全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ２０１５， ４２（６）： ９１４ － ９２０ ＤＯＩ： １０􀆰 １３８０２ ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｚｗｂｈｘｂ． ２０１５􀆰 ０６􀆰 ００８
基金项目：国家现代农业（玉米）产业技术体系（ＣＡＲＳ⁃０２⁃１５），四川省“十二五”农作物及畜禽育种攻关项目（２０１１ＹＺＧＧ⁃２５⁃３）
∗通讯作者（Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）， Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｌｉｘｉａｏｍａｉｚｅ＠ １６３． ｃｏｍ
收稿日期： ２０１５ － ０７ － ２２
西南地区玉米纹枯病病菌融合群鉴定
和 ＵＰ⁃ＰＣＲ 分析
崔丽娜　 张小飞　 邹成佳　 李　 晓∗　 杨晓蓉　 向运佳
（四川省农业科学院植物保护研究所， 农业部西南作物有害生物综合治理重点实验室， 成都 ６１００６６）
摘要： 为明确西南地区玉米纹枯病病菌组成结构，从西南地区（四川、贵州、云南和重庆）玉米纹枯
病样上分离获得 ２８５ 个疑似丝核菌菌株，根据培养性状、菌丝形态和细胞核染色对其进行鉴定，通
过载玻片配对培养法对鉴定出的菌株进行菌丝融合群鉴定，并采用 ＵＰ⁃ＰＣＲ 方法从各融合群中选
取代表性菌株进行遗传变异分析。 结果显示，供试疑似菌株中共鉴定出 ２５３ 个丝核菌，分别为 ２２４
株立枯丝核菌 Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ 和 ２９ 株玉蜀黍丝核菌 Ｒ． ｚｅａｅ。 立枯丝核菌包括 ５ 个融合群，其中
ＡＧ１⁃ⅠＡ 共 ２０１ 株，出现频率为 ７９􀆰 ４％ ；ＡＧ１⁃ⅠＢ 共 ２ 株，出现频率为 ０􀆰 ８％ ；ＡＧ２⁃２ⅢＢ 共 ３ 株，
出现频率为 １􀆰 ２％ ； ＡＧ４⁃ＨＧⅠ共 １０ 株，出现频率为 ３􀆰 ９％ ；ＡＧ⁃５ 共 ８ 株，出现频率为 ３􀆰 ２％ 。 ２９
株玉蜀黍丝核菌融合群均为 ＷＡＧ⁃Ｚ，出现频率为 １１􀆰 ５％ 。 遗传变异分析中，当相似系数为 ０􀆰 ７８
时，按照出现频率从立枯丝核菌和玉蜀黍丝核菌选取的不同融合群的 ２０ 株菌株被划分为 ６ 个类
群，与菌丝融合分析结果完全吻合，其中 ＡＧ２⁃２ⅢＢ 融合群首次从西南地区玉米上分离到。
关键词： 玉米纹枯病； 融合群； 通用引物聚合酶链反应技术
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ． ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｍａｉｚｅ ｉｎ ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ
Ｃｈｉｎａ ａｎｄ ＵＰ⁃ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｃｕｉ Ｌｉｎａ　 Ｚｈａｎｇ Ｘｉａｏｆｅｉ　 Ｚｏｕ Ｃｈｅｎｇｊｉａ　 Ｌｉ Ｘｉａｏ∗ 　 Ｙａｎｇ Ｘｉａｏｒｏｎｇ　 Ｘｉａｎｇ Ｙｕｎｊｉａ
（Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｎ Ｃｒｏｐｓ ｉｎ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ； Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００６６， Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ． ｆｒｏｍ ｍａｉｚｅ ｉｎ ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ
Ｃｈｉｎａ， ２８５ ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｓｉｃｈｕａｎ， Ｇｕｉｚｈｏｕ， Ｙｕｎｎａｎ ａｎｄ
Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ． Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｃｕｌｔｕｒａｌ ｔｒａｉｔｓ， ｃｏｌｏｎｉａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｎｕｃｌｅｕｓｅｓ， ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ． Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ， ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｓｌｉｄｅ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ； ｉｎ
ａｄｄｉｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ
ｇｒｏｕｐｓ ｗｉｔｈ ｕｎｉｖｅｒｓａｌｌｙ ｐｒｉｍｅｄ ＰＣＲ （ＵＰ⁃ＰＣＲ）． Ｉｎ ｔｏｔａｌ， ２５３ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ
ｓｐｐ． ， ａｍｏｎｇ ｗｈｉｃｈ ２２４ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ａｎｄ ２９ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｚｅａｅ． Ｔｈｅ
ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｒ． ｓｏｌａｎｉ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｆｉｖｅ ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐｓ （ＡＧ）： ＡＧ１⁃ⅠＡ （２０１ ｉｓｏｌａｔｅｓ， ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ ｆｏｒ
