡葬藻则燥贼澡藻糟葬 枣怎造蚤早蚤灶藻葬援 月蚤燥造燥早蚤糟葬造
悦燥灶贼则燥造袁 圆园园苑袁 源园渊猿冤院 猿圆苑 原 猿猿圆
咱圆园暂 运蚤皂 匀 再袁 蕴藻藻 匀 月袁 运蚤皂 再 悦袁 藻贼 葬造援 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 葬灶凿 枣蚤藻造凿
藻增葬造怎葬贼蚤燥灶泽 燥枣 藻灶贼燥皂燥责葬贼澡燥早藻灶蚤糟 蕴藻糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂
悦晕哉鄄圆猿 枣燥则 糟燥灶贼则燥造 燥枣 早则藻藻灶 责藻葬糟澡 葬责澡蚤凿 渊酝赠扎怎泽 责藻则泽蚤糟葬藻冤援
允燥怎则灶葬造 燥枣 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 员愿 渊员圆冤院
员怨员缘 原 员怨员愿
咱圆员暂 运蚤皂 允 允袁 运蚤皂 运 悦援 杂藻造藻糟贼蚤燥灶 燥枣 葬 澡蚤早澡造赠 增蚤则怎造藻灶贼 蚤泽燥造葬贼藻 燥枣 蕴藻鄄
糟葬灶蚤糟蚤造造蚤怎皂 葬贼贼藻灶怎葬贼怎皂 葬早葬蚤灶泽贼 糟燥贼贼燥灶 葬责澡蚤凿援 允燥怎则灶葬造 燥枣 粤泽蚤葬鄄
孕葬糟蚤枣蚤糟 耘灶贼燥皂燥造燥早赠袁 圆园园愿袁 员员渊员冤院 员 原 源
咱圆圆暂 在葬则藻 砸袁 郧葬皂泽 宰袁 悦怎造澡葬皂 粤援 粤 则藻增蚤泽蚤燥灶 燥枣 灾藻则贼蚤糟蚤造造蚤怎皂 泽藻糟贼援
孕则燥泽贼则葬贼葬援 陨援 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 泽贼怎凿蚤藻泽 怎泽蚤灶早 陨栽杂 泽藻择怎藻灶糟藻泽援 晕燥增葬
匀藻凿憎蚤早蚤葬袁 圆园园园袁 苑员渊猿 辕 源冤院 源远缘 原 源愿园
咱圆猿暂 栽则怎凿藻造 允袁 粤泽泽藻造蚤灶 粤援 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 糟澡蚤贼蚤灶葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 葬枣贼藻则 责燥造赠鄄
葬糟则赠造葬蚤皂蚤凿藻 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽援 粤灶葬造赠贼蚤糟葬造 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠袁
员怨愿怨袁 员苑愿渊圆冤院 猿远圆 原 猿远远
咱圆源暂 郧葬皂泽 宰援 粤 糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 贼燥 贼澡藻 噪灶燥憎造藻凿早藻 燥枣 灶藻皂葬贼燥责澡葬早燥怎泽
泽责藻糟蚤藻泽 燥枣 灾藻则贼蚤糟蚤造造蚤怎皂援 晕藻贼澡藻则造葬灶凿泽 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁
员怨愿愿袁 怨源渊猿冤院 员圆猿 原 员源愿
咱圆缘暂 杂澡葬则燥灶 耘袁 悦澡藻贼 陨袁 灾蚤贼藻则遭燥 粤袁 藻贼 葬造援 孕葬则葬泽蚤贼蚤泽皂 燥枣 栽则蚤糟澡燥凿藻则皂葬
燥灶 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 躁葬增葬灶蚤糟葬 葬灶凿 则燥造藻 燥枣 贼澡藻 早藻造葬贼蚤灶燥怎泽 皂葬贼则蚤曾援 耘怎鄄
则燥责藻葬灶 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园园苑袁 员员愿渊猿冤院 圆源苑 原 圆缘愿
咱圆远暂 杂蚤灶早澡 杂袁 孕葬灶凿藻赠 砸 运袁 郧燥泽憎葬皂蚤 月 运援 月蚤燥鄄糟燥灶贼则燥造 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣
孕怎则责怎则藻燥糟蚤造造蚤怎皂 造蚤造葬糟蚤灶怎皂 泽贼则葬蚤灶泽 蚤灶 皂葬灶葬早蚤灶早 则燥燥贼鄄噪灶燥贼 凿蚤泽藻葬泽藻
燥枣 贼燥皂葬贼燥 糟葬怎泽藻凿 遭赠 酝藻造燥蚤凿燥早赠灶藻 蚤灶糟燥早灶蚤贼葬援 月蚤燥糟燥灶贼则燥造 杂糟蚤藻灶糟藻
葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园员猿袁 圆猿渊员圆冤院 员源远怨 原 员源愿怨
咱圆苑暂 砸葬泽贼 阅 酝袁 匀燥则泽糟澡 酝袁 云怎则贼藻则 砸袁 藻贼 葬造援 粤 糟燥皂责造藻曾 糟澡蚤贼蚤灶燥造赠贼蚤糟
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