７９􀆰 ４％ ）， ＡＧ１⁃ⅠＢ （２， ０􀆰 ８％ ）， ＡＧ２⁃２ⅢＢ （３， １􀆰 ２％ ）， ＡＧ４⁃ＨＧⅠ （１０， ３􀆰 ９％ ） ａｎｄ ＡＧ⁃５ （８，
３􀆰 ２％ ）． Ｔｈｅ ａｌｌ ２９ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｒ． ｚｅａｅ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ ＷＡＧ⁃Ｚ （１１􀆰 ５％ ）． Ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ，
ｔｈｅ ２０ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ Ｒ． ｓｏｌａｎｉ ａｎｄ Ｒ． ｚｅａｅ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｓｉｘ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｗａｓ ０􀆰 ７８， ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐ ａｎａｌｙｓｉｓ．
Ｍｏｒｅｏｖｅｒ， ＡＧ２⁃２ⅢＢ ｗａｓ ｆｉｒｓｔｌｙ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｍａｉｚｅ ｉｎ ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｃｈｉｎａ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｍａｉｚｅ ｂａｎｄｅｄ ｌｅａｆ ａｎｄ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ； ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐ； ＵＰ⁃ＰＣＲ
　 　 玉米纹枯病由丝核菌 Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ． 引起，在
世界玉米产区广泛存在，我国最早于 １９６６ 年在吉
林省报道了该病害的发生（戚佩坤，１９６６）。 ２０ 世纪
７０ 年代，随着玉米种植面积的扩大、杂交种的推广
应用、施肥量及种植密度的提高，玉米纹枯病的发
生、扩展和蔓延日趋严重，已成为我国玉米产区的主
要病害（杨华等，２００５）。 在西南玉米种植区，由于
受气温高、湿度大和寡照的影响，使纹枯病成为该地
区的主要病害（赵茂俊等，２００６）。 近年来，随着免
（少）耕措施的实行、施肥水平的提高、密植栽培技
术的推广和抗病品种的缺乏，纹枯病的发生有日益
加重的趋势（黄明波等，２００７）。 玉米品种的更替及
耕作制度的改变，对病原菌种群结构也可能产生了
一定的影响（严大富等，１９９９； 何玉梅等，２００７）。
玉米纹枯病病原菌种类在不同地区之间存在差
异。 菲律宾报道只发现立枯丝核菌 Ｒ． ｓｏｌａｎｉ 融合
群 ＡＧ１⁃ⅠＡ（Ｐａｓｃｕａｌ ｅｔ ａｌ． ，２０００）；土耳其玉米籽粒
样品上主要发现立枯丝核菌融合群 ＡＧ⁃４、ＡＧ⁃５ 和
ＡＧ⁃１０，玉蜀黍丝核菌 Ｒ． ｚｅａｅ 及双核丝核菌融合群
ＡＧ⁃Ｂａ（Ｄｅｍｉｒｃｉ ＆ Ｋｏｒｄａｌｉ，１９９９）；印度玉米纹枯病
菌只发现立枯丝核菌融合群 ＡＧ１⁃ⅠＡ 和 ＡＧ１⁃ⅠＢ
（Ｐａｕｌ ＆ Ｓｏｏｄ，２００８）。 国内报道辽宁省玉米纹枯病
致病菌目前仅发现 ＡＧ１⁃ⅠＡ 融合群（唐朝荣等，
２０００），华北地区玉米上分离到立枯丝核菌中的
ＡＧ１⁃ⅠＡ、ＡＧ１⁃ⅠＢ、ＡＧ３、ＡＧ５ 以及禾谷丝核菌 Ｒ．
ｃｅｒｅａｌｉｓ 中的 ＣＡＧ３、ＣＡＧ６、ＣＡＧ８、ＣＡＧ９、ＣＡＧ１０ 等
融合群（高卫东，１９８７）。 而对我国西南地区玉米纹
枯病病原组成尚缺乏系统研究，对该地区纹枯病菌
的分析以及对其融合群的鉴定，将为选育和利用抗
纹枯病品种提供理论依据。
菌丝融合群是目前丝核菌最成功的分类手段，
但它不能提供融合群间或亚群间以及融合群内或亚
群内更多遗传多样性和种群系统演化的信息。 通用
引物聚合酶链反应技术 （ ｕｎｉｖｅｒｓａｌｌｙ ｐｒｉｍｅｄ ＰＣＲ，
ＵＰ⁃ＰＣＲ）是研究病原菌群体遗传多样性的分子标记
方法之一。 国内外广泛将 ＵＰ⁃ＰＣＲ 分析用于如生防
木霉菌等真菌生物多样性和种类鉴定（Ｂｕｌａｔ ｅｔ ａｌ． ，
１９９８），以及镰孢菌和黑粉菌等植物病原菌遗传多
样性的研究 （ Ｙｌｉ⁃Ｍａｔｔｉｌａ ｅｔ ａｌ． ， ２００４；张小飞等，
２００９ａ）。 将该技术用于丝核菌遗传多样性研究在
国内尚无相关报道，因此，本研究采集西南玉米主产
区纹枯病标样，分析玉米纹枯病菌的种群组成，并应
用 ＵＰ⁃ＰＣＲ 方法拟从 ＤＮＡ 水平上明确我国西南地
区玉米纹枯病菌的群体内遗传变异情况，与传统的
融合群鉴定方法进行相互验证，以期为该病害的流
行与发生规律和抗病育种研究提供基础信息。
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试材料及标准菌株：２００６—２０１０ 年从四川
（１８３ 份）、贵州（６７ 份）、云南（２６ 份）及重庆市（９
份）玉米主产区采集纹枯病罹病叶病叶鞘、苞叶、菌
核共 ２８５ 份，采用水琼脂分离法分离菌株（周而勋
和杨媚，１９９８）。 分离、纯化后获得的纯培养物经鉴
定为丝核菌后，４℃保存备用。 立枯丝核菌菌丝融合
群标准菌株由沈阳农业大学高增贵研究员、华南农
业大学周而勋教授提供，玉蜀黍丝核菌融合群标准
菌株由山东农业大学于金凤教授提供。
培养基：马铃薯葡萄糖琼脂 （ ｐｏｔａｔｏ ｄｅｘｔｒｏｓｅ
ａｇａｒ，ＰＤＡ）培养基：马铃薯 ２００ ｇ、葡萄糖 １０ ～ ２０ ｇ、
琼脂 １７ ～ ２０ ｇ、水 １ Ｌ；马铃薯葡萄糖（ ｐｏｔａｔｏ ｄｅｘ⁃
ｔｒｏｓｅ，ＰＤ）培养基：ＰＤＡ 培养基中不添加琼脂。
试剂及仪器：Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶、ｄＮＴＰ、１０ × Ｂｕｆｆ⁃
ｅｒ 购自大连 ＴａＫａＲａ 公司；其余试剂均为国产分析
纯；引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合
成。 Ｍｏｔｉｃ ＢＡ２１０ 型生物显微镜，麦克奥迪（厦门）
电气股份有限公司；ＰＴＣ⁃２００ 型 ＰＣＲ 仪、Ｇｅｌ Ｄｏｃ
ＸＲ ＋ Ｓｙｓｔｅｍ 凝胶成像系统，美国 Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ 公司；
ＤＹＹ⁃Ⅲ电泳仪，北京市六一仪器厂。
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 细胞核染色与纹枯菌菌丝融合群鉴定
细胞核染色采用改进的海登汉氏苏木精法（李
振岐等，１９８５）：将灭菌载玻片置于融化的 ２％水琼
脂中浸后取出，水琼脂成一薄层凝固在载玻片上，将
待鉴定菌株挑取菌丝块于水琼脂载片中间培养
２４ ～ ４８ ｈ，将长满菌丝的载玻片 ４２℃干燥 ６ ｈ；取出
用蒸馏水冲洗 １ ｍｉｎ；在 ４％铁明矾媒染液中媒染 ４
ｈ；取出用蒸馏水冲洗；放入 ０􀆰 ５％海登汉氏苏木精
染液中染色 ４ ～ １０ ｈ；取出用蒸馏水冲洗；在 ５０％ 、
７５％ 、９５％ 、１００％酒精中逐级脱水；在 ０􀆰 ２５％桔红
Ｇ 酒精溶液中复染 ５ ｍｉｎ，用无水酒精冲洗；将平板
置于显微镜下，小心滴加 ５０％乳酚油 １ 滴，当观察
细胞质的染色基本褪完、细胞核（染成蓝黑色）明显
出现时，立即滴加纯甘油，停止褪色，然后加盖玻片
用显微镜进行细胞核的观察与记录。
菌丝融合群鉴定采用载玻片配对培养法
（Ｐａｒｍｅｔｅｒ ｅｔ ａｌ． ，１９６９），稍有改动。 将灭菌载玻片
置于融化的 ２％水琼脂中浸后取出，水琼脂成一薄
５１９６ 期 崔丽娜等： 西南地区玉米纹枯病病菌融合群鉴定和 ＵＰ⁃ＰＣＲ 分析
层凝固在载玻片上，挑取标准 ＡＧ 菌株于载玻片正
中，两侧间隔约 １􀆰 ５ ～ ２ ｃｍ 处分别放置同一待测
菌株，在 ２５℃下培养。 待 ２ 菌落前缘在载玻片中
央相遇并交叠约 ２ ～ ３ ｍｍ 后进行镜检，根据待测
菌株与标准菌株间的菌丝融合情况确定是否为该
融合群。
１􀆰 ２􀆰 ２ 供试菌株的 ＵＰ⁃ＰＣＲ 分析
在丝核菌融合群鉴定的基础上，按比例每个融
合群随机选取 １ ～ ５ 株菌株：ＡＧ１⁃ⅠＡ 包括贵州龙
里 ０８⁃４１⁃１３、四川南溪 ０８⁃３０⁃１６、云南楚雄 ０８⁃５７⁃
１２、四川资阳 ０８⁃４５⁃１７ 和云南曲靖 ０８⁃４３⁃０２ 共 ５
株；ＡＧ１⁃ⅠＢ 仅有四川新都 ０８⁃５３⁃０４；ＡＧ２⁃２ⅢＢ 包
括贵州遵义 ０８⁃２５⁃０８、四川新都 ０８⁃４５⁃１４ 和四川德
阳 ０８⁃２５⁃２７ 共 ３ 株；ＡＧ４⁃ＨＧⅠ包括四川德阳 ０８⁃
２５⁃２７、０８⁃２０⁃０６ 和四川峨眉 ０７⁃１０⁃０２ 共 ３ 株；ＡＧ５
包括云南大理 ０８⁃４７⁃０２、贵州正安 ０８⁃４４⁃０６、贵州龙
里 ０８⁃４２⁃０９ 和四川金堂 ０８⁃２９⁃１６ 共 ４ 株；ＷＡＧ⁃Ｚ
包括四川简阳 ０８⁃３８⁃１５、贵州玉屏 ０８⁃３９⁃０５、贵州贵
阳 ０８⁃５５⁃０４ 和贵州正安 ０８⁃４４⁃０２ 共 ４ 株。 将 ２０ 株
供试菌株在 ＰＤＡ 平板上活化 ３ ｄ 后，每个菌株取直
径 ５ ｍｍ 的菌丝圆片至 ＰＤ 液体培养基中。 ２５℃、
１００ ｒ ／ ｍｉｎ 培养 ３ ｄ。 收集菌丝体后用无菌蒸馏水冲
洗 ２ 次后过滤，６０℃干燥。 采用 ＣＴＡＢ 法提取基因
组 ＤＮＡ（张小飞等，２００９ｂ）。
２０ μＬ ＰＣＲ 反应体系为：１０ × Ｂｕｆｆｅｒ ２ μＬ、２５
ｍｍｏｌ ／ Ｌ ＭｇＣｌ２ ２ μＬ、１０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ ｄＮＴＰ ０􀆰 ５ μＬ、５ Ｕ ／
μＬ Ｔａｑ 酶 ０􀆰 ２５ μＬ、１０ μｍｏｌ ／ Ｌ 引物 １ μＬ、供试菌株
ＤＮＡ 模板 １ μＬ（２５ ｎｇ）、ｄｄＨ２Ｏ １３􀆰 ２５ μＬ。 ＵＰ⁃ＰＣＲ
反应条件：９４℃预变性 ５ ｍｉｎ；９４℃ ４５ ｓ，５６℃ ５０ ｓ，
７２℃ ９０ ｓ，３５ 个循环；７２℃延伸 １０ ｍｉｎ。 扩增结果
用 １􀆰 ７％的琼脂糖凝胶电泳检测，ＴＢＥ 为电泳缓冲
液，上样 ７ μＬ。 检测扩增效果并记录。
１􀆰 ２􀆰 ３ 供试菌株的遗传相似性分析
共采用 １３ 个 ＵＰ⁃ＰＣＲ 通用引物 ０􀆰 ３⁃１（５′⁃ＣＧＡ
ＧＡＡＣＧＡＣＧＧＴＴＣＴ⁃３′）、０􀆰 ３⁃２（５′⁃ＴＧＡＧＧＡＣＡＡＣＧＧ
ＴＴＣＣ⁃３′）、３⁃１ （５′⁃ＴＡＡＧＧＴＧＧＣＧＧＣＣＡＧＴ⁃３′）、 ３⁃２
（５′⁃ＴＡＡＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＡＧＴ⁃３′）、 ＡＡ２Ｍ２ （５′⁃ＣＴＧＣ
ＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＧＧ⁃３′）、 ＡＳ４ （５′⁃ＴＧＴＧＧＧＣＧＣＴＣＧＡＣＡ
Ｃ⁃３′）、 ＡＳ１５ （５′⁃ＧＧＣＴＡＡＧＣＧＧＴＣＧＴＴＡＣ⁃３′）、 ＡＳ１３ｉｎｖ
（５′⁃ＣＡＴＴＧＣＴＧＧＣＧＡＡＴＣＧＧ⁃３′）、 Ｌ１５ （ ５′⁃ＧＡＧＧＧＴＧ⁃
ＧＣＧＧＴＴＣＴ⁃３′）、 Ｌ１５ ／ ＡＳ１９ （ ５′⁃ＧＡＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＴ
ＡＧ⁃３′）、 Ｌ２１ （ ５′⁃ＧＧＡＴＣＣＧＡＧＧＧＴＧＧＣＧＧＴＴＣＴ⁃３′）、
Ｌ４５（５′⁃ＧＴＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴ⁃３′）、ＨＥ４５（５′⁃ＧＴＡ⁃
ＡＡＡＣＧＡＧＧＣＣＡＧＴ⁃３′）对 １􀆰 ２􀆰 ２ 部分中选取的 ２０
个菌株进行扩增，并选取扩增条带带型清晰、多态性
好的引物进行分析，根据每个位点上谱带的有无，分
别用 “１”和“０”代表，用 ＮＴＳＹＳ⁃ＰＣ 软件中的 ＳＴ⁃
ＭＱＵＡＬ 程序计算 ＤＮＡ 相似系数，并用 ＵＰＧＭＡ 程
序构建遗传相关聚类图，以分析供试菌株间的遗传
相似性。
２ 结果与分析
２􀆰 １ 西南地区玉米纹枯病菌融合群组成与分布
对采自西南地区四川、贵州、重庆、云南的 ２８５
份玉米纹枯病病样进行分离、纯化，根据培养性状、
菌丝形态和细胞核数目，鉴定出 ２５３ 株丝核菌菌
株，包括立枯丝核菌 ２２４ 株和玉蜀黍丝核菌 ２９ 株。
菌丝融合鉴定结果表明，立枯丝核菌包括 ５ 个融合
群，分别为 ＡＧ１⁃ⅠＡ（图 １⁃Ａ）、ＡＧ１⁃ⅠＢ（图 １⁃Ｂ）、
ＡＧ２⁃２ⅢＢ（图 １⁃Ｃ）、ＡＧ４⁃ＨＧⅠ（图 １⁃Ｄ）、ＡＧ⁃５（图
１⁃Ｅ），各包含 ２０１、２、３、１０、８ 株菌株， 出现频率分别
为 ７９􀆰 ４％ 、０􀆰 ８％ 、１􀆰 ２％ 、３􀆰 ９％和 ３􀆰 ２％ ，ＡＧ１⁃ⅠＡ
为优势融合群；２９ 株玉蜀黍丝核菌融合群均为
ＷＡＧ⁃Ｚ（图 １⁃Ｆ），出现频率为 １１􀆰 ５％ （表 １）。 四川
省的 １６１ 个菌株被分为 ５ 个融合群，主要融合群为
ＡＧ１⁃ⅠＡ（７９􀆰 ４％ ）和 ＷＡＧ⁃Ｚ（１３％ ）；其它 ３ 个融
合群出现频率低。 贵州省的 ５９ 个菌株分为 ４ 个融
合群，未分离到 ＡＧ１⁃ⅠＢ 和 ＡＧ４⁃ＨＧＩ。 云南的 ２０
个菌株分别属于 ５ 个融合群，ＡＧ１⁃ⅠＡ、ＡＧ１⁃ⅠＢ、
ＡＧ４⁃ＨＧＩ、ＡＧ５ 和 ＷＡＧ⁃Ｚ。 重庆的 ９ 个菌株均为
ＡＧ１⁃ⅠＡ。 表明 ＡＧ１⁃ⅠＡ 为西南地区玉米纹枯病
的优势致病群，而其它融合群的分布在不同地区间
存在一定的差异。
２􀆰 ２ 西南地区玉米纹枯病菌 ＵＰ⁃ＰＣＲ 分析
所用引物中共有 ８ 个引物 ３⁃１、３⁃２、ＡＡ２Ｍ２、
ＡＳ４、Ｌ１５、Ｌ１５ ／ ＡＳ１９、Ｌ２１ 和 Ｌ４５ 可通过 ＵＰ⁃ＰＣＲ 扩
增出清晰条带，且稳定、分布合理、重复性好。 不同
引物的扩增条带数介于 １７ ～ ２７ 条，共产生 １５９ 条
ＤＮＡ 条带，分布于 ２５０ ～ ２ ５００ ｂｐ 之间，平均每条引
物扩增出 １９􀆰 ８７ 条带（图 ２）。 ８ 个引物的扩增图谱
中，没有共同谱带，在较多的遗传位点上存在差异，
菌株间存在丰富的遗传多样性。 表明西南地区玉米
纹枯病菌菌株间既表现出种内的稳定性，又反映出
不同菌株之间的差异。
２􀆰 ３ 西南地区玉米纹枯病菌的遗传多样性
聚类结果表明，当相似系数为 ０􀆰 ７８ 时，２０ 株菌
株被划分为 ６ 个类群（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｇｒｏｕｐｓ，ＲＧｓ）， 即
ＲＧⅠ、ＲＧⅡ、ＲＧⅢ、ＲＧⅣ、ＲＧＶ 和 ＲＧⅥ（图 ３）。 ＲＧⅠ
６１９ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
　 　 　
图 １ 西南地区玉米丝核菌不同融合群在 ＰＤＡ 上的培养性状
Ｆｉｇ． １ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ． ｆｒｏｍ ｍａｉｚｅ ｉｎ ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｃｈｉｎａ ｏｎ ＰＤＡ
Ａ： ０８⁃３０⁃１６（ＡＧ１⁃ⅠＡ）； Ｂ： ０８⁃５３⁃０４（ＡＧ１⁃ⅠＢ）； Ｃ： ０８⁃２５⁃０８（ＡＧ２⁃２ⅢＢ）； Ｄ： ０８⁃２０⁃０７（ＡＧ４⁃ＨＧⅠ）； Ｅ： ０８⁃４４⁃０６
（ＡＧ５）； Ｆ： ０８⁃４４⁃０２（ＷＡＧ⁃Ｚ）．
　
表 １ 西南地区玉米纹枯病菌融合群种类组成和分布
Ｔａｂｌｅ １ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ． ｆｒｏｍ ｍａｉｚｅ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｉｎ ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｃｈｉｎａ
种
Ｓｐｅｃｉｅｓ
融合群
Ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ
ｇｒｏｕｐ
分布 Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
四川
Ｓｉｃｈｕａｎ
贵州
Ｇｕｉｚｈｏｕ
云南
Ｙｕｎｎａｎ
重庆
Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ
总计
Ｔｏｔａｌ
出现频率 （％）
Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ
立枯丝核菌 Ｒ． ｓｏｌａｎｉ ＡＧ１⁃ⅠＡ １３０ ５０ １２ ９ ２０１ ７９􀆰 ４
立枯丝核菌 Ｒ． ｓｏｌａｎｉ ＡＧ１⁃ⅠＢ ０ ０ ２ ０ ２ ０􀆰 ８
立枯丝核菌 Ｒ． ｓｏｌａｎｉ ＡＧ２⁃２ⅢＢ ２ １ ０ ０ ３ １􀆰 ２
立枯丝核菌 Ｒ． ｓｏｌａｎｉ ＡＧ４⁃ＨＧⅠ ６ ０ ４ ０ １０ ３􀆰 ９
立枯丝核菌 Ｒ． ｓｏｌａｎｉ ＡＧ５ ２ ２ ４ ０ ８ ３􀆰 ２
玉蜀黍丝核菌 Ｒ． ｚｅａｅ ＷＡＧ⁃Ｚ ２１ ６ ２ ０ ２９ １１􀆰 ５
总计 Ｔｏｔａｌ １６１ ５９ ２４ ９ ２５３ １００􀆰 ０
包括 ５ 个菌株，均为 ＡＧ１⁃ⅠＡ；ＲＧⅡ包括 １ 个菌株，
为 ＡＧ１⁃ⅠＢ；ＲＧⅢ包含 ３ 个菌株，均为 ＡＧ４⁃ＨＧＩ；
ＲＧⅣ含有 ４ 个菌株，均为 ＡＧ５；ＲＧⅤ含有 ４ 个菌
株，均为 ＷＡＧ⁃Ｚ；ＲＧⅥ包含 ３ 个菌株，均为 ＡＧ２⁃２
ⅢＢ。 此聚类结果与菌丝融合分析结果完全吻合，
表明 ＵＰ⁃ＰＣＲ 技术可以应用于菌丝融合群分析。 ２０
株菌株中 ０８⁃３８⁃１５ 和 ０８⁃３９⁃０５ 菌株相似程度最高，
达 ９７％ ，２ 个菌株同源性强，但 ０８⁃３８⁃１５ 菌株来自
于四川省简阳，０８⁃３９⁃０５ 菌株来自贵州省玉屏；
ＡＧ１⁃ⅠＡ 融合群的 ０８⁃４１⁃１３ 和 ０８⁃３０⁃１６ 菌株相似
度达 ９６􀆰 ０％ ，但分别采自贵州龙里和四川南溪， 其
它融合群也存在相似的情况，说明纹枯病菌群的遗
传分化与地理分布无明显相关性。
３ 讨论
本研究对分离自西南地区 １９ 市 ２８ 县 ２８５ 份
样品中的 ２５３ 株玉米纹枯病菌进行了种群鉴定，发
现供试菌株可划分为 ２ 个种类，即立枯丝核菌与玉
蜀黍丝核菌。 立枯丝核菌包括 ５ 个融合群，分别为
ＡＧ１⁃ⅠＡ、ＡＧ１⁃ⅠＢ、ＡＧ２⁃２ⅢＢ、ＡＧ４⁃ＨＧＩ和 ＡＧ⁃５；
玉蜀黍丝核菌仅为 ＷＡＧ⁃Ｚ 融合群。 其中 ＡＧ１⁃ⅠＡ
和 ＷＡＧ⁃Ｚ 为主要类群，在四川的出现频率分别为
８０􀆰 ７％和 １３􀆰 ０％ ，与李华荣和兰景华（１９９７）的研究
结果（７１􀆰 ６％和 １６􀆰 ３％ ）较一致，不同的是未分离到
双核丝核菌，但分离到了 ＡＧ２⁃２ⅢＢ（１􀆰 ２％ ）；对云
南省玉米纹枯病样分离鉴定的结果表明 ＡＧ１⁃ⅠＡ
　 　 　
７１９６ 期 崔丽娜等： 西南地区玉米纹枯病病菌融合群鉴定和 ＵＰ⁃ＰＣＲ 分析
图 ２ 引物 Ｌ１５、Ｌ２１、Ｌ４５ 和 ３⁃２ 对供试菌株的 ＵＰ⁃ＰＣＲ 扩增结果　 　
Ｆｉｇ． ２ ＵＰ⁃ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ Ｌ１５， Ｌ２１， Ｌ４５ ａｎｄ ３⁃２ ｆｏｒ ｔｅｓｔｅｄ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｉｓｏｌａｔｅｓ
１： ０８⁃４１⁃１３； ２： ０８⁃３０⁃１６； ３： ０８⁃５７⁃１２； ４： ０８⁃４５⁃１７； ５： ０８⁃４３⁃０２； ６： ０８⁃５３⁃０４； ７： ０８⁃２５⁃０８； ８： ０８⁃４５⁃１４； ９： ０８⁃２５⁃２７；
１０： ０８⁃２０⁃０３； １１： ０８⁃２０⁃０６； １２： ０７⁃１０⁃０２； １３： ０８⁃４７⁃０２； １４： ０８⁃４４⁃０６； １５： ０８⁃４２⁃０９； １６： ０８⁃２９⁃１６； １７： ０８⁃３８⁃１５； １８：
０８⁃３９⁃０５； １９： ０８⁃５５⁃０４； ２０： ０８⁃４４⁃０２．
　
为主要病原菌，其次为 ＡＧ４⁃ＨＧＩ（１６􀆰 ７％ ）和 ＡＧ５
（１６􀆰 ７％ ），ＷＡＧ⁃Ｚ 出现频率为 ８􀆰 ３％ ，与 Ｙａｎｇ ｅｔ
ａｌ． （２００８）认为 ＷＡＧ⁃Ｚ 和 ＡＧ１⁃ⅠＡ 是云南玉米纹
枯病的主要病原物存在明显差异。 这可能是采样的
地区及数量差异造成的。
我国玉米纹枯病病原菌种类在不同地区之间存
在较大差异。 如在华北地区玉米上分离到立枯丝核
菌中的 ＡＧ１⁃ⅠＡ、ＡＧ１⁃ⅠＢ、ＡＧ３、ＡＧ５ 以及禾谷丝
核菌中的 ＣＡＧ３、ＣＡＧ６、ＣＡＧ８、ＣＡＧ９、ＣＡＧ１０ 等融
合群（高卫东，１９８７），唐朝荣等（２０００）认为辽宁省
玉米纹枯病致病菌只有 ＡＧ１⁃ⅠＡ。 引起湖北省玉
米纹枯病的病原菌融合群有 ＡＧ１⁃ⅠＡ、ＡＧ４、ＡＧ５、
８１９ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
图 ３ 西南地区玉米纹枯病菌基于 ＵＰ⁃ＰＣＲ 的遗传聚类分析图
Ｆｉｇ． ３ Ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ２０ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｃｈｉｎａ ｂｙ ＵＰ⁃ＰＣＲ
　
ＡＧＡ、ＡＧＥ 和 ＷＡＧ⁃Ｚ 共 ６ 个（肖炎农等，２００２）； 江
苏省则主要为 ＡＧ１⁃ⅠＡ 和 ＡＧ１⁃ⅠＣ（陈厚德等，
１９９６）；黄淮海地区为 ＡＧ１⁃ⅠＡ、ＡＧ１⁃ⅠＢ、ＡＧ４⁃ＨＧ⁃Ｉ、
ＡＧ⁃５、ＡＧ⁃Ａ、ＡＧ⁃Ｂａ 和 ＷＡＧ⁃Ｚ 融合群，并新发现了
ＡＧ⁃Ｂａ 融合群的菌株（夏海波等，２００８）；东北地 区
为 ＡＧ１⁃Ⅰ Ａ、 ＡＧ１⁃Ⅰ Ｂ、 ＡＧ４⁃ＨＧ⁃Ⅰ、 ＡＧ４⁃ＨＧ⁃Ⅲ、
ＡＧ⁃５、ＷＡＧ⁃Ｚ、ＡＧ⁃Ｂａ（李菊等，２０１１）；而本研究中
西南地区则为立枯丝核菌的 ＡＧ１⁃ⅠＡ、ＡＧ１⁃ⅠＢ、
ＡＧ２⁃２ⅢＢ、ＡＧ４⁃ＨＧＩ、ＡＧ⁃５ 和玉蜀黍丝核菌 ＷＡＧ⁃Ｚ
融合群。 综合各地区的研究结果可知，引起我国玉
米纹枯病的优势致病菌是立枯丝核菌的 ＡＧ１⁃ⅠＡ
融合群，其它融合群种类构成因地域不同而存在一
定差异。 关于本研究中新鉴定的 ＡＧ２⁃２ⅢＢ 融合
群，国外报道主要为害甜菜，也为害土豆和玉米
（Ｗｏｏｄｈａｌｌ ｅｔ ａｌ． ，２０１２；Ａｂｂａｓ ｅｔ ａｌ． ，２０１４），国内尚
无该融合群为害玉米的相关报道，本研究从玉米纹
枯病样上分离到 ＡＧ２⁃２ⅢＢ 菌株在国内尚属首次。
ＵＰ⁃ＰＣＲ 技术与 ＲＡＰＤ 技术相比，优点在于具
有广泛性、通性，且重复性好，是研究病原菌群体遗
传多样性很好的分子标记方法。 本研究将 ＵＰ⁃ＰＣＲ
技术应用于我国西南地区玉米纹枯病菌不同融合群
的菌株间遗传多样性研究，聚类结果显示不同玉米
纹枯病菌融合群存在着丰富的遗传多样性。 ＵＰ⁃
ＰＣＲ分析既体现了玉米纹枯病菌同一融合群菌株
之间的亲缘关系，又体现了不同融合群之间存在的
差异。 本研究结果表明菌丝融合鉴定结果与 ＵＰ⁃
ＰＣＲ聚类分类分析结果具有很好的吻合度，从而进
一步验证了本试验结果的准确性。 同时，ＵＰ⁃ＰＣＲ
聚类结果表明同一融合群内菌株遗传相似度与地理
位置无明显相关性。
参 考 文 献 （Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
Ａｂｂａｓ ＳＪ， Ａｈｍａｄ Ｂ， Ｋａｒｌｏｖｓｋｙ Ｐ． ２０１４． Ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ＰＣＲ （ｑＰＣＲ）
ａｓｓａｙ ｆｏｒ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ａｎａｓｔｏｍｏｓｅｓ ｇｒｏｕｐ ＡＧ２⁃２Ⅲｂ． Ｐａ⁃
ｋｉｓｔａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙ， ４６（１）： ３５３ － ３５６
Ｂｕｌａｔ ＳＡ， Ｌüｂｅｃｋ Ｍ， Ｍｉｒｏｎｅｎｋｏ Ｎ， Ｊｅｎｅｓｎ ＤＦ， Ｌüｂｅｃｋ ＰＳ． １９９８．
ＵＰ⁃ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ＩＴＳ１ ｒｉｂｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ
ａｎｄ Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ． Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， １０２（８）： ９３３ － ９４３
Ｃｈｅｎ ＨＤ， Ｌｉａｎｇ ＪＮ， Ｚｈｕ Ｈ． １９９６． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ
ｏｆ ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｏｎ ｃｏｒｎ ｉｎ Ｊｉａｎｇｓｕ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ． Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ， ２６（２）： １３８ （ ｉｎ Ｃｈｉ⁃
ｎｅｓｅ） ［陈厚德， 梁继农， 朱华． １９９６． 江苏玉米纹枯菌的菌
丝融合群及致病力． 植物病理学报， ２６（２）： １３８］
Ｄｅｍｉｒｃｉ Ｅ， Ｋｏｒｄａｌｉ Ｓ． １９９９． Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ
ｇｒｏｕｐｓ ｆｒｏｍ ｃｏｒｎ ｋｅｒｎｅｌｓ ｉｎ Ｔｕｒｋｅｙ． Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ， ８３（９）： ８７９
Ｇａｏ ＷＤ． １９８７． Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｍａｉｚｅ， ｓｏｒ⁃
ｇｈｕｍ ａｎｄ ｍｉｌｌｅｔ ｉｎ ｎｏｒｔｈ Ｃｈｉｎａ． Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ，
１７（４）： ２４７ － ２５１ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［高卫东． １９８７． 华北区玉
米、高粱、谷子纹枯病病原学的初步研究． 植物病理学报，
１７（４）： ２４７ － ２５１］
Ｈｅ ＹＭ， Ｚｈａｎｇ ＲＺ， Ｚｈａｎｇ ＬＨ， Ｘｉｅ ＫＺ． ２００７． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｔｉｌｌａｇｅ ｐｒａｃｔｉｃｅｓ ｏｎ ｆｕｎｇｉ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｃｏｌｏｇｉｃ ｃｈａｒ⁃
ａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｉｎ ｌｏｅｓｓ ｓｏｉｌｓ． Ａｃｔａ Ｅｃｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ， ２７（１）： １１３ －
９１９６ 期 崔丽娜等： 西南地区玉米纹枯病病菌融合群鉴定和 ＵＰ⁃ＰＣＲ 分析
１１９ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［何玉梅， 张仁陟， 张丽华， 解开治．
２００７． 不同耕作措施对土壤真群菌落结构与生态特征的影
响． 生态学报， ２７（１）： １１３ － １１９］
Ｈｕａｎｇ ＭＢ， Ｔａｎ Ｊ， Ｙａｎｇ ＪＰ， Ｙａｎｇ ＫＣ． ２００７． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｄｖａｎｃｅ ｏｎ
ｂａｎｄｅｄ ｌｅａｆ ａｎｄ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｍａｉｚｅ． Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２０（２）： ２０９ － ２１３ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［黄
明波， 谭君， 杨俊品， 杨克诚． ２００７． 玉米纹枯病研究进
展． 西南农业学报， ２０（２）： ２０９ － ２１３］
Ｌｉ ＨＲ， Ｌａｎ ＪＨ． １９９７． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ
ｚｅａｅ ｆｒｏｍ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｍａｉｚｅ． Ｍｙｃｏｓｙｓｔｅｍａ， １６（２）： １３４ －
１３８ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［李华荣， 兰景华． １９９７． 玉蜀黍丝核菌的
鉴定特征． 菌物系统， １６（２）： １３４ － １３８］
Ｌｉ Ｊ， Ｘｉａ ＨＢ， Ｙｕ ＪＦ． ２０１１． Ｔｈｅ ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｒｎ
ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ． ｉｎ ｎｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎ Ｃｈｉｎａ．
Ｍｙｃｏｓｙｓｔｅｍａ， ３０（３）： ３９２ － ３９９ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［李菊， 夏海
波，于金凤． 中国东北地区玉米纹枯病菌的融合群鉴定，菌
物学报， ３０（３）： ３９２ － ３９９］
Ｌｉ ＺＱ， Ｌｕ ＨＰ， Ｍａ Ｑ， Ｓｈａｒｐ ＥＬ， Ｒｅｉｎｈｏｌｄ Ｍ． １９８５． Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ
ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈａｉｄｅｎｈａｉｎｓ Ｈａｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ
ｇｅｒｍ ｔｕｂｅ ｎｕｃｌｅｉ ｏｆ ｓｔｒｉｐｅ ｒｕｓｔ ｏｆ ｗｈｅａｔ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ
Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）， （１）： １ － １３
（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［李振岐， 陆和平， 马青， Ｓｈａｒｐ ＥＬ， Ｒｅｉｎｈｏｌｄ
Ｍ． １９８５． 小麦条锈菌夏孢子芽管核染色方法的改进研究．
西北农学院学报（自然科学版）， （１）： １ － １３］
Ｐａｒｍｅｔｅｒ ＪＲ Ｊｒ． ， Ｓｈｅｒｗｏｏｄ ＲＴ， Ｐｌａｔｔ ＷＤ． １９６９． Ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ
ｇｒｏｕｐｓ ａｍｏｎｇ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ⁃
ｏｇｙ， ５９（９）： １２７０ － １２７８
Ｐａｓｃｕａｌ ＣＢ， Ｔｏｄａ Ｔ， Ｒａｇｍｒｏｄｏ ＡＤ， Ｈｙａｋｕｍａｃｈｉ Ｍ． ２０００． Ｃｈａｒ⁃
ａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ ＰＣＲ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ
ｓｏｌａｎｉ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｃａｕｓｉｎｇ ｂａｎｄｅｄ ｌｅａｆ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｉｎ ｍａｉｚｅ． Ｐｌａｎｔ
Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ４９（１）： １０８ － １１８
Ｐａｕｌ ＹＳ， Ｓｏｏｄ Ｖ． ２００８． Ｅｔｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｂａｎｄｅｄ ｌｅａｆ
ａｎｄ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｍａｉｚｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ９０
（Ｓ２）： １２３ （Ａｂｓｔｒａｃｔ）
Ｑｉ ＰＫ． １９６６． Ｆｕｎｇｉ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｐｌａｎｔ ｉｎ Ｊｉｌｉｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ．
Ｂｅｉｊｉｎｇ： Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓ， ｐｐ． ３３ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［戚佩坤． 吉林
省栽培植物真菌病害志． １９６６． 北京： 科学出版社， ｐｐ．
３３］
Ｔａｎｇ ＣＲ， Ｃｈｅｎ Ｊ， Ｊｉ ＭＳ， Ｚｏｕ ＱＤ， Ｓｏｎｇ Ｇ． ２０００． Ｔｈｅ ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ
ｃｏｒｎ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｉｎ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ． Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ
Ｓｉｎｉｃａ， ３０（４）： ３１９ － ３２６ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［唐朝荣， 陈捷， 纪
明山， 邹庆道， 宋刚． ２０００． 辽宁省玉米纹枯病病原学研
究． 植物病理学报， ３０（４）： ３１９ － ３２６］
Ｗｏｏｄｈａｌｌ ＪＷ， Ｂｅｃｈｅｒ ＡＲ， Ｐｅｔｅｒｓ ＪＣ， Ｋｉｒｋ ＷＷ， Ｗｈａｒｔｏｎ ＰＳ．
２０１２． Ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ＡＧ２⁃２ⅢＢ ｉｎｆｅｃｔｉｎｇ ｐｏ⁃
ｔａｔｏ ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｓｔｏｌｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ． Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ， ９６
（３）： ４６０
Ｘｉａ ＨＢ， Ｗｕ ＥＹ， Ｙｕ ＪＦ． ２００８． Ｔｈｅ ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｒｎ
ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ． ｉｎ Ｈｕａｎｇｈｕａｉ Ｐｌａｉｎ ａｎｄ
Ｈａｉｈｅ Ｐｌａｉｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ． Ｍｙｃｏｓｙｓｔｅｍａ， ２７（３）： ３６０ －３６７ （ｉｎ Ｃｈｉ⁃
ｎｅｓｅ） ［夏海波， 伍恩宇， 于金凤． ２００８． 黄淮海地区夏玉米
纹枯病菌的融合群鉴定． 菌物学报， ２７（３）： ３６０ －３６７］
Ｘｉａｏ ＹＮ， Ｌｉ ＪＳ， Ｚｈｅｎｇ ＹＬ， Ｙｕ ＳＺ， Ｙｕ ＧＹ． ２００２． Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ
ｓｐｐ． ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｒｎ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｉｎ Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ． Ｍｙ⁃
ｃｏｓｙｓｔｅｍａ， ２１（３）： ４１９ － ４２４ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［肖炎农， 李建
生， 郑用链， 徐尚忠， 于广洋． ２００２． 湖北省玉米纹枯病病
原丝核菌的种类和致病性． 菌物系统， ２１（３）： ４１９ － ４２４］
Ｙａｎ ＤＦ， Ｈｕａ ＪＬ， Ｌｕ Ｆ， Ｗａｎｇ ＦＭ， Ｙａｎｇ ＪＬ， Ｃｈｅｎ ＹＲ． １９９９．
Ｒｅｇｕｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｒａｃｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ ａｎｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ ｒｉｃｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｉｎ Ｗｕｊｉａｎｇ ｒｉｃｅ⁃ｐｌａｎｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ Ｊｉａｎ⁃
ｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ． Ｊｉａｎｇｓｕ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １５（３）：
１４１ － １４６ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［严大富， 花家禄， 陆凡， 王法明，
杨金龙， 陈以仁． １９９９． 吴江稻区稻瘟病菌小种更替规律及
抗瘟品种的利用． 江苏农业学报， １５（３）： １４１ － １４６］
Ｙａｎｇ ＧＨ， Ｃｏｎｎｅｒ ＲＬ， Ｃｈｅｎ ＹＹ， Ｃｈｅｎ ＪＹ， Ｗａｎｇ ＹＧ． ２００８． Ｆｒｅ⁃
ｑｕｅｎｃｙ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ． ｃａｕ⁃
ｓｉｎｇ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｏｎ ｒｉｃｅ ａｎｄ ｂａｎｄｅｄ ｌｅａｆ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｎ ｍａｉｚｅ ｉｎ
Ｙｕｎｎａｎ， Ｃｈｉｎａ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ９０（２）： ３８７ － ３９２
Ｙａｎｇ Ｈ， Ｙａｎｇ ＪＰ， Ｒｏｎｇ ＴＺ， Ｔａｎ Ｊ， Ｑｉｕ ＺＧ． ２００５． ＱＴＬ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｍａｒｋｅｒ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｍａｉｚｅ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅ⁃
ｔｉｎ， ５０（８）： ７７２ － ７７６ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［杨华， 杨俊品， 荣廷
昭， 谭君， 邱正高． ２００５． 玉米抗纹枯病 ＱＴＬ 分子标记定
位． 科学通报， ５０（８）： ７７２ － ７７６］
Ｙｌｉ⁃Ｍａｔｔｉｌａ Ｔ， Ｍａｃｈ ＲＬ， Ａｌｅｋｈｉｎａ ＩＡ， Ｂｕｌａｔ ＳＡ， Ｋｏｓｋｉｎｅｎ Ｓ，
Ｋｕｌｌｎｉｇ⁃Ｇｒａｄｉｎｇｅｒ ＣＭ， Ｋｕｂｉｃｅｋ ＣＰ， Ｋｌｅｍｓｄａｌ ＳＳ． ２００４． Ｐｈｙ⁃
ｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｌａｎｇｓｅｔｈｉａｅ ｔｏ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐｏａｅ
ａｎｄ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓａｓ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｂｙ ＩＧＳ， ＩＴＳ， β⁃ｔｕｂｕｌｉｎ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎｄ ＵＰ⁃ＰＣＲ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ９５（３）： ２６７ － ２８５
Ｚｈａｎｇ ＸＦ， Ｇａｏ ＺＧ， Ｚｈｕａｎｇ ＪＨ， Ｚｈａｏ Ｈ， Ｚｈａｏ ＢＸ． ２００９ａ． Ｇｅｎｅｔ⁃
ｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｐｏｒｉｓｏｒｉｕｍ ｒｅｉｌｉａｎｕｍ， ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ａｇｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ
ｍａｉｚｅ ｈｅａｄ ｓｍｕｔ， ｂｙ ｕｓｉｎｇ ＵＰ⁃ＰＣＲ． Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ３５（２）：
９５ － ９８ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［张小飞， 高增贵， 庄敬华， 赵辉， 赵
柏霞． ２００９ａ． 应用 ＵＰ⁃ＰＣＲ 进行玉米丝黑穗病菌遗传多样
性研究． 植物保护， ３５（２）： ９５ － ９８］
Ｚｈａｎｇ ＸＦ， Ｇａｏ ＺＧ， Ｚｈｕａｎｇ ＪＨ， Ｚｈａｏ Ｈ， Ｚｈａｏ ＢＸ． ２００９ｂ． Ｅｘ⁃
ｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ａｎｄ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＵＰ⁃ＰＣＲ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｏｆ
Ｓｐｏｒｉｓｏｒｉｕｍ ｒｅｉｌｉａｎａ． Ｍａｉｚｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， １７ （４）： １２２ － １２６ （ ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［张小飞， 高增贵， 庄敬华， 赵辉， 赵柏霞．
２００９ｂ． 玉米 丝黑穗病菌 ＤＮＡ 提取及 ＵＰ⁃ＰＣＲ 反应体系建
立． 玉米科学， １７（４）： １２２ － １２６］
Ｚｈａｏ ＭＪ， Ｚｈａｎｇ ＺＭ， Ｌｉ ＷＣ， Ｐａｎ ＧＴ． ２００６． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ
ｏｆ ｂａｎｄｅｄ ｌｅａｆ ａｎｄ ｓｈｅａｔｈ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｍａｉｚｅ． Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ３２
（１）： ５ － ８ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［赵茂俊， 张志明， 李晚忱， 潘光
堂． ２００６． 玉米纹枯病研究进展． 植物保护， ３２（１）： ５ － ８］
Ｚｈｏｕ ＥＸ， Ｙａｎｇ Ｍ． １９９８． Ａ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓｉｍｐｌｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｓｏ⁃
ｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｆｒｏｍ ｄｉｓｅａｓｅｄ ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， １９（１）： １２５ － １２６ （ ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［周而勋， 杨媚． １９９８． 从植物病组织中分离立 枯
丝核菌的快速、简便技术． 华南农业大学学报， １９ （１）：
１２５ － １２６］
（责任编辑：李美娟）
０２９ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